Différences Évaluation de la capacité concurrentielle de sperme dans Drosophila

L’objectif global de l’expérience suivante est de tester les différences dans la capacité de compétition des spermatozoïdes entre les mâles drosophiles, melanogaster avec des génotypes distincts. Ceci est réalisé en suivant des marqueurs génétiques visibles qui identifient la paternité de la progéniture d’une femelle accouplée à deux mâles différents, génotypes dans l’essai, les femelles sont d’abord autorisées à s’accoupler avec un mâle de référence, puis autorisées à s’accoupler avec un mâle expérimental. La fraction de la progéniture issue du mâle expérimental est déduite en examinant la coloration oculaire de la progéniture.

Les résultats comparent indirectement la capacité compétitive des spermatozoïdes mâles expérimentaux en fonction de leurs performances relatives par rapport aux spermatozoïdes mâles de référence. Ces méthodes peuvent aider à répondre à des questions clés dans les domaines de la génétique et de l’évolution dans les domaines de la biologie, telles que l’évaluation de l’impact d’un facteur génétique sur la capacité compétitive de la SPR, démontrant que cette procédure sera effectuée par des étudiants de premier cycle de notre laboratoire. Le protocole suivant illustre l’analyse d’un facteur génétique appelé sic, qui code vraisemblablement pour une protéine impliquée dans la motilité des spermatozoïdes.

Commencez par installer 15 à 20 flacons pour chaque flacon. Saupoudrez légèrement le média de quelques granulés de levure active séchée. Pour faciliter la position.

Utilisez toujours des milieux nutritifs frais tels qu’un milieu de levure de semoule de maïs. Ensuite, à chaque flacon, ajoutez huit à 10 femelles, mais pas plus, et ajoutez cinq mâles. L’identification du sexe peut être réalisée par l’inspection visuelle de quelques différences morphologiques.

Conservez les flacons à 25 degrés Celsius et transférez les adultes dans de nouveaux flacons au moins tous les trois à cinq jours. Transférez les adultes tous les deux jours pour le meilleur résultat. Conservez l’œuf contenant des flacons pour récolter la progéniture.

Le nombre de flacons requis dépendra du nombre de types mâles expérimentaux dans l’étude et du nombre estimé d’individus nécessaires pour la puissance statistique. Quatre ou cinq jours après le transfert des parents hors d’un flacon, augmentez la surface disponible pour la nymphose dans le flacon en insérant un papier plié en plusieurs fois dans le support. Examinez les flacons à la recherche de nymphes foncées lorsqu’elles sont visibles.

Ces mouches émergeront dans les 24 heures, 11 à 12 jours après la mise en place du croisement. Commencez à récolter les femelles vierges et les mâles naïfs dans ces flacons. Dès le matin, jetez les mouches qui ont émergé pendant la nuit.

Puis, une ou deux fois dans la journée, à des intervalles de quatre à six heures, collectez les mouches dans les flacons, anesthésiez les mouches en introduisant du dioxyde de carbone dans le flacon. Ensuite, tapotez les mouches et sexez-les sous le microscope stéréoscopique. Placez les mouches souhaitées dans différents flacons par sexe et phénotype et étiquetez les flacons de manière appropriée.

Ne chargez pas les flacons avec plus de 10 potentiellement . Les femelles vierges définissent un cycle d’obscurité de 12 à 12 jours clairs sur les mouches pour réguler leur temps d’occlusion à votre avantage. Les heures de pointe de l’occlusion se produisent une à deux heures après l’aube subjective et deux heures avant que les lumières ne s’éteignent.

Il existe deux versions de cette expérience. Ils sont appelés l’essai offensif et l’essai défensif. Cette section décrit comment effectuer le test d’attaque le matin du premier jour, configurer le premier accouplement à l’aide d’un aspirateur.

Un aspirateur se compose d’un morceau de tube attaché à la pointe d’une pipette avec une barricade qui maintient les mouches aspirées dans la pointe. L’alésage de la pointe est élargi. Pour les mouches, installez des flacons contenant dix, quatre ou cinq femelles vierges âgées de quatre ou cinq jours.

Avec 10 mâles de référence naïfs, installez deux à trois flacons de ce type par jour pendant cinq jours consécutifs. Pour chaque flacon, laissez les mouches s’accoupler pendant deux heures, puis jetez les mâles de référence et transférez chaque femelle dans un nouveau flacon à l’aide d’un aspirateur, étiquetez chaque flacon V un et laissez la femelle dans le flacon pendant deux jours. Le troisième jour, mettez en place le deuxième accouplement avec des mâles naïfs de l’autre génotype pour chaque femelle.

Deux heures avant la tombée de la nuit, utilisez un aspirateur pour transférer la femelle dans un nouveau flacon avec des mâles expérimentaux âgés de trois, cinq ou six jours du même génotype. Étiquetez les flacons avec le génotype mâle et étiquetez le nouveau flacon V deux. Le lendemain matin, c’est le quatrième jour.

Deux heures avant que les mouches ne soient subjectives, l’aube jette les mâles à l’aide de l’aspirateur. Le sixième jour, transférez chaque femelle dans un autre nouveau flacon étiqueté V trois. Le 10e jour, jetez les femelles le 17e jour.

Inspectez les flacons V one de la descendance. Déterminez si la femelle était vierge ou non lorsqu’elle s’est accouplée à la cotte postale de référence et si elle s’est accouplée avec la cotte postale de référence. Le même jour, inspectez la descendance des deux flacons V en faisant tomber les mouches avec du carbone.

Triez-les par couleur des yeux et par sexe. Notez ensuite le nombre de descendants engendrés par le premier et le deuxième mâles. Dans cette expérience, seule la progéniture femelle peut être attribuée sans ambiguïté comme indiqué par la référence ou les mâles expérimentaux.

Dans d’autres expériences, différents marqueurs génétiques pourraient également être utilisés pour déterminer la paternité de la progéniture masculine. Jetez la progéniture inspectée, mais conservez les deux flacons V pendant une seconde. L’inspection le jour 20, consigne une deuxième fois la paternité de la descendance des flacons V deux et effectue la première inspection de la descendance émergée des flacons V trois.

Puis, trois jours plus tard, le jour 23, inspectez la progéniture émergée dans V trois. Encore une fois, les dénombrements de progéniture enregistrés doivent être organisés de manière appropriée pour faciliter l’inspection visuelle et l’analyse efficace, avec un ensemble de statistiques pour chaque femelle et les dénombrements à partir de V deux et V trois. Pour calculer le nombre total de descendants du mâle de référence et du mâle expérimental, il faut calculer le score P deux pour chaque femelle comme la proportion de descendants du mâle expérimental par rapport à la descendance des mâles expérimentaux et des mâles de référence.

Certaines femelles doivent être exclues de l’analyse. D’abord, celles qui n’avaient pas de descendance ou une descendance très limitée, les deuxièmes femelles qui sont mortes pendant la procédure et les troisièmes femelles qui n’ont été inséminées avec succès que par l’un des deux mâles. Recherchez des différences statistiques dans les valeurs P deux.

Parmi les types masculins expérimentaux, utilisez des tests paramétriques ou non paramétriques basés sur l’asymétrie de la distribution de la valeur P deux et la dépendance entre la variance et la proportion moyenne. Les données ne sont généralement pas distribuées normalement. La transformation du signe d’arc, également connue sous le nom de transformation angulaire, peut être appliquée aux valeurs P deux d’origine avant le test T d’un étudiant ou un test NOVA, ou simplement utiliser des tests non paramétriques tels que les expériences d’infraction WIL Coxin two avec drosophila melanogaster.

Les mâles expérimentaux ont été menés l’un avec et l’autre sans groupe ESIC fonctionnel. Au total, de 58 % à 83 % des femmes étaient informatives. Les mâles sans cluster ESIC fonctionnel ont montré des scores P deux significativement plus faibles que les hommes avec le cluster esic intact.

Cela indique que le cluster SIC stimule la capacité compétitive des spermatozoïdes. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer des expériences de double accouplement, afin que vous puissiez détecter les différences de capacité compétitive des spermatozoïdes entre les mâles mutants et témoins.