Rénale Capsule xénogreffe sous-cutanée et Pellet implantation pour l'évaluation de la carcinogenèse prostatique et l'hyperplasie prostatique bénigne

Les techniques illustrées dans cette vidéo sont utiles dans les expériences, évaluant la régulation hormonale de la cancérogenèse et la croissance bénigne de la prostate. Premières presses d’appel utilisées pour fabriquer des granules d’hormones qui permettront une administration continue. Ensuite, des pipettes en verre à pointes arrondies sont préparées après l’extériorisation du rein.

L’embout de la pipette est utilisé pour faciliter l’insertion du greffon. Les granules d’hormones comprimées sont ensuite implantées par voie sous-cutanée. En fin de compte, on obtient des résultats qui montrent les effets du traitement hormonal sur la croissance des xénogreffes de tissus bénins.

Les techniques présentées dans cette vidéo sont simples à réaliser et reproductibles. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine, telles que la façon dont les hormones sont impliquées dans la transformation des cellules bénignes en tumeurs malignes, ainsi que la façon dont la croissance bénigne de la prostate est régulée par les hormones. Les implications de cette technique s’étendent à de nouvelles thérapies potentielles et à des stratégies de prévention pour l’hyperplasie prothétique bénigne et le cancer de la prostate.

En général, les personnes qui débutent dans cette technique auront du mal avec l’aspect technique de la capsule rénale. Les granulés de xénogreffe sont préparés dans une cagoule de sécurité chimique tout en portant un équipement de protection approprié pour commencer à nettoyer soigneusement l’équipement de fabrication de granulés avec de l’éthanol à 70 % pour éviter la contamination croisée. Ensuite, pesez la quantité souhaitée de poudre d’hormones, en laissant environ 5 % de matériau supplémentaire pour compenser les pertes pendant le pressage.

Certaines hormones nécessitent un liant ou une charge, qui est mélangé avant le fabricant de granulés. Ici, l’œstradiol est combiné avec un remplisseur de cholestérol, ce qui donne une pastille de 25 milligrammes. Une fois que tout est pesé et combiné, transférez la poudre dans le dset.

Placez le colorant sous la presse et poussez fermement le levier vers le bas pour comprimer la pastille. Utilisez une pression constante pour maintenir un rapport surface/volume constant. Ensuite, inversez le porte-colorant et poussez à nouveau le levier vers le bas pour libérer la pastille.

Inspectez l’intégrité de la pastille et déterminez si la masse finale se situe dans la plage souhaitée. Les granules peuvent être fabriquées avant la chirurgie et stockées en fonction de la stabilité de l’hormone ou du médicament utilisé tout en portant une protection appropriée. Passez la pointe d’une pipette en verre à travers la flamme, un bec Bunsen pour créer une pointe arrondie et polie au feu.

Maintenez un mouvement constant et léger de la pipette pour éviter les points chauds. Ensuite, placez la pipette dans la flamme à un angle d’environ 60 degrés pour créer une pointe arrondie incurvée. Cette pointe servira à créer une poche de greffe sous la capsule rénale.

Avant de commencer l’intervention chirurgicale, stérilisez tous les instruments nécessaires et préparez la zone de travail. Une fois l’animal correctement anesthésié, désinfectez le site chirurgical avec des applications répétées de bétadine et d’alcool. Après l’application de champs stériles sur la zone, une incision médiane dorsale de deux à trois centimètres est pratiquée.

Ensuite, séparez le derme sous-jacent de la paroi corporelle. Séparez les deux côtés de l’incision pour la greffe bilatérale, ou un seul pour la greffe unilatérale. Une fois séparés, placez la souris en position latérale et localisez le rein en observant le profil rénal à travers la paroi musculaire.

L’application d’une légère pression avec le pouce et l’index peut aider à visualiser les organes internes à l’aide de ciseaux à iris fins et en prenant soin d’éviter les gros vaisseaux et les nerfs rachidiens. Faites une incision d’un centimètre dans la paroi corporelle parallèlement à la colonne vertébrale. Élargissez cette incision à un centimètre et demi à deux centimètres en ouvrant doucement les ciseaux plus largement.

Après les avoir placés dans l’incision initiale, extériorisez le rein en appliquant une légère pression à l’extérieur de la paroi musculaire de chaque côté du rein. Ensuite, rentrez les bords de la peau sous le rein extériorisé, qui reposera sur la paroi du corps. Si d’autres structures sont également présentes, elles peuvent être doucement rentrées pendant que le rein est extériorisé.

Maintenez l’hydratation de la capsule rénale en appliquant une solution saline stérile. Soulevez doucement la capsule rénale et faites une incision de deux à quatre millimètres. La taille de l’incision est déterminée par la taille du greffon, mais doit être minimisée afin de maintenir l’intégrité de la capsule.

Insérez l’extrémité fermée arrondie de la pipette préparée précédemment sous la capsule tangente à la surface du rein. Une fois inséré, ouvrez doucement une petite poche pour les greffons en prenant grand soin de ne pas endommager le rein. Les greffes de tissu parenchymateux sont préparées à partir de tissu prostatique frais obtenu lors de la résection chirurgicale.

Soulevez le bord coupé de la capsule rénale et insérez le greffon dans la poche. À l’aide de l’embout de la pipette, plusieurs greffons peuvent être placés sous la capsule rénale et espacés uniformément sur la surface du rein. Lorsque la greffe est terminée, soulevez doucement les côtés de l’incision de la paroi musculaire pour replacer le rein dans la cavité corporelle.

Assurez-vous que le greffon ne glisse pas sous la capsule. Une seule suture est utilisée pour fermer la paroi musculaire avant de procéder à l’implantation sous-cutanée de granules. Lorsque la greffe est terminée, séparez le derme sous-jacent de la paroi corporelle dans le sens crânien.

Soulevez doucement l’aspect crânien de l’incision cutanée pour créer une poche tout en tenant la pastille d’hormone Doucement avec une pince dentelée droite, insérez la pastille à la peau du cou. À l’aide d’une pince dentée, alignez les bords de la peau et appliquez deux à trois clips chirurgicaux pour fermer l’incision. Dans cet exemple, des xénogreffes de tissus primaires de patients atteints d’hyperplasie bénigne de la prostate ont été complétées par de la testostérone exogène.

Pendant un mois, les pointes de flèches indiquent l’emplacement des xénogreffes. La greffe de capsule rénale peut également être utilisée pour évaluer la cancérogenèse hormonale. Ici, les recombinants cellulaires contenant un épithélium prostatique bénin et une méchy urogénitale inductive forment des excroissances bénignes chez les souris non traitées.

Dans cet exemple, le même greffon est cultivé chez un hôte qui a reçu des pastilles sous-cutanées de testostérone et d’œstradiol pendant quatre mois et a choisi un carcinome de la prostate qui envahit la capsule rénale. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la fabrication et de l’implantation de granules d’hormones compressées, ainsi que de la création d’une pipette en verre poli au feu pour la chirurgie et la réalisation d’une xénogreffe de capsule rénale. Lorsque vous tentez cette procédure, il est important de ne pas oublier de manipuler doucement la capsule rénale, de maintenir l’humidité et d’éviter d’endommager le parenchyme rénal Après cette procédure.

D’autres méthodes telles que l’histologie, l’immunohistochimie et les techniques moléculaires pour détecter R-N-A-D-N-A ou des protéines d’intérêt peuvent être effectuées. Cela permettra de mieux évaluer la nature de la croissance bénigne ou maligne observée. N’oubliez pas que les hormones utilisées dans ces expériences sont potentiellement tératogènes et cancérigènes.

Le fabricant de granulés d’hormones compressées doit toujours être effectué dans une cagoule de sécurité chimique. Un équipement de protection individuelle approprié doit toujours être porté pour chaque étape de la procédure décrite dans cette vidéo.