Name: Isolation Manuel des cellules souches du tissu adipeux de Lipoaspirates humaines (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-26T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Apprenez l'isolation manuelle des cellules souches du tissu adipeux à partir de lipoaspirates humains par digestion enzymatique à la collagénase. Cette méthode efficace permet d'obtenir des ASC viables pour la recherche en médecine régénérative.

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Les auteurs tiennent à remercier les personnels de recherche supplémentaires qui ont contribué à l&#39;élaboration du protocole décrit et son isolement du CSA, y compris: le Dr H. Peter Lorenz, MD, le Dr Hiroshi Muzuno, MD, le Dr Jerry Huang, MD , le Dr Adam Katz, MD, le Dr William Futrell, MD, le Dr Zhang Rong, DDS, PhD, le Dr Larissa Rodriguez, MD, Dr. Alfonso Zeni, PhD, et le Dr John Fraser, PhD. Les résultats présentés ont été financés, en partie, par des subventions de recherche des Instituts nationaux de la santé, y compris les NIAMS et NIDCR Instituts.

<ol><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-lineage+cells+from+human+adipose+tissue%3A+implications+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Multi-lineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Engineering. 7 (2), 211-226 (2001).</li>
<li>Rodbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+isolated+fat+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Metabolism of isolated fat cells.</a> J. Biol. Chem. 239, 375-380 (1964).</li>
<li>Poznanski, W. J., Waheed, I., Human Van, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((fat+cell+precursors.+Morphologic+and+metabolic+differentiation+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">fat cell precursors. Morphologic and metabolic differentiation in culture.</a> Lab Invest. 29 (5), 570-576 (1973).</li>
<li>Zuk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+Stem+Cells+in+Tissue+Regeneration%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived Stem Cells in Tissue Regeneration: A Review.</a> ISRN Stem Cells. , in press (2012).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).</li>
<li>Mitchell, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotype+of+human+adipose-derived+cells%3A+temporal+changes+in+stromal-associated+and+stem+cell-associated+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Immunophenotype of human adipose-derived cells: temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers.</a> Stem Cells. 24 (2), 376-385 (2006).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypical+and+functional+characterization+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Phenotypical and functional characterization of freshly isolated adipose tissue-derived stem cells.</a> Stem Cells Dev. 16 (1), 91-104 (2007).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+freshly+isolated+and+cultured+cells+derived+from+the+fatty+and+fluid+portions+of+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of freshly isolated and cultured cells derived from the fatty and fluid portions of liposuction aspirates.</a> J Cell Physiol. 208 (1), 64-76 (2006).</li>
<li>Zannettino, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotential+human+adipose-derived+stromal+stem+cells+exhibit+a+perivascular+phenotype+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Multipotential human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo.</a> J Cell Physiol. 214 (2), 413-421 (2008).</li>
<li>Chung, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD90+%28Thy-1%29+Positive+Selection+Enhances+Osteogenic+Capacity+of+Human+Adipose-Derived+Stromal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">CD90 (Thy-1) Positive Selection Enhances Osteogenic Capacity of Human Adipose-Derived Stromal Cells.</a> Tissue Eng Part A. , (2012).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipogenic+potential+of+adipose+stem+cell+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Adipogenic potential of adipose stem cell subpopulations.</a> Plast Reconstr Surg. 128 (3), 663-672 (2011).</li>
<li>Rada, T., Reis, R. L., Gomes, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+stem+cells+subpopulations+isolated+from+human+adipose+tissue+exhibit+different+chondrogenic+and+osteogenic+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Distinct stem cells subpopulations isolated from human adipose tissue exhibit different chondrogenic and osteogenic differentiation potential.</a> Stem Cell Rev. 7 (1), 64-76 (2011).</li>
<li>Heydarkhan-Hagvall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Adipose+Stem+Cells%3A+A+Potential+Cell+Source+for+Cardiovascular+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Human Adipose Stem Cells: A Potential Cell Source for Cardiovascular Tissue Engineering.</a> Cells Tissues Organs. 187 (4), 263-274 (2008).</li>
<li>Jack, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processed+lipoaspirate+cells+for+tissue+engineering+of+the+lower+urinary+tract%3A+implications+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+bladder+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Processed lipoaspirate cells for tissue engineering of the lower urinary tract: implications for the treatment of stress urinary incontinence and bladder reconstruction.</a> J Urol. 174 (5), 2041-2045 (2005).</li>
<li>Banas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+hepatic+fate+specification+of+adipose-derived+stem+cells+and+their+therapeutic+potential+for+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Rapid hepatic fate specification of adipose-derived stem cells and their therapeutic potential for liver failure.</a> J Gastroenterol Hepatol. 24 (1), 70-77 (2009).</li>
<li>Schreml, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harvesting+human+adipose+tissue-derived+adult+stem+cells%3A+resection+versus+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Harvesting human adipose tissue-derived adult stem cells: resection versus liposuction.</a> Cytotherapy. 11 (7), 947-957 (2009).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cell+yield+and+growth+characteristics+are+affected+by+the+tissue-harvesting+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure.</a> Cytotherapy. 8 (2), 166-177 (2006).</li>
<li>Ahmad, J., Eaves, F. F., Rohrich, R. J. 3rd, Kenkel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+American+Society+for+Aesthetic+Plastic+Surgery+%28ASAPS%29+survey%3A+current+trends+in+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Aesthet+Surg+J%22%5BJournal%5D)">The American Society for Aesthetic Plastic Surgery (ASAPS) survey: current trends in liposuction.</a> Aesthet Surg J. 31 (2), 214-224 (2011).</li>
<li>Tierney, E. P., Kouba, D. J., Hanke, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+of+tumescent+and+laser-assisted+liposuction%3A+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22J+Drugs+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Safety of tumescent and laser-assisted liposuction: review of the literature.</a> J Drugs Dermatol. 10 (12), 1363-1369 (2012).</li>
<li>Mojallal, A., Auxenfans, C., Lequeux, C., Braye, F., Damour, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+negative+pressure+when+harvesting+adipose+tissue+on+cell+yield+of+the+stromal-vascular+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Mater+Eng%22%5BJournal%5D)">Influence of negative pressure when harvesting adipose tissue on cell yield of the stromal-vascular fraction.</a> Biomed Mater Eng. 18 (4-5), 193-197 (2008).</li>
<li>Matsumoto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+preservation+at+various+temperatures+on+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Influences of preservation at various temperatures on liposuction aspirates.</a> Plast Reconstr Surg. 120 (6), 1510-1517 (2007).</li>
<li>Francis, M. P., Sachs, P. C., Elmore, L. W., Holt, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+from+lipoaspirate+blood+and+saline+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Isolating adipose-derived mesenchymal stem cells from lipoaspirate blood and saline fraction.</a> Organogenesis. 6 (1), 11-14 (2010).</li>
<li>Boquest, A. C., Shahdadfar, A., Brinchmann, J. E., Collas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+stromal+stem+cells+from+human+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of stromal stem cells from human adipose tissue.</a> Methods Mol Biol. 325, 35-46 (2006).</li>
<li>Bunnell, B. A., Flaat, M., Gagliardi, C., Patel, B., Ripoll, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells%3A+isolation%2C+expansion+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells: isolation, expansion and differentiation.</a> Methods. 45 (2), 115-120 (2008).</li>
<li>Dubois, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+adipose-derived+stem+cells+from+biopsies+and+liposuction+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of human adipose-derived stem cells from biopsies and liposuction specimens.</a> Methods Mol Biol. 449, 69-79 (2008).</li>
<li>Mosna, F., Sensebe, L., Krampera, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+marrow+and+adipose+tissue+mesenchymal+stem+cells%3A+a+user%27s+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Human bone marrow and adipose tissue mesenchymal stem cells: a user's guide.</a> Stem Cells Dev. 19 (10), 1449-1470 (2010).</li>
<li>Zachar, V., Rasmussen, J. G., Fink, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+growth+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and growth of adipose tissue-derived stem cells.</a> Methods Mol Biol. 698, 37-49 (2011).</li>
<li>Williams, S. K., McKenney, S., Jarrell, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagenase+lot+selection+and+purification+for+adipose+tissue+digestion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Collagenase lot selection and purification for adipose tissue digestion.</a> Cell Transplant. 4 (3), 281-289 (1995).</li>
<li>Wang, H., Van Blitterswijk, C. A., Bertrand-De Haas, M., Schuurman, A. H., Lamme, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+enzymatic+isolation+of+fibroblasts+for+the+creation+of+autologous+skin+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Improved enzymatic isolation of fibroblasts for the creation of autologous skin substitutes.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 40 (8-9), 268-277 (2004).</li>
<li>Pilgaard, L., Lund, P., Rasmussen, J. G., Fink, T., Zachar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+highly+defined+proteases+for+the+isolation+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of highly defined proteases for the isolation of adipose tissue-derived stem cells.</a> Regen Med. 3 (5), 705-715 (2008).</li>
<li>Kurita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+centrifugation+on+cells+and+tissues+in+liposuction+aspirates%3A+optimized+centrifugation+for+lipotransfer+and+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Influences of centrifugation on cells and tissues in liposuction aspirates: optimized centrifugation for lipotransfer and cell isolation.</a> Plast Reconstr Surg. 121 (3), 1033-1041 (2008).</li>
<li>Poloni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dedifferentiated+adipocytes+show+similar+properties+to+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dedifferentiated adipocytes show similar properties to bone marrow-derived mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 30 (5), 965-974 (2012).</li>
<li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells%3A+a+new+tool+for+regenerative+medicine+and+tissue+banking%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine and tissue banking.</a> Tissue Eng Part C Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li>
<li>Tallone, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+adipose+tissue+contains+several+types+of+multipotent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Adult human adipose tissue contains several types of multipotent cells.</a> J Cardiovasc Transl Res. 4 (2), 200-210 (2011).</li>
<li>De Francesco, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD34%2FCD90+ASCs+are+capable+of+growing+as+sphere+clusters%2C+producing+high+levels+of+VEGF+and+forming+capillaries%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human CD34/CD90 ASCs are capable of growing as sphere clusters, producing high levels of VEGF and forming capillaries.</a> PLoS One. 4 (8), e6537(2009).</li>
<li>Haasters, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+immunocytochemical+characteristics+indicate+the+yield+of+early+progenitors+and+represent+a+quality+control+for+human+mesenchymal+stem+cell+culturing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Morphological and immunocytochemical characteristics indicate the yield of early progenitors and represent a quality control for human mesenchymal stem cell culturing.</a> J Anat. 214 (5), 759-767 (2009).</li>
</ol>

Les auteurs de ce manuscrit sont co-inventeurs sur un brevet détenu par les Régents de l&#39;Université de Californie et autorisé à Cytori Therapeutics.

Le tissu adipeux pour l&#39;isolement des CSA peut prendre de nombreuses formes: à partir de morceaux de tissus solides obtenus par résection ou lipoplasty de petits morceaux obtenus soit par extraction de la seringue ou lipoplastie assistée par aspiration (c&#39;est à dire la liposuccion). Que plus de cellules SVF (et donc CSA) peuvent être obtenus à partir d&#39;échantillons de tissu adipeux résection ou aspiration n&#39;est pas clair que les études contradictoires ont été présentées 16, 17. Il est...

En 2001, une population présumée de cellules souches multipotentes à partir de tissu adipeux a été décrite dans la revue Tissue Engineering 1. Ces cellules ont été donné le nom de cellules transformés lipoaspirat ou PLA en raison de leur dérivation à partir de tissu de lipoaspirat traités obtenus par la chirurgie esthétique. Le procédé d&#39;isolement décrit dans cet article est basée sur des stratégies existantes enzymatiques pour l&#39;isolement de la fraction stroma vasculaire (SVF) à partir de tissu adipeux 2. Le SVF a été définie comme une transformation minimale population de globules rouges, les fibroblastes, les cellules endothéliales, les cellules musculaires lisses, des pericytes et des pré-adipocytes qui restent encore à adhérer à un substrat de culture de tissus 2, 3. La culture de cette SVF dans le temps est proposé d&#39;éliminer bon nombre de ces populations de cellules contaminantes et entraîner, une population de fibroblastes adhérent. Ces fibroblastes ont été identifiés dans la littérature pour les 40 dernières années comme étant pré-adipocytes. Toutefois, notre groupe de recherche a démontré que ces cellules possédaient mésodermique multipotency et renommés de la population SVF adhérente que les cellules de l&#39;APL. Des études ultérieures par de nombreux autres groupes de recherche ont ajouté à ce potentiel, suggérant à la fois endodermique et potentiels ectodermiques (pour revue, voir 4). Depuis ce temps, de nombreux termes supplémentaires pour ces cellules ont été publiés dans la littérature. Afin de fournir un certain type de consensus, le terme de cellules souches du tissu adipeux ou CSA a été adopté lors de la deuxième conférence annuelle IFATS 2. En tant que tel, l&#39;ASC terme sera utilisé dans cet article. Le protocole décrit dans cet article est une procédure relativement simple qui nécessite un équipement de laboratoire standard et utilise des réactifs simples, telles que la phospho-solution saline tamponnée, des réactifs de milieux de culture de tissus standard et de la collagénase. Il peut produire un grand nombre de CSA en fonction de la quantité de départ de volume du tissu adipeux et c ultérieurulture temps. Cependant, le traitement d&#39;une telle quantité de tissu adipeux peut présenter certains problèmes physiques qui peuvent être atténués à un degré en utilisant ce protocole. En outre, ce protocole ne nécessite tissus stériles installations de culture et les hottes de biosécurité approuvées, ce qui nécessite l&#39;utilisation d&#39;une installation de culture de tissus approuvé. Cette exigence peut également diminuer l&#39;utilité de la population de l&#39;ASC dans les applications cliniques, sauf s&#39;ils sont isolés dans de bonnes pratiques de fabrication des installations (GMP) approuvés conçus pour l&#39;isolement et l&#39;expansion des matériaux pour une utilisation clinique. Comme alternative, les systèmes automatisés qui peuvent isoler CSA dans un système fermé dans la salle d&#39;opération permettrait d&#39;éviter cette question clé et permettre l&#39;utilisation immédiate des CSA sans qu&#39;il soit nécessaire pour l&#39;expansion in vitro ultérieure. A ce jour, il existe six systèmes automatisés qui sont commercialement disponibles pour l&#39;isolement de cellules à partir de tissu humain. Ces systèmes peuvent permettre d&#39;isoler unnombre important des CSA de grandes quantités de tissu adipeux immédiatement après sa récolte. Ces CSA pourraient alors être réintroduits dans le patient pour une variété de fins de régénération sans que le patient jamais avoir à quitter la salle d&#39;opération. En plus de ce protocole décrivant l&#39;isolement d&#39;emploi des CSA, un protocole pour l&#39;isolement automatique des CSA à l&#39;aide du système Celution est également donnée dans un article associé.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><fort>réactif</fort></td></tr><tr><td>DMEM (Dulbecco&#8217 ; s Modification de Eagle&#8217 ; s Medium)</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>10-013-CV</td><td>avec 4,5 g/ml de glucose, L-glutamine, pyruvate de sodium</td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>30-002-CI</td><td>10 000 UI/ml de pénicilline/10 000 &#956 ; g/ml streptomycine</td></tr><tr><td>Amphotéricine B</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>30-003-CF</td><td>250 &#956 ; g/ml amphotéricine B</td></tr><tr><td>10X PBS (solution saline tamponnée au phospho)</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>25-053-CI</td><td>sans calcium, sans magnésium</td></tr><tr><td>Trypsine/EDTA</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>20-031-CV</td><td>0,25 % trypsine/2,21 mM</td></tr><tr><td>EDTA Collagénase de type IA (de Clostridium histolyticum)</td><td>Sigma</td><td>C2674</td><td>préparation brute ; < 125 unités de digestion de collagène/mg solide</td></tr><tr><td>FBS (Fetal Bovin Serum) inactivé à la chaleur</td><td>Gemini Bioproducts</td><td>100106</td><td>source USDA, inactivées à la chaleur </td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques de 10 ml</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-104</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques de 25 ml</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-106</td><td></td></tr><tr><td>Tubes à centrifuger en polypropylène de 50 ml</td><td>Genesee Scientific</td><td>21-106</td><td></td></tr><tr><td>Boîtes de culture tissulaire de 100 mm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>Boîtes de culture tissulaire de 150 mm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>500 ml Unités de filtration Stericup</td><td>Membrane Millipore</td><td>SCGPU05RE</td><td>PES, 0,22 &#956 ; </td></tr><tr><td>crépines à cellules</td> à pores m <td>FisherBrand</td><td>22-363-549</td><td>100 &#956 ; m maille de nylon</td></tr><tr><td>dexaméthasone - soluble dans l’eau</td><td>Sigma</td><td>D-2915</td><td></td></tr><tr><td>Acide L-ascorbique 2 phosphate</td><td>Sigma</td><td>A-8960</td><td></td></tr><tr><td>&#946 ;-glycérophosphate sel disodique </td><td>Sigma</td><td>G-9422</td><td>également connu sous le nom de glycérophosphate</td></tr><tr><td></td><td>insuline Sigma</td><td>I-6634</td><td>fabriqué à partir de pancréas bovin</td></tr><tr><td>indométacine</td><td>Sigma</td><td>I-7378</td><td></td></tr><tr><td>apo-transferrin</td><td>Sigma</td><td>T-4382</td><td></td></tr><tr><td>TGF&#946 ; 1</td><td>R& D Systems</td><td>240-B-002</td><td>recombinant humain</td></tr><tr><td>Rouge d’huile O</td><td>Sigma</td><td>O-0625</td><td></td></tr><tr><td>Bleu alcien</td><td>Sigma</td><td>A-5268</td><td></td></tr><tr><td>Nitrate d’argent</td><td>Sigma</td><td>S-0319</td><td></td></tr><tr><td>Acide chlorhydrique</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde</td><td>Fisher Scientific</td><td>30525-89-4</td><td>fourni en stock</td></tr> <tr>à 16 %<td colspan="4">[en-tête]</td></tr><tr><td colspan="4">Équipement nécessaire</fort> </td></tr><tr><td>Classe II A/B Cagoule de biosécurité</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>s’assure que la hotte dispose de conduites de vide pour l’aspiration</td></tr><tr><td>Centrifugeuse de paillasse</td><td>Hermle Labnet</td><td>Z383</td><td>Rotor pivotant pour tubes de 50 ml requis, capable de 1200xg</td></tr><tr><td>Bain-marie </td><td>Fisher Scientific Isotemp</td><td>S52602Q</td><td>capacité de 5-10L, capable de 37C</td></tr><tr><td>Aides à la pipette automatisées</td><td>Drummond Pipette Aid XL</td><td>4-000-105</td><td></td></tr><tr><td>CO2</td><td>Incubateur Thermo Scientific</td><td>Forma 310</td><td>à chaleur directe ou à l’eau</td></tr></tbody></table>

isolation manuel des cellules souches du tissu adipeux de lipoaspirates humaines

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

En 2001, des chercheurs de l&#39;Université de Californie, Los Angeles, décrit l&#39;isolement d&#39;une nouvelle population de cellules souches adultes à partir de tissu adipeux que Liposuctioned qu&#39;ils appellent d&#39;abord les cellules de lipoaspirat transformés ou des cellules de l&#39;APL. Depuis lors, ces cellules souches ont été renommés que les cellules souches dérivées de tissu adipeux ou CSA et ont continué pour devenir l&#39;un des plus populaires des populations les cellules souches adultes dans les domaines de la recherche sur les cellules souches et la médecine régénérative. Des milliers d&#39;articles décrivent maintenant l&#39;utilisation des CSA dans une variété de modèles animaux de régénération, y compris la régénération osseuse, réparation des nerfs périphériques et de l&#39;ingénierie cardiovasculaire. Des articles récents ont commencé à décrire la multitude d&#39;utilisations pour CSA dans la clinique. Le protocole indiqué dans cet article décrit la procédure de base pour la main et enzymatique isoler CSA de grandes quantités de lipoaspirates obtenus à partir des procédures cosmétiques. Ce protocole peut être facilement agrandie ou réduite à accommodmangé le volume du lipoaspirat et peut être adapté pour isoler à partir de tissu adipeux ASCs obtenus par plasties abdominales et d&#39;autres procédures similaires.

Le contour du protocole décrit ci-dessus, un procédé enzymatique manuel pour l&#39;isolement d&#39;un SVF à partir d&#39;un grand échantillon de lipoaspirat de volume. Dans ce SVF sont nombreuses populations de cellules, y compris l&#39;ASC. De nombreuses études suggèrent que la culture de cette SVF dans des conditions de culture de tissus standards choisira pour une population de fibroblastes adhérent susceptible d&#39;être composé principalement de type ASC. Conformément à cela, nous avons montré, en utilisant la cyto...

En 2001, des chercheurs de l&#39;UCLA ont décrit l&#39;isolement d&#39;une population de cellules souches adultes, les cellules appelé ou CSA souches du tissu adipeux, du tissu adipeux. Cet article décrit l&#39;isolement des CSA de lipoaspirates utilisant un protocole de digestion enzymatique manuel à l&#39;aide de la collagénase.

Isolation Manuel des cellules souches du tissu adipeux de Lipoaspirates humaines

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

L'objectif général de cette procédure est d'isoler des cellules souches dérivées du tissu adipeux à partir de la graisse obtenue sous forme d'aspirat de liposuccion. Cela est réalisé en éliminant d'abord la solution chirurgicale et en lavant l'aspirat afin d'éliminer les globules rouges contaminants. La deuxième étape consiste à libérer les cellules souches par digestion enzymatique de l'aspirat de liposuccion lavé à l'aide de collagénase.Ensuite, les cellules libérées sous forme de fraction vasculaire stromale ou FVS sont recueillies par centrifugation. La dernière étape consiste à éliminer le surnageant et à mettre en culture les cellules FVS afin de sélectionner et cultiver les ASC adhérents. Enfin, une induction in vitro de ces ASC cultivés vers l'os, les graisses et le cartilage.Les lignées peuvent être utilisées pour confirmer la présence de ces cellules dans la culture, en plus de confirmer leur pluripotentialité. En général, les personnes novices dans cette méthode éprouvent des difficultés en raison de la logistique liée à la manipulation de grands volumes de liposuif prélevé avant la récolte des cellules. Préparez une solution stérile de collagénase de type I et un milieu

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Ce protocole décrit l'isolement de tissu adipeux dérivé des cellules stromales de lipoaspirate et la création d'une 4 mm de taille critique défaut crânienne pour évaluer la régénération osseuse.

Réparation d&#39;un modèle de critique des défauts de taille crânienne Utilisation adipeuses cellules stromales prélevés sur des Lipoaspirate

Cette vidéo présente une technique d’isolement et de culture de cellules souches dérivées du tissu adipeux de l’arc périaortique murin marquées par fluorescence à partir de tissus adipeux murins de l’arc périaortique. Après l’isolement, les NCADCs sont détectés, triés à l’aide d’un tri cellulaire activé par fluorescence, puis cultivés sur une plaque, favorisant ainsi la prolifération cellulaire.

Isolement de cellules souches dérivées du tissu adipeux périortique murin

Nous présentons ici un protocole pour obtenir la fraction vasculaire stromale du tissu adipeux grâce à une série de procédés mécaniques, incluent l’émulsification et plusieurs centrifugations.

Micronisation mécanique de Lipoaspirates pour la thérapie régénérative

Ce protocole fournit une méthode sans enzyme s'est dissipée des cellules souches mésenchymales à partir d'échantillons d'abdominoplastie et de lipoaspirate à l'aide d'une méthode d'explantation. L'absence d'enzymes dures ou d'étapes de centrifugation prévoit des cellules souches cliniquement pertinentes qui peuvent être utilisées pour des études in vitro ou transférées à la clinique.

Une méthode sans enzyme s'est d'isolement et d'expansion des cellules souches mésenchymales dérivées de l'adipose humaine

Ici, nous présentons la micro-fragmentation sans enzyme s'adipeux humain à l'aide d'un dispositif système fermé. Cette nouvelle méthode permet l'obtention de grappes de tissus adipeux sous-millimétriques adaptées à la transplantation in vivo, à la culture in vitro et à l'isolement et à la caractérisation des cellules.

Micro-fragmentation humaine des tissus adipeux pour le phénotypage cellulaire et la caractérisation du secretome

Ce protocole décrit l’approche technique permettant d’isoler des sous-populations de cellules stromales adipogènes et fibro-inflammatoires à partir de dépôts de tissu adipeux blanc (WAT) intra-abdominal murin par tri cellulaire activé par fluorescence ou séparation immunomagnétique des billes.

Isolement de sous-populations de cellules stromales adipogènes et fibro-inflammatoires à partir de dépôts adipeux intra-abdominaux murins

Le présent protocole décrit une méthodologie améliorée pour l’isolement ADSC résultant en un rendement cellulaire énorme avec gain de temps par rapport à la littérature. Cette étude fournit également une méthode simple pour obtenir un nombre relativement important de cellules viables après cryoconservation à long terme.

Technique d’obtention de cellules souches mésenchymateuses à partir de tissu adipeux et caractérisation de la fraction vasculaire stromale dans la cryoconservation à long terme

Les produits xénogéniques (chimiques ou d’origine animale) introduits dans les étapes de préparation/manipulation de la thérapie cellulaire sont associés à un risque accru de réactivité immunitaire et de transmission pathogène chez les patients hôtes. Ici, une méthode complète sans xénogénétique pour l’isolement et l’expansion in vitro de cellules souches humaines dérivées du tissu adipeux est décrite.

Isolement et culture de cellules souches humaines dérivées du tissu adipeux à l’aide d’une méthode innovante sans xénogène pour la thérapie humaine

Ce protocole décrit une méthodologie pour isoler et identifier les cellules souches mésenchymateuses dérivées du tissu adipeux (CSM) de rats Sprague Dawley.

Isolement et identification de cellules souches mésenchymateuses dérivées du tissu adipeux de rats Sprague Dawley

Ce protocole décrit l’isolement semi-automatisé de la fraction vasculaire stromale (SVF) du tissu adipeux murin pour obtenir des préadipocytes et obtenir une différenciation adipocytaire in vitro. L’utilisation d’un dissociateur tissulaire pour la digestion de la collagénase réduit la variation expérimentale et augmente la reproductibilité.

Isolement semi-automatisé de la fraction vasculaire stromale à partir de tissu adipeux blanc murin à l’aide d’un dissociateur tissulaire

Ici, nous présentons une méthode standard pour isoler efficacement les cellules souches et les adipocytes dérivés de l’adipos, caractérisée par une réduction de &gt; 90 % du temps de traitement, une forte viabilité cellulaire et une large compatibilité.

Isolation efficace des cellules souches et adipocytes dérivés de l’adipeux à partir du tissu adipeux porcine

Apprenez l'isolation manuelle des cellules souches du tissu adipeux à partir de lipoaspirates humains par digestion enzymatique à la collagénase. Cette méthode efficace permet d'obtenir des ASC viables pour la recherche en médecine régénérative.

Isolation Manuel des cellules souches du tissu adipeux de Lipoaspirates humaines

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