Tibial Nerve Transection - un modèle standardisé pour dénervation induit l'atrophie musculaire chez les souris

L’objectif général de cette vidéo est de démontrer le modèle de transsection du nerf tibial de l’atrophie des muscles squelettiques chez la souris. Ceci est accompli en isolant le nerf sciatique et ses trois branches, les nerfs tibial, syl et péronier. Une fois isolé, le nerf tibial est transecté.

Après dénervation, la plaie est scellée et l’état de l’animal est surveillé de près. En fin de compte, des échantillons sont obtenus qui montrent une diminution progressive de la masse musculaire après dénervation. Le modèle de transsection du nerf tibial de l’atrophie musculaire squelettique induite par la dénervation est couramment utilisé dans un modèle bien validé chez le rat, et il présente beaucoup moins de morbidité que celle associée à la transsection du nerf sciatique.

Nous avons adapté ce modèle pour l’utiliser chez la souris, ce que nous allons démontrer ici. Cela permet à l’investigateur de tirer parti de l’existence de souris génétiquement modifiées et d’étudier le processus d’atrophie musculaire en l’absence de protéines cruciales pour la régulation de la masse musculaire squelettique tout en induisant une morbidité minimale chez l’animal. Tout d’abord, enregistrez le poids de la souris après avoir confirmé une anesthésie adéquate par pincement des orteils, identifiez l’encoche sciatique par palpation et rasez le côté de la cuisse et la fesse de là jusqu’au genou.

Ensuite, nettoyez la zone avec des applications répétées d’alcool et de pro-iode. Placez la souris sur le côté sous un microscope opératoire ou de dissection tout en portant des gants stériles. Identifiez l’encoche sciatique par palpation.

Inciser la peau de la cuisse latérale de l’encoche sciatique jusqu’au genou. Écartez doucement la peau pour l’ouvrir. Identifiez le muscle biceps fémoral, qui est le muscle plat et superficiel de la cuisse latérale immédiatement sous la peau à l’aide de ciseaux fins.

Divisez le muscle biceps fémoral le long des fibres musculaires et insérez un écarteur à ressort. Pour exposer le nerf sciatique et ses branches, identifiez le nerf sciatique immédiatement sous le muscle biceps fémoral. Il peut être identifié par sa couleur blanche brillante caractéristique et mesure environ 0,8 millimètre de diamètre.

Elle s’étend de l’encoche sciatique au genou en se ramifiant dans les nerfs tibiaux, péroniers et sals, au niveau de la fosse poplitée. Séparez doucement le tibial des branches nerveuses péronières et sales à l’aide d’une pince ultra fine et de ciseaux de micro-dissection à ressort. Le nerf tibial est la plus grande branche et est généralement central.

Une manipulation en douceur du nerf sciatique et de ses branches est essentielle au succès de cette procédure. Veillez à ce que les branches nerveuses sal et périnéale ne soient pas endommagées ou étirées. Si ces branches sont endommagées ou étirées, cela affaiblira également leurs cibles.

Tenir le nerf juste sur la couche adventice externe avec la pince ultra fine et maintenir le nerf mou évitera l’écrasement nerveux et les lésions de traction pour une dénervation temporaire Avec une réation complète prévue dans deux à quatre semaines, écrasez le nerf tibial avec des pinces ultra fines pendant 15 secondes pour une dénervation complète et durable. Coupez le nerf tibial avec les micros en disséquant les ciseaux aussi distalement que possible. Éviter soigneusement les vaisseaux poplités si une dénervation complète est nécessaire.

Suturez l’extrémité du nerf tibial transecté à la surface antérieure du muscle biceps fémoral avec du nylon 10 T et rapprochez le biceps fémoral avec cinq T Vicryl pour prévenir la réation abbérante des muscles gastros et soléaires. Une fois la dénervation terminée, fermez la peau avec une suture Vicryl de cinq ans. Lorsque vous êtes prêt, éteignez l’anesthésique inhalé, mais maintenez le flux d’oxygène.

Après avoir administré un analgésique individuellement, logez la souris dans une cage chaude et propre sans litière. Gardez la souris sous observation directe jusqu’à ce qu’elle se promène. Une fois complètement rétablie, transférez la souris dans une cage à fond propre et solide avec une litière suffisamment douce.

Inspectez quotidiennement le membre opératoire et le pied pour détecter le développement d’ulcères au talon ou de signes de mastication, des problèmes mineurs peuvent être gérés avec des antibiotiques topiques ou des antiseptiques, tels que l’odine. Les indicateurs finaux nécessitant l’euthanasie de l’animal sont la perte de poids, la preuve de mauvais soins personnels et une posture voûtée. De plus, les animaux présentant des lésions ou des ulcères qu’ils ne guérissent pas avec une à deux semaines de soins des plaies doivent également être sacrifiés.

De plus, tous les animaux qui souffrent indûment Au point postopératoire, les tissus souhaités sont prélevés pour analyse. Après l’euthanasie, raser la face médiale des jambes de contrôle opératoire et controlatérale et nettoyer à l’alcool en travaillant sous un microscope de dissection, inciser la peau médiale du mollet avec un scalpel de la cheville au genou et circonférentiellement autour de la cheville sur le membre opératoire. Ensuite, retirez doucement la peau du muscle et proximale vers la cuisse.

Pour exposer tous les muscles de la jambe, identifiez le muscle gastro, qui est le muscle du mollet qui s’étend du genou à la cheville sur la face postérieure de la jambe. Ensuite, localisez l’insertion distale du muscle biceps fémoral à proximité du muscle gastro sur la face médiale du genou. Lors de son insertion distale, le biceps fémoral apparaît mince et filmique et recouvre la partie la plus proximale de la gastro à l’aide de ciseaux et d’une dissection à extrémité émoussée.

Séparez doucement l’insertion distale du biceps fémoral du muscle gastros. Ajoutez son insertion distale dans le calcanéum, le muscle gastros se rétrécit dans le tendon d’Achille. Identifiez le tendon d’Achille qui apparaît blanc et nerveux.

Tenez le tendon d’Achille avec une pince. En prenant soin de ne pas tenir ou écraser le muscle gastrique et de séparer le tendon d’Achille de l’insertion du calcanéum. À l’aide de ciseaux qui maintiennent toujours le tendon, soulevez doucement le muscle gastro rouge pâle du soléaire rouge plus profond de l’insertion distale vers son origine au niveau du genou, en utilisant une traction très douce.

Pour faciliter le processus, disséquez le gastro de la jambe en séparant l’origine du gastro des condyles médiaux et latéraux du fémur. À l’aide de ciseaux. Attention à ne pas écraser le muscle.

Le soléaire sera désormais clairement visible immédiatement à la vue des gastros. Soulevez le sous de son insertion sur le tendon d’Achille jusqu’à son origine sur le mollet postérieur. Une fois retirés, pesez les muscles séparément sur une balance de précision.

Ensuite, divisez les muscles verticalement : la moitié pour la congélation instantanée et l’azote liquide, et l’autre moitié pour l’histologie. Enfin, répétez ces procédures sur le côté témoin non évalué pour récolter les muscles gastro et soléaires de contrôle. Les muscles gastro ont été prélevés sur les membres postérieurs dénervés et de contrôle controlatéral à une, deux ou quatre semaines et exprimés sous forme de rapport.

La dénervation a induit une perte progressive de masse musculaire au fil du temps. La section transversale des myofibres a été mesurée après immuno-marquage, comme on le voit ici. Contraction rapide de type deux fibres tache brune et contraction lente de type un fibres, tache blanche de type deux rapide.

Les fibres à contraction ont démontré une diminution progressive de la section transversale du muscle dénervé. Plus de quatre semaines Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez être en mesure d’effectuer la section du nerf tibial chez la souris. Cela fournit un modèle reproductible, robuste et bien validé de l’atrophie musculaire squelettique induite par la dénervation.