Name: Induction pharmacologique de mélanine épidermique et la protection contre les coups de soleil dans un modèle humanisé de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-07T16:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 37 s
Description: Découvrez l'induction pharmacologique de mélanine épidermique par forskoline pour protéger la peau contre les UV dans un modèle murin humanisé. Cette méthode permet d'évaluer la sensibilité aux rayonnements et la résistance aux coups de soleil.

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Les auteurs tiennent à remercier Malinda Spry pour l&#39;assistance technique. Nous reconnaissons également les sources de financement actuelles et passées: l&#39;Institut national du cancer (R01 CA131075, R01 CA131075-02S1), le Fonds de recherche Wendy Will cas du cancer, la Fondation Markey Cancer, le Réseau de l&#39;enfance et la Jennifer et Dickens Research Foundation mélanome David.

Une. Préparation de la forskoline pour l&#39;administration topique d&#39;un extrait de racine de brut de l&#39;usine de Plectranthus barbatus (Cohleus forskohlii) <ol><li> Protocoles pour expériences murines ont suivi les lignes directrices pour la conduite éthique dans le soin et l&#39;utilisation des animaux et ont été approuvés par la institutionnel de protection et d&#39;utilisation des animaux Comité à l&#39;Université du Kentucky (Protocole # 00768M2004). L&#39;extrait de racine est constituée à 40% poids / volume dans une base dermatologique norme de 70% d&#39;éthanol, 30% de propylène glycol. </li><li> Peser 200 g de forskoline brut extrait de racine et le transférer dans un bêcher. Pour faire 500 ml de 40% (p / v) de solution, remettre en suspension 200 g de forskoline brut extrait de racine par l&#39;ajout de la plupart, mais pas la totalité du volume du véhicule (70% éthanol, 30% de propylene glycol) et porter la solution à environ 450 ml. </li><li> Agiter pendant une heure à température ambiante. La solution sera un peu visqueux et peut nécessiter une agitation manuelle de «lever» l&#39;extrait en solution avantla barre d&#39;agitation est en mesure de prendre le relais. </li><li> Après une heure d&#39;agitation, verser le mélange dans un cylindre gradué et porter le volume à 500 ml en utilisant un véhicule qui a été utilisé à &quot;rincer&quot; le bêcher qui a été utilisé pour agiter la bouillie (pour maximiser la récupération de la forskoline à partir du bécher) . </li><li> Transférer la suspension de tubes de 50 ml à centrifuger en polypropylène. Centrifugeuse (1500 xg, la température ambiante, 15 min) à l&#39;aide d&#39;une centrifugeuse de table. A ce moment, la matière insoluble sera assez compacté, ce qui permet au surnageant d&#39;être facilement déversé. </li><li> Filtrer la solution à travers une membrane d&#39;acétate de cellulose de 0,22 um pour éliminer toute matière insoluble résiduelle à partir de l&#39;extrait. On utilise un système de haut-bouteille conçue pour la culture cellulaire, ainsi que l&#39;utilisation des pré-filtres qui viennent avec l&#39;appareil pour éviter un colmatage prématuré de la membrane à partir de composants insolubles de l&#39;extrait de racine. Lors de grands volumes de l&#39;extrait, un filtrage d&#39;environ 100 ml à la fois, en changeant le pari préfiltreween chaque volume ajouté. </li><li> Lorsqu&#39;elles sont stockées à la température ambiante, l&#39;extrait maintient l&#39;activité biologique pour jusqu&#39;à un an. </li></ol> 2. Préparation de C57BL / 6 K14-Scf souris pour des traitements topiques <ol><li> Retirer dorsale fourrure des animaux par cisaillement électrique. Anesthésier brièvement les animaux avec de l&#39;isoflurane inhalation pour faciliter la tonte de dorsale fourrure avec des ciseaux électriques équipés d&#39;une tête préparatoire chirurgicale 0,25 mm (Fisher Scientific). De préférence, utiliser un seul type d&#39;anesthésie (par exemple, la kétamine / xylazine) pour minimiser les risques de surdose d&#39;anesthésique. La chambre d&#39;inhalation saturé comporte des risques au travail lorsqu&#39;il est utilisé en dehors d&#39;une hotte et fournit des quantités inconnues de l&#39;anesthésie des animaux. Idéalement, un vaporisateur de précision doit être utilisé. </li><li> Pour supprimer résiduelle chaume de cheveux, traiter les animaux avec un dépilatoire chimique. Administrer une anesthésie à l&#39;animal par une injection ip de la kétamine à 40 mg / kg de xylazine et 4 mg / kg </li&gt; <li> Lorsque les animaux sont anesthésiés de façon adéquate (à en juger par pincement de l&#39;orteil), appliquer une quantité doigt de taille de crème dépilatoire à cisaillé peau du dos à l&#39;aide d&#39;un doigt ganté. Frottez la crème dans la peau pendant 30-60 secondes ou jusqu&#39;à ce que les poils sont clairement visibles dans la crème comme il est déplacé. Laissez la crème sur que pour le montant minimum de temps nécessaire pour l&#39;épilation comme l&#39;exposition prolongée conduit à la combustion chimique de la peau, l&#39;éclatement de l&#39;épiderme et de la mort de la perte de l&#39;intégrité de l&#39;épiderme. </li><li> Essuyez la peau du dos avec des tampons de gaze imbibée d&#39;eau jusqu&#39;à ce que toutes les crèmes a été supprimé. Animaux à sec utilisant des serviettes en papier doux, et leur permettront de récupérer dans un endroit isolé chaud (par exemple cages propres placés sur un coussin chauffant). Épiler les animaux un par un et suivre de près tout au long de la procédure. </li></ol> 3. L&#39;administration topique de la forskoline ou de contrôle des véhicules <ol><li> Les animaux doivent être traités un à la fois. Anesthésier brièvement à inhalerd isoflurane en plaçant la souris au-dessus d&#39;un filtre en nylon perméable à l&#39;air de forme équipée en vertu de laquelle a été placé un papier essuie-isoflurane saturé dans un bocal en verre avec couvercle clair isoflurane saturé dans une hotte. Exposer la souris à l&#39;isoflurane pendant un temps suffisant pour supprimer les mouvements musculaires volontaires mais aussi pour préserver la respiration spontanée (typiquement 10-20 sec). Laissant l&#39;animal dans l&#39;isoflurane trop longtemps se traduira par la suppression respiratoire et la mort. Il est préférable de pécher par excès de «lumière qui&quot; et d&#39;avoir à ré-exposer la souris brièvement plus isoflurane plutôt que de sur-exposer l&#39;animal à la mort de la drogue et les risques. </li><li> Retirer l&#39;animal de la chambre de l&#39;isoflurane et le placer sur un tapis de banc absorbant propre. </li><li> Avec une micropipette 1000 pi équipé d&#39;une pointe de polypropylène à usage unique, établir 400 ul de 40% d&#39;extrait de forskoline brut (animaux de contrôle du véhicule recevront 70% d&#39;éthanol, 30% de propylène glycol seul). </li><li> Transvaser l&#39;extrait sur ledos de l&#39;animal par égouttement il sur la peau, puis, à l&#39;aide du côté de la pointe de la pipette, appliquer l&#39;extrait sur la peau du dos jusqu&#39;à ce que toute la peau a été couvert. Il n&#39;est pas nécessaire d&#39;effacer la peau après application. </li><li> Retour de la souris dans sa cage, et observer attentivement jusqu&#39;à ce qu&#39;il récupère de l&#39;anesthésie. </li><li> Afin que les effets de l&#39;AMPc non pigments ne doivent pas confondre expériences de sensibilité UV, arrêter tous les traitements topiques deux jours avant l&#39;exposition aux UV (effet de pigment dure plusieurs jours au-delà dernier traitement topique). </li></ol> 4. Couleur de la peau de mesure par colorimétrie réfléchissant <ol><li> Anesthésier brièvement la souris avec de l&#39;isoflurane en inhalation (voir ci-dessus). </li><li> Calibrer un colorimètre Minolta en plaçant la tête portable sur la surface blanche standard fourni avec le colorimètre. </li><li> Placez la tête de mesure portable de la chasse du colorimètre avec la peau du dos de l&#39;animal assurer que le cycle apertur 1 cm 2e est complètement enfoncé sur la peau. Prenez au moins trois mesures distinctes dans différents domaines de la peau du dos. </li><li> Calculer moyenne L * Partition ± SD par animal et par groupe de traitement. Colorimétrie réfléchissante peut se faire à n&#39;importe quel moment dans l&#39;expérience. </li></ol> 5. Détermination de la sensibilité aux UV par calcul de &quot;Minimal érythémateuse Dose&quot; (MED) <ol><li> Utiliser des animaux qui ont été pré-traitées avec le véhicule ou la forskoline comme décrit ci-dessus. Anesthésier les animaux avec une injection intrapéritonéale d&#39;un mélange standard de kétamine et de xylazine (voir ci-dessus). </li><li> Préparer un morceau de ruban adhésif occlusif-UV pour les tests MED. Pour générer des trous dans la bande, utilisez une perforatrice de grande puissance avec une découpe circulaire 1 cm 2 (Figures 2A et B). Ayant des trous d&#39;une taille définie et la disposition symétrique dans la bande facilite la reconnaissance de modifications de la peau après irradiation. Sur chaque trou dans la bande, appliquer une petite mais facilement détachable pièce<html> de ruban qui peut être retiré à des instants définis pendant l&#39;exposition aux UV pour permettre l&#39;administration de différentes doses d&#39;UV. </li><li> Lorsque les animaux sont suffisamment sédation, placez le ruban sur la surface dorsale. lubrifiant des yeux doit toujours être utilisée sous anesthésie. </li><li> Allumez la source UV composé de deux Westinghouse F15T8UV-B lampes avec une puissance de pointe de 313 nm et une gamme de 280-370 nm. Laissez la lampe à s&#39;équilibrer à une sortie d&#39;UV constante telle que mesurée par un photomètre UV avec un capteur de rayons UVB (faut généralement quelques minutes pour les lampes à réchauffer). </li><li> Sur la base de la vitesse de transmission des UV, tel que mesuré par le photomètre UV, UV calculer le temps d&#39;exposition pour chaque dose désirée. Par exemple, UVB mesures de sortie de notre lampe de 2,4 mW / cm 2. Par conséquent, l&#39;administration de 5 kJ / m 2, la peau aurait besoin d&#39;être exposé à 208 sec (qui est de 3 min et 28 s) de rayonnement UVB, tel que calculé ci-dessous: upload/50670/50670eq1.jpg &quot;/&gt; </li><li> Placez les animaux sous sédation (chacune avec bande occlusif en place) ventrale de surface vers le bas pour assurer une exposition même UV. Pour administrer les doses choisies de rayonnement UV, retirer successivement les petites bandes occlusifs couvrant les trous d&#39;exposer 1 cm 2 zones de peau à des doses correctes de rayonnement. Par conséquent, en utilisant l&#39;exemple ci-dessus, si 40 kJ / m 2 est la plus grande dose dans l&#39;expérience, alors que l&#39;animal serait sous la lampe à 27 min et 47 sec total de la peau et dans la condition de 40 kJ / m 2 n&#39;aurait pas d&#39; bande recouvrant tout le temps. Cependant, la bande recouvrant la condition 5 kJ / m 2 serait supprimé quand il ya 208 sec restant dans l&#39;exposition. Moment de retrait de la bande doit être fait pour que chaque état se termine en même temps. </li><li> Après l&#39;exposition aux UV, ôtez la pellicule de la peau du dos, en prenant soin de ne pas déchirer la peau avec des mouvements brusques ou trop énergiques. Placer les animaux dans un endroit calme au chaud pour permettrerécupération de l&#39;anesthésie. </li><li> Surveillance de la souris pendant 24-48 heures à chercher des zones discrètes de l&#39;érythème (rougeur) ou œdème (gonflement) correspondant à des sites anatomiques exposés à la dose spécifique de l&#39;irradiation UV. Documenter les résultats de la peau photographiquement. </li><li> MED valeur correspond à la dose minimale d&#39;UV qui provoque une inflammation telle que définie par un érythème et / ou d&#39;œdème de l&#39;ensemble du cercle de peau exposée. Notez que la pigmentation de la peau peut contester la détermination de MED, cependant, un érythème et un oedème peuvent encore généralement être évalués avec précision, grâce en partie à la forme définie des ouvertures dans la bande pendant l&#39;exposition aux UV. </li></ol> 6. Analyse statistique Analyser les données entre les cohortes de souris par une ANOVA avec post-test de Bonferroni (Graph Pad PRISM). Des valeurs de p &lt;0,05 sont considérées comme statistiquement significative.

Les auteurs déclarent qu&#39;ils n&#39;ont aucun intérêt financier concurrents.

En utilisant un modèle animal de l&#39;être humain à la peau claire, nous constatons que l&#39;application topique d&#39;un extrait brut racine forskoline riche s&#39;assombrit robuste l&#39;épiderme en stimulant la production de mélanine dans la peau. Mélanisation épidermique est dépendante de l&#39;expression du facteur de cellules souches dans l&#39;épiderme basales, comme cela se produit dans la peau humaine, mais pas dans la peau non modifiée génétiquement souris. La peau dorsale de souris génétiquement non-modifié...

L&#39;incidence du mélanome, la forme la plus mortelle de cancer de la peau, a considérablement augmenté au cours des dernières décennies aux États-Unis, en particulier chez les personnes à peau claire. Preuve moléculaire et épidémiologique forte implique rayonnement UV comme un facteur causal majeur de l&#39;environnement 2-5. L&#39;exposition aux UV renforcée sous forme d&#39;exposition au soleil et l&#39;utilisation des lits de bronzage est susceptible d&#39;être responsable de la plupart des augmentations de mélanome incidence 6-7. risque de mélanome semble particulièrement liée à des coups de soleil 8, en particulier ceux au début de la vie 9-10. Le risque de coup de soleil est liée non seulement à la dose et l&#39;intensité de l&#39;exposition aux UV, mais aussi par des facteurs héréditaires qui influencent la réponse cutanée à un rayonnement UV. pigmentation de la peau est l&#39;un des déterminants les plus importants de la sensibilité aux UV, le risque de coups de soleil et le risque de cancer. Le mélanome se produit environ vingt fois plus souvent chez les personnes à peau claire par rapport à individua peau foncéels 11-13. La mélanine, un pigment produit par les mélanocytes de l&#39;épiderme, est le principal déterminant de teint de la peau. La mélanine est disponible en deux variétés principales: (1) l&#39;eumélanine, un pigment brun / noir foncé efficace pour absorber l&#39;énergie du rayonnement UV, et (2) phéomélanine, un rouge / pigment blond moins efficace pour prévenir la pénétration de photons UV dans la peau. couleur de la peau, la sensibilité aux UV et le risque de mélanome sont en grande partie déterminées par le contenu épidermique eumélanine 14-15. Le plus eumélanine dans l&#39;épiderme, les photons UV moins peut pénétrer dans la peau. En raison de faibles niveaux innées de l&#39;eumélanine, les personnes à la peau claire sont beaucoup plus sujettes à des effets aigus et chroniques du rayonnement UV 16-18. la pigmentation de la peau, le mélanome et le risque de la capacité de &quot;bronzage&quot; après l&#39;exposition aux UV tout en corrélation avec la capacité de signalisation du récepteur de la mélanocortine 1 (Mc1r), une s-G à sept domaines transmembranaires couplés srécepteur de urface sur les mélanocytes 19-22. Lorsque Mc1r se lie à son ligand apparenté à haute affinité, α-mélanocyte stimulating hormone (α-MSH), il est l&#39;activation de l&#39;adénylcyclase et la production de la deuxième camp de messager 23. La réponse physiologique normale de la peau après exposition aux UV comprend la production de l&#39;épiderme de α-MSH par les kératinocytes 24-29. Nous émettons l&#39;hypothèse que d&#39;autres et de kératinocytes dérivées de α-MSH se lie à Mc1r sur les mélanocytes épidermiques, s&#39;engageant dans la production en aval du second messager AMPc par l&#39;activation de l&#39;adénylcyclase 30. taux d&#39;AMPc contrôlent de nombreux aspects de la différenciation des mélanocytes, y compris les voies de survie, réparation de l&#39;ADN et de la synthèse du pigment. signalisation de l&#39;AMPc Mc1r et induisent clairement les niveaux de l&#39;enzyme de pigments et de la production de l&#39;eumélanine. Lorsque la signalisation Mc1r est intacte et les taux d&#39;AMPc mélanocytaires sont robustes, l&#39;eumélanine est produite et la peau s&#39;assombrit. Toutefois, si la signalisation Mc1r est défectueux etles taux d&#39;AMPc cytoplasmiques restent faibles, pheomelanin est produite à la place 1. synthèse de eumélanine peut être stimulé pharmacologiquement par des agents qui augmentent le taux d&#39;AMPc 1,14,31-35. Depuis la protéine Mc1r est un régulateur majeur du risque de mélanome chez l&#39;homme 36-46, nous sommes intéressés aux mécanismes par lesquels Mc1r protège les mélanocytes contre la carcinogenèse induite par les UV. En tant que fondation pour nos études, nous avons généré un Mc1r-modèle murin transgénique variante sur un pur C57BL / 6 génétique 1. Dans ce modèle, facteur des cellules souches (SCF) est constitutivement exprimé dans l&#39;épiderme basaux et des mélanocytes épidermiques interfolliculaires sont retenus dans la peau tout au long de la vie 47, contrairement aux souris non-transgénique, dans lequel mélanocytes localiser au derme dans les follicules pileux. Avec le transgène K14-Scf incorporé, l&#39;épiderme devient pigmenté avec notamment la caractéristique de la mélanine de pigments de pigmentsouche de l&#39;animal 1. souris K14-SCF sur le fond génétique C57BL / 6 de type sauvage signalisation Mc1r ont la peau noire de jais caractérisé par des niveaux très élevés de l&#39;eumélanine pigment. Sans surprise, ces animaux sont très résistants aux UV. En revanche, génétiquement adaptés K14-SCF C57BL / 6 animaux qui abritent un inactif Mc1r mutant n&#39;ont presque pas d&#39;eumélanine dans l&#39;épiderme. Au lieu de cela, ces animaux «d&#39;extension» (Mc1r e / e) ont un teint de peau juste causée par le dépôt de pheomelanin pigment (figure 1A) et sont beaucoup plus sensibles aux UV 48-49. Composés pharmacologiques ayant des propriétés chimiques qui permettent la pénétration dans la peau ont été montré pour induire puissamment eumélanine dans le prolongement (Mc1r e / e) modèle animal K14-Scf en manipulant directement les taux d&#39;AMPc dans les mélanocytes de l&#39;épiderme de la peau. La mélanine régulation à la hausse dans ce modèle a été reported par adénylylcyclase activation 1 ainsi que de la phosphodiestérase 4 inhibition 35. Dans cet article, nous démontrons la préparation et l&#39;application topique de la forskoline en extension (Mc1r e / e) animaux K14-SCF qui modèle la sensible aux UV humain à la peau claire. Nous montrons que l&#39;application deux fois par jour du médicament favorise la mélanisation accélérée, ce noircissement de la peau est due au dépôt de l&#39;épiderme de mélanine et qui induit la mélanine épidermique protège contre les coups de soleil induite par les UV à travers la mesure de la &quot;dose minimale érythémateuse&quot; (MED) 48.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><fort>Réactifs</fort></td></tr><tr><td>Extrait de Coleus Forskoli 20 %</td><td>Buckton Scott USA Inc.</td><td>n/a</td><td>Princeton, NJ</td></tr><tr><td>Isothesia, Isoflurane , USP</td><td>Butler Schein</td><td>NCD 11695-6776-1</td><td>Dublin, OH, États-Unis</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Anased Injection</td><td>LA04612</td><td>Shenandoah, Iowa, États-Unis</td></tr><tr><td>Kétamine HCl, USP</td><td>Putney</td><td>NDC 26637-411-01</td><td>St. Joseph, MO, États-Unis</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs.</td><td>2705</td><td></td></tr><tr><td>Propylène glycol</td><td>Adesco</td><td>05751L</td><td>Solon, OH, États-Unis</td></tr><tr><td>Crème dépilatoire, Nair</td><td>Church Dwight</td><td>JF-11 4381322</td><td>Priceton, NJ</td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>Germicide Hg Lamp UV-B</td><td>Westinghouse</td><td>F15T8UV-B</td><td></td></tr><tr><td>Radiomètre photomètre</td><td>International light</td><td>1LT400A</td><td>Peabody, MA, USA</td></tr><tr><td>Chromamètre</td><td>Konica Minolta</td><td>CR-400</td><td>Ramsey, NJ, USA</td></tr><tr><td>Processeur de données pour chromamètre CR-400</td><td>Konica Monilta</td><td>DR-400</td><td>Ramsey, NJ, États-Unis</td></tr></tbody></table>

induction pharmacologique de mélanine épidermique et la protection contre les coups de soleil dans un modèle humanisé de souris

Pharmacologic Induction of Epidermal Melanin and Protection Against Sunburn in a Humanized Mouse Model

Équité de la peau, la sensibilité aux UV et le risque de cancer de la peau tout en corrélation avec la fonction physiologique du récepteur de la mélanocortine 1, une protéine de signalisation G s couplé trouve à la surface des mélanocytes. Mc1r stimule l&#39;adénylyl cyclase et la production d&#39;AMPc qui, à son tour, régule à la hausse la production de mélanine dans les mélanocytes de la peau. Afin d&#39;étudier les mécanismes par lesquels la signalisation Mc1r protège la peau contre les dommages UV, cette étude s&#39;appuie sur un modèle de souris avec &quot;peau humanisé&quot; basé sur l&#39;expression épidermique du facteur de cellules souches (SCF). Souris transgéniques K14-SCF conservent mélanocytes dans le épiderme et ont donc la possibilité de déposer la mélanine dans l&#39;épiderme. Dans ce modèle animal, type sauvage résultats de l&#39;état Mc1r en dépôt solide de pigment noir de l&#39;eumélanine et un phénotype anti-UV. En revanche, les animaux K14-SCF avec signalisation défectueux Mc1r capacité présentent une pigmentation rouge / blonde, très peu d&#39;eumélanine dans la peau etun phénotype sensible aux UV. Raisonnement que le dépôt de l&#39;eumélanine pourrait être renforcée par des agents topiques qui imitent signalisation Mc1r, nous avons constaté que l&#39;application directe de l&#39;extrait de la forskoline sur la peau de souris à la peau claire Mc1r défectueux a entraîné robuste induction de l&#39;eumélanine et la protection UV 1. Nous décrivons ici la méthode pour la préparation et l&#39;application d&#39;un extrait de racine naturelle contenant la forskoline à des souris à la peau claire K14-SCF et signaler une méthode pour mesurer la sensibilité aux UV par déterminer la dose érythémateuse minimale (DEM). En utilisant ce modèle animal, il est possible d&#39;étudier comment épidermique AMPc induction et la mélanisation de la peau affectent les réponses physiologiques à l&#39;exposition aux UV.

Souris C57BL / 6 ont été générées sur un fond eumelanotic, pheomelanotic ou amélanotiques intégrant le transgène K14-SCF comme décrit (figure 1A). Cohortes d&#39;extension à la peau claire (Mc1r e / e, Tyr + / +) souris ont été traitées par voie topique avec deux doses quotidiennes de véhicule (70% d&#39;éthanol, 30% de propylène glycol) ou 40% d&#39;extrait de coleus brut forskohlii racine (80 uM par dose) pendant 5 jours (Figure 2B). Ef...

Mélanine épidermique est induite par l&#39;application topique de la forskoline dans un modèle murin de la sensible aux UV humain à la peau claire. Manipulation pharmacologique du taux d&#39;AMPc dans la peau et l&#39;épiderme assombrissant fortement protéger contre l&#39;inflammation médiée par les UV (coups de soleil), telle que mesurée par la dose érythémateuse minimale (DEM) de dosage.

Induction pharmacologique de mélanine épidermique et la protection contre les coups de soleil dans un modèle humanisé de souris

Fairness of skin, UV sensitivity and skin cancer  risk all correlate with the physiologic function of the melanocortin 1  receptor, a Gs-coupled signaling ...

L'objectif général de l'expérience suivante est de mesurer la sensibilité aux UV en déterminant la dose érythémateuse minimale chez des souris à peau claire prétraitées avec quatre types de peau. Cela est réalisé en préparant d'abord la peau dorsale des souris à être irradiée par épilation et ablation. Ensuite, des traitements topiques de forskoline sont appliqués sur la peau dorsale.Ensuite, les souris sont exposées à différentes doses d'irradiation UV afin de déterminer les effets du mélon intermédiaire sur l'inflammation induite par les UV. Les résultats obtenus montrent qu'une application topique de forline augmente fortement la pigmentation cutanée, et que les animaux dont le mélanine a été pharmacologiquement renforcée sont résistants aux UV, comme déterminé par la DME (dose érythémateuse minimale). Il s'agit d'études de principe démontrant qu'il est possible d'induire pharmacologiquement un bronzage chez un individu incapable de bronzer en raison d'un défaut dans un gène très important des mélanocytes appelé récepteur de la mélanocortine 1 ou MC1R. Dans les populations humaines, la perte de fonction de MC1R est corrélée à une sensibilité accrue aux UV, à une tendance aux cou

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Dans cette vidéo, des cellules de mélanome d’origine humaine sont implantées par voie sous-cutanée dans la région du flanc d’une souris immunodéprimée. Le modèle PDX permet l’investigation préclinique des cellules de mélanome qui récapitulent mieux l’hétérogénéité tumorale et l’agressivité du mélanome observées dans des conditions in vivo.

Modélisation de xénogreffes dérivées de patients : une technique pour générer des modèles de souris de mélanome

Cette vidéo décrit la procédure d’induction de la carcinogenèse cutanée en deux étapes pour étudier l’initiation tumorale par l’application topique de produits chimiques. Dans un premier temps, un mutagène, le DMBA, est appliqué sur la peau d’un modèle murin qui initie la formation de tumeurs en provoquant des mutations dans les cellules souches, suivi de l’application d’un stimulateur de croissance, le TPA, qui accélère la formation du papillome cutané.

Modèle de cancérogenèse cutanée en deux étapes induite par des produits chimiques : un modèle murin expérimental de cancer de la peau

Cette vidéo décrit une méthode de mesure de la sensibilité aux UV dans un modèle de souris humanisée, un modèle de souris qui imite la peau humaine. Nous déterminons la dose érythémateuse minimale (DME) de rayonnement UV qui peut provoquer un érythème ou un œdème sur la peau. La méthode peut aider à déterminer l’efficacité des médicaments utilisés pour réduire la sensibilité aux UV.

Dosage de la dose érythémateuse minimale : méthode de mesure de la sensibilité aux UV dans des modèles murins

Nous décrivons trois méthodes expérimentales pour l’évaluation de l’activité de l’hypopigmentation des produits chimiques in vitro : quantification du contenu de l’activité et la mélanine 2) tyrosinase 1) cellulaire et 3) mesure de mélanine de mélanine cellulaire coloration et analyse d’images.

Quantification de l’activité In Vitro de l’Hypopigmentation

La procédure suivante décrit une méthode de contrôle spatial et temporel de l’initiation de tumeurs mélanocytaires dans la peau dorsale murin, à l’aide d’un modèle de souris génétiquement modifiée. Ce protocole décrit l’initiation des mélanomes cutanés macroscopiques et microscopiques.

Contrôle spatial et temporel de l’initiation du mélanome murin à partir de cellules souches de mélanocytes mutants

La carcinogenèse de peau à deux étapes est induite par deux produits chimiques topiques appliqués. Un mutagène 7,12-dimethylbenz[a]anthracene) provoque des mutations dans les cellules épidermiques et une application continue du stimulateur de croissance générale 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate accélère la formation de papillome cutané.

Modèle de carcinogenèse de la peau induitparé par des produits chimiques à l'aide de Dimethylbenz[a]Anthracene et 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

L’objectif de ce protocole est d’induire une production transitoire in vivo de niveaux non létaux d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) dans la peau de souris, favorisant ainsi les réponses physiologiques dans les tissus.

Stimulation de niches de cellules souches et régénération tissulaire dans la peau de souris par photogénération commutable d’espèces réactives de l’oxygène dépendantes de la protoporphyrine IX in situ

Nous décrivons ici un système de reprogrammation directe optimisé pour les mélanocytes et un système d’emballage de virus concentré à haute efficacité qui assure une reprogrammation directe en douceur.

Reprogrammation directe des fibroblastes de souris en mélanocytes

Le protocole décrit une étude des effets systémiques et locaux sur la peau de l’exposition aux ultraviolets B chez la souris.

Étude de l’exposition chronique des souris aux rayons ultraviolets B 

L’étude démontre le rôle de la peau dans la modulation des réponses immunitaires chez la souris par l’immunisation épicutanée (EC). L’immunisation par EC avec un antigène protéique peut supprimer les réponses immunitaires en cas d’hypersensibilité de contact ou inverser la suppression induite par la peau lorsqu’elle est associée à des profils moléculaires associés à des agents pathogènes. L’immunisation EC est prometteuse en tant qu’approche efficace et sans aiguille de l’immunothérapie.

Modèle murin d’immunomodulation induite par l’épi-peau

Un protocole standardisé pour induire la sénescence prématurée chez les HNM utilisant tBHP, des protocoles standardisés pour analyser les marqueurs clés de sénescence, notamment l’arrêt de croissance, l’activité SA-β-galactosidase et les facteurs SASP.

Un protocole standardisé pour induire la sénescence prématurée induite par le stress chez les mélanocytes humains primaires à l’aide de tert-butyl hydroperoxyde

Découvrez l'induction pharmacologique de mélanine épidermique par forskoline pour protéger la peau contre les UV dans un modèle murin humanisé. Cette méthode permet d'évaluer la sensibilité aux rayonnements et la résistance aux coups de soleil.

Induction pharmacologique de mélanine épidermique et la protection contre les coups de soleil dans un modèle humanisé de souris

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