Visualiser les effets d'une expérience précoce positive, tactile stimulation, sur dendritiques Morphologie et Synaptic connectivité avec Golgi-Cox coloration

L’objectif global de cette procédure est d’utiliser des techniques de coloration à l’or G Cox pour visualiser les changements morphologiques dans les neurones qui suivent la stimulation tactile tôt dans la vie. Ceci est accompli en administrant d’abord la stimulation tactile trois fois par jour, du troisième jour postnatal au 21e jour postnatal. La deuxième étape consiste à perfuser les animaux une fois qu’ils ont atteint l’âge de la recherche et à stocker leur cerveau dans la solution Goldy cos.

Ensuite, les cerveaux sont tranchés avec de l’Aome. La dernière étape consiste à imprégner les cerveaux avec la technique de co-coloration GOGI. En fin de compte, la procédure GOGI co est utilisée pour visualiser des neurones individuels, ce qui permet d’analyser les changements morphologiques.

La beauté de la technique de Goy Cox est qu’elle nous permet de quantifier la structure des neurones et de la corréler avec les résultats comportementaux. Les implications de cette technique s’étendent aux troubles du développement, car la stimulation tactile s’est avérée efficace dans la récupération comportementale et anatomique de ces troubles. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu de la neuroanatomie des rats, elle peut également être appliquée à d’autres organismes modèles et au tissu cérébral humain.

Pour nous aider à approfondir notre compréhension de la plasticité dépendante expérimentée, les animaux sont maintenus sur un cycle d’obscurité légère de 12 heures avec un accès libre à la nourriture et à l’eau après la naissance. Chaque rat femelle est logée individuellement avec sa progéniture. Pour éviter un stress supplémentaire lié à la manipulation, les chiots reçoivent une stimulation tactile à partir de P trois.

Après avoir pesé les chiots avant la séance de stimulation tactile du matin, transportez les chiots dans leurs cages domestiques vers une salle de test séparée. Placez la cage domestique sur un coussin chauffant réglé à 24 degrés Celsius. Lorsqu’ils sont prêts pour la stimulation tactile, retirez les barrages de leur cage domestique et placez-les dans une cage temporaire avec de la nourriture et de l’eau.

Garder la mère et la cage temporaire dans la salle d’élevage. Ensuite, utilisez une planche rigide pour diviser la cage d’accueil en deux moitiés. Ensuite, attribuez au hasard la moitié des chiots de chaque portée à une stimulation tactile, l’autre moitié servant de témoin.

Marquez leurs pattes arrière et leur queue avec un marqueur permanent pour différencier les groupes et placez les chiots dans le groupe de stimulation tactile d’un côté de la cage et contrôlez les chiots de l’autre. Réglez une minuterie sur 15 minutes à l’aide d’une plume douce comme un plumeau. Brossez tous les chiots du groupe de stimulation tactile en même temps pendant 15 minutes consécutives.

Les jeunes ratons se blottissent généralement les uns contre les autres et semblent entrer dans un cycle de sommeil profond, ce qui rend très facile de stimuler tous les chiots à la fois. Au fur et à mesure que les chiots vieillissent, ils deviennent plus actifs, certains chiots se promenant et explorant. Pendant la séance, déplacez tous les chiots errants dans le groupe pour vous assurer que chaque chiot reçoit une stimulation égale.

Après 15 minutes de stimulation tactile, retournez la mère dans la cage et transportez la cage dans la salle d’élevage. Ce processus est répété trois fois par jour. Pendant 19 jours Après la dernière séance de stimulation tactile, sevrer les petits de leurs mères Les petits sont logés dans des cages avec cinq ou six autres animaux sevrés du même sexe, laissant les rats tranquilles dans des conditions de logement standard jusqu’à ce qu’ils atteignent l’âge de recherche.

Les échantillons sont prélevés lorsque les animaux atteignent l’âge de 100 jours. Après l’euthanasie et la perfusion intracardiaque, le cerveau est extrait. Prendre soin de garder le cervelet intact.

Placez les cerveaux dans une bouteille Nalgene opaque remplie de 20 millilitres de solution Goldy Cox où ils sont conservés pendant 14 jours. Après 14 jours, remplacez la solution par une solution à 30 % de saccharose. Gardez les cerveaux dans une solution de saccharose pendant deux à cinq jours avant de sectionner pour sectionner.

Séchez le cerveau avant de le fixer à une étape de sectionnement avec de la colle acrylique Sano pour éviter les déchirures ou les sections inégales, assurez-vous que tout le cerveau est fermement fixé à la scène. Ensuite, remplissez le réservoir Vibram avec une solution de saccharose à 6 % jusqu’à ce qu’il recouvre la lame de sectionnement. Réglez la vitesse et l’amplitude du Vibram sur cinq.

Coupez le cerveau en sections de 200 microns et placez les sections sur une lame de microscope gélatinisée à 2 %. Assurez-vous de garder les sections humides au cours du sectionnement lorsque toutes les sections d’intérêt ont été collectées. Appuyez les sections sur les lames en exerçant une pression avec du papier humide.

Placez les lames dans un support à lames et stockez-les dans une chambre d’humidité pendant au moins 12 heures, mais pas plus de quatre jours. Pour commencer la procédure de coloration, étiquetez et préparez 12 plats de coloration en verre. Tout d’abord, plongez les lames dans de l’eau distillée pendant une minute.

Ensuite, placez les lames dans de l’hydroxyde d’ammonium et conservez-les dans l’obscurité pendant 30 minutes. Après une minute supplémentaire dans de l’eau distillée, placez les lames dans Kodak Fix pendant 30 minutes avec une protection contre la lumière. Placez à nouveau les lames dans de l’eau distillée avant de les déshydrater dans une série de solutions d’alcool graduées.

Après le dernier lavage à l’alcool, placez les lames dans une solution tierce pendant 15 minutes. Enfin, placez les lames en hemo D pendant 15 minutes. Lorsque vous êtes prêt, utilisez Paramount pour placer les lamelles sur les lames et laissez les lames sécher à l’air libre avant de les examiner avec un microscope

Voici une photographie représentative d’un neurone paramétallique coloré par Golgi Cox chez un rat qui a reçu une stimulation tactile pendant le développement. Une photographie agrandie montre des épines dendritiques sur les dendrites terminales. L’image plus claire de gauche provient d’un rat du groupe témoin et l’image plus sombre provient d’un rat qui a reçu une stimulation tactile.

Ce graphique représente la complexité dendritique apicale et basérique moyenne pour les neurones de la zone CG trois de rats adultes qui ont reçu une stimulation tactile pendant le développement ou non. En suivant cette procédure, nous avons l’avantage que si nous voulons poser des questions supplémentaires, nous avons coloré tout le cerveau et nous pouvons donc revenir en arrière et utiliser le même tissu cérébral pour répondre à ces questions. En développant ces techniques, nous avons ouvert la voie aux chercheurs pour explorer l’utilité de la stimulation tactile comme thérapie pour le traitement des traumatismes crâniens ou d’autres formes de lésions neurologiques après son développement.

Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs en neurosciences pour explorer son potentiel dans la remédiation des traumatismes cérébraux et des troubles du développement. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de fournir aux chiots enveloppants l’expérience enrichissante de la stimulation tactile ainsi qu’un moyen de visualiser les neurones et les synapses individuels.