Murin col de l'utérus Cœur, la transplantation en utilisant une technique de modification de manchette
12 octobre 2014
Le modèle de transplantation cardiaque col de l'utérus de souris est bien adapté pour immunologique ainsi que des études de lésions d'ischémie reperfusion. Nous avons modifié la procédure en utilisant une technique de manchette non-suture et effectué plus de 1.000 transplantations réussies avec cette approche.
Ici, nous fournissons des détails supplémentaires de cette technique pour compléter la vidéo.
Je suis UBA du laboratoire de recherche Daniel KY du département de transplantation viscérale et de chirurgie thoracique de l’Université de médecine d’Ensberg. Aujourd’hui, nous allons vous montrer un modèle de transplantation cardiaque hétérotopique de Morine. Utilisation d’une technique de brassard modifiée Pour que l’animal receveur soit anesthésié par une injection intramusculaire d’INE et de kétamine.
Ensuite, tous les poils de la région latérale cervicale sont enlevés et le champ opératoire gratté trois fois avec de la chlorhexidine. Ensuite, le champ opératoire est préparé et l’animal est placé en position couchée sur le dos sur le champ opératoire, la souris donneuse est anesthésiée par une injection intramusculaire d’oxil sine et de kétamine. Ensuite, tous les poils de la région abdominale des receveurs sont enlevés et le champ opératoire gratté trois fois avec de la chlorhexidine.
Ensuite, le champ opératoire est préparé et l’animal est placé en position couchée sur le champ opératoire. Comme le montre cette séquence, les greffons de Carlo cardiaque provenant de donneurs de biopsie sont rejetés dans les sept jours suivant la transplantation chez des receveurs de C 57 noir six entièrement incompatibles. Les transplantations cardiaques syngéniques effectuées dans notre série ont survécu indéfiniment.
Malgré le fait que la transplantation cardiaque hétérotopique chez la souris soit techniquement difficile, elle reste l’étalon-or pour toutes les études mécanistes in vivo liées à l’immunologie de la transplantation. Notre approche modifiée permet d’obtenir des taux de réussite élevés avec des compétences microchirurgicales de base qui permettront une large application de ce modèle. Cette vidéo a pour but d’aider et de guider d’autres chercheurs dans l’établissement du modèle dans leurs propres laboratoires.
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Aperçu
Le modèle de transplantation cardiaque cervicale murine est un outil précieux pour l'étude des réponses immunologiques et des lésions induites par l'ischémie-reperfusion. Cet article décrit une technique modifiée avec manchon sans suture qui a permis avec succès plus de 1 000 transplantations cardiaques.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Biologie de la transplantation
- Immunologie
- Lésion par ischémie-reperfusion
Contexte
- Le modèle murin est essentiel pour comprendre la dynamique de la greffe cardiaque.
- La lésion ischémie-reperfusion est un domaine de recherche crucial en transplantation.
- Les réponses immunologiques peuvent influencer considérablement le succès de la greffe.
- Des techniques chirurgicales innovantes peuvent améliorer les résultats de la transplantation.
Objectif de l'étude
- Démontrer une technique chirurgicale modifiée pour la transplantation cardiaque.
- Améliorer le taux de réussite des transplantations cardiaques chez la souris.
- Fournir un modèle fiable pour des études immunologiques futures.
Méthodes utilisées
- Technique modifiée de greffe cardiaque sans suture avec manchon.
- Protocoles d'anesthésie pour les souris donneuses et receveuses.
- Préparation du champ opératoire à l'aide de chlorhexidine.
- Positionnement en décubitus dorsal du receveur pendant l'intervention chirurgicale.
Résultats principaux
- Réalisation de plus de 1 000 transplantations cardiaques avec succès.
- Mise en évidence de l'efficacité de la technique modifiée du manchon.
- Mise en place d'un modèle reproductible pour les recherches futures.
- Apport de connaissances approfondies sur la préparation chirurgicale et l'anesthésie.
Conclusions
- La technique modifiée améliore les taux de réussite de la greffe.
- Ce modèle convient à diverses études immunologiques.
- De futures recherches pourront s'appuyer sur cette méthodologie établie.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
Le modèle murin de transplantation cardiaque cervicale fournit un système in vivo reproductible pour évaluer les mécanismes immunologiques et la survie des greffons en recherche transplantologique. En permettant une anastomose vasculaire à haut taux de réussite grâce à une technique de manchon modifiée, ce modèle soutient l'analyse mécanistique et la réduction des risques associés aux thérapies immunomodulatrices ainsi qu'aux interventions contre l'ischémie-reperfusion. Cela place le modèle comme un pont translationnel pour la validation préclinique de candidats biologiques ciblant la tolérance au greffon et la protection du greffon.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmacie
Découverte précoce et validation de cibles
- Valeur scientifique : Permet l'interrogation fonctionnelle de cibles immunomodulatrices dans un système murin entièrement immunocompétent avec des greffes incompatibles au niveau du CMH.
- Valeur opérationnelle : Atteint un taux de perméabilité >95 %, réduisant ainsi la variabilité expérimentale et augmentant la puissance statistique dans les études de validation de cibles.
Développement de criblages et de tests
- Valeur scientifique : Fournit une plateforme standardisée d'anastomose vasculaire pour une perfusion homogène de la greffe et une modélisation reproductible des lésions par ischémie-reperfusion.
- Valeur opérationnelle : Une durée d'opération courte et un taux de réussite élevé favorisent une utilisation à grande échelle dans des campagnes de criblage nécessitant une surveillance longitudinale de la fonction greffée.
Recherche translationnelle et préclinique
- Valeur scientifique : Facilite les études mécanistiques du rejet et de la tolérance des greffes, permettant l'évaluation préclinique de thérapeutiques biologiques dans un contexte hémodynamique orthotopique proche du cadre clinique.
- Valeur opérationnelle : Les greffes syngéniques survivent indéfiniment, servant de contrôles internes pour réduire les risques d'interprétation mécanistique dans les études de greffes allogéniques.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Le modèle s'intègre dans la continuité de la découverte, de la validation de la cible jusqu'aux tests d'efficacité préclinique, en soutenant des cycles itératifs de conception, réalisation et évaluation pour les candidats immunomodulateurs.
- Biologie de la découverte : Permet la vérification d'hypothèses sur les voies des points de contrôle immunitaire et les médiateurs cytoniques dans le rejet de greffon en utilisant des receveurs totalement incompatibles au niveau du CMH, de souche C57BL/6.
- Évaluation : Permet l'évaluation quantitative du temps de survie du greffon et du score histopathologique, utilisés comme indicateurs fonctionnels de l'efficacité des composés.
- Analyse : Génère des résultats binaires de survie du greffon et des mesures de délai de rejet, permettant des comparaisons statistiques entre groupes expérimentaux.
- Recherche translationnelle : Relie les découvertes mécanistiques à la continuité préclinique en modélisant des conditions hémodynamiques pertinentes pour l'humain par une perfusion rétrograde via une anastomose carotido-aortique.
- Réutilisation institutionnelle : Met en place une plateforme chirurgicale réutilisable, adaptable à divers programmes d'anticorps, de cytokines et de thérapies cellulaires nécessitant une évaluation de la fonction du greffon à long terme.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Réduit l'ambiguïté mécanistique en immunologie des transplantations en fournissant un modèle murin fidèle et techniquement accessible.
- Valeur opérationnelle : L'anastomose standardisée à l'aide de manchons améliore la reproductibilité entre laboratoires et opérateurs disposant d'une formation de base en microchirurgie.
- Valeur stratégique : Permet de prendre plus tôt des décisions d'orientation (aller ou ne pas aller plus loin) en réduisant le risque d'échec en phase avancée dû à des mécanismes immunologiques imprévus.
- Impact sur le portefeuille : Favorise la priorisation ajustée au risque des candidats en se basant sur un engagement ciblé validé dans un microenvironnement immunitaire complexe.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en manipulation microchirurgicale des vaisseaux et en techniques d'éversion par manchon.
- Dépend de l'accès à des manchons en polyéthylène, à des instruments microchirurgicaux et à un équipement de positionnement stéréotaxique.
- Exige des protocoles standardisés d'anesthésie et d'asepsie afin de maintenir des taux de succès élevés quel que soit l'opérateur.
- L'adaptation à d'autres lits vasculaires peut nécessiter une optimisation de la taille des manchons et une validation de la perméabilité de l'anastomose.
- Les résultats à long terme dépendent de soins postopératoires rigoureux et d'une surveillance constante de la fonction et de la survie de la greffe.
