Name: PCR multiplex pour le typage des staphylocoques Cassette Chromosome Mec types I (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Apprenez le typage SCCmec des souches MRSA par PCR multiplex pour la microbiologie clinique. Cette méthode simplifie le criblage épidémiologique des Staphylococcus aureus résistants à la méthicilline.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nous remercions T. Ito, K. Hiramatsu, R. Daum, H. de Lencastre et D. Coleman pour l’aimable cadeau de quelques souches de référence utilisées dans cette étude. Ce travail a été en partie financé par le Centre de résistance aux antimicrobiens (CAR), les Services de santé de l’Alberta à Calgary, les Services de laboratoire de Calgary et l’Université de Calgary.

<ol><li>IWG-SCC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+%28SCCmec%29%3A+guidelines+for+reporting+novel+SCCmec+elements%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Classification of staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec): guidelines for reporting novel SCCmec elements.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (12), 4961-4967 (2009).</li>
<li>Ito, T., Hiramatsu, K., Tomasz, A., de Lencastre, H., Perreten, V., Holden, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+Reporting+Novel+mecA+Gene+Homologues%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Guidelines for Reporting Novel mecA Gene Homologues.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 56 (10), 4997-4999 (2012).</li>
<li>Okuma, K., Iwakawa, K., Turnidge, J. D., Grubb, W. B., Bell, J. M., O'Brien, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+of+new+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+clones+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Dissemination of new methicillin-resistant Staphylococcus aureus clones in the community.</a> Journal of Clinical Microbiology. 40 (11), 4289-4294 (2002).</li>
<li>Kondo, Y., Ito, T., Ma, X. X., Watanabe, S., Kreiswirth, B. N., Etienne, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+multiplex+PCRs+for+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+type+assignment%3A+rapid+identification+system+for+mec%2C+ccr%2C+and+major+differences+in+junkyard+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Combination of multiplex PCRs for staphylococcal cassette chromosome mec type assignment: rapid identification system for mec, ccr, and major differences in junkyard regions.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 51 (1), 264-274 (2007).</li>
<li>Oliveira, D. C., de Lencastre, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+PCR+strategy+for+rapid+identification+of+structural+types+and+variants+of+the+mec+element+in+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Multiplex PCR strategy for rapid identification of structural types and variants of the mec element in methicillin-resistant Staphylococcus aureus.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 46 (7), 2155-2161 (2002).</li>
<li>Milheirico, C., Oliveira, D. C., de Lencastre, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+to+the+multiplex+PCR+strategy+for+assignment+of+mec+element+types+in+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Update to the multiplex PCR strategy for assignment of mec element types in Staphylococcus aureus.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 51 (9), 3374-3377 (2007).</li>
<li>Milheirico, C., Oliveira, D. C., de Lencastre, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+PCR+strategy+for+subtyping+the+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+type+IV+in+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%3A+%27SCCmec+IV+multiplex%27%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Multiplex PCR strategy for subtyping the staphylococcal cassette chromosome mec type IV in methicillin-resistant Staphylococcus aureus: 'SCCmec IV multiplex'.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 60 (1), 42-48 (2007).</li>
<li>Zhang, K., McClure, J. A., Elsayed, S., Louie, T., Conly, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+multiplex+PCR+assay+for+characterization+and+concomitant+subtyping+of+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+types+I+to+V+in+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Novel multiplex PCR assay for characterization and concomitant subtyping of staphylococcal cassette chromosome mec types I to V in methicillin-resistant Staphylococcus aureus.</a> Journal of Clinical Microbiology. 43 (10), 5026-5033 (2005).</li>
<li>Zhang, K., McClure, J. A., Conly, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+multiplex+PCR+assay+for+typing+of+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+types+I+to+V+in+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Probes%22%5BJournal%5D)">Enhanced multiplex PCR assay for typing of staphylococcal cassette chromosome mec types I to V in methicillin-resistant Staphylococcus aureus.</a> Molecular and Cellular Probes. 26 (5), 218-221 (2012).</li>
<li>de Lamballerie, X., Zandotti, C., Vignoli, C., Bollet, C., de Micco, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+one-step+microbial+DNA+extraction+method+using+%22Chelex+100%22+suitable+for+gene+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A one-step microbial DNA extraction method using "Chelex 100" suitable for gene amplification.</a> Research in Microbiology. 143 (8), 785-790 (1992).</li>
<li>Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agarose+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+DNA+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments.</a> J. Vis. Exp. (62), e3923(2012).</li>
<li>McClure, J. A., Conly, J. M., Elsayed, S., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+PCR+assay+to+facilitate+identification+of+the+recently+described+Staphylococcal+cassette+chromosome+mec+type+VIII%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Probes%22%5BJournal%5D)">Multiplex PCR assay to facilitate identification of the recently described Staphylococcal cassette chromosome mec type VIII.</a> Molecular and Cellular Probes. 24 (4), 229-232 (2010).</li>
<li>Zhang, K., McClure, J. A., Elsayed, S., Conly, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+type%2C+tentatively+designated+type+VIII%2C+harboring+class+A+mec+and+type+4+ccr+gene+complexes+in+a+Canadian+epidemic+strain+of+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Novel staphylococcal cassette chromosome mec type, tentatively designated type VIII, harboring class A mec and type 4 ccr gene complexes in a Canadian epidemic strain of methicillin-resistant Staphylococcus aureus.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (2), 531-540 (2009).</li>
</ol>

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Le test PCR multiplex décrit ici fournit une méthode simple et fiable pour classer les types et les principaux sous-types deSCC mec I-V dans les staphylocoques, avec discrimination simultanée du SARM de la MSSA. Le test est robuste, facilement réalisé en une seule réaction PCR et les résultats sont faciles à interpréter. Le test a des limites en ce sens qu’il cible des loci individuels au sein de chaque typede mec SCC, mais n’offre pas de typage complexe complet de ccr et de mec , et n...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/50779/multiplex-pcr-assay-for-typing-staphylococcal-cassette-chromosome-mec">Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus</a>.&#160; There was a&#160;typo&#160;in Table 1.
In Table 1, the Oligonucleotide sequence for Type III-F5 was updated from:
TTCTCATTGATGCTGAAGCC
To:
GAAACTAGTTATTTCCAACGG

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/50779/multiplex-pcr-assay-for-typing-staphylococcal-cassette-chromosome-mec">Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus</a>.&#160; There was a&#160;typo&#160;in Table 1.

Erratum: Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus r

<table><tbody><tr><td>Gélose tryptique de soja</td><td>Fisher (BD)</td><td>CA90002-700 (236920)</td><td></td></tr><tr><td>Eau distillée stérile</td><td>Life Technologies</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>Platinum Taq : avec 10x tampon PCR et 50 mM MgCl2</td><td>Life Technologies</td><td>10966-034</td><td></td></tr><tr><td>100 mM dNTP</td><td>Life Technologies</td><td>10297-018</td><td></td></tr><tr><td>Base Tris</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6066</td><td></td></tr><tr><td>Acide borique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7901</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>15576-028</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Life Technologies</td><td>16500-500</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Life Technologies</td><td>15514-011</td><td></td></tr><tr><td>Bleu de bromophénol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B8026</td><td></td></tr><tr><td>1Kb+ Échelle d’ADN</td><td>Life Technologies</td><td>10787-026</td><td></td></tr><tr><td>Bromure d’éthidium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7637</td><td></td></tr><tr><td>1.5ml Tubes à microcentrifuger </td><td>VWR (Axygen Scientific)</td><td>10011-700</td><td></td></tr><tr><td>Bâtonnets de culture</td><td>VWR</td><td>CA10805-018</td><td></td></tr><tr><td>Tubes PCR</td><td>Diamed</td><td>AD0210-FCN (nouveau # : DIATEC420-1250)</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Eppendorf</td><td>5417c</td><td></td></tr><tr><td>Bloc chauffant</td><td>VWR</td><td>13259-030 / 13259-286</td><td></td></tr><tr><td>Thermocycleur</td><td>Applied Biosystems (2720)</td><td>4359659</td><td></td></tr><tr><td>Chambre d’électrophorèse sur gel submersible horizontale avec moule en gel</td><td>BioRad</td><td>170-4469</td><td></td></tr><tr><td>Alimentation</td><td>BioRad</td><td>164-5050</td><td></td></tr><tr><td>Agitateur à bascule</td><td>VWR</td><td>40000-300</td><td></td></tr><tr><td>Moléculaire Imager Gel Doc System</td><td>BioRad</td><td>1708170</td><td></td></tr></tbody></table>

pcr multiplex pour le typage des staphylocoques cassette chromosome mec types i 

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Staphylococcique Cassette Chromosome mec (CSC MEC) typage mol

Ce M-PCR mis à jour permet de déterminer (classer) les types SCCmec I à V, ainsi que les principaux sous-types de SCCmec IV. Le test cible des loci uniques et spécifiques des éléments SCCmec I, II, III, IVa, IVb, IVc, IVd, IVE et V, tout en détectant simultanément le gène mecA. Une identification préliminaire des SCCmec VI et VIII est également possible, mais nécessiterait des analyses supplémentaires pour confirmation. Figure 3 illustre des exemples représent...

Nous faisons la démonstration d’un test PCR multiplex simple pour le dépistage et le typage rapides des types I-V du chromosome à cassette staphylococcique (SCCmec) pour le Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline, et nous fournissons certaines des étapes essentielles et des nuances procédurales qui le rendent efficace pour adapter ce test à chaque laboratoire.

PCR multiplex pour le typage des staphylocoques Cassette Chromosome Mec types I 

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

L'objectif général de cette procédure est de déterminer le type SCC MEC de souches de staphylocoque doré résistant à la méthicilline, ou isolats de MRSA, en utilisant un test de PCR multiplex. Cela est réalisé en premier lieu en isolant l'ADN des souches, au moyen d'une technique d'extraction rapide et simple impliquant le chauffage des cellules bactériennes dans l'eau. La deuxième étape consiste à réaliser un test de PCR multiplex afin d'amplifier des cibles spécifiques à chacun des types SEC ME.Ensuite, les produits de PCR sont séparés par électrophorèse sur gel AROS. La dernière étape consiste à colorer le gel pour visualiser l'ADN et analyser les données. En définitive, la combinaison unique de produits de PCR spécifiques obtenus avec cet essai de PCR multiplexe est utilisée pour déterminer les types SE cmec des isolats MRS A. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que les schémas traditionnels de typage S CEC, qui ciblent individuellement les complexes géniques CCR et MEC et nécessitent plusieurs tubes de PCR distincts, est qu'elle simplifie considérablement la charge de travail et peut être réalisée dans un seul tube de PCR.Ces procédures doivent être réalisées dans un laboratoire agréé de niveau de biosécurité 2. Des équipements de protection individuelle appropriés doivent être utilisés en permanence le jour précédant la réalisation de la PCR. Sélectionnez une colonie unique de SARM à partir d'une boîte de culture fraîche incubée pendant la nuit à l'aide d'un bâtonnet stérile et préparez une stries dense de la bactérie sur une boîte de gélose au soja triptyque.Plusieurs échantillons peuvent être ensemencés en stries sur une même boîte de Petri et incubés toute la nuit à 37 degrés Celsius. Ajouter 75 microlitres d'eau distillée stérile dans un tube microcentrifuge de 1,5 millilitre. À l'aide d'un curet stérile.Prélevez une petite quantité de bactéries à partir de la stries dense de la veille. Agitez les bactéries dans l'eau stérile pour préparer une solution trouble. Répétez ce processus pour tous les échantillons.Incuber les tubes dans un bloc chauffant sec réglé à 95 degrés Celsius pendant 10 minutes afin de lyser les bactéries et libérer l'ADN. Retirer les échantillons du bloc chauffant et les laisser reposer à température ambiante pendant cinq minutes. Centrifuger les échantillons à 13 000 tr/min pendant une minute.L'échantillon obtenu présente un culot de débris cellulaires et un surnageant clair contenant l'ADN. Pour la préparation de la PCR, sortir les réactifs de PCR, incluant le tampon 10 XPCR, le chlorure de magnésium à 50 millimolaire, les DTPs et les amorces, du congélateur à moins 20 degrés Celsius et les laisser décongeler à température ambiante sur la paillasse propre de PCR, où aucune bactérie ni ADN n'est autorisé. Des tubes PCR de 0,2 millilitre peuvent être préparés et étiquetés à ce moment-là.Une fois décongelé, vortexer brièvement pour mélanger tous les réactifs, puis combiner comme indiqué dans le protocole tabulaire du texte. Il est important d'utiliser la polymérase ADN Platinum Tech car elle influence le succès de la réaction. Après avoir vortexé le mélange maître, distribuer l'Eloqua dans les tubes PCR individuels, fermer tous les tubes PCR et les transporter vers le plan de travail général.Ajouter le modèle aux tubes PCR en pipettant deux microlitres du surnageant clair provenant des échantillons bactériens préparés précédemment. Se déplacer vers l'emplacement dédié à l'amplification avant de placer les tubes dans le thermocycleur et de lancer la réaction selon le protocole indiqué dans le texte. Travailler dans un emplacement dédié à l'électrophorèse sur gel avec 2,5 grammes d'agarose pour 100 millilitres de tampon 0,5 XTBE dans un flacon Erlenmeyer en verre.Couvrez le flacon avec du papier plastique et faites bouillir la solution au micro-ondes jusqu'à dissolution complète. Un gel à 2,5 % bout rapidement. Arrêtez donc régulièrement le micro-ondes et remuez la solution en la faisant tourner.Refroidissez les géloses jusqu'à ce qu'elles soient tièdes au toucher en les faisant tourner sous de l'eau froide ou en les laissant reposer sur la paillasse pendant cinq minutes. Versez les géloses dans le bac de coulée après avoir retiré les tubes du thermocycleur PCR. Préparez les échantillons en ajoutant deux microlitres de colorant de charge d'ADN 6X à chaque échantillon.Chargez cinq à 10 microlitres d'échantillon par puits sur le gel. Une échelle d'ADN de un KB plus ou de 100 paires de bases convient aux tailles de bandes attendues. Le bromure d'éthidium peut être ajouté au gel avant de le couler, ou alternativement, le gel peut être coloré dans un bain de bromure d'éthidium avant d'être visualisé.Placer le gel terminé dans une solution d'athérium bromure à 0,5 microgramme par millilitre dans de l'eau distillée, puis mélanger doucement sur un agitateur pendant 10 minutes. Transférer le gel dans un récipient propre et le maintenir dans de l'eau distillée pendant 10 minutes supplémentaires. On observe ici un gel représentatif montrant les produits PCR attendus pour toutes les souches représentatives des types SEC MEC un à six et huit, ainsi que pour les sous-types A à F du SEC MEK quatre. Pour une souche typique du SEC MEK un, deux bandes sont attendues.La bande spécifique de type un à 613 paires de bases ainsi que la bande témoin mec à 147 paires de bases. Trois souches représentatives SEC MEK deux sont présentées, incluant la souche typique de type deux N trois 15 et les types deux A et deux B moins fréquents. Pour classer une souche comme SEC mek deux, deux bandes doivent être présentes, incluant la cible du locus de type deux à 128 paires de bases et la bande témoin Meca. Deux souches représentatives SEC MEK trois sont visibles sur le gel, incluant la souche typique SEC MEK trois 85 2 0 8 2 et la variante moins fréquente de type trois A de la souche JCSC deux 90. SSC MEC trois est identifié par la présence de deux produits de PCR, incluant la cible spécifique de type trois à 257 paires de bases et la cible témoin Mecca.Le SEC MEC trois dominant sera également positif pour la cible mercure à 280 paires de bases, qui se trouve sur un élément SEC adjacent et permet de le distinguer du SEC MEC trois A cinq, moins fréquent. Des éléments représentatifs de SEC MEC quatre sont présentés, incluant les types quatre A, quatre B, quatre C, quatre D, quatre E et quatre F. Contrairement aux SCC MEK un à trois, aucun marqueur unique n’est présent dans tous les sous-types de SCC MEK quatre, à l’exception de meck A. La souche représentative de SCC MEK quatre E est identifiée par la présence de la bande de type quatre E ainsi que du produit CCR AB quatre, situé sur un élément accessoire adjacent, et du produit de type quatre C, présent car le SEC MEK quatre E partage la même région J un que le SE Cmk quatre. Le CSCC MEK quatre F est similaire au SEC MEK quatre E en ce sens qu’il partage la même région J trois et est donc également positif pour la cible quatre E, ainsi que positif pour la cible CCR AB quatre en raison d’un élément accessoire adjacent. Toutefois, le S Cmk quatre F peut être distingué du S CMK quatre E par l’absence de la cible de type quatre C.Un SE CMK de type cinq typique aurait montré deux produits de PCR sur le gel : une bande spécifique du type cinq à 325 paires de bases et un témoin ME à 147 paires de bases. Enfin, bien que l'objectif de ce test ne soit pas d'identifier de façon définitive les souches SEC MEK six ou huit, des souches représentatives ont été incluses pour chacun des deux types, car un profil de PCR spécifique fournit un indice suggérant la présence de ces types.En plus de la cible Meck A, on s'attend à ce que le représentant SEC MEK six produise un produit positif CR AB quatre à 106 paires de bases, car il s'agit de son type principal de complexe CCR. Le représentant SEC MEC huit serait également positif pour MEC A à 147 paires de bases et pour C-C-R-A-B quatre à 106 paires de bases, et pourrait être distingué du SEC MEK six par la présence d'un produit spécifique de type deux, résultant de sa région J deux identique à celle du SEC MEK deux. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de garder à l'esprit que, en raison de la nature sophistiquée du test et du grand nombre d'amorces présents dans la réaction, des difficultés peuvent survenir.Lors de l'adaptation de cette méthode aux laboratoires individuels, une attention particulière portée à certains points essentiels, tels que la préparation du modèle d'ADN et la marque des réactifs de PCR, facilitera grandement cet objectif.

multiplex-pcr-assay-for-typing-staphylococcal-cassette-chromosome-mec

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Un peu coûteuse, la méthode à haut débit pour la détection simultanée de jusqu'à 43 cibles moléculaires est décrit. Applications de MPCR / RLB comprennent tapant microbienne et la détection de pathogènes multiples à partir d'échantillons cliniques.

PCR multiplex et de test d&#39;hybridation inverse Ligne Blot (MPCR / RLB)

Nous décrivons un multiplex pour la détection rapide de Salmonella enterica sérovars, Hadar, Heidelberg et Typhimurium PCR. Sérotypes de Salmonella les particuliers peuvent être identifiés, en ciblant un multiplex PCR pour les gènes et les séquences uniques à la grappe biosynthèse de l'antigène O et la flagelline d'un sérovar donné. Sérovar est affecté ensuite à une Salmonella isoler basé sur l'apparence des amplicons spécifiques de taille, (produit de PCR) correspondant à l'allèle cible.

Une PCR pour l&#39;identification allélotypage Salmonella enterica Sérovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg et Typhimurium

Nous décrivons une méthode multiplex pour la détection des microorganismes dans un échantillon à l'aide d'oligonucléotides couplés billes fluorescentes. Amplicon de tous les organismes au sein d'un échantillon est hybridé à un panel de sondes couplées perles. Un instrument Luminex ou Bio-Plex est utilisé pour interroger chaque perle pour le type de perle et le signal d'hybridation.

Détection multiplex de bactéries dans les échantillons complexes cliniques et environnementaux à l&#39;aide d&#39;oligonucléotides couplés microsphères fluorescentes

Biocapteurs de phages lytiques et des perles d'anticorps sont capables de discriminer entre résistant à la méthicilline (SARM) et les bactéries de staphylocoque sensibles. Les phages ont été immobilisés par une méthode de Langmuir-Blodgett sur une surface d'un capteur à microbalance à cristal de quartz et a travaillé comme Large gamme des sondes de staphylocoque. perles d'anticorps reconnaissent SARM.

Biocapteurs pour la détection de bactéries aux antibiotiques de staphylocoques résistants

Un microréseau d'amplification asymétrique combine l'amplification par PCR et l'hybridation microarray dans une seule chambre, qui simplifie considérablement microarray flux de travail pour l'utilisateur final. Simplifier microarray flux de travail est une première étape nécessaire pour la création de diagnostics des biopuces qui peuvent être utilisées en routine dans des environnements à faibles ressources.

Faisant preuve d&#39;une multi-résistante<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Amplification de puces à ADN

Ce protocole décrit la détection des intégrons de classe 1 et de leurs cassettes de gènes associées dans les denrées alimentaires.

Dépistage denrées alimentaires pour les intégrons de classe 1 et Gene Cassettes

Ici, la PCR d’espacement ribosomique (RS-PCR) est utilisée avec un système d’électrophorèse miniaturisé comme méthode rapide et à haute résolution pour le génotypage de S. aureus à des coûts modérés permettant un débit élevé.

génotypage des<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; par Ribosomal Spacer PCR (RS-PCR)

Nous présentons deux kits de RT-qPCR en une étape basés sur des sondes pour les virus respiratoires courants. Le premier test concerne le SRAS-CoV-2 (N), la grippe A (H1N1 et H3N2) et la grippe B. Le second concerne le SARS-Cov-2 (N) et le MERS (UpE et ORF1a). Ces tests peuvent être mis en œuvre avec succès dans n’importe quel laboratoire spécialisé.

Développement de tests RT-qPCR multiplex en temps réel pour la détection du SRAS-CoV-2, de la grippe A/B et du MERS-CoV

Les protocoles pour l'utilisation ouverte biofilms débit du système avec des réacteurs à écoulement goutte à goutte et la rotation du disque réacteurs sont présentés en détail.

L&#39;utilisation des flux de goutte et des réacteurs de disque rotatif pour Staphylococcus aureus Analyse du biofilm

La peau douce et murin modèle d'infection des tissus est utilisé pour évaluer la fonction de virulence de Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline (SARM) et les réponses immunologiques hôte. Ici, nous avons présenté un modèle d'infection sous-cutanée de la peau et les infections des tissus mous.

Infection sous-cutanée du Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline (SARM)

Apprenez le typage SCCmec des souches MRSA par PCR multiplex pour la microbiologie clinique. Cette méthode simplifie le criblage épidémiologique des Staphylococcus aureus résistants à la méthicilline.

PCR multiplex pour le typage des staphylocoques Cassette Chromosome Mec types I

Explorer plus de vidéos