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DOI: 10.3791/50935-v
Mazen Amatoury1, Vera Merheb1, Jessica Langer1, Xin Maggie Wang2, Russell Clive Dale1, Fabienne Brilot1
1Institute for Neuroscience and Muscle Research, The Kids Research Institute at the Children's Hospital at Westmead,The University of Sydney, 2Flow Cytometry Centre,Westmead Millennium Institute for Medical Research
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Au cours des dernières années, des essais à base de cellules vivantes ont été utilisées avec succès pour détecter des anticorps contre les antigènes de surface et de conformation. Ici, nous décrivons une méthode utilisant un écoulement à haut débit cytométrie permettant l'analyse de grandes cohortes de patients. Détection de nouveaux anticorps permettra d'améliorer le diagnostic et le traitement des troubles du système immunitaire à médiation.
L’objectif global de l’expérience suivante est de détecter les anticorps neuronaux anti D deux R ou N-M-D-A-R dans des échantillons de patients à l’aide d’un test cellulaire de cytométrie en flux à haut débit. Ceci est réalisé en sous-adhérent, la séquence complète de CDNA de D deux R ou N-M-D-A-R humain dans un plasmide. Dans un deuxième temps, une lignée cellulaire humaine est transfectée, ce qui conduit à l’expression à la surface cellulaire des antigènes neuronaux.
Ensuite, les cellules transfectées sont incubées avec le sérum du patient et un anticorps secondaire approprié avant l’acquisition de la cytométrie en flux. Afin de détecter la liaison des anticorps aux antigènes de surface cellulaire, les résultats sont obtenus sur la base de l’analyse par cytométrie en flux. Notre test basé sur des cellules de cytométrie à trois ports est rapide, quantitatif et efficace pour de grandes cohortes d’échantillons de patients.
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