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Enquêter sur les systèmes récepteur-ligand de la cellulosome avec base-AFM unique molécule Spectr...
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Bioengineering
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JoVE Journal Bioengineering
Investigating Receptor-ligand Systems of the Cellulosome with AFM-based Single-molecule Force Spectroscopy

Enquêter sur les systèmes récepteur-ligand de la cellulosome avec base-AFM unique molécule Spectroscopie de Force

Full Text
7,761 Views
11:34 min
December 20, 2013

DOI: 10.3791/50950-v

Markus A. Jobst*1, Constantin Schoeler*1, Klara Malinowska1, Michael A. Nash1

1Lehrstuhl für Angewandte Physik and Center for Nanoscience,Ludwig-Maximilians-Universität

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Les cellulosomes sont des complexes multienzymatiques conçus pour digérer la cellulose. Le SMFS basé sur l’AFM a été utilisé pour étudier les propriétés mécaniques et la configuration de repliement des assemblages de protéines associées au cellulosome. Nous présentons un flux de travail complet pour l’immobilisation des protéines, l’acquisition de données et l’analyse de données afin d’étudier les interactions des complexes récepteurs-ligands individuels impliqués dans l’assemblage des cellulosomes.

L’objectif général de l’expérience suivante est d’étudier les propriétés mécaniques et les états de repliement des partenaires de liaison aux protéines de fusion à l’aide d’une spectroscopie de force à molécule unique basée sur la FM. Ceci est réalisé en immobilisant de manière covalente des partenaires de liaison aux protéines sur une lame de verre et sur un cantilever A FM pour obtenir une géométrie de traction bien définie dans un deuxième temps. La surface du verre est dentelée par le cantilever, ce qui permet d’établir la liaison des ligands du récepteur.

Ensuite, le cantilever est rétracté à une vitesse constante afin de déplier des domaines protéiques individuels et d’associer le ligand du récepteur. D’autres informations cinétiques et énergétiques sur les partenaires de liaison peuvent être obtenues en ajustant les modèles cinétiques au spectre de force dynamique. L’objectif global de cette procédure est d’étudier les voies de dépliage des protéines sous l’effet de la force.

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Mots-clés : Cellulosomes systèmes récepteurs-ligands microscopie à force atomique (AFM) spectroscopie de force à molécule unique (SMFS) interactions cohésine-dockerine paramètres de liaison forces de déploiement taux de décalage cinétique largeurs de potentiel

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