Name: Méthodes de collecte de lait pour souris et Muntjac cerfs de Reeves (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Apprenez une technique de collecte de lait chez la souris et le muntjac de Reeves pour étudier l'immunité passive et identifier les agents pathogènes. Cette méthode manuelle, peu coûteuse et facile à apprendre, permet de recueillir jusqu'à 450 µL de lait de souris ou 5 à 30 mL de lait de muntjac par session.

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Ces expériences ont été financées par la subvention NIH #RAI093634A. Nous exprimons notre immense gratitude à Jenny Powers, DVM, PhD, pour son aide dans la traite du muntjac.

1. Protocole traite souris Les méthodes décrites dans le présent protocole ont été approuvés par IACUC. 1. Séparation du barrage de Offspring <ol><li> Sélectionnez le barrage à traire. Choisissez un barrage avec une portée de 4 ou plus petits qui est de 8-12 jours après l&#39;accouchement de fournir du lait maximale collection-même si la collecte est possible à tout point de temps après l&#39;accouchement jusqu&#39;à 21 jours. </li><li> Séparer le barrage de sa litière au moins 2 heures avant la traite. Remarque: Si un désir de lait plus d&#39;un barrage dans une période de temps donnée, il est acceptable pour abriter les barrages séparés dans la même cage avec une alimentation adéquate et d&#39;eau. </li></ol> 2. L&#39;administration de l&#39;ocytocine, anesthésie et des yeux Lubrifiant <ol><li> Administrer 2 UI / kg par voie intrapéritonéale d&#39;ocytocine (IP). L&#39;ocytocine est une hormone qui agit sur les glandes mammaires de femelles en lactation à stimuler la libération de lait. L&#39;ocytocine peut être acquise from un vétérinaire. </li><li> Administrer un mélange anesthésique contenant 80-100 mg / kg de kétamine en association avec 5-10 mg / kg de xylazine IP. Par exemple, un mélange de 10 ml actions anesthésique peut être préparé à l&#39;avance pour les souris pesant environ 30 g et comprendrait 0,1 ml de xylazine, 8,9 ml H 2 O, et 1,0 ml de kétamine. 0,25 ml anesthésie totale endormir une souris de cette taille environ 20-30 min, ce qui devrait donner suffisamment de temps pour la collecte du lait. Notes: Pour déterminer que l&#39;animal a été anesthésié avec succès, la placer délicatement sur le ventre sur une surface solide; elle ne doit pas être en mouvement ses pieds ou de tenter de monter à ses pieds si elle est complètement anesthésié. Dans le cas d&#39;une souris anesthésiée pas pleinement avec la dose initiale, le chercheur peut administrer un autre quart ou la moitié de la dose initiale du mélange anesthésique en fonction de la taille de la souris et / ou le niveau de sédation que la souris a déjà atteint . Toutefois, cela pourrait iUGMENTATION la probabilité d&#39;une réaction indésirable à l&#39;anesthésie, et peut également conduire à la souris étant anesthésiée plus profondément et / ou l&#39;anesthésie pendant une période de temps plus longue. Remarque: Si la traite plus d&#39;un barrage, il est nécessaire d&#39;échelonner l&#39;ocytocine et les injections anesthésiques en raison de la courte demi-vie de l&#39;ocytocine et les temps de sédation de la kétamine et de xylazine. </li><li> Appliquez une petite quantité de lubrifiant oeil au coin de chaque oeil et se propage à empêcher les yeux de la souris de se dessécher sous anesthésie. </li></ol> 3. Collecte de lait La collecte du lait est plus facilement réalisée avec deux chercheurs: un chercheur de tenir la souris anesthésiée tout en exprimant manuellement le lait (dénommé R1), et un chercheur pour recueillir le lait (R2). Cette méthode peut également être effectuée avec une seule personne, si la souris est fixé sur une surface plane pour éviter un préjudice. <ol><li> R2 doit être équipé tampons à l&#39;alcool stériles, un pip P-200Etman, une pointe de pipette propre pour chaque souris, et un récipient pour contenir le lait, comme un tube Eppendorf de 1,5 ml ou un cryovial 1,2 ml (voir tableau des matériaux). </li><li> Comme l&#39;ocytocine commence à prendre effet, la descente du lait sera visible dans la zone mammaire de la souris (voir la figure 1A). R1: Déballer un tampon à l&#39;alcool stérile et essuyez délicatement la zone mammaire de la souris pour nettoyer la zone avant la traite. Exprimer manuellement le lait du trayon en utilisant le pouce et l&#39;index pour masser doucement et presser le tissu mammaire dans un mouvement ascendant jusqu&#39;à ce qu&#39;un bourrelet visible de lait commence à se former à la base de la tétine. </li><li> Appuyez sur le piston Pipetman P-200 à son premier arrêt pour libérer l&#39;air de la pointe de la pipette et se préparer pour la collecte du lait. </li><li> Placez la pointe de la pipette au sommet de la goutte de lait, et tirez doucement le lait dans la pointe de la pipette en libérant lentement la pression sur le piston. Prenez soin de ne pas mettre la pointe trop près de la tétine ou la peau (voirFigure 1B). Il n&#39;est pas nécessaire de libérer complètement le piston car cela va tirer le lait tout le chemin vers le sommet de la pointe de la pipette et il sera difficile d&#39;expulser le lait souvent visqueux dans le récipient de maintien. </li><li> Expulser le lait dans le récipient à l&#39;aide du pouce sur le piston au-delà de la première étape (voir figure 1C). Afin de faciliter l&#39;expulsion de petits volumes, appuyez sur la pointe de la pipette contre le côté du tube de manière à ce qu&#39;aucun liquide est perdue. </li><li> Continuer à exprimer manuellement le lait de chaque trayon, se déplaçant dans le sens horaire ou antihoraire afin de ne pas sauter des trayons. Il est à la fois acceptable et utile de revenir sans cesse et exprimer le lait de la même tétine doit-il produire plus de lait que les autres. </li></ol> 4. Reprise anesthésique dans le barrage <ol><li> Dans la plupart des cas, il est fréquent que le barrage pour commencer à commencer à se réveiller pendant le processus de traite. Si ce n&#39;est pas le cas, placez le barrage dans un cage indirectement sous une source de chaleur, comme une couverture de circulation chauffée, jusqu&#39;à ce qu&#39;elle commence à se réveiller. Remarque: Comme le barrage commence à se réveiller, garder une surveillance étroite de son activité jusqu&#39;à ce qu&#39;elle est capable de marcher sur sa cage elle-même. </li><li> Une fois le barrage se déplace sur la cage sans lutte, placer son dos dans sa cage d&#39;origine avec sa litière. Pas d&#39;effets néfastes ont été constatés à l&#39;égard de la capacité des petits à nourrir après la collecte du lait. </li></ol> 2. Protocole traite Muntjac Les méthodes décrites dans le présent protocole ont été approuvés par IACUC. 1. Séparation de la Biche de Offspring <ol><li> Sélectionnez la biche à traire. Les cerfs muntjac de Reeves donnent généralement naissance à un faon 2. Traire la biche le jour après l&#39;accouchement afin de permettre la possibilité de faon d&#39;avoir accès à des nutriments essentiels dans le colostrum 8. Remarque: Le faon cache habituellement et ne réapparaît pas au cours de la procedure; la séparation de la paire mère-progéniture n&#39;est pas nécessaire. </li></ol> 2. L&#39;administration de l&#39;ocytocine, anesthésie et des yeux Lubrifiant <ol><li> Administrer 10 UI / kg de l&#39;ocytocine par voie intramusculaire (IM). L&#39;ocytocine est une hormone qui agit sur les glandes mammaires de femelles en lactation à stimuler la déception de lait. L&#39;ocytocine peut être acquis auprès d&#39;un vétérinaire. </li><li> Administrer l&#39;anesthésique BAM IM 11 contenant butorphanol 0,45 mg / kg, azapérone 0,25 mg / kg, medetomadine 0,07 mg / kg. Une dose de mélange anesthésique BAM endormir un muntjac environ 20-30 min, ce qui donne suffisamment de temps pour la collection complète de lait. Une autre option pour l&#39;anesthésie est midazolam à 1-2 mg / kg, ce qui endormir un muntjac environ 10-15 min. Bien que cela fournit suffisamment de temps pour la collecte du lait, ce anesthésique est métabolisé plus rapidement que les BAM et l&#39;animal peuvent tenter de s&#39;échapper à la fin de la période de temps plus courte. Remarque: Une réponse minimale à la douleur, Réflexes mineures en touchant les oreilles, suivies par la capacité de R1 à tenir le MJ sans lutte indique que l&#39;animal a été anesthésié avec succès. Remarque: Dans le cas d&#39;un muntjac pas pleinement anesthésiés avec de la dose initiale, le chercheur peut administrer un autre quart ou la moitié de la dose initiale du mélange anesthésique en fonction de la taille de l&#39;animal et / ou le niveau de sédation, qui a déjà été atteint. Toutefois, cela pourrait augmenter le risque d&#39;une réaction indésirable à l&#39;anesthésie, et peut également entraîner la muntjac être plus profondément anesthésié et / ou anesthésié pour une période de temps plus longue. </li><li> Appliquez une petite quantité de lubrifiant dans le coin de chaque oeil et la propagation de prévenir les yeux du muntjac de sécher sous anesthésie. </li></ol> 3. Collecte de lait La collecte du lait est plus facilement réalisée avec deux chercheurs; un chercheur de tenir le muntjac anesthésié dansla tour tout en exprimant manuellement le lait (désigné par R1), et un second chercheur à garder la tête de la muntjac dans une position confortable et sûre et pour recueillir le lait (R2). <ol><li> Selon l&#39;anesthésique utilisé, la traite doit être effectuée soit 1) dans leurs stylos à fournir un endroit sûr pour eux devraient-ils se réveiller au cours de la procédure (midazolam induite) 2) ou dans une antichambre d&#39;une literie à maintenir la propreté (BAM- induite). </li><li> R1 et R2 doivent être équipés d&#39;une gaze imbibée d&#39;éthanol et 15 ml de plusieurs tubes coniques en polypropylene pour maintenir le lait. </li><li> Comme l&#39;ocytocine commence à prendre effet, la descente du lait sera visible dans la zone mammaire du muntjac. R1: Désinfecter les mains gantées et des doigts, ainsi que l&#39;ensemble du pis et les trayons de l&#39;animal individuel avec de la gaze imbibée d&#39;éthanol. R2: Maintenez la tête du muntjac dans une position sûre et confortable pour permettre une facilité de respiration et aider à prévenir la régurgitation rumen. Tenez les cl tubes de prélèvement<html> ose à la tétine étant traire sans le toucher pour éviter la contamination potentielle. </li><li> Exprimez-lait d&#39;une tétine en utilisant le pouce et l&#39;index pour presser doucement le tissu mammaire dans un mouvement ascendant jusqu&#39;à ce que la tétine est gorgé de lait, et rouler doucement le lait du trayon et dans le tube que R2 tient (voir la figure 2 ). </li><li> Remarque: Le lait sort dans un flux, il est donc important pour R2 pour que le tube de prélèvement placé de sorte que peu ou pas de lait sera gaspillée. </li><li> Le pis de l&#39;muntjac est divisé en quadrants. R1: Continuer à exprimer le lait de chaque quadrant jusqu&#39;à ce que le lait ne coule plus facilement. Si le lait ne peut pas être exprimé d&#39;une tétine, exprimer de toutes les autres tétines avant de revenir à la première. Il est à la fois acceptable et utile de revenir sans cesse et exprimer le lait de la même tétine doit-il produire plus de lait que les autres. </li></ol> 4. Reprise anesthésique dans le Doe t &quot;&gt; Il est commun pour une lapine induite midazolam à commencer à se réveiller au cours du processus de traite. Dans la plupart des cas, la biche va tenter de s&#39;échapper avant tout le lait a été exprimé. retenue mineure est utilisé dans un effort pour augmenter le lait rendement, mais la sécurité et le confort des deux chercheurs et la biche sont tout aussi importants. <ol><li> Administrer atipamezole à 2,5 mg / mg medetomadine voie sous-cutanée pour l&#39;inversion rapide de BAM anesthésié biche. Remarque: Avec les deux types d&#39;anesthésique, il est nécessaire de maintenir une surveillance étroite de la biche jusqu&#39;à ce qu&#39;elle est capable de marcher sur son propre sans trébucher et de tomber, et est capable de manger et de boire sans crainte d&#39;aspiration ou d&#39;étouffement. Pas d&#39;effets néfastes ont été constatés en ce qui concerne la capacité de la faon d&#39;allaiter après la collecte du lait. </li></ol>

<ol><li>Dueling, S. Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , Available from: 
 
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<li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim%22%5BJournal%5D)">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li>
<li>Depeters, E. J., Hovey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+collecting+milk+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mammary+Gland+Biol.+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Methods for collecting milk from mice.</a> J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).</li>
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<li>Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+is+required+for+nursing+but+is+not+essential+for+parturition+or+reproductive+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).</li>
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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Souris Il ya plusieurs facteurs à prendre en considération lors de la collecte de lait d&#39;une souris, y compris 1) le temps mis de côté pour la collecte, 2) la dose d&#39;ocytocine administrée, 3) combien de chiots barrage est actuellement infirmière et 4) le montant de temps qui s&#39;est écoulé depuis la mise bas au moment de la collecte. En utilisant des études précédentes que les lignes directrices, nous avons décidé d&#39;optimiser les conditions pour la production d...

Les modèles animaux donnent un aperçu de la pathologie de la maladie qui ne peut être obtenu par une analyse in vitro. De fournir les résultats les plus efficaces, il est important d&#39;utiliser un modèle animal qui est étroitement liée à la maladie et des espèces d&#39;intérêt. Par exemple, le muntjac de l&#39;Reeves (Muntiacus reevesi), un petit cerf Asie 1,2, et les souris transgéniques exprimant la protéine prion des cervidés (CerTgPrP) 3 sont des modèles animaux utiles pour les espèces de cervidés. Les deux espèces sont polyestrous, permettant l&#39;année élevage, et donc une source constante pour les tissus et les fluides liés à la grossesse pour étudier les mécanismes spécifiques à la biologie des cervidés. Études de lait ont une vaste gamme d&#39;applications qui sont plus simplement (et peu coûteuse) accomplis dans des modèles animaux que chez les humains. Les chercheurs peuvent étudier lait et le colostrum comme une source potentielle de 1) la transmission de maladies infectieuses, 2) des immunoglobulines transférés de la mère à la progéniture dans le dévepement de l&#39;immunité passive 4 et 3) la lactoferrine, une protéine présente dans le lait maternel humain impliqué dans l&#39;immunité passive que les chercheurs tentent actuellement de produire commercialement 5. Collecte une quantité importante de lait des petits animaux peut s&#39;avérer être une tâche difficile. Rogers propose une approche de la collecte du lait de rats 6, qui a ensuite été utilisés chez la souris. Depeters et Hovey proposé deux procédés pour la collecte du lait, l&#39;une utilisant un vide manuellement généré produite par une ampoule de pipette en caoutchouc à l&#39;aide d&#39;une pipette Pasteur, et un second nécessitant la construction d&#39;une unité de traite, qui est ensuite fixé à une source de dépression (par exemple comme un robinet) pour récolter le lait de la souris 7. Nous proposons ici une méthode simple et peu coûteuse pour la collecte du lait de la souris et le muntjac le cerf de Reeves, qui nécessite un équipement de laboratoire seulement facilement disponibles et les compétences techniques de base. Notre méthode donne des volumes suffisants de lait pour diversapplications.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Matériaux&#8212 ; </td></tr><tr><td>Kétamine de souris (KetaVed 100 mg/ml) (dose : 80-100 mg/kg)</td><td>MWI/Vedco</td><td>011075</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose : 5-10 mg/kg)</td><td>MWI/Vedco</td><td>NADA 139236</td><td></td></tr><tr><td>Lubrifiant pour les yeux</td><td>MWI/Apexa</td><td>701013</td><td></td></tr><tr><td>Ocytocine (2 UI/kg)</td><td>Vet One</td><td>501013</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Matériaux&#8212 ; Muntjac</td></tr><tr><td>Midazolam (1-2 mg/kg)</td><td>Amerisource Bergen Drug Corp</td><td>924326</td><td>Facultatif : le chercheur peut utiliser le midazolam seul ou en association avec le BAM comme anesthésique</td></tr><tr><td>Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0,45 mg/kg)</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>NADA 135-780</td><td></td></tr><tr><td>Tartrate d’azaperone (0,25 mg/kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medetomadine HCl (0,07 mg/kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chlorhydrate d’antipamezol (Antisedan) (dose : 0,25 mg/kg)</td><td>Orion Corporation</td><td>NADA 141-033</td><td></td></tr><tr><td>Ocytocine (10 UI/kg)</td><td>Vet One</td><td>501013</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Équipement&#8212 ; Souris</td></tr><tr><td>P-200 Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu ; l pointes de pipette</td><td>Light Labs</td><td>B-2004-SH</td><td></td></tr><tr><td>Seringues de 1 ml</td><td>MWI</td><td>005427</td><td></td></tr><tr><td>aiguilles de 27 G</td><td>MWI</td><td>002031</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Équipement&#8212 ; Muntjac</td></tr><tr><td>15 ml Tubes coniques</td><td>VWR</td><td>21008-918</td><td></td></tr><tr><td>Aiguilles 22 G</td><td>MWI</td><td>873</td><td></td></tr><tr><td>Seringues Luer Lock 3 ml</td><td>MWI</td><td>001377</td><td></td></tr></tbody></table>

méthodes de collecte de lait pour souris et muntjac cerfs de reeves

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Les modèles animaux sont couramment utilisés dans les laboratoires de recherche pour accomplir ce qui serait normalement considéré comme impraticable chez l’hôte natif d’un agent pathogène. La collecte de lait sur des animaux permet aux scientifiques d’étudier de nombreux aspects de la reproduction, notamment la transmission verticale, l’immunité passive, la biologie des glandes mammaires et la lactation. Obtenir des volumes de lait adéquats pour ces études est une tâche difficile, en particulier à partir de petits modèles animaux. Nous illustrons ici une méthode peu coûteuse et facile pour la collecte du lait chez les souris et le cerf muntjac de Reeves qui ne nécessite pas d’équipement spécialisé ni de formation approfondie. Cette méthode particulière nécessite deux chercheurs : l’un pour exprimer le lait et stabiliser l’animal, et l’autre pour recueillir le lait dans un récipient approprié à partir d’un modèle de Muntjac ou de souris. Le modèle de souris nécessite également l’utilisation d’un pipeteur P-200 et des pointes de pipette correspondantes. Bien que cette méthode soit peu coûteuse et relativement facile à mettre en œuvre, les chercheurs doivent être informés qu’une anesthésie de l’animal est nécessaire pour une collecte optimale du lait.

Souris De nos expériences, nous avons déterminé qu&#39;il est possible de collecter environ 100-400 pi de lait d&#39;une souris de laboratoire, en fonction de plusieurs variables. Ces variables comprennent: 1) le temps mis de côté pour la collecte, 2) la dose d&#39;ocytocine administrée, 3) combien de chiots barrage est actuellement infirmière et 4) le montant de la post accouchement de temps. Nos études ont montré que le rendement le plus élevé est obtenu lorsque les barrag...

La collecte de lait sur des modèles animaux facilite diverses pistes de recherche : comprendre l’immunité passive, identifier les agents pathogènes responsables de la transmission verticale et, grâce à l’utilisation de souris transgéniques, voire la production commerciale de protéines présentes dans le lait maternel humain. Nous illustrons ici une méthode simple de collecte du lait chez les souris et le cerf muntjac de Reeves.

Méthodes de collecte de lait pour souris et Muntjac cerfs de Reeves

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

L'objectif général de cette procédure est de démontrer comment recueillir du lait chez une souris ou un chevreuil mulet de Reeve pour son utilisation dans diverses expériences scientifiques. Cette opération s'effectue en administrant d'abord de l'ocytocine à l'animal afin de stimuler l'éjection du lait, puis en anesthésiant l'animal. Ensuite, un chercheur exprime manuellement le lait tandis qu'un second chercheur le recueille.La dernière étape consiste à assurer la sécurité de l'animal pendant sa récupération de l'anesthésie. En fin de compte, on peut recueillir environ cinq à 30 millilitres de lait de chienne par séance, ou jusqu'à 450 microlitres de lait de souris par séance. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que celles nécessitant un équipement spécialisé, est qu'elle est relativement peu coûteuse et facile à apprendre.Cette méthode peut aider à répondre à plusieurs questions scientifiques, comme savoir si un agent pathogène peut être transmis de la mère à la progéniture par le lait. Les personnes novices dans cette méthode se découragent généralement, car il faut de la pratique pour exprimer correctement le lait. Stephanie Full

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Le sperme de récolte et l&#39;insémination artificielle des souris

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Ici, nous présentons un protocole pour une technique de collecte de sang optimisée chez des sujets murins par ponction veineuse faciale à l’aide d’une lancette. Nous utilisons cette technique parallèlement à l’évaluation par cytométrie en flux pour caractériser les phénotypes cellulaires des souches transgéniques, congéniques et rapporteures. Il convient également à l’analyse des cytokines sériques et aux études sur le diabète.

Ponction veineuse faciale pour le prélèvement de sang murin

Apprenez une technique de collecte de lait chez la souris et le muntjac de Reeves pour étudier l'immunité passive et identifier les agents pathogènes. Cette méthode manuelle, peu coûteuse et facile à apprendre, permet de recueillir jusqu'à 450 µL de lait de souris ou 5 à 30 mL de lait de muntjac par session.

Méthodes de collecte de lait pour souris et Muntjac cerfs de Reeves

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