Méthodes de collecte de lait pour souris et Muntjac cerfs de Reeves

L'objectif général de cette procédure est de démontrer comment recueillir du lait chez une souris ou un chevreuil mulet de Reeve pour son utilisation dans diverses expériences scientifiques. Cette opération s'effectue en administrant d'abord de l'ocytocine à l'animal afin de stimuler l'éjection du lait, puis en anesthésiant l'animal. Ensuite, un chercheur exprime manuellement le lait tandis qu'un second chercheur le recueille.

La dernière étape consiste à assurer la sécurité de l'animal pendant sa récupération de l'anesthésie. En fin de compte, on peut recueillir environ cinq à 30 millilitres de lait de chienne par séance, ou jusqu'à 450 microlitres de lait de souris par séance. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que celles nécessitant un équipement spécialisé, est qu'elle est relativement peu coûteuse et facile à apprendre.

Cette méthode peut aider à répondre à plusieurs questions scientifiques, comme savoir si un agent pathogène peut être transmis de la mère à la progéniture par le lait. Les personnes novices dans cette méthode se découragent généralement, car il faut de la pratique pour exprimer correctement le lait. Stephanie Fullaway, technicienne de notre laboratoire, m'assistera dans cette procédure afin de stimuler la libération de lait chez une souris allaitante.

Administrer deux unités internationales par kilogramme d'ocytocine par voie intrapéritonéale immédiatement avant la collecte du lait, anesthésier la souris et appliquer une petite quantité de lubrifiant oculaire sur chaque œil afin d'empêcher les yeux de la souris de se dessécher en attendant que l'anesthésique fasse effet. Préparer quelques compresses stériles imbibées d'alcool, un pipeteur P200, des embouts de pipette stériles et un récipient pour recueillir le lait, tel qu'un tube Eppendorf de 1,5 millilitre ou un tube cryogénique de 1,2 millilitre. La traite nécessite deux chercheurs.

L'un stabilise l'animal et exprime le lait, tandis que l'autre le recueille. Le collecteur de lait récupère celui-ci en prenant soin d'éviter toute contamination du récipient de prélèvement. À l'aide d'un tampon stérile imprégné d'alcool, l'exprimeur de lait nettoie délicatement la zone mammaire avant la traite.

Un à deux minutes après l'injection d'ocytocine, la montée de lait devient visible au niveau de la région mammaire de la souris. Exprimez manuellement le lait du mamelon en utilisant le pouce et l'index pour masser et presser doucement le tissu mammaire vers le haut, jusqu'à ce qu'une goutte de lait visible commence à se former à la base du mamelon. Le collecteur de lait appuie alors sur le piston du pipeteur P 200 pour l'amener à son premier point d'arrêt, chassant ainsi l'air de l'embout de la pipette et se préparant à la collecte du lait.

Ensuite, le collecteur de lait positionne la pointe de la pipette en haut de la goutte de lait. En prenant soin de ne pas approcher la pointe trop près du mamelon ou de la peau, il relâche lentement la pression sur le piston afin d'aspirer le lait dans la pointe de la pipette, en appuyant celle-ci contre la paroi du tube de collecte pour éviter toute perte de liquide. Le collecteur de lait utilise le pouce pour enfoncer le piston au-delà du premier cran et expulser le lait dans le récipient.

Continuer à exprimer manuellement le lait de chaque mamelon en se déplaçant dans le sens horaire ou antihoraire. Il est acceptable de revenir à un mamelon précédent pour exprimer davantage de lait, particulièrement s’il produit plus de lait que les autres mamelons. Une fois la collecte du lait terminée, laisser la souris se réveiller de l’anesthésie.

Une fois que la femelle se déplace facilement dans la cage, la remettre dans sa cage d’origine avec sa portée afin de stimuler la montée de lait. Chez la biche allaitante de type reeve's mut jack, administrer 10 unités internationales par kilogramme d’ocytocine par voie intramusculaire, puis anesthésier immédiatement le mutt jack. Le niveau d’anesthésie est jugé adéquat s’il n’y a que de légers réflexes lors du toucher des oreilles, et si l’extracteur de lait peut maintenir le mutt jack sans résistance.

Ensuite, appliquez une petite quantité de lubrifiant sur chaque œil afin d'éviter que les yeux du mut jack ne s'assèchent. Équipez à la fois l'extracteur de lait et le collecteur de lait avec une compresse imbibée d'éthanol et plusieurs tubes coniques en polypropylène de 15 millilitres pour recueillir le lait. Lorsque l'ocytocine commence à faire effet, l'éjection du lait devient visible au niveau de la région mammaire des mutt jacks.

Le collecteur de lait et l'opérateur du tire-lait doivent porter des gants et les désinfecter avec un coton imbibé d'éthanol. Utilisez également un coton imbibé d'éthanol pour désinfecter l'ensemble du pis et chaque mamelon individuel de l'animal, en maintenant la tête du ruminant dans une position confortable afin de faciliter la respiration et d'éviter la régurgitation du rumen. Le collecteur de lait place le tube de collecte près du mamelon en cours de traite sans le toucher à la peau.

L'extracteur de lait utilise le pouce et l'index pour comprimer doucement le tissu mammaire par un mouvement ascendant, jusqu'à ce que le mamelon soit gonflé de lait, puis fait rouler délicatement le lait hors du mamelon et dans le tube que tient le collecteur de lait. Le lait s'écoule en un filet continu, il est donc important de positionner le tube de collecte de manière à limiter au maximum les pertes de lait. Le pis de Mt Jack est divisé en quadrants.

L'extracteur de lait continue d'extraire le lait de chaque quadrant jusqu'à ce que le lait ne s'écoule plus facilement. Si du lait ne peut pas être exprimé à partir d'un mamelon, passez aux autres mamelons avant de revenir au premier. Une fois la collecte du lait terminée, administrez de l'aamaz par voie sous-cutanée pour une inversion rapide de l'anesthésie au bam. Enfin, surveillez la femelle jusqu'à ce qu'elle soit capable de marcher, de manger et de boire par elle-même. Cette figure indique que l'on peut obtenir entre 100 et 450 microlitres de lait d'une souris allaitante.

Les volumes maximaux de lait ont été récoltés entre huit et douze jours après le part, à l’aide de deux unités internationales par kilogramme d’ocytocine. On observe ici le rendement laitier approximatif d’une souris allaitante, tracé en fonction de la taille de la portée chez le cerf jack mut de Reeve. Le volume de lait recueilli par séance variait de cinq à trente millilitres selon l’anesthésique utilisé et le moment du part. Les dates de début et de fin des prélèvements de lait pour les femelles mut, Jack, sont indiquées dans ce tableau.

Le lait a été collecté en moyenne 80 jours après la mise bas, avec une fourchette allant de 18 à 150 jours. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en environ une heure, selon le nombre d'animaux dont on souhaite effectuer la collecte lors d'une même séance. Lors de la réalisation de cette procédure, il est toujours essentiel de se rappeler que la sécurité des animaux passe avant tout. Après cette procédure, un traitement du lait peut être nécessaire, suivi de tests in vitro ou de bioessais, ce qui pourrait aider à répondre à des questions supplémentaires concernant les composants du lait.