Name: Intralymphatique Immunothérapie et vaccination chez la souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: Découvrez l'immunothérapie intralymphatique chez la souris pour stimuler les réponses immunitaires par injection directe dans les ganglions lymphatiques inguinaux. Cette méthode améliore l'efficacité vaccinale comparée aux injections sous-cutanées traditionnelles.

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Les auteurs sont reconnaissants pour l&#39;aide au développement expérimental de la méthode de la vaccination chez les souris de intralymphatique Iris Erdmann, Barbara von Beust, Maria et Julia Martínez-Gómez. Merci aussi à Maggy Arras et Nikola Cesarovic pour nous laisser utiliser leur salle d&#39;opération pour cette production vidéo.

Une. Anesthésie de souris <ol><li> Préparer les anesthésiques par mélange de kétamine (anesthésique dissociatif) et de xylazine (sédatif et analgésique) dans une solution saline tamponnée. Les concentrations de kétamine et de xylazine dans la solution finale est de 12,5 et 2 mg / ml, respectivement. </li><li> Injecter l&#39;anesthésique à la souris par voie intrapéritonéale à l&#39;aide d&#39;une seringue avec une aiguille de 25 à 30 G. Utiliser 0,1 ml/10 g de poids corporel. </li><li> Appliquer une pommade ophtalmique aux yeux des souris afin d&#39;éviter le dessèchement de la cornée. </li><li> Assurez-vous que la souris est suffisamment anesthésiée par pincement son pied ou un orteil avec la pince. Si la souris ne réagit pas avec les réflexes au pincement, de procéder à une intervention chirurgicale. Si la souris réagit à la rigueur avec des réflexes ou des contractions musculaires, attendre 1-2 minutes et répéter le test de pincement. Si la souris réagit toujours, remplacez la souris avec un nouvel animal et répéter les procédures de l&#39;étape 1.2 partir. </li></ol> 2. Je chirurgicalencision de la région inguinale de la souris <ol><li> Placez la souris sur son dos. </li><li> Mouiller une région inguinale avec de l&#39;éthanol désinfection (70%). Pour assurer une meilleure désinfection, la région inguinale peut être rasé pour enlever la fourrure désinfection préalable avec de l&#39;éthanol. </li><li> Prenez la patte arrière et plier la hanche pour produire un angle d&#39;environ 90 ° de l&#39;articulation de la hanche. </li><li> L&#39;utilisation d&#39;un forceps courbes de microdissecting, prendre la peau de la souris dans la région inguinale où l&#39;articulation de la hanche est plié et tirez la peau mouillée légèrement. </li><li> Tout en maintenant la peau avec des pinces, couper une petite incision (&lt;5 mm) à travers la peau avec des ciseaux chirurgicaux. </li><li> Placez la pointe des ciseaux fermés dans l&#39;incision et ouvrir davantage l&#39;incision en ouvrant les ciseaux tout en maintenant à l&#39;intérieur de l&#39;incision. Cela entraînera la peau à se déchirer et devrait produire un diamètre inférieur à 10 mm. Remarque: Une source de lumière froide avec guides de lumière flexibles peut être utilisé pour améliorer la visibilité. En plusles souris mâles, en particulier, l&#39;identification d&#39;un ganglion lymphatique peut être difficile en raison de la quantité de tissu de matière grasse dans la région inguinale. </li></ol> 3. Injection intralymphatique <ol><li> Préparer une seringue (0,5 ml ou moins) avec une aiguille hypodermique G 28-30; biseau court peut être préférable à un long biseau. Aspirer 10 pi de vaccin à injecter et assurent que la seringue est exempte d&#39;air. </li><li> Localiser le ganglion lymphatique inguinal avec l&#39;aide de la pince courbes et la pointe de ciseaux fermé. Le ganglion lymphatique apparaît grisâtre dans le tissu adipeux plus blanchâtre et peut encore être identifié par capillaires afférents et efférents qui entrent et sortent du ganglion lymphatique. </li><li> Immobiliser le ganglion lymphatique en le maintenant entre les branches de la pince incurvés. </li><li> Prenez la seringue et insérer l&#39;aiguille dans le ganglion lymphatique avec les coniques orientés vers le haut; s&#39;assurer que l&#39;ensemble du biseau pénètre dans le ganglion lymphatique. </li><li> Injecter le vaccin (10 pi). Si le feu vert de la lymphee est un gonflement (sauter), l&#39;injection peut supposer succès. Si l&#39;aiguille n&#39;est pas placé assez profondément dans le ganglion lymphatique, une partie ou la totalité du vaccin peut s&#39;échapper et ne pas entrer dans le ganglion lymphatique. Si l&#39;aiguille est insérée trop profondément, le vaccin injecté sera publié voie sous-cutanée en dessous du noeud lymphatique. Dans ce dernier cas, répéter l&#39;injection ou de remplacer la souris avec une nouvelle souris non traitées. </li></ol> 4. Fermeture de l&#39;incision par suture <ol><li> Ouvrez un paquet de suture chirurgicale stérile. </li><li> Saisir l&#39;aiguille de suture et d&#39;un support d&#39;aiguille à la portion distale du corps d&#39;aiguille. Serrer le porte-aiguille en le serrant jusqu&#39;à ce que les premières prises de cliquet. </li><li> Saisir la peau d&#39;un côté de l&#39;incision avec une pince (en fonction de la préférence du chirurgien, pinces ou crochets de la peau dentée ou non dentée peut être utilisé). Insérer l&#39;aiguille ca. 2-3 mm du bord de l&#39;incision, l&#39;entrée de l&#39;extérieur de la peau. </li><li> Loosen attente de la peau avec la pince et à saisir le côté opposé de l&#39;incision avec la pince. Insérer l&#39;aiguille ca. 2-3 mm du bord de l&#39;incision, l&#39;entrée de l&#39;intérieur de la peau. </li><li> Desserrer le porte-aiguille et de saisir l&#39;extrémité de l&#39;aiguille avec la pince. Retirez l&#39;aiguille de la bande de roulement à travers la peau, laissant une longueur convenable de la bande de roulement à l&#39;extérieur du premier point insertion de l&#39;aiguille (si plusieurs souris sont à traiter, laisser un extrémité la plus courte; 5-10 souris peut être utilisée sur une seule aiguille à suture / bande de roulement). </li><li> Faire le noeud préféré selon les protocoles de chirurgien standard. Un point est suffisante si l&#39;incision n&#39;est pas supérieure à 10 mm. Pour les grandes incisions, faire un deuxième point. </li></ol> 5. Traitement post-opératoire <ol><li> Placez la souris dans la cage et couvrir avec les tissus pour garder au chaud. Lors du traitement de plusieurs souris, placez-les près de l&#39;autre pour se réchauffer. Sinon, placez la souris sur un tapis chaud jusqu&#39;à ce qu&#39;ils se sont réveillésup. </li><li> Observez la souris jusqu&#39;à ce qu&#39;ils se réveillent. </li><li> Respecter les souris quotidiennement en ce qui concerne la cicatrisation ainsi que d&#39;autres symptômes cliniques tels que des infections de plaies. La blessure est généralement suffisamment fermée dans les deux jours et guérit dans les sept jours de la procédure. </li></ol>

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TMK est désigné comme l&#39;inventeur de brevets portant sur l&#39;immunothérapie intralymphatique chez l&#39;homme. TMK a été conseiller scientifique et a reçu les frais de voyage de ImVisioN GmbH, Cytos Biotechnology, MannKind Corporation, et XBiotech USA Inc. PJ n&#39;a aucun intérêt à divulguer des conflits.

Intralymphatique immunisation et l&#39;immunothérapie se sont révélés être appropriés pour la stimulation des deux réponses d&#39;anticorps et de réponses des cellules T. Comme démontré dans cette vidéo-article, la procédure intralymphatique de la vaccination est une méthode rapide et facile pour stimuler une forte réponse immunitaire chez les souris. Un chirurgien qualifié peut effectuer la procédure pendant 3-4 min. La session peut également être partagé entre deux chirurgiens où l&#39;on est généralement en train de ...

Les vaccins sont typiquement injectés par voie intramusculaire ou sous-cutanée pour la stimulation des réponses immunitaires. La réussite de ce procédé nécessite un drainage efficace de vaccin vers les ganglions lymphatiques où les cellules présentant l&#39;antigène peuvent interagir avec les lymphocytes pour la production de T-et de réponses des cellules B. En outre, la force et le type de réponses immunitaires induites dépendent aussi de la densité ou de la fréquence de ces interactions ainsi que le micro-environnement lui-même, en particulier la teneur en cytokines. Comme seule une petite fraction d&#39;un vaccin injecté dans un tissu périphérique atteint un ganglion lymphatique, la vaccination de souris et l&#39;homme par injection directe du vaccin dans les ganglions lymphatiques, le site ont été les réponses immunitaires sont produits, ont été réalisées. Chez l&#39;homme, la procédure est guidée par ultrasons, un procédé également utilisé pour l&#39;administration d&#39;agents d&#39;imagerie pour la visualisation et de diagnostic dans le système lymphatique. Chez la souris, la procédure est invasive. Ici, une petite (5-10 mm) incision est fabriqué dans la région inguinale des animaux anesthésiés 1, le ganglion lymphatique est localisé et immobilisé avec une pince, et un volume de 10-20 ul du vaccin est injecté sous contrôle visuel, 10 pi est utilisé pour les premières injections et chez de jeunes souris avec de petits ganglions lymphatiques, tandis que 20 pl peuvent être injectés dans les ganglions lymphatiques de souris âgée ou déjà amorcés, qui ont de plus grands ganglions lymphatiques. L&#39;incision peut être fermé avec un seul point à l&#39;aide de sutures chirurgicales. Par cette méthode, les souris ont vaccinés avec l&#39;ADN plasmidique de 2,3, l&#39;ARN messager 4, 1,3,5,6 peptide, protéine 7-10, les particules 11, 12 des bactéries, ainsi que des adjuvants 7,13, et une forte amélioration de l&#39;abri réponses contre tous les types de vaccins ont été observés. La méthode intralymphatique de la vaccination est particulièrement approprié dans les situations où la vaccination classique produit une immunité insuffisante ou lorsque la quantité de vaccin disponible est limité ou very coûteux. Chez l&#39;homme, le procédé intralymphatique de vaccination a été appliquée à des patients allergiques à 14,15 ou 16 à 21 patients atteints d&#39;un cancer. Bien que la notion de courant est que la méthode est intralymphatique plus invasif que d&#39;autres méthodes injectables tels que des injections intramusculaires et sous-cutanées, la perception de la douleur n&#39;est pas plus élevée qu&#39;après une ponction veineuse 15. Il est prévu que la vaccination intralymphatique deviendra une alternative ou un complément à d&#39;autres méthodes de vaccins prophylactiques et thérapeutiques en particulier. Cet article décrit en détail la façon dont la procédure de vaccination intralymphatique est réalisée chez la souris. Toutes les procédures décrites, ont été approuvés par l&#39;Agence vétérinaire cantonal de Zurich et réalisés selon des lignes directrices et des directives sur la protection des animaux utilisés à des fins scientifiques fédéraux suisses.

<table><tbody><tr><td>Kétamine (Ketasol-100)</td><td>Graeub AG, Suisse</td><td></td><td>Anesthésiques</td></tr><tr><td>Xylazine (Rompun)</td><td>Bayer, Allemagne</td><td></td><td>Anesthésiques</td></tr><tr><td>Viscotears Eye-Gel</td><td>Novartis, Suisse</td><td></td><td>Pour empêcher les yeux de se dessécher pendant l’anesthésie.</td></tr><tr><td>BD Micro-Fine 0,5 ml</td><td>BD Medical, France</td><td></td><td>29 G Seringues à insuline avec aiguilles fixées en permanence</td></tr><tr><td>6-0 Dermalon Monofilament Nylon</td><td>Covidien, MA, USA</td><td></td><td>Pour les sutures (0,7 métrique, 18 G, 45 cm, Bleu)</td></tr><tr><td>Pince courbée, 4,5 à</td><td>Polymed, Suisse</td><td></td><td>Pour l’incision et le maintien des ganglions lymphatiques</td></tr><tr><td>Ciseaux chirurgicaux droits, 4,5 à</td><td>Polymed, Suisse</td><td></td><td>Pour l’incision</td></tr><tr><td>Porte-aiguille, 5,5 po Polymed</td><td>, Suisse</td><td></td><td>Pour fermer l’incision avec suture</td></tr></tbody></table>

intralymphatique immunothérapie et vaccination chez la souris

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Les vaccins sont typiquement injectés par voie intramusculaire ou sous-cutanée pour la stimulation des réponses immunitaires. Le succès de cette nécessite un drainage efficace de vaccin vers les ganglions lymphatiques où les cellules présentant l&#39;antigène peuvent interagir avec les lymphocytes pour la génération de réponses immunitaires recherchés. La force et le type de réponses immunitaires induites dépendent aussi de la densité ou la fréquence des interactions ainsi que le micro-environnement, en particulier la teneur en cytokines. Comme seule une infime partie de la périphérie vaccins injectés atteint les ganglions lymphatiques, la vaccination de souris et de l&#39;homme ont été réalisées par injection directe de vaccin dans les ganglions lymphatiques inguinaux, à savoir l&#39;injection intralymphatique. Chez l&#39;homme, la procédure est guidée par échographie. Chez la souris, une petite (5-10 mm) incision est pratiquée dans la région inguinale des animaux anesthésiés, le ganglion lymphatique est localisé et immobilisé avec une pince, et un volume de 10-20 ul du vaccin est injecté sous contrôle visuel.L&#39;incision est fermée avec un seul point à l&#39;aide de sutures chirurgicales. Les souris ont été vaccinées avec de l&#39;ADN plasmidique, l&#39;ARN, un peptide, une protéine, des particules, et les bactéries ainsi que des adjuvants, et une forte amélioration de la réponse immunitaire contre tous les types de vaccins ont été observées. La méthode intralymphatique de la vaccination est particulièrement approprié dans les situations où la vaccination classique produit une immunité insuffisante ou lorsque la quantité de vaccin disponible est limitée.

La procédure d&#39;injections intralymphatique chez la souris, en dépit de la nature chirurgicale, est simple et relativement rapide. Une personne formée peut effectuer la procédure en 3-4 min. L&#39;incision est fermée avec une couture guérit normalement dans les deux jours (figure 1) Intralymphatique vaccination ou l&#39;immunisation a été réalisée avec l&#39;ARNm, l&#39;ADN plasmidique, les peptides, les protéines, les virus et les bactéries. Figure 2 ill...

La vaccination prophylactique et thérapeutique échoue souvent pour stimuler une forte réponse immunitaire due à la semaine drainage du vaccin vers les ganglions lymphatiques et par conséquent faible implication des cellules immunitaires. Par injection directe de vaccin vers les ganglions lymphatiques, dite injection intralymphatique, l&#39;efficacité du vaccin peut être fortement améliorée, et les doses de vaccin peut être réduite.

Intralymphatique Immunothérapie et vaccination chez la souris

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

L'objectif général de cette procédure est de stimuler les réponses immunitaires de souris en injectant directement un vaccin dans leurs ganglions lymphatiques. Pour ce faire, on commence par anesthésier la souris et pratiquer une petite incision dans la région inguinale. Ensuite, on localise et immobilise les ganglions lymphatiques inguinaux.La dernière étape consiste à injecter le vaccin dans le ganglion lymphatique inguinal. En fin de compte, l'administration intralymphatique du vaccin peut être évaluée en mesurant sa réponse et en la comparant à celle des méthodes d'administration traditionnelles, telles que les injections sous-cutanées. Généralement, les personnes novices dans cette méthode ont des difficultés à atteindre le ganglion lymphatique avec le vaccin.Il peut être nécessaire de s'entraîner pour coordonner l'immobilisation du ganglion lymphatique, l'insertion de l'aiguille et l'injection du vaccin, car l'aiguille sort facilement de sa position, ce qui entraîne alors une injection du vaccin à l'extérieur du ganglion lymphatique. Commencez par anesthésier la souris comme décrit dans le protocole textuel accompagnant. Dès que possible, appliquez une pommade ophtalmique sur

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Nous illustrons non-chirurgical de livraison du matériel de test dans les poumons des souris anesthésiées par la trachée. Cette méthode permet l'exposition des poumons à des agents pathogènes bactériens et viraux, les cytokines, des anticorps, des perles, des produits chimiques, ou des colorants. En outre, nous décrivent la récolte et la transformation des poumons et les ganglions lymphatiques drainant pulmonaires (LDLNs) pour la cytométrie de flux.

Non-chirurgicale instillation intratrachéale de souris avec analyse des poumons et les ganglions lymphatiques drainant poumon par cytométrie en flux

Cette vidéo présente un test de vaccination contre les tumeurs basé sur des cellules. Une souris, injectée par voie intradermique avec des cellules de mélanome B16-F10 pour la formation de tumeurs, est vaccinée avec des cellules B16-F10 sécrétant la cytokine Flt3L près de la tumeur développée. Le Flt3L sécrété par le vaccin favorise la maturation et la prolifération des cellules dendritiques qui présentent ensuite des antigènes tumoraux aux lymphocytes T des ganglions lymphatiques, déclenchant...

Implantation tumorale et injection d’un vaccin antitumoral dans un modèle murin

Les ganglions lymphatiques sont les tissus immunologiques qui orchestrent la réponse immunitaire et constituent une cible critique pour les vaccins. Des biomatériaux ont été utilisés pour mieux cibler les ganglions lymphatiques et contrôler l’administration d’antigènes ou d’adjuvants. Cet article décrit une technique combinant ces idées pour injecter des particules de polymère biocompatibles dans les ganglions lymphatiques.

Injection intra-lymphatique de particules de polymère biodégradables

Le présent travail illustre la commodité de l’utilisation de l’immunothérapie sublinguale pour stimuler la réponse immunitaire innée dans les poumons et conférer une protection contre la pneumonie pneumococcique aiguë chez la souris.

L&#39;immunothérapie sublinguale comme une alternative à induire une protection contre les infections respiratoires aiguës

Nous détaillons ici la méthodologie suivie pour comparer l’efficacité protectrice et la réponse immunitaire pulmonaire induites par l’immunisation intranasale et sous-cutanée avec le BCG dans un modèle murin. Nos résultats montrent les avantages de la vaccination pulmonaire et suggèrent un rôle de la réponse médiée par l’IL17 dans la protection induite par le vaccin.

Efficacité de protection et de la réponse immunitaire pulmonaire après l&#39;administration sous-cutanée et intranasale BCG chez la souris

Décrit est la préparation de nanoparticules LIPOSOMALES antigéniques et leur utilisation en stimulant cellules B activation in vitro et in vivo. Uniforme et robuste d’anticorps conduit à l’élaboration d’un nouveau modèle d’allergie à l’arachide. Le protocole pour générer des liposomes antigéniques peut être étendu à des antigènes différents et des modèles de vaccination.

Liposomes antigéniques pour la production d’anticorps spécifiques à certaines maladies

Le protocole introduit ici permet la caractérisation de la capacité de radioralliement pulmonaire des lymphocytes humains primaires dans des conditions inflammatoires in vivo. Une infiltration pulmonaire des cellules immunitaires humaines moutschen transférés dans un modèle murin d’inflammation allergique peut être imagée et quantifiée par microscopie à fluorescence lumière-feuille de tissu pulmonaire chimiquement défrichées.

Avancée d’imagerie du poumon Homing des Lymphocytes humains dans un modèle In Vivo de l’Inflammation allergique, issue des feuilles lumière microscopie expérimentale

Nous décrivons un modèle de transplantation abdominale hétérotopique de coeur chez les rats, impliquant des modifications des stratégies actuelles, qui mènent à une approche chirurgicale simplifiée. En outre, nous décrivons un modèle de rejet nouveau par l’injection dans l’oreille des cellules cardiaques vitales de muscle, permettant d’autres analyses immunologiques de greffe chez des rats.

Un modèle immunologique pour la transplantation héterotopique de cellules cardiaques et cardiaques chez les rats

Le protocole présente un modèle d’immunothérapie du cancer utilisant la vaccination tumorale cellulaire avec le mélanome B16-F10 exprimant Flt3L. Ce protocole démontre les procédures, y compris la préparation de cellules tumorales en culture, l’implantation tumorale, l’irradiation cellulaire, la mesure de la croissance tumorale, l’isolement des cellules immunitaires intratumorales et l’analyse par cytométrie en flux.

Modèle expérimental d’immunothérapie du mélanome utilisant la vaccination tumorale avec une cytokine hématopoïétique

Le présent protocole décrit une procédure de radiologie interventionnelle établie pour l’injection intrathymique chez la souris afin d’éviter le risque de chirurgie ouverte et d’améliorer la précision des injections percutanées à l’aveugle.

Une technique mini-invasive, précise et efficace pour l’injection intrathymique chez la souris

L’étude démontre le rôle de la peau dans la modulation des réponses immunitaires chez la souris par l’immunisation épicutanée (EC). L’immunisation par EC avec un antigène protéique peut supprimer les réponses immunitaires en cas d’hypersensibilité de contact ou inverser la suppression induite par la peau lorsqu’elle est associée à des profils moléculaires associés à des agents pathogènes. L’immunisation EC est prometteuse en tant qu’approche efficace et sans aiguille de l’immunothérapie.

Modèle murin d’immunomodulation induite par l’épi-peau

Découvrez l'immunothérapie intralymphatique chez la souris pour stimuler les réponses immunitaires par injection directe dans les ganglions lymphatiques inguinaux. Cette méthode améliore l'efficacité vaccinale comparée aux injections sous-cutanées traditionnelles.

Intralymphatique Immunothérapie et vaccination chez la souris

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