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DOI: 10.3791/51066-v
Ilias I. Siempos1,3, Hilaire C. Lam1, Yan Ding2, Mary E. Choi2, Augustine M. K. Choi1, Stefan W. Ryter1
1Department of Medicine, Division of Pulmonary and Critical Care Medicine,Brigham and Women's Hospital, 2Department of Medicine, Renal Division,Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 3First Department of Critical Care Medicine and Pulmonary Services,University of Athens Medical School, Evangelismos Hospital, Athens, Greece
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
La septicémie expérimentale peut être induite chez des souris en utilisant la méthode (CLP) ligature caecale et ponction. Les protocoles actuels pour évaluer autophagy in vivo dans le cadre de la sepsie induite par CLP sont présentés ici: Un protocole pour la mesure en utilisant des souris autophagy (GFP)-LC3, et d'un protocole de mesure de la formation de autophagosome par microscopie électronique.
L’objectif global de cette procédure est d’induire une septicémie par ligature et ponction seql chez la souris afin d’étudier l’autophagie tissulaire, un processus homéostatique qui facilite le renouvellement des protéines et des organites endommagés. Pour ce faire, il suffit d’abord d’identifier le sécum et de le faire sortir de la cavité péritonéale de la souris anesthésiée. Une fois isolé, 60 % du sécum est ligaturé puis perforé pour induire une péritonite de grade moyen.
Le sérum ligaturé et perforé est remis dans la cavité péritonéale et l’animal est autorisé à récupérer. La dernière étape consiste à prélever les tissus pulmonaires, hépatiques et rénaux de l’animal septique 24 heures plus tard. En fin de compte, la microscopie électronique est utilisée pour montrer la formation d’autophagosomes dans les cellules intactes à partir des tissus prélevés sur l’animal septique.
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