Shock Wave application cultures cellulaires

L'objectif général de cette procédure est d'éviter les effets physiques perturbateurs pendant le traitement in vitro par ondes de choc afin d'obtenir des résultats reproductibles. Cela est réalisé en remplissant d'abord complètement un flacon de culture cellulaire avec du milieu de culture, puis en plaçant le flacon dans un bain d'eau chauffé. La deuxième étape consiste à utiliser une quantité généreuse de gel échographique lors du couplage de l'appliquateur au bain d'eau.

Ensuite, l'appliquateur est placé horizontalement contre la membrane du bain d'eau. La dernière étape consiste à s'assurer que la source d'ondes de choc est alignée avec le centre du flacon de culture cellulaire afin que les cellules soient positionnées au foyer de l'onde. Enfin, l'analyse de vos cellules peut être réalisée, par exemple, par PCR en temps réel et par une matrice de cytokines afin de mettre en évidence une modification des gènes et des cytokines d'intérêt.

Nous avons eu pour la première fois l'idée de ce modèle lorsque nous avons constaté que les méthodes existantes appliquant directement des ondes courtes aux cultures cellulaires ne tiennent pas compte de l'effet de réflexion des ondes au passage du milieu de culture à l'air ambiant. Le déroulement de la procédure sera présenté par le Dr. Chante, étudiante au doctorat de mon groupe de recherche. Pour commencer, chauffez 3,5 litres d'eau du robinet à 37 degrés Celsius.

Ensuite, transférez l'eau chauffée dans le bain-marie. Le niveau d'eau doit se situer à trois centimètres en dessous du bord supérieur du bain-marie et recouvrir complètement la membrane. Ensuite, reliez le capteur de température à une alimentation électrique et placez le capteur de température dans l'emplacement prévu à cet effet sur la paroi arrière du bain-marie.

Ensuite, tout en agitant l'eau, reliez continuellement le chauffage à une alimentation électrique et chauffez l'eau jusqu'à une température stable de 37 degrés Celsius. Dans des conditions stériles. Ensemencez les cellules dans des flacons de culture T 25.

Ainsi, ils atteindront une confluence de 90 % après une incubation nocturne. Ensuite, placer les flacons verticalement et les remplir de milieu de culture jusqu'au bas du col du flacon afin d'éviter toute contamination. Ne pas laisser le milieu entrer en contact avec le col du flacon ou le bouchon de fermeture.

Ensuite, fermez hermétiquement les flacons avec un bouchon solide sans filtre afin d'éviter toute contamination par l'eau du bain. Scellez ensuite les bouchons avec du paraforme. Une fois les flacons scellés, fixez-les à un support à l'aide de pinces.

Insérez ensuite les fioles fixées dans le bain d'eau et alignez le centre du flacon de culture cellulaire avec le centre de la membrane de l'appliquateur d'ondes de choc. Appliquez une quantité généreuse de gel de transmission ultrasonore sur l'appliquateur d'ondes de choc et sur la membrane du bain d'eau. Connectez ensuite l'appliquateur à la membrane en veillant à ce qu'aucune bulle d'air ne soit présente entre les deux.

Ensuite, placez l'appliquateur d'ondes de choc au centre de la membrane et assurez-vous qu'il est aligné horizontalement et verticalement avec le flacon de culture cellulaire afin de garantir un traitement de toute la zone de croissance cellulaire. Réalisez ensuite une expérience pilote pour déterminer la distance idéale entre l'appliquateur d'ondes de choc et le flacon de culture, ainsi que pour définir les paramètres de traitement corrects. Veillez à maintenir le flacon de culture et l'appliquateur en position stable pendant l'activation du dispositif d'ondes de choc.

Une fois la distance idéale déterminée, réalisez l'expérience selon les paramètres souhaités de traitement par ondes de choc. Après l'achèvement du traitement par ondes de choc, retirez le flacon de culture cellulaire du bain-marie, séchez-le avec du papier absorbant et désinfectez la surface extérieure du flacon. Ensuite, transférez le milieu du flacon dans un tube de centrifugation.

Centrifuger les cellules selon les paramètres normaux de centrifugation. Resuspendre le culot cellulaire dans deux millilitres de milieu de culture cellulaire, puis transférer la suspension cellulaire dans le flacon contenant cinq millilitres de milieu de culture cellulaire, et cultiver les cellules jusqu’à la confluence requise pour les expériences d’analyse cellulaire. Une analyse par PCR en temps réel de cellules endothéliales de veine ombilicale humaine a révélé une surexpression des niveaux d’ARNm de tie two après un traitement par ondes de choc.

Cela suggère un traitement par ondes de choc, une prolifération accrue des cellules endothéliales et une angiogenèse. Les niveaux de cytokines dans la veine ombilicale ont été quantifiés à l'aide d'un réseau de cytokines.

On a également observé une augmentation significative des deux cytokines inflammatoires IL-6 et IL-8, toutes deux impliquées dans l'inflammation associée au processus angiogénique après son développement. Cette technique a ouvert la voie à de nombreux chercheurs dans le domaine de la recherche fondamentale sur les ondes de choc, leur permettant d'explorer les effets sur un type cellulaire unique lors d'expériences in vitro. Nous espérons convaincre encore davantage de chercheurs d'utiliser ce modèle afin d'obtenir des résultats reproductibles et comparables en recherche sur les ondes de choc.