Name: Trace conditionnement de la peur chez la souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-20T18:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Découvrez le conditionnement de la peur par trace chez la souris pour évaluer l'apprentissage et la mémoire dépendants de l'hippocampe. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes de la mémoire associative et les réponses comportementales.

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Ce travail est soutenu par une subvention du Conseil de recherche de l&#39;Université Baylor et d&#39;une subvention de la Fondation de recherche de l&#39;épilepsie.

Les souris utilisées dans l&#39;expérience suivante ont été générées et logés à l&#39;Université Baylor à une température ambiante de 22 ° C, avec une lumière 14 h et 10 h foncé (20:00-06:00 h) de cycle diurne. Les souris ont reçu un accès ad libitum à la nourriture et de l&#39;eau. Toutes les procédures aux souris étaient en conformité avec les Instituts nationaux de la santé Lignes directrices pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire et le protocole des animaux a été approuvé par l&#39;Université Baylor de protection des animaux et l&#39;utilisation Comité. Vue d&#39;ensemble La tâche de la peur de trace conditionné repose sur des procédures décrites par Wiltgen et ses collègues 9. Une. Préparation de l&#39;équipement La chambre d&#39;un appareil de conditionnement de peur (26 cm x 22 cm x 18 cm) se compose de deux parties qui sont en acrylique, de deux côtés qui sont en métal, et une partie inférieure du plancher de la grille qui est utilisée pour délivrer un choc à la patte doux. La chambre d&#39;essai est la maisond dans une chambre atténué son. La chambre est également étanche à la lumière pour empêcher la lumière extérieure d&#39;influencer le logiciel de détection de mouvement. <ol><li> Calibrer les niveaux de chocs, les niveaux de lumière, et les niveaux d&#39;intensité sonore pour la chambre d&#39;essai. Mesurer le niveau de la chambre de contrôle de fond. Le bruit de fond dans cette chambre est de 65 dB. Utilisez un sonomètre pour mesurer ce niveau. L&#39;appareil doit être fixé à 70 dB, la valeur C, et à la détection à prise lente. <ol><li> Calibrer le niveau de choc de 0,5 mA. Utilisez un dispositif de calibrage externe pour calibrer le niveau de choc (voir le tableau des matériaux). La mesure interne du générateur de choc n&#39;est pas exact. Le générateur de choc administre un choc brouillé qui ne peut être mesurée avec précision par un ampèremètre standard. </li><li> Placer une tête sur l&#39;un des barreaux de la grille et de placer les autres plomb 3 ou 4 bars au-dessus de. Utilisez le générateur de choc à administrer le choc. Réglez le niveau de choc jusqu&#39;à ce que le niveau correct soit atteint. Pour ce faire, pour each craindre chambre de conditionnement. </li><li> Fermer la porte de la chambre lors de la mesure du niveau de la chambre de lumière. Calibrer le niveau de lumière à environ 1,0. Il s&#39;agit d&#39;un numéro spécifique au logiciel FreezeFrame utilisé dans cette expérience. Un compteur de lumière externe va lire ce que 2 lux. Le niveau de luminosité peut être réglé en déplaçant la position de la lumière de la maison ou en réglant le condenseur de la lentille. Assurez-vous de serrer les vis de réglage pour la lentille après ajustement. </li><li> Calibrer le niveau sonore en décibels à 85 dB. Utilisez un mètre de décibel externe à l&#39;intérieur de la cage de test pour étalonner le niveau de décibels (voir le tableau des matériaux). Le son sera présenté une tonalité Hz 2700. Remarque: Si vous utilisez la souris âgés de plus de 6 mois, il peut être préférable d&#39;utiliser un bruit blanc puisque les souris plus âgées peuvent avoir entendu les déficits. </li></ol></li><li> Après l&#39;appareil est prêt de prendre les sujets à une salle d&#39;attente séparée. Note: Ne pas loger la souris dans la même pièce que la salle d&#39;examen. </li><li> e d&#39;étiquetagee la queue des souris qui seront testés pour des tests. Il est préférable de réduire la manipulation excessive avant le test. Alternativement, les queues peuvent être marqués la veille de l&#39;expérience pour réduire le stress de manipulation. Après les souris ont été marqué leur permettre de s&#39;acclimater à l&#39;ambiante pendant 30 min. Avoir cages supplémentaires propres pour loger la souris une fois le test terminé. </li></ol> 2. Trace conditionné Jour 1 <ol><li> Retirez les souris de la cage et placez-les dans des cages individuelles pour le transport à la chambre de conditionnement de la peur. Utiliser de la litière propre pour chaque cage. Placez une note collante sur la cage de transfert de garder l&#39;ordre de souris test correct. Remarque: Si les souris sont logés individuellement ils peuvent être transportés dans leur cage. </li><li> Placez la souris dans la chambre d&#39;essai et fermer la porte. Démarrez le logiciel. </li><li> Le jour de la formation, permettent aux souris pour explorer la chambre pour 3 min. Le logiciel présente alors une tonalité sec 20 (85 dB, 2700 Hz) to l&#39;animal. Après une période d&#39;aller de 20 secondes un léger choc (2 s, 0,5 mA) est administrée à l&#39;animal. </li><li> Notez la réaction du sujet à confirmer qu&#39;ils ont reçu les stimulus aversif en regardant la vidéo. A 200 secondes d&#39;intervalle entre les essais sépare les 5 essais de conditionnement. Chaque essai consiste en une tonalité de 20 s suivie d&#39;un délai de 20 secondes, puis un choc. </li><li> Après le test est terminé permettre à l&#39;animal de rester dans la chambre d&#39;essai pendant 1 min avant de le retirer de la cage de test. </li><li> Placez le dos de l&#39;animal dans la cage de transfert et le retourner à sa cage. Si il ya des souris supplémentaires dans leur cage alors accueillir individuellement la souris jusqu&#39;à ce que toutes les souris tests complets. Cela permettra de réduire la contrainte à l&#39;autre des souris qui n&#39;ont pas été testés. Une solution alternative serait de loger séparément toutes les souris une semaine avant les essais, afin de réduire l&#39;influence de l&#39;élimination en continu des souris d&#39;une cage. </li><li> Nettoyer la chambre d&#39;essai avec 30% d&#39;isopropanol après each animale est testée. </li><li> Répétez les étapes 02.02 à 02.07 pour toutes les souris de la cohorte d&#39;essai. </li><li> Retour toutes les souris dans leur chambre de la colonie après la dernière souris dans la cohorte a été testé. </li></ol> 3. Trace Jour conditionnement de la peur 2: Memory Trace Test <ol><li> test de la mémoire de la trace se déroulera le jour 2. Dans ce protocole, il ya 3 présentations de tonalité. Placez la souris dans un nouveau contexte pour le test trace de conditionnement. </li><li> Préparer le logiciel pour exécuter un programme avec une période de référence de 2 min, suivie de trois présentations de 20 secondes de tonalité. Il est sa 220 sec ITI entre chaque présentation de ton. </li><li> Pour la nouvelle condition de contexte, placer des inserts en acrylique clair sur le plancher de la chambre à modifier la forme, la texture et la couleur de la chambre de conditionnement. </li><li> Changer l&#39;odeur dans la chambre en plaçant l&#39;extrait de vanille dans un bateau peser moins de l&#39;insert de-chaussée. </li><li> Nettoyer la chambre d&#39;éthanol à 70% au lieu de 30% d&#39;isopropanol. Remarque: Cela aiderade créer un contexte nouveau. </li><li> Apportez les souris à la salle d&#39;attente et renommer leurs queues pour les tests si nécessaire. </li><li> Préparer de nouvelles cages de transfert de contexte par le remplacement de la literie avec du papier déchiqueté. Remarque: Cela aidera à créer un contexte nouveau. </li><li> Placez la souris dans la chambre d&#39;essai puis lancez le programme. Nettoyer la chambre avec 70% d&#39;éthanol fois le test terminé. </li><li> Remettre les souris dans leur cage après le conditionnement de trace est terminée. Retour toutes les souris dans leur chambre de la colonie quand toutes les souris ont été testés. </li></ol> 4. Trace conditionnement de la peur Jour 3: mémoire contextuelle Test <ol><li> Le troisième jour, le conditionnement contextuel est effectuée. Préparer le logiciel pour exécuter un programme pour enregistrer le comportement de congélation pendant 8 min. </li><li> Nettoyer la chambre avec 30% d&#39;isopropanol avant de tester et après avoir testé chaque souris. Le cadre doit être identique à celle du jour 1. Les cages de transfert devraient être les mêmes que dans le jour 1. </li><li&gt; Apportez souris à la salle de détention et d&#39;étiqueter leurs queues pour les tests. </li><li> Placez chaque souris dans la chambre d&#39;essai puis lancez le programme. Nettoyer la chambre avec 30% d&#39;isopropanol fois le test terminé. </li><li> Retour toutes les souris dans leur chambre de la colonie une fois rempli. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Il ya eu plusieurs études qui ont permis d&#39;élucider les circuits neuronaux qui sous-tend trace conditionnement de la peur. Trace conditionnement de la peur est censé impliquer le CA1 de l&#39;hippocampe 12-14. Il est également prouvé que le cortex préfrontal médian (mPFC) joue un rôle important dans la trace clignement conditionné 15, et la mPFC a été trouvé pour être impliqués dans la trace conditionnement de la peur. Une étude a montré que les neurones MPFC fournissent une activité soutenue a...

En conditionnement de la peur un stimulus neutre (NS) est jumelé avec un stimulus inconditionnel aversif (États-Unis). Le NS est normalement un ton et devient un stimulus conditionné (CS) par associations répétées avec les États-Unis. Le CS peut alors déclencher une réponse conditionnée (RC), tel que le gel, en l&#39;absence de l&#39;US aversive. Un protocole de conditionnement de la peur couramment utilisé est conditionné retard. Dans ce protocole, le début de la Nouvelle-Écosse et les États-Unis contigus ou avec un certain chevauchement dans la présentation du stimulus. Même si retard conditionnement de la peur est l&#39;un des types de conditionnement associatif temporelle plus couramment utilisés, il existe plusieurs autres types de conditionnement associatif dispositions temporelles: conditionnement simultané, conditionnement en arrière, et le conditionnement de trace 1. Dans trace conditionnement de la peur, il ya un intervalle libre de relance entre la Nouvelle-Écosse et aux États-Unis de plusieurs secondes résultant dans une période de &quot;trace&quot;. Plusieurs études ont rapporté déficits en trace conditionnement de peur lorsque les lésions neurotoxiques sont produites dans les ouvrages que l&#39;entrée dans l&#39;hippocampe 2-5 ou lorsque des agents pharmacologiques sont utilisés pour bloquer la fonction du récepteur dans l&#39;hippocampe. Lésion aux résultats de l&#39;hippocampe des déficits dans le conditionnement de trace et le conditionnement contextuel, mais ne porte pas atteinte retard conditionnement de la peur 8. Il ya plusieurs avantages à utiliser trace conditionnement de la peur. Le protocole de conditionnement de peur peut être réalisé sur une période de test de trois jours et permet une mémoire dépendante de l&#39;hippocampe qui n&#39;est pas spatialement dépendants. Trace conditionnement de la peur peut être utilisé comme un test complémentaire pour le labyrinthe de Morris de l&#39;eau, nouveau test de reconnaissance d&#39;objet, ou d&#39;autres tests de labyrinthe dans les enquêtes sur la mémoire de l&#39;hippocampe-dépendante.

<table><tbody><tr><td>FreezeFrame</td><td>Coulbourn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>30 % Isopropanol</td><td></td><td></td><td>Achetez 90 % d’isopropanol et diluez-le à 30</td></tr>%<tr><td>70 % d’éthanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ampèremètre</td><td>Med-Associates</td><td>ENV-420</td><td>Windows XP, Vista et 7 Compatible (32 bits uniquement)</td></tr><tr><td>Sonomètre</td><td></td> numérique <td>33-2055</td><td></td></tr><tr><td>Extrait de vanille</td><td>McCormick Extrait</td><td></td><td></td>de vanille pure</tr><tr><td>Notes</td><td>autocollantes Post-it</td><td></td><td>3 po x 3 po</td></tr></tbody></table>

trace conditionnement de la peur chez la souris

Trace Fear Conditioning in Mice

Dans cette expérience, nous présentons une technique pour mesurer l&#39;apprentissage et de memoire. Dans le protocole de conditionnement de peur trace présentée ici comporte cinq paires entre un stimulus neutre et un stimulus non conditionné. Il ya une période de trace de 20 secondes qui sépare chaque essai de conditionnement. Sur le gel de jour suivant est mesurée au cours de la présentation du stimulus conditionné (CS) et la période de suivi. Le troisième jour, il ya un test de 8 min pour mesurer la mémoire contextuelle. Les résultats représentatifs sont des souris qui ont été présentés avec le stimulus inconditionnel aversif (choc) par rapport à des souris qui ont reçu les présentations de tonalité sans le stimulus inconditionnel. Trace conditionnement de la peur a été utilisée avec succès pour détecter apprentissage et de mémoire des déficits et des améliorations subtiles chez les souris qui ne se trouvent pas à d&#39;autres méthodes peur de conditionnement. Ce type de conditionnement à la peur est considérée comme dépendant de connexions entre le cortex préfrontal médian et l&#39;hippocampe. Une controverse actuelle est de savoir si cette méthode est considérée comme l&#39;amygdale indépendant. Par conséquent, d&#39;autres tests de conditionnement de la peur est nécessaire d&#39;examiner apprentissage et de mémoire effets de l&#39;amygdale-dépendante, comme par le retard conditionnement de la peur.

Pour les résultats représentatifs, nous présentons les données de C57BL/6J souris adultes de contrôle qui ont reçu les appariements de relance neutres avec le stimulus inconditionnel (état de choc) par rapport à des souris qui ont reçu le stimulus neutre, mais n&#39;ont pas reçu le stimulus inconditionnel (pas de condition de choc). Il est important d&#39;exécuter cette condition lors de la première mise en place de ce test de comportement pour déterminer si le protocole a été effectuée correctement. <p class="jove_...

Dans l&#39;expérience suivante, on décrit un protocole pour la trace conditionnement de peur chez la souris. Ce type de mémoire associative comprend une période de trace qui sépare l&#39;impulsion neutre et le stimulus inconditionnel.

Trace conditionnement de la peur chez la souris

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings ...

L'objectif général de l'expérience suivante est d'évaluer l'apprentissage et la mémoire dépendants de l'hippocampe chez la souris à l'aide d'un conditionnement auditif avec intervalle interstimulus. Cela est réalisé en entraînant d'abord l'animal à associer un ton auditif à un stimulus aversif. Le jour suivant, l'animal est placé dans un contexte nouveau et le comportement de figement est enregistré en réponse au ton.Le troisième jour, l'animal est réintroduit dans le contexte d'origine et le comportement de figement est enregistré. Les résultats montrent que les souris entraînées avec l'association ton-choc présentent un comportement de figement plus marqué que celles qui n'ont pas reçu le choc. Cette méthode peut être utilisée pour obtenir des informations sur l'apprentissage et la mémoire dépendants de l'hippocampe chez la souris, et s'avère particulièrement utile dans l'étude des animaux transgéniques et des animaux knock-out.La procédure suivante est réalisée dans une chambre de conditionnement à la peur placée à l'intérieur d'une chambre plus grande atténuant les sons. Lorsque la porte de la chambre est fermée, positionnez les lumières de manière à atteindre le niveau d'illumination souhaité ; si elles sont correctement placées, le témoin lumineux du niveau d'éclairement doit être éteint. Utilisez un sonomètre pour confirmer un niveau constant de bruit de fond à l'intérieur de chaque chambre.Ensuite, étalonnez le ton utilisé pendant l'entraînement. Utilisez un dispositif externe d'étalonnage pour régler le niveau de choc. Placez une électrode sur une barre et une autre trois ou quatre barres plus loin.Utilisez le générateur de choc pour administrer le choc et étalonner jusqu'à l'obtention du niveau correct. Répétez cette étape pour chaque chambre de conditionnement à la peur. Une fois l'appareil préparé, transférez les sujets dans une salle de contention séparée de la salle de test afin de réduire la manipulation excessive.Avant le test, étiquetez les queues au moins 30 minutes avant le test ou la veille. Lorsque vous êtes prêt à commencer, transférez la souris de test dans une cage propre et étiquetée pour le transport vers la chambre de conditionnement à la peur. Placez la souris dans la chambre, fermez la porte et démarrez le logiciel.Le premier jour de l'entraînement, on laisse les souris explorer la chambre pendant trois minutes. Le logiciel présente ensuite un ton de 22e, suivi par un intervalle de trace de 22e qui se termine par une légère secousse électrique aux pattes. Observer le sujet afin de confirmer qu'il a reçu les stimuli aversifs.Un intervalle inter-essai de 202 secondes sépare cinq essais de conditionnement. Après les essais, laissez l'animal rester dans la chambre de test pendant une minute avant de le retirer, replacez l'animal dans la cage de transfert et ramenez-le dans la salle de maintien. S'il reste d'autres souris à tester individuellement dans leur cage d'origine, gardez la souris en quarantaine jusqu'à ce que toutes les souris aient terminé les tests.Nettoyez la chambre de test avec de l'isopropanol à 30 % en prévision du prochain animal. Répétez ces étapes jusqu'à ce que toutes les souris aient été entraînées. Ramenez toutes les souris dans leur salle d'élevage.Le lendemain, après avoir testé la dernière souris de la cohorte, les animaux sont testés pour la mémoire de la peur conditionnée en trace. Ce jour-là, remplacez la litière des cages de transfert par du papier déchiqueté afin de modifier leur contexte.Le contexte de la chambre est également modifié. Placez une feuille de mousse sous un insert en acrylique transparent sur le sol afin d'en modifier la texture et l'apparence. Placez un séparateur en acrylique à l'intérieur de la zone de test.Changez l'odeur en plaçant de l'extrait de vanille dans un bateau en lactosérum sous le plancher. Ce jour-là, nettoyez la chambre avec de l'éthanol à 70 % au lieu de l'isopropanol à 30 % entre chaque souris. Lorsque prêt, placez la souris dans la chambre de test et démarrez le programme.La session commence par une période de base de deux minutes, suivie par trois présentations d'un son de 22 secondes. Un intervalle inter-essai de 222 secondes sépare chaque présentation du son. Une fois la session terminée, remettez les souris dans leur cage d'origine et poursuivez jusqu'à ce que tous les animaux aient été testés en vue des expériences du lendemain.Restaurer le même contexte que celui utilisé le premier jour. Nettoyer la chambre avec de l'isopropanol à 30 %. Le conditionnement contextuel est réalisé le troisième jour.À l’aide des mêmes cages de transfert que le premier jour, récupérez la souris en essai dans la salle de contention. Placez la souris dans la chambre d’essai, puis démarrez le programme d’évaluation de la mémoire contextuelle. Exécutez un programme permettant d’enregistrer le comportement de figement pendant huit minutes.Après cette période, remettez la souris dans sa cage d’origine et poursuivez les tests comme indiqué précédemment. Les résultats représentatifs montrent une augmentation du comportement de figement chez les animaux ayant reçu l’association son-choc au cours de la séance d’entraînement. Dans un contexte nouveau, les souris ayant reçu le stimulus de choc aversif présentaient un figement plus marqué par rapport aux souris n’ayant pas reçu de choc durant la trace du son de base et l’intervalle inter-essai. Lorsqu’elles étaient replacées dans le contexte d’origine, les animaux ayant reçu le stimulus de choc aversif montraient un comportement de figement constamment plus élevé pendant la période de huit minutes.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment utiliser le conditionnement associatif à trace pour étudier l'apprentissage et la mémoire dépendants de l'hippocampe chez la souris.

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Cet article présente un protocole pour un test de conditionnement peur contextuelle et indicé l'aide d'un système vidéo d'analyse pour évaluer l'apprentissage peur et la mémoire chez la souris.

Contextuelles et Cued conditionnement de la peur de test en utilisant un système d&#39;analyse de la vidéo chez des souris

Ce protocole décrit une méthode de bois d’allumage chimique avec pentylènetétrazole et fournit un modèle de souris de l’épilepsie. Ce protocole permet également d’enquêter sur la vulnérabilité à l’induction de la saisie et la pathogenèse après les crises d’épilepsie chez les souris.

Modèle de souris de bois d’allumage induite par le pentylènetétrazole

Nous décrivons ici la méthodologie détaillée requise pour mener des expériences d’apprentissage (SEFL) de peur stress améliorée, un modèle préclinique de trouble de stress post-traumatique, chez les rats et les souris. Le modèle utilise des aspects de la crainte pavlovien climatisation et froid comme un indice de la peur accrue chez les rongeurs.

Peur stress-Enhanced Learning, un modèle robuste rongeur du syndrome de Stress post-traumatique

Nous décrivons un protocole prolongé de conditionnement de la peur qui produit l’incubation de surentraînement et la peur chez les rats. Ce protocole comprend une seule séance d’entraînement avec 25 appariements de choc sonore (c.-à-d. surentraînement) et une comparaison des réponses de congélation conditionnées au cours des tests de contexte et de repère 48 h (à court terme) et 6 semaines (à long terme) après l’entraînement.

Incubation de la peur à l’aide d’un protocole étendu de conditionnement de la peur pour les rats

Les réactions comportementales défensives dépendent de l’intensité de la menace, de la proximité et du contexte d’exposition. Sur la base de ces facteurs, nous avons développé un paradigme de conditionnement classique qui suscite des transitions claires entre le gel conditionné et le comportement de vol chez les sujets individuels. Ce modèle est crucial pour comprendre les pathologies impliquées dans l’anxiété, la panique et les troubles de stress post-traumatique.

Un nouveau paradigme pavlovien de conditionnement de la peur pour étudier le gel et le comportement de vol

Pour étudier les comportements de vol dans un contexte de peur, nous introduisons un protocole de conditionnement de peur modifié. Ce protocole garantit que les souris présentent systématiquement des comportements de vol lors de la présentation des signaux dans le conditionnement de la peur.

Conditionnement de peur modifié pour induire des comportements de fuite chez la souris

Le paradigme de la peur observationnelle évalue la congélation par procuration chez les rongeurs comme un modèle d’empathie affective. Cette procédure consiste à exposer des rongeurs observateurs à des démonstrateurs conspécifiques recevant des chocs de pied aversifs pour susciter des réponses de gel empathiques. En utilisant des tests de peur observationnels, les chercheurs peuvent étudier les mécanismes neuronaux sous-jacents à l’empathie affective.

La peur observationnelle comme modèle d’empathie affective chez la souris

La reconsolidation disruptive est une approche prometteuse pour atténuer l’expression comportementale de la mémoire de peur chez les patients atteints de troubles anxieux ou de trouble de stress post-traumatique. Dans une série d’études sur le conditionnement de la peur humaine, nous avons montré que la perturbation de la reconsolidation par le propranolol, un β-bloquant noradrénergique, est très efficace pour effacer la réponse de peur conditionnée.

Perturber reconsolidation de la mémoire peur chez les humains par un β-noradrénergique Blocker

Les hormones gonadiques telles que l’œstrogène modulent la formation de la mémoire dans un certain nombre de paradigmes expérimentaux, y compris la mémoire d’extinction de la peur. Ce protocole décrit un ensemble de méthodes pour étudier l’influence des hormones gonadiques spécifiquement pendant l’extinction chez les femelles à cycle naturel, y compris la surveillance du cycle œstral et l’administration d’œstrogènes exogènes.

Protocole pour l&#39;étude de l&#39;extinction de la peur conditionnée dans le cyclisme Naturellement rats femelles

Cet article décrit un nouveau protocole pour la mesure quantitative de la motivation sociale chez la souris en utilisant le conditionnement opérant pour une récompense sociale. Le protocole est utile pour la mesure de la motivation sociale dans des modèles murins d’autisme et d’autres troubles du comportement social.

Quantifier Motivation sociale chez la souris utilisant Conditionnement opérant

Découvrez le conditionnement de la peur par trace chez la souris pour évaluer l'apprentissage et la mémoire dépendants de l'hippocampe. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes de la mémoire associative et les réponses comportementales.

Trace conditionnement de la peur chez la souris

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