En Vivo mesures électrophysiologiques sur les nerfs sciatiques souris

L’objectif global de cette méthode est de déterminer les principales propriétés de conduction nerveuse sur les nerfs SCIC de souris vivantes. La souris à tester est placée sur son ventre. Veuillez prendre en considération que vous devez être familier avec l’anatomie du nerf SCIC ici indiquée en bleu, les électrodes de détection indiquées en noir sont installées à une position où le muscle gastro a son diamètre maximum.

Les électrodes de référence indiquées en rouge sont simplement placées sous les électrodes de détection. Maintenant, le point de stimulation distale doit être marqué. Nous avons choisi arbitrairement la distance définie et constante de quatre millimètres.

Le lieu de stimulation proximale se trouve à une distance de 16 millimètres de l’électrode de détection. Cela signifie que nous avons un espace d’exactement 12 millimètres entre les points de stimulation proximale et distale du nerf STIC. La stimulation à l’aide des électrodes de l’aiguille est ensuite effectuée d’abord au site de stimulation proximale, puis à la position de stimulation distale.

Bonjour, je m’appelle Alexander Schultz. Je travaille à l’Institut Ance pour la recherche sur l’H. à Gina, en Allemagne, sous la supervision du Dr Helen Morrison. En collaboration avec le professeur Reinhard Power de l’Institut de biologie cellulaire moléculaire de l’hôpital universitaire de Gina, nous avons établi une méthode par laquelle nous sommes capables d’effectuer des mesures électrophysiologiques sur les nerfs célestes de souris vivantes.

Ces enregistrements constituent un outil puissant utilisé pour caractériser des modèles murins de maladies neuromusculaires. Alors commençons. C’est l’équipement dont vous auriez besoin pour effectuer les mesures.

Trois électrodes-aiguilles pour l’enregistrement ECG. Une électrode à aiguille pour la stimulation, des électrodes annulaires pour la détection, et comme cheveux de référence, prélever la crème un rasoir électrique, une plaque chauffante contrôlée par rétroaction, une sonde thermique recal, un morceau de souris pour l’anesthésie et du gel de contact. Les souris sont anesthésiées par inhalation continue de fluor pour l’initiation de l’anesthésie.

Nous avons appliqué 3 % de fluor dans cent pour cent d’oxygène. Plus tard, lors des mesures, il suffit de travailler avec 2 % de fluor dans cent pour cent d’oxygène. Afin de réduire la résistance de la peau lors des mesures, nous enlevons complètement la fourrure des membres postérieurs des souris testées.

Ceci est réalisé par un rasoir électrique. De plus, nous utilisons une crème dépilatoire disponible dans le commerce. À la fin, la crème est complètement éliminée et la peau est nettoyée à l’aide d’éthanol à 70 %.

Dans The Next Step, nous installons trois électrodes pour les enregistrements ECG, une électrode sous la peau de chaque chute et une électrode sous la peau dans la région du cou. La prise d’enregistrements ECG pendant les mesures permet de surveiller au moins un paramètre vital. Les deux membres postérieurs sont fixés au sol à l’aide d’un ruban adhésif après un placement approximatif des électrodes annulaires.

Pour une conductivité optimale du signal, nous utilisons un gel de contact réduisant la résistance au transfert entre la peau et les électrodes annulaires. Les électrodes de détection marquées en noir sont placées à la position où le muscle gastrocs a son diamètre maximal. Les électrodes de référence indiquées en rouge sont placées juste en dessous des électrodes de détection.

Ensuite, les positions exactes pour la stimulation du nerf sciatique sont définies et marquées à une distance de quatre millimètres des électrodes de détection. La stimulation distale aura lieu à une distance de 16 millimètres des électrodes de détection. La stimulation proximale sera effectuée ici.

Vous voyez ici l’interface utilisateur d’un programme d’acquisition et d’analyse de données. Dans la première rangée, l’enregistrement de l’ECG est visualisé. Au deuxième rang.

Vous pouvez voir les impulsions répétitives du stimulateur. Dans la troisième rangée, les signaux de réponse détectés par l’électrode de détection apparaîtront à l’aide d’un taux d’échantillonnage de 50 kilohertz. Nous pouvons maintenant commencer les enregistrements proprement dits.

L’aiguille de stimulation est d’abord injectée à la position de stimulation proximale. Le positionnement correct de l’aiguille, ou plus précisément, la stimulation correcte du nerf STIC, peut être surveillé par une réponse musculaire appropriée en aval du nerf STIC. Dans la zone des électrodes de détection, les signaux détectés par les électrodes de détection sont visualisés dans l’interface utilisateur.

En même temps, essayez d’obtenir des courbes de réponse biphasiques claires d’amplitude maximale constante. Ensuite, la stimulation distale est effectuée de la même manière. Dans le coin supérieur gauche, vous pouvez voir les enregistrements simultanés des électrodes sur pied dans l’interface utilisateur.

Dans la rangée supérieure, vous voyez une image représentative d’une impulsion à onde carrée unique d’une durée de oh 0,1 milliseconde, qui est appliquée par les électrodes de l’aiguille de stimulation toutes les 200 millisecondes dans la rangée inférieure, une courbe de réponse neuromusculaire correspondante est illustrée. L’analyse des données comprend la détermination de la latence et de l’amplitude des signaux enregistrés. À cette fin, il est recommandé de faire la moyenne de plusieurs courbes de réponse à partir d’un seul site de stimulation.

La latence du signal est le temps entre le début de la stimulation et le début de la courbe de réponse. Ou plus précisément le point d’inflexion de la, la différence de temps entre les latences suivant une stimulation proximale et distale peut maintenant être utilisée pour calculer la vitesse de conduction nerveuse. Pour cela, vous devez également connaître la distance spatiale entre la stimulation proximale et distale dans notre cas 12 millimètres.

De plus, l’amplitude de la courbe de réponse peut être quantifiée afin de déterminer ce que l’on appelle le potentiel d’action motrice composé. Il représente l’amplitude entre les points de retournement positifs et négatifs maximaux du signal. Pour certaines applications, il peut également être utile de mesurer la durée de l’amplitude du signal allant du premier point d’inflexion au dernier point de la courbe de réponse.

La vitesse de conduction nerveuse dépend fortement de la propagation rapide du signal permise par la myélinisation. Par conséquent, les maladies démyélinisantes présentent généralement une diminution des vitesses de conduction. Le potentiel d’action motrice composé corrélé avec le nombre d’axones fonctionnels et de jonctions neuromusculaires est un indicateur de lésions axonales lorsqu’il est significativement réduit.

Nous venons de vous montrer un moyen simple et fiable de déterminer les principales propriétés de conduction nerveuse chez la souris. Lors de cette procédure, il est d’une grande importance de réduire la résistance de la peau par une épilation complète et un nettoyage de la peau. Ensuite, vous enregistrerez des signaux avec un rapport signal/bruit optimal.

De plus, il est important d’identifier la réponse maximale au stimulus pour une acquisition de données appropriée. Cela peut être réalisé en déplaçant doucement l’aiguille de stimulation de manière à ce que vous puissiez détecter les courbes de réponse biphasiques. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.