Name: Visualisation neuroblaste Cytocinèse cours C. elegans Embryogenèse (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-12T18:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Découvrez l'imagerie de la cytocinèse des neuroblastes chez Caenorhabditis elegans par microscopie confocale. Cette méthode permet d'étudier les gènes contrôlant la division cellulaire en embryogenèse.

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Les auteurs tiennent à reconnaître que ce travail a été soutenu par le Conseil de recherches en génie du Canada de subvention (CRSNG) en sciences naturelles et.

<ol><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li>
<li>Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., Mello, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+Sequencing+Consortium.+Genome+sequence+of+the+nematode+C.+elegans%3A+a+platform+for+investigating+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">C. elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology.</a> Science. 282, 2012-2018 (1998).</li>
<li>Pennisi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worming+secrets+from+the+C.+elegans+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Worming secrets from the C. elegans genome.</a> Science. 282, 1972-1974 (1998).</li>
<li>Tabara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rde-1+gene%2C+RNA+interference%2C+and+transposon+silencing+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The rde-1 gene, RNA interference, and transposon silencing in C. elegans.</a> Cell. 99, 123-132 (1999).</li>
<li>Chisholm, A. D., Hardin, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChisholm%2C+AD+%22Epidermal+morphogenesis.+WormBook.+The+C.+elegans+Research+Community%22">Epidermal morphogenesis. WormBook. The C. elegans Research Community</a>. , 1-22 (2005).</li>
<li>Zhang, H., Gally, C., Labouesse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+morphogenesis%3A+how+multiple+cells+cooperate+to+generate+a+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue morphogenesis: how multiple cells cooperate to generate a tissue.</a> Curr. Opin. Cell Biol. 22, 575-582 (2010).</li>
<li>Kiehart, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing%3A+the+power+of+the+purse+string%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Wound healing: the power of the purse string.</a> Curr. Biol. 9, 602-605 (1999).</li>
<li>Ikegami, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semaphorin+and+Eph+receptor+signaling+guide+a+series+of+cell+movements+for+ventral+enclosure+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Semaphorin and Eph receptor signaling guide a series of cell movements for ventral enclosure in C. elegans.</a> Curr. Biol. 22, 1-11 (2012).</li>
<li>Chin-Sang, I. D., George, S. E., Ding, M., Moseley, S. L., Lynch, A. S., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ephrin+VAB-2%2FEFN-1+functions+in+neuronal+signaling+to+regulate+epidermal+morphogenesis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22C.+elegans.+Cell%22%5BJournal%5D)">The ephrin VAB-2/EFN-1 functions in neuronal signaling to regulate epidermal morphogenesis in C. elegans.</a> C. elegans. Cell. 99, 781-790 (1999).</li>
<li>Wang, X., Roy, P. J., Holland, S. J., Zhang, L. W., Culotti, J. G., Pawson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+Ephrins+Control+Cell+Organization+in+C.+elegans+Using+Kinase-Dependent+and+-Independent+Functions+of+the+VAB-1+Eph%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Multiple Ephrins Control Cell Organization in C. elegans Using Kinase-Dependent and -Independent Functions of the VAB-1 Eph.</a> Mol. Cell. 4, 903-913 (1999).</li>
<li>Chin-Sang, I. D., Moseley, S. L., Ding, M., Harrington, R. J., George, S. E., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+divergent+C.+elegans+ephrin+EFN-4+functions+in+embryonic+morphogenesis+in+a+pathway+independent+of+the+VAB-1+Eph+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The divergent C. elegans ephrin EFN-4 functions in embryonic morphogenesis in a pathway independent of the VAB-1 Eph receptor.</a> Development. 129, 5499-5510 (2002).</li>
<li>Ghenea, S., Boudreau, J. R., Lague, N. P., Chin-Sang, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+VAB-1+Eph+receptor+tyrosine+kinase+and+SAX-3%2FRobo+neuronal+receptors+function+together+during+C.+elegans+embryonic+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The VAB-1 Eph receptor tyrosine kinase and SAX-3/Robo neuronal receptors function together during C. elegans embryonic morphogenesis.</a> Development. 132, 3679-3690 (2005).</li>
<li>Bernadskaya, Y. Y., Wallace, A., Nguyen, J., Mohler, W. A., Soto, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UNC-40%2FDCC%2C+SAX-3%2FRobo%2C+and+VAB-1%2FEph+polarize+F-actin+during+embryonic+morphogenesis+by+regulating+the+WAVE%2FSCAR+actin+nucleation+complex%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">UNC-40/DCC, SAX-3/Robo, and VAB-1/Eph polarize F-actin during embryonic morphogenesis by regulating the WAVE/SCAR actin nucleation complex.</a> PLoS Genet. 8, (2012).</li>
<li>Piekny, A. J., Werner, M., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokinesis%3A+welcome+to+the+Rho+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytokinesis: welcome to the Rho zone.</a> Trends Cell Biol. 15, 651-658 (2005).</li>
<li>Piekny, A. J., Maddox, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+myriad+roles+of+Anillin+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The myriad roles of Anillin during cytokinesis.</a> Sem. Cell Dev. Biol. 21, 881-891 (2010).</li>
<li>Zhao, W. M., Fang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+is+a+substrate+of+anaphase-promoting+complex%2Fcyclosome+%28APC%2FC%29+that+controls+spatial+contractility+of+myosin+during+late+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Anillin is a substrate of anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C) that controls spatial contractility of myosin during late cytokinesis.</a> J. Biol. Chem. 280, 33516-33524 (2005).</li>
<li>Piekny, A. J., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+is+a+scaffold+protein+that+links+RhoA%2C+actin+and+myosin+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Anillin is a scaffold protein that links RhoA, actin and myosin during cytokinesis.</a> Curr. Biol. 18, 30-36 (2008).</li>
<li>Hickson, G. R., O’Farrell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rho-dependent+control+of+anillin+behavior+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Rho-dependent control of anillin behavior during cytokinesis.</a> J. Cell Biol. 180, 285-294 (2008).</li>
<li>Fraser, A. G., Kamath, R. S., Zipperlen, P., Martinez-Campos, M., Sohrmann, M., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+analysis+of+C.+elegans+chromosome+I+by+systematic+RNA+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional genomic analysis of C. elegans chromosome I by systematic RNA interference.</a> Nature. 408, 325-330 (2000).</li>
<li>Kamath, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+functional+analysis+of+the+Caenorhabditis+elegans+genome+using+RNAi%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Systematic functional analysis of the Caenorhabditis elegans genome using RNAi.</a> Nature. 421, 231-237 (2003).</li>
<li>Duerr, J. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuerr%2C+JS+%22Immunohistochemistry.+WormBook%2C+The+C.+elegans+Research+Community%22">Immunohistochemistry. WormBook, The C. elegans Research Community</a>. , 1-61 (2006).</li>
<li>Maddox, A. S., Habermann, B., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+two+C.+elegans+anillins+in+the+gonad+and+early+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for two C. elegans anillins in the gonad and early embryo.</a> Development. 132, 2837-2848 (2005).</li>
<li>Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+embryonic+cell+lineage+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 100, 64-119 (1983).</li>
<li>Chin-Sang, I. D., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Form+of+the+worm%3A+genetics+of+epidermal+morphogenesis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Form of the worm: genetics of epidermal morphogenesis in C. elegans.</a> Trends Genet. 16, 544-551 (2000).</li>
<li>Zhang, H., Labouesse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+through+mechanical+inputs+%E2%80%93+a+coordinated+process%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Signaling through mechanical inputs – a coordinated process.</a> J. Cell Sci. 125, 3039-3049 (2012).</li>
<li>Guenther, C., Garriga, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+distribution+of+the+C.+elegans+HAM-1+protein+in+neuroblasts+enables+daughter+cells+to+adopt+distinct+fates%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Asymmetric distribution of the C. elegans HAM-1 protein in neuroblasts enables daughter cells to adopt distinct fates.</a> Development. 122, 3509-3518 (1996).</li>
<li>Audhya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complex+containing+the+Sm+protein+CAR-1+and+the+RNA+helicase+CGH-1+is+required+for+embryonic+cytokinesis+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A complex containing the Sm protein CAR-1 and the RNA helicase CGH-1 is required for embryonic cytokinesis in Caenorhabditis elegans.</a> J. Cell Biol. 171, 267-279 (2005).</li>
<li>Maddox, A. S., Lewellyn , L., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+and+the+septins+promote+asymmetric+ingression+of+the+cytokinetic+furrow%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Anillin and the septins promote asymmetric ingression of the cytokinetic furrow.</a> Dev. Cell. 12, 827-835 (2007).</li>
<li>Dorn, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actomyosin+tube+formation+in+polar+body+cytokinesis+requires+Anillin+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Actomyosin tube formation in polar body cytokinesis requires Anillin in C. elegans.</a> Curr. Biol. 20, 2046-2051 (2010).</li>
<li>Calixto, A., Ma, C., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+neuronal+RNAi+in+C.+elegans+using+SID-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Enhanced neuronal RNAi in C. elegans using SID-1.</a> Nat. Methods. 7, 554-559 (2010).</li>
</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Ce protocole décrit l&#39;utilisation de divers types de microscopie à des divisions cellulaires de l&#39;image au cours de l&#39;embryogenèse milieu. En particulier, ce protocole met en évidence comment l&#39;image de la division des neuroblastes, des cellules qui peuvent faciliter la morphogenèse épidermique. La communication cellulaire est important pour la formation des tissus au cours du développement de métazoaires et C. elegans est un excellent modèle pour étudier la formation du tissu in vivo. ...

Bien qu&#39;il existe des protocoles décrivant la manière de la division cellulaire de l&#39;image au début C. elegans embryon, ce protocole décrit comment la division cellulaire de l&#39;image dans un tissu à la mi embryogenèse. L&#39;un des principaux défis dans les organismes d&#39;imagerie au cours du développement a été leur sensibilité à la phototoxicité. Cependant, l&#39;augmentation de l&#39;accessibilité à la filature microscopes confocaux disque ou microscopes champ balayé a permis des applications d&#39;imagerie les plus répandues. Les deux systèmes utilisent des lasers à l&#39;état solide et la lumière diffusée, ce qui limite les niveaux de rayons UV que les organismes sont exposés. Toutefois, les peuplements Widefield peuvent encore être utilisés pour l&#39;imagerie in vivo, en particulier s&#39;ils sont équipés de caméras à haute sensibilité (par exemple EMCCD), le contrôle de l&#39;ouverture et contrôle de la lumière (par exemple des LED ou des ampoules de mercure réglables). Ce protocole décrit comment utiliser soit un système confocal base ou un système à grand champ de la division cellulaire de l&#39;image dans le développement C. elegans &lt;/ Em&gt; embryons. A titre d&#39;exemple, nous décrivons comment l&#39;image de la division cellulaire des neuroblastes. Neuroblastes peuvent faciliter la morphogenèse épidermique en fournissant des signaux chimiques ou mécaniques pour les cellules de l&#39;épiderme sus-jacentes, et de fournir un excellent exemple de l&#39;importance de la communication intercellulaire dans la formation des tissus. Caenorhabditis elegans est un organisme modèle idéal pour les études fondées microscopie en raison de sa transparence et de l&#39;organisation simple tissu 1. Par ailleurs, C. elegans se prête à des méthodes génétiques et RNAi, et puisque plusieurs de ses gènes ont des homologues humains, il peut être utilisé pour identifier les mécanismes conservées pour la formation de tissu 2-5. Dans C. elegans, la formation de l&#39;épiderme survient pendant l&#39;embryogenèse milieu, quand l&#39;embryon a&gt; 300 cellules. Morphogenèse épidermique se compose de plusieurs phases principales, au cours de laquelle l&#39;embryon est enfermé dans une couche de cellules épidermiques qui compriment et s&#39;étendent à transformer le embryo d&#39;une forme ovoïde dans la forme allongée d&#39;un ver 6. Décrit une enceinte ventrale de ces événements morphogénétiques, lorsque les cellules épidermiques ventrales migrent vers la ligne médiane ventrale à couvrir la surface ventrale de l&#39;embryon (figure 1). Tout d&#39;abord, deux paires de cellules de premier plan de bord antérieure située migrent vers la ligne médiane ventrale, où elles adhèrent et fusionnent avec leurs voisins controlatérales 6. Elle est suivie par la migration des cellules de poche postérieure situé, qui forment coin comme des formes en créant une poche ventrale 6-7. Le mécanisme qui ferme la poche n&#39;est pas bien comprise. Une possibilité est que la structure de la myosine contractile actine supracellular lie les cellules de poche ensemble dans une chaîne de sac à main comme la mode, semblable à la cicatrisation des plaies 8. Fait intéressant, la migration d&#39;une partie des cellules de la poche est médiée par des sous-ensembles spécifiques de sous-jacents 9 neuroblastes (précurseurs neuronaux qui se trouvent en dessous de la epidermis, figure 1B). Des études antérieures ont montré que les neuroblastes régulent la migration ventrale des cellules épidermiques et de l&#39;enceinte ventral. VAB-1 (récepteur Ephrin) et (ligand Ephrin) VAB-2 est fortement exprimé dans les neuroblastes et faciliter le tri des antérieur et neuroblastes postérieures les unes des autres, et mutations dans VAB-1 ou VAB-2 provoquent enceinte ventrale phénotypes 10-13. Cependant, les expériences de sauvetage de promoteurs ont montré que VAB-1 est également nécessaire dans les cellules épidermiques ventrales jacentes et des récepteurs pour d&#39;autres signaux de guidage sécrétées par les neuroblastes sont exprimés dans les cellules de l&#39;épiderme ventral 9. Bien que des mutations dans l&#39;un de ces récepteurs provoquent phénotypes de l&#39;enceinte ventrales, il n&#39;est pas clair si les défauts se produisent en raison de problèmes de positionnement des neuroblastes ou en raison de l&#39;échec des cellules épidermiques ventrales pour répondre aux signaux de guidage 14. Modification de la répartition des neuroblastes wiThoout affectant leur capacité à sécréter des signaux de guidage pourrait faire la lumière sur le rôle des neuroblastes et leur capacité à apporter une contribution mécanique au cours de la morphogenèse épidermique. Récemment, il a été constaté qu&#39;un gène de la division cellulaire, ani-1 (anillin) est fortement exprimé dans les neuroblastes (figure 2A) et son appauvrissement provoque neuroblastes défauts de division. Fait intéressant, ces embryons présentent ventrales phénotypes de l&#39;enceinte (Fotopoulos, Wernike et Piekny, observations non publiées). Anillin est requis pour la division cellulaire, et en particulier pour la cytokinèse, qui décrit le processus par lequel une cellule mère sépare physiquement en deux cellules filles. Cytocinèse est entraîné par la formation d&#39;un anneau contractile actomyosine, qui doit être étroitement contrôlée dans l&#39;espace et le temps pour s&#39;assurer qu&#39;il est correctement couplée avec la sœur de chromatides ségrégation. Le régulateur principal de la cytokinèse métazoaires est RhoA (RHO-1 chez C. elegans), une petite GTPase qui est unctive dans sa forme liée au GTP. La FEM Ect2/ECT-2 RhoA active, après quoi interagit RhoA-GTP avec des effecteurs en aval, qui forment l&#39;anneau contractile et la médiation de son l&#39;admission 15. Anillin est une protéine de domaine qui se lie à plusieurs RhoA via son extrémité C-terminale et à l&#39;actine et de la myosine par l&#39;intermédiaire de son extrémité N-terminale. Anillin est nécessaire pour stabiliser la position de l&#39;anneau contractile dans des cellules de mammifères ou de Drosophila S2 16. Anillin épuisement provoque des anneaux contractiles à des oscillations latérales, et la cytokinèse échoue finalement former des cellules multinucléées 17-19. Fait intéressant, bien que C. elegans ani-1 coordonne actomyosin contractilité dans l&#39;embryon précoce, il n&#39;est pas essentiel pour la cytokinèse. Cependant, comme décrit ci-dessus, ani-1 est requise pour la cytokinèse neuroblastes durant l&#39;embryogenèse (mi-Fotopoulos, Wernike et Piekny, observations non publiées). l&#39;échec de la cytokinèse modifierait le nombre et la position des neuroblastes et pourrait affecter la loction de signaux de guidage chimiques, ou il peut modifier les propriétés mécaniques du tissu. Les deux modèles mettent en évidence le rôle non autonome de neuroblastes pour enceinte ventrale, et l&#39;importance de la communication tissus tissus au cours du développement embryonnaire. Ce protocole expérimental décrit comment la division cellulaire de l&#39;image pendant C. elegans mi embryogenèse en utilisant la microscopie de fluorescence. La majorité des expériences qui étudient les mécanismes de la division cellulaire ont été réalisées dans des cellules individuelles dans des boîtes de culture (par exemple. Des cellules HeLa ou S2) ou dans les embryons précoces avec un nombre limité de cellules (par exemple C. elegans embryon d&#39;une cellule, Xenopus, ou échinoderme embryons). Cependant, il est également important d&#39;étudier la division cellulaire dans les tissus, car il existe des indices externes qui peuvent influer sur la synchronisation et la mise en place du plan de division. En outre, les cellules peuvent fournir des indices chimiques ou mécaniques d&#39;influencer le développement du tissu voisins, et il est important de comprendre comment la communication intercellulaire aide tissus pour former au cours du développement.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#AGR001.1</td><td>Pour la fabrication des plaques C. elegans NGM et ARNi</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#9002-18-0</td><td>Pour la fabrication de bactéries LB plaques de gélose</td></tr><tr><td>Agarose BioShop</td><td>Canada Inc.</td><td>#AGA001.500</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-souris Alexa Fluor 488</td><td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td><td>#A11029</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-souris anti-GFP</td><td>Roche Applied Science</td><td>#11814460001</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-lapin Alexa Fluor 568</td><td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td><td>#A11011</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#AMP201.5</td><td>Conserver la poudre à 4 &deg ; C et ampicilline dissoute à -20 &deg ; C</td></tr><tr><td>Bactopetone&nbsp ; (peptone-A)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td></td><td></td>#G213</tr><tr><td>CaCl2 (chlorure de calcium)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#C302.1</td><td></td></tr><tr><td>Cholestérol</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#CHL380.25</td><td>Dissoudre dans l’éthanol</td></tr><tr><td>DAPI&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#D9542</td><td>Utiliser pour colorer les acides nucléiques (ADN)</td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#GLY001.1</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (isopropylthio-&beta ;-galactoside)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#367-93-1</td><td>Conserver la poudre et l’IPTG dissous à -20 &deg ; C</td></tr><tr><td>KH2PO4 (phosphate de potassium, monobasique)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#PPM666.1</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4 (phosphate de potassium dibasique)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#PPD303.1</td><td></td></tr><tr><td>L4440&nbsp ; (vecteur d’alimentation)</td><td>Addgene</td><td>#1654</td><td>Conserver comme stock de glycérol à -80 &deg ; C</td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp ; &nbsp ; (sulfate de magnésium)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#MAG511.500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (chlorure de sodium)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4 (phosphate de sodium, dibasique)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>Sérum d’âne normal (NDS)</td><td>Wisent Bioproducts</td><td>#035-110</td><td></td></tr><tr><td>n-Propyl-3,4,5-trihydroxybenzoate (gallate de propyle)</td><td>Alfa Aesar</td><td>#A10877</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-lysine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#P8920</td><td>Pour des résultats optimaux, appliquez trois fois sur les lames de microscope.</td></tr><tr><td>Streptomycine</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#STP101.50</td><td>Conserver la poudre à 4 &deg ; C et streptomycine dissoute à -20 &deg ; C</td></tr><tr><td>Tetracyclin</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#TET701.10</td><td>Conserver la poudre à 4 &deg ; C et tétracycline dissoute à -20 &deg ; C</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>CAS#9005-64-5</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#TRP402.500</td><td></td></tr><tr><td>Extrait de levure</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>Référence 8013-01-2</td><td></td></tr></tbody></table>

visualisation neuroblaste cytocinèse cours<em&gt; c. elegans</em&gt; embryogenèse

Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis

Ce protocole décrit l&#39;utilisation de la microscopie de fluorescence à l&#39;image à l&#39;intérieur de la division des cellules en développement Caenorhabditis elegans embryons. En particulier, ce protocole met l&#39;accent sur la façon de l&#39;image divisant neuroblastes, qui se trouvent sous les cellules de l&#39;épiderme et peuvent être importants pour la morphogenèse épidermique. formation de tissus est cruciale pour le développement de métazoaires et s&#39;appuie sur des indices externes de tissus voisins. C. elegans est un excellent organisme modèle pour étudier la morphogenèse des tissus in vivo en raison de sa transparence et de l&#39;organisation simple, faire ses tissus faciles à étudier par microscopie. Enceinte ventrale est le processus où la surface ventrale de l&#39;embryon est recouvert d&#39;une seule couche de cellules épithéliales. Cet événement est pensé pour être facilitée par les neuroblastes sous-jacents, qui fournissent orientation chimique indices de médiation migration des cellules épithéliales recouvrant. Toutefois, les neuroblastes sont très proliférante et peuvent également agircomme substrat mécanique pour les cellules épidermiques ventrales. Les études utilisant ce protocole expérimental pourraient découvrir l&#39;importance de la communication intercellulaire pendant la formation du tissu, et pourraient être utilisées pour révéler les rôles des gènes impliqués dans la division cellulaire dans les tissus en développement.

Ce protocole expérimental décrit la façon de la division cellulaire de l&#39;image en C. elegans embryons en moyenne embryogenèse. En particulier, il décrit comment les neuroblastes de l&#39;image, ce qui peut faciliter la morphogenèse épidermique. Épidermique morphogenèse est due à une combinaison de changements de forme des cellules épidermiques, la migration et l&#39;adhérence, mais aussi s&#39;appuie sur des indices chimiques ou mécaniques des neuroblastes sous-jacents (figure 1B). Les neur...

Ce protocole décrit comment l&#39;image des cellules en division dans un tissu en Caenorhabditis elegans embryons. Bien que de nombreux protocoles décrivent comment la division cellulaire de l&#39;image dans l&#39;embryon précoce, ce protocole décrit comment l&#39;image de la division cellulaire dans un tissu en développement au cours de l&#39;embryogenèse tardive milieu.

Visualisation neuroblaste Cytocinèse cours<em&gt; C. elegans</em&gt; Embryogenèse

This protocol describes the use of fluorescence microscopy to image dividing cells within developing Caenorhabditis elegans embryos. In particular, this ...

L'objectif général de l'expérience suivante est d'observer des cellules en division au sein d'un tissu en développement au cours de l'embryogenèse de C. elegans. Afin d'étudier les gènes contrôlant la division cellulaire, cela est réalisé en créant ou en obtenant une souche C. elegans exprimant de façon stable des marqueurs transgéniques qui étiquettent les cellules d'intérêt. Dans un deuxième temps, on inhibe de manière ciblée un gène d'intérêt en administrant un ARN interférent aux larves de stade L4 pendant 24 à 48 heures.Les embryons RNAi sont collectés à partir de hermaphrodites graphiques et transférés sur un coussin d'aros pour l'imagerie en direct. Ensuite, à l'aide d'une microscopie à champ large ou confocale, les embryons sont observés afin de visualiser les phénotypes de division cellulaire. Les résultats montreront comment les neuroblastes se divisent durant l'embryogenèse de sea elgin, ainsi que le rôle des gènes nécessaires à leur division.Cette méthode peut aider à répondre à des questions fondamentales dans le domaine de la biologie du développement et de la biologie cellulaire. Par exemple, elle pourrait permettre d'identifier les gènes et les mécanismes impliqués

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Nous décrivons la procédure pour préparer...

La visualisation du système nerveux embryonnaire, en totalité montage Drosophile Embryons

Cet article décrit une technique pour la visualisation des événements précoces de l'embryogenèse chez le...

Time-lapse de microscopie du début de l&#39;embryogenèse dans les Caenorhabditis elegans

Source : Williams, A. L., et al. Imagerie multi-photonique Time Lapse pour visualiser le développement en temps réel : visualisation des cellules de la crête neurale en migration dans les embryons de poisson-zèbre. J. Vis. Exp. (2017)Cette vidéo présente un protocole d’imagerie time-lapse multiphotonique permettant de visualiser la migration des cellules de la crête neurale dans un embryon de poisson-zèbre en temps réel avec une haute résolution.

Visualisation de la migration des cellules de la crête neurale dans un embryon de poisson-zèbre à l’aide de l’imagerie multiphotonique en accéléré

Progénitrices neurales mitose est un paramètre critique de la neurogenèse. Une grande partie de notre compréhension des neurones progéniteurs mitose est basé sur l'analyse des tissus fixés. Imagerie en temps réel dans des tranches de cerveau embryonnaire est une technique souple pour évaluer la mitose avec une résolution temporelle et spatiale dans un environnement contrôlé.

Imagerie en direct de la mitose dans les développement Cortex souris embryonnaires

Ici, on montre comment suivre et quantifier les processus de développement chez C. elegans. Les méthodes présentées sont basées sur des outils open-source qui peuvent être facilement mis en œuvre. Il est démontré comment reconstruire des modèles de forme cellulaire 3D, comment suivre manuellement les structures subcellulaires et comment analyser le flux contractile cortical.

Suivi et quantification des processus de développement des<em&gt; C. elegans</em&gt; Utilisation des outils open-source

Ce travail décrit une méthode d'immunohistochimie standard pour visualiser les projections de neurones moteurs d'embryons de Drosophila melanogaster en phase finale 16. La préparation en filets d'embryons fixés colorés à l'aide d'un anticorps FasII fournit un outil puissant pour caractériser les gènes requis pour le suivi des axones motrices et la reconnaissance des cibles lors du développement neuronal.

Visualisation du modèle de projection axonale des neurones du moteur embryonnaire dans<em&gt; Drosophila</em

Ici, nous présentons une approche combinatoire utilisant la microscopie à haute résolution, les outils de calcul, et l’étiquetage à une seule cellule dans les embryons vivants de C. elegans pour comprendre la dynamique de cellule unique pendant le neurodéveloppement.

Microscopie isotrope en feuilles légères et analyse automatisée de la lignée cellulaire au catalogue Caenorhabditis elegans embryogenèse avec résolution subcellulaire

Ce travail décrit un protocole semi-haut débit qui permet l'imagerie simultanée en time-lapse 3D de l'embryogenèse dans 80-100 embryons d'élegans de C. dans une seule course de nuit. En outre, des outils de traitement d'image et de visualisation sont inclus pour rationaliser l'analyse des données. La combinaison de ces méthodes avec des souches de reporter personnalisées permet une surveillance détaillée de l'embryogenèse.

Une méthode d'imagerie semi-haut débit et une boîte à outils de visualisation de données pour analyser C. elegans Embryonic Development

Nous présentons ici un protocole pour la préparation et le montage des embryons de Caenorhabditis elegans , l’enregistrement du développement sous un microscope 4D et le traçage de la lignée cellulaire.

Microscopie 4D: Démêler le développement embryonnaire de Caenorhabditis elegans à l’aide de la microscopie Nomarski

Ici, nous présentons des protocoles et des outils pour visualiser le calcium pendant la fécondation et l’embryogenèse précoce à l’aide d’un rapporteur de calcium génétiquement codé exprimé dans la lignée germinale du nématode modèle C. elegans.

Visualisation in vivo des transitoires calciques pendant la fécondation et le développement précoce chez C. elegans

Découvrez l'imagerie de la cytocinèse des neuroblastes chez Caenorhabditis elegans par microscopie confocale. Cette méthode permet d'étudier les gènes contrôlant la division cellulaire en embryogenèse.

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