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DOI: 10.3791/51189-v
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Ce protocole décrit les procédures expérimentales pour évaluer la différenciation des cellules dendritiques plasmacytoïdes dans les plaques de Peyer de progéniteurs de cellules dendritiques ordinaires, en utilisant des techniques impliquant l'isolement FACS à médiation cellulaire, le transfert de gène hydrodynamique, et l'analyse des flux de sous-ensembles immuns dans les plaques de Peyer.
L’objectif général de la procédure suivante est d’examiner la capacité des progéniteurs hématopoïétiques purifiés à donner naissance à des cellules dendritiques plasmacytoïdes dans les plaques de pire intestinale lors du transfert adoptif. Ceci est accompli en effectuant d’abord un transfert de gène hydrodynamique du plasmide, codant pour le facteur de croissance cellulaire dendritique. FLIT trois ligand dans le patch de PI plasmacytoïde cellule dendritique souris altérées.
Dans la deuxième étape, les cellules progénitrices dendritiques communes sont isolées de la moelle osseuse de type sauvage par séparation magnétique des billes et tri par flux. Dans la dernière étape, les cellules progénitrices sont transférées adoptivement par injection intraveineuse dans des souris atteintes de cellules dendritiques plasmacytoïdes de bûchers qui ont été traitées par transfert de gènes hydrodynamiques. En fin de compte, la population de cellules dendritiques plasmacytoïdes du patch de PI dérivée de la cellule progénitrice hématopoïétique du donneur peut être évaluée par cytométrie en flux.
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