Name: Barnes Maze Stratégies de test avec les petites et grandes des modèles de rongeurs (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-26T22:45:00.000+00:00
Duration: 12 min 59 s
Description: Découvrez l'évaluation de l'apprentissage spatial chez les rongeurs avec le labyrinthe de Barnes terrestre. Cette méthode moins stressante permet d'étudier la mémoire et les capacités cognitives en laboratoire.

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Les auteurs remercient M. Eldin Jašarević, M. Scott Williams, M. Roger W. Meissen, Sarah A. Johnson, le Dr R. Michael Roberts, le Dr Mark R. Ellersieck, et le Dr David C. Geary à l&#39;Université de Missouri, et M. C. loi Delbert et le personnel de soins aux animaux au Centre national de la recherche toxicologique / FDA. Ce travail a été soutenu par une subvention défi de NIH Grant à la RSE (RC1 ES018195), un avantage Grant Mizzou à (RSE et DCG), l&#39;Université de Missouri Collège de médecine vétérinaire de l&#39;attribution du corps professoral (RSE), et le protocole e7318 au Centre national pour la recherche toxicologique / FDA.

Une. Barnes procédure Maze pour les petits rongeurs <ol><li> Allumez les lumières aériennes au-dessus du labyrinthe et le lieu «Ne pas retourner&quot; signes à l&#39;extérieur de la porte du laboratoire. </li><li> Apportez souris dans leurs cages normales de la chambre d&#39;essai d&#39;environ 30 minutes avant le début du premier procès pour permettre l&#39;accoutumance. Si la pièce est calme, il peut ne pas être nécessaire d&#39;inclure un bruit blanc, sinon cette mesure de précaution peut être considéré. </li><li> Mettre en place le programme de suivi. </li><li> Retirez délicatement la première souris de sa cage et placer dans la boîte de plastique recouvert de hauteur. Placez son évasion (de maison propre) polypropylène cage (29 cm x 19 cm x 13 cm) sous le trou d&#39;évacuation désigné. <ol><li> Vérifier que le papier qui bloque le tube est retiré de ce trou d&#39;évacuation et de tous les autres trous sont bouchés. </li><li> Dessinez rideau dans le labyrinthe. </li></ol></li><li> Placez la boîte en plastique avec la souris à l&#39;intérieur dans le centre du labyrinthe et environ 8 secondes plus tard, doucement take l&#39;animal hors de la cage et le placer sur le labyrinthe. <ol><li> Après avoir placé l&#39;animal dans le centre du labyrinthe, se déplacer doucement vers la zone de l&#39;ordinateur (~ 150 cm du labyrinthe). </li><li> Lancer le logiciel de suivi approprié qui devrait déjà être ouverte afin d&#39;assurer un minimum de temps (quelques secondes) s&#39;est écoulée entre le moment où l&#39;animal a été placé sur le labyrinthe jusqu&#39;à ce que le programme commence documenter ses performances. </li></ol></li><li> Observer la performance de l&#39;animal de moniteur d&#39;ordinateur et enregistrer le numéro du trou, le nombre de procès, la stratégie de recherche, et le nombre d&#39;erreurs commises. Une erreur est définie comme renifler d&#39;un trou incorrects. Évaluation de la stratégie de recherche peut être faite en direct ou tard sur la base du modèle de suivi. <ol><li> stratégie de recherche est classé comme directe (aller directement dans la cage d&#39;échappement avec 3 erreurs ou moins), </li><li> Série (voyage le long du périmètre de labyrinthe jusqu&#39;à la cage d&#39;échappement est situé), ou </li><li> Aléatoire &lt;/ Strong&gt; (traversant le centre du labyrinthe à plusieurs reprises pour vérifier les différents trous). </li></ol></li><li> Arrêtez le programme de suivi lorsque l&#39;animal a quatre pattes à l&#39;intérieur de la cage d&#39;échappement. </li><li> Si la souris ne entrer dans la cage d&#39;échappement à moins de 5 min, guider doucement vers l&#39;emplacement correct et dans la cage d&#39;échappement. Que la souris restent dans la cage d&#39;échappement pendant 2 min. </li><li> Retirez la souris de la cage d&#39;évacuation et placer dans un cage. </li><li> Vaporiser le dessus du labyrinthe et échapper cage avec 70% d&#39;éthanol et essuyez. Réglez la première cage / souris de côté pendant 30 minutes avant de lancer son second procès. </li><li> Avant de commencer la prochaine souris, boucher le trou d&#39;évacuation auparavant correcte et retirer le bouchon de papier bloquant le trou du trou d&#39;évacuation désigné pour ce sujet prochaine. </li><li> Chaque souris est testée pour deux essais / jour avec un intervalle entre les essais d&#39;environ 30 min. </li><li> Répétez ces étapes jusqu&#39;à ce que toutes les souris ont été testées pendant sept jours consécutifs, ce qui peut augmenter la probabilité of observer une amélioration des performances et / ou les différences entre les groupes de traitement, par rapport à seulement quatre jours de données. </li></ol> 2. Test Maze Barnes pour rats Quand un programme de surveillance est indisponible <ol><li> S&#39;assurer que le labyrinthe est dans sa position correcte (directement centrée sous des lumières), double fond qui bloquent les trous nonescape et empêchent l&#39;animal de tomber sont en sécurité dans le labyrinthe, et la cage d&#39;échappement est à l&#39;endroit désigné pour le premier sujet. Plafonniers au-dessus du labyrinthe doivent être allumés. </li><li> Assurez-ordinateur et l&#39;appareil photo sont prêts et un chronomètre est disponible. </li><li> Mettez bruit blanc pour atténuer des bruits provenant d&#39;autres lieux à proximité. Le président de la testeur est d&#39;environ 122 cm du bord le plus proche du haut de labyrinthe et reste dans le même endroit tout au long de l&#39;essai. </li><li> Une minuterie (fixé à 2 min) devrait être disponible (uniquement nécessaire le jour 1 de l&#39;essai). Minuterie ne doit pas &quot;bip&quot; ou autrement faire du bruit. Porte (s) de tester room devrait avoir &quot;Ne pas entrer&quot; signe sur l&#39;extérieur. </li><li> Une feuille de commande de test pour les sujets listera l&#39;ordre des essais de l&#39;objet, le numéro de session, l&#39;emplacement du trou numéro de la cage d&#39;échappement pour chaque sujet, et les zones d&#39;enregistrer la latence et le temps de la journée pour chaque sujet ainsi qu&#39;une zone pour toute notes nécessaires (figure 6). </li><li> De 30 à 60 min avant la première rat est à tester, mettre les animaux dans leurs cages d&#39;accueil à la chambre de test afin de permettre l&#39;accoutumance. </li><li> Le tube central que le rat est placé dans au début d&#39;un essai est fixée au centre du labyrinthe. Définir la feuille de carton montrant la première identification des animaux sur le dessus. Cela permet l&#39;enregistrement vidéo pour capturer l&#39;identification des animaux pour faciliter l&#39;identification de chaque objet en observant les quelques premières secondes de la vidéo. </li></ol> Initiale Journée Test 1: <ol><li> Commencez ordinateur enregistrement vidéo (le cas échéant) et comprennent environ 5 secondes de l&#39;essai avec la feuille d&#39;identification des animaux pour subject identification. Nom de fichier (ou date de création) identifieront jour / moment du test. </li><li> Retirez le premier animal de sa cage (vérifier l&#39;identité si plusieurs animaux sont en cage) et placez doucement la tête la première dans la cage d&#39;échappement. Couvrir la cage d&#39;échappement avec un faux fond supplémentaire et lancer le chronomètre de 2 min. Ceci permet à l&#39;animal de s&#39;habituer à la cage d&#39;échappement. </li><li> Après la fin de 2 min minuterie, retirer délicatement animal évasion cage (enlever le couvercle faux fond ainsi et situé loin de labyrinthe), fiche ascenseur d&#39;identité, et placer immédiatement le rat à l&#39;intérieur du tube central. Couvrez le dessus du tube central avec une feuille de carton d&#39;identification. </li><li> Doucement et lentement soulever tube central avec couvercle en carton et mettre de côté. Démarrer le chronomètre lorsque le tube central est soulevé au-dessus de l&#39;animal. Déplacez à s&#39;asseoir dans le fauteuil du testeur. </li><li> Asseyez-vous tranquillement dans le fauteuil, regardant à la fois l&#39;animal et le chronomètre. Chaque animal a un maximum de 5 min à trouver la cage d&#39;échappement. </li><li> Si le rat trouve la cage d&#39;échappement en moins d&#39;5 min, arrêter le chronomètre et l&#39;enregistrement de latence et le temps de la journée sur la feuille de commande de test. Retirer l&#39;animal du évasion cage et la remise en cage. </li><li> Si le rat ne trouve pas la cage d&#39;échappement à moins de 5 min, guider doucement l&#39;animal à la cage d&#39;échappement et permet de passer 15 secondes avant de retirer et de retourner à l&#39;animal de la cage de la maison. <ol><li> Cette durée de 15 secondes peut être programmé à l&#39;aide d&#39;une horloge avec une deuxième main sur le mur de la salle de test. </li><li> temps d&#39;enregistrement de la journée sur la feuille de commande d&#39;essai et dossier que le rat n&#39;a pas trouvé la cage d&#39;échappement. </li></ol></li><li> Si le rat tombe / sauts hors du labyrinthe, le testeur devrait coup d&#39;œil sur le chronomètre pour le temps. Le testeur doit alors tenter de récupérer rapidement l&#39;animal. <ol><li> Si cela peut être fait dans les 10 secondes, remplacer l&#39;animal sur le centre du labyrinthe et enregistrer le temps de l&#39;automne / saut sur la feuille de test (si le testeur peut distinguer entre une chute ou saut, cela doit être noté). Poursuivre le procès. </li><li> Si la récupération de l&#39;animal prend plus de 10 secondes, arrêter le chronomètre, et mettre l&#39;animal dans la cage de la maison. temps d&#39;enregistrement de l&#39;automne / saut (si le testeur peut distinguer entre une chute ou saut, notez). </li><li> Les données des essais dans lequel un animal est tombé / sauté et ne peut être récupéré dans les 10 secondes sont omises des analyses statistiques. </li></ol></li><li> Arrêtez l&#39;enregistrement vidéo sur l&#39;ordinateur. Enregistrer des commentaires sur le procès. </li><li> Retirez tout urine ou les excréments du haut de labyrinthe, pulvériser avec 70% d&#39;éthanol, et essuyer sec. Retirer évasion cage et nettoyer avec 70% d&#39;éthanol. </li><li> Mettez une cage d&#39;échappement propre à la mise en place désigné pour le sujet suivant. Ayant plus d&#39;une cage d&#39;échappement permet à chacun de sécher à l&#39;air pour réduire l&#39;odeur de l&#39;éthanol. Mettez un faux fond propre au trou précédent (de sorte que tous, sauf un trou a un faux fond et que l&#39;on trou contient la cage d&#39;échappement). </li><li> Réglez le tube central avec fiche d&#39;identité pour le prochain sujet au centre du labyrinthe. Commencez l&#39;enregistrement vidéo sur l&#39;ordinateur. </li&gt; <li> Retirez le prochain animal à tester, mettre en fuite cage (si jour / Session 1), et de commencer à 2 min minuterie (seulement si le jour / Session 1). Continuez à partir de l&#39;étape 2 ci-dessus. Chaque sujet reçoit 1 essai / jour. </li><li> Après tous les animaux sont testés, nettoyer le labyrinthe et échapper à la cage, éteindre les lumières généraux, et le bruit blanc. Supprimer &quot;Ne pas entrer&quot; signe (s) de porte (s). </li></ol> Jours 2 à 7 essais <ol><li> Mettre en place la salle d&#39;essai et labyrinthe pour les essais, comme détaillé ci-dessus. </li><li> Réglez tube central dans le centre de labyrinthe avec fiche d&#39;identité sur le dessus. Commencer l&#39;enregistrement vidéo. Retirez le premier animal de cage et la placer dans le tube central. </li><li> Cette étape consiste à différencier Jours 2-7 du Jour 1, plus précisément, aux jours 2-7, le sujet est placé directement dans le tube central après l&#39;enlèvement de la cage de la maison et de la période d&#39;habituation 2 min dans la cage d&#39;évacuation ne se fait pas. </li><li> Répétez la procédure à partir de l&#39;étape 4 ci-dessus. </li></ol> 3. Analyses statistiquespour Barnes Maze points de terminaison <ol><li> analyses de données peuvent nécessiter plusieurs tests statistiques. Variables continues, comme la latence et le taux d&#39;erreur, peuvent être analysés comme un terrain de scission dans l&#39;espace et le temps 52. </li><li> Si certains animaux n&#39;ont pas localiser la fuite ou cage dans le délai maximum imparti, les données de latence peuvent être affectés comme le maximum et analysées en utilisant le test de ProcLife SAS la version 9.2 d&#39;analyse de logiciel. <ol><li> Cette méthode statistique est utile pour les données de comportement, dans lequel il existe une limite de coupure supérieure. </li></ol></li><li> données de stratégie de recherche peuvent être analysées en utilisant un modèle de mesures répétées avec PROC GLIMMIX et SAS version 9.2 du logiciel d&#39;analyse. <ol><li> Cette première analyse emploie un journal il lien cumulatif et une distribution multinomiale tels que les trois stratégies de recherche (au hasard, de série, et direct) sont inclus dans cette analyse. </li><li> Pour déterminer si les animaux apprennent à utiliser le plus efficace stratégie de recherche (direct), une secondeanalyse d sur la stratégie de recherche peut être effectuée sur lequel les deux stratégies les moins efficaces (aléatoires et série) sont combinées et comparées à la stratégie de recherche directe plus efficace. </li><li> Cette dernière méthode se traduit par une distribution binomiale et emploie PROC GLIMMIX aussi. </li></ol></li></ol>

Ce document a été examiné conformément à la politique des États-Unis Food and Drug Administration (FDA) a approuvé la publication. Cette approbation ne signifie pas que le contenu reflète nécessairement la position ou les opinions de la FDA ni mention des noms de commerce ou de produits commerciaux ne constitue approbation ou une recommandation à l&#39;emploi. Les résultats et les conclusions de ce rapport sont celles des auteurs et ne représentent pas nécessairement les vues de la FDA. Les auteurs n&#39;ont aucun intérêt concurrentes et rien à révéler.

Les étapes critiques dans les tests de labyrinthe Barnes comprennent: 1) fournir le stimulus légèrement aversion propre à motiver l&#39;animal pour localiser la cage d&#39;évacuation, 2) assurer des conditions uniformes sont maintenus à travers les essais sur les animaux (par exemple, la durée du test, essai personnel, lutte contre le bruit externe, et d&#39;autres stimuli qui pourraient affecter la performance), 3) si les essais sont la vidéo enregistrée, optimiser et assurer l&#39;enregistrement de vidéo corr...

L&#39;apprentissage spatial et la mémoire chez les rongeurs de laboratoire a d&#39;abord été évaluées chez des rats privés de nourriture qui naviguaient un dédale de ruelles pour trouver un renforçateur alimentaire 1. Plusieurs décennies plus tard, un système de mémoire de référence spatiale a été proposé 2. Contrairement à la mémoire de travail qui se réfère à la mémoire d&#39;une session ou d&#39;un procès test, la mémoire de référence correspond à la mémoire à travers des sessions ou des essais de test et est plus étroitement lié à la mémoire à long terme. Plusieurs types de labyrinthes ont été développés comme des évaluations non invasives de cet apprentissage de l&#39;hippocampe-dépendante spatial et la mémoire dans les petites et grandes rongeurs (par exemple labyrinthe d&#39;eau, labyrinthe en T multiple, bras radial et labyrinthe labyrinthes de terre sèche) 3-6. Ici, nous nous concentrons sur la plate-forme circulaire ou Barnes labyrinthe, décrite pour la première en 1979 par le Dr Carol Barnes 7. Ce labyrinthe a été utilisée pour tester l&#39;apprentissage de la navigation spatiale et de la mémoire dans un large éventail de modèles de rongeurs, notamment les rats (RaTTU norvegicus), souris (Mus musculus), souris sylvestres (Peromyscus maniculatus bairdii), les souris Californie (Peromyscus californicus), et les rongeurs hystricomorphes (par exemple, les octodons [octodon Octodon]) 8-13. D&#39;autres espèces évaluées en utilisant le labyrinthe Barnes comprennent blattes américaines (Periplaneta americana), 14 serpents de maïs (Elaphe guttata guttata) 15, &#160; reptiles squamates (par exemple, les lézards de côté-blotched [Uta stansburiana]) 16, et les primates non humains (par exemple, les lémuriens de souris [Microcebus murinus]) 17. Dans nos laboratoires, les performances du labyrinthe Barnes a été utilisé comme un indice de la neurotoxicité développementale après bisphénol A (BPA) ou de l&#39;éthinylestradiol (EE2) exposition 9-1113. Il est aussi couramment utilisé pour le comportement phénotypage de diverses souches de souris 18-21, l&#39;évaluation des effets du vieillissement 7,22-28, et la définition de la maladie d&#39;Alzheimer liéeicits dans des modèles animaux 3,29-33, ainsi que les effets de l&#39;exercice et les modifications alimentaires, de l&#39;environnement, et métabolique 34-42. Un des principaux avantages de l&#39;utilisation de Barnes labyrinthe est qu&#39;il induit moins de stress dans les sujets relatifs à labyrinthes d&#39;eau, tels que l&#39;eau de Morris 43, même si les deux peuvent induire une augmentation de courte durée à des concentrations de corticostérone plasmatiques chez des souris 44. Comme un labyrinthe de la terre ferme, le labyrinthe Barnes peut être plus éthologique pertinentes pour les rongeurs terrestres 45. Bien que les performances de labyrinthe d&#39;eau a été montré pour être plus sensibles aux altérations génétiques chez la souris 3,46,47, la performance en labyrinthe Barnes est plus sensible aux modifications de certaines autres 48,49. Dans les modèles de rongeurs où l&#39;utilisation du labyrinthe d&#39;eau n&#39;est pas possible, le labyrinthe Barnes peut fournir une évaluation de la fine de la rétention de la mémoire spatiale 31. Les stimuli aversifs légèrement généralement utilisés dans le labyrinthe Barnes (feux lumineux), c&#39;est à direcependant, ne peut pas fournir une motivation suffisante pour le rongeur pour localiser la cage d&#39;échappement 45. En outre, les rongeurs peuvent apprendre qu&#39;aucune sanction se produit si elles n&#39;entrent pas dans la cage d&#39;échappement. Ainsi, au lieu de chercher activement pour la cage d&#39;évacuation, certains rongeurs explorer activement le labyrinthe pour de longues durées de chaque essai. Comme examiné par Kennard et Woodruff-Pak 24, cette exploration accrue permettra de prolonger le temps de latence pour localiser la cage d&#39;échappement, la longueur du trajet, et d&#39;augmenter le nombre d&#39;erreurs. Ainsi, la mesure de plusieurs paramètres, y compris les temps de latence, taux d&#39;erreur, le temps passé dans les quadrants correctes et incorrectes, la vitesse, le temps en mouvement, le temps de repos, et de la stratégie de recherche, peut collectivement fournir un meilleur indicateur de l&#39;espace d&#39;apprentissage de la navigation et de la mémoire capacité de chaque sujet 8 -10. En outre, la performance peut être mesurée comme le temps de latence pour trouver la première cage d&#39;échappement (mesure primaire) ou la latence pour entrer dans la cage d&#39;échappement (mesure totale). Certains ont argued que les mesures primaires de performance sont un reflet plus précis de l&#39;apprentissage spatial de mesures au total 50. La plupart des études, y compris les exemples décrits ici, utiliser la latence pour entrer dans la cage d&#39;échappement pour déterminer le taux d&#39;erreur et de la stratégie de recherche. En outre, certains systèmes de logiciels de suivi ont un système de détection de corps en trois points qui permet de mesurer les fréquences de renifler les trous vs incorrectes correctes. Enfin, le labyrinthe doit être nettoyé avec de l&#39;éthanol entre les essais pour éliminer les signaux olfactifs qui pourraient fournir des indices ou prouver gênant pour animaux ultérieures. Barnes conceptions de labyrinthe varier, mais en général ont chacun 12 ou 20 trous d&#39;échappement potentiels, dont un seul conduit à la maison ou une cage d&#39;échappement. La cage d&#39;échappement peut être situé directement sous le trou d&#39;évacuation sur le dessus du labyrinthe (pour des labyrinthes sans murs) ou intégré dans le mur d&#39;enceinte du labyrinthe. Les repères peuvent varier en taille d&#39;environ 16,5 cm de hauteur ou de la largeur (dans la maze) à une ligne horizontale de 21,6 cm de largeur placées du sol au plafond de la paroi de la chambre à l&#39;extérieur du labyrinthe. Figures 1-5 montrent des exemples de Barnes conceptions de labyrinthe pour les espèces Peromyscus (figure 1) et les rats (figures 2-5). Bouchons ou faux fonds doivent couvrir les trous de nonescape pour empêcher l&#39;animal de tomber hors du labyrinthe. Taille de la chambre d&#39;essai peut varier (~ 20 m 2), mais il doit être suffisamment grand pour fournir suffisamment d&#39;espace pour le labyrinthe, habituer les animaux à la salle, pouvant accueillir un ordinateur avec vidéo set-up (le cas échéant), et un lieu pour l&#39;expérimentateur de s&#39;asseoir à une distance (au moins 122 cm ~) à partir de l&#39;appareil de labyrinthe de telle sorte que leur présence n&#39;interfère pas avec la performance de l&#39;animal. Affectation de l&#39;emplacement de la cage d&#39;échappement doit être équilibrée entre les groupes de traitement et le sexe. Alors que les procédures spécifiques décrites ici ne comprennent pas tourner le labyrinthe entre les essais pour décourager l&#39;utilisation des intra-labyrinthe odeur indices, certaines étudesintégrer cette procédure 50. Dans nos procédures, le labyrinthe est nettoyé avec de l&#39;éthanol entre les essais pour éliminer les odeurs repères. En localisant la cage d&#39;évacuation, trois types de stratégies de recherche ont été définis (à l&#39;origine appelés «modèles» de Barnes 7): 1) aléatoires, définies sur le plan opérationnel que des recherches localisées de trous séparés par des chemins qui traversent le centre du labyrinthe, 2) de série, définis comme une recherche systématique de trous consécutifs dans un sens horaire ou antihoraire, et 3) direct ou spatiale, définie comme la navigation directement au quadrant correct sans traverser le centre du labyrinthe plus d&#39;une fois et avec trois ou moins d&#39;erreurs. En général, à des tests répétés, rongeurs progressent généralement à travers les stratégies de recherche dans l&#39;ordre indiqué (au hasard, de série, et direct) 51. Un essai de sonde sans la cage d&#39;échappement peut également être utilisée comme mesure supplémentaire de la mémoire 50. Le protocole et représentantrésultats ici ont été élaborés pour deux types de rongeurs (petits rongeurs appelés Peromyscus espèces contraire) et les rats. Bien que ces procédures générales peuvent aussi tenir des souris consanguines et / ou consanguine (Mus musculus), d&#39;autres études doivent être consultés sur les différences de méthodologie potentiels pour ces dernières espèces 18-21.

<table><tbody><tr><td><fort>REMARQUE : Les articles qui ne sont destinés qu’aux petits rongeurs sont en gras. Les articles qui ne sont destinés qu’aux gros rongeurs sont en italique. Les éléments qui ne sont ni en gras ni en italique sont pour les deux .</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plate-forme Barnes Maze avec 12 ou 20 trous d’évacuation tous les 30&deg ;. Pour les rats, chaque trou a un diamètre de 10,5 cm et est à 4 cm du bord supérieur du labyrinthe. Pour une utilisation avec des programmes de suivi automatisés, un dessus noir pour les rongeurs blancs ou un dessus blanc pour les rongeurs pigmentés est nécessaire. Pour les souris et les rats, ce sommet circulaire mesure respectivement 95 et 122 cm de diamètre.</td><td>US Plastics Corp, Lima, OH</td><td>42625</td><td>Il s’agit du sommet du labyrinthe de Barnes et de la surface sur laquelle le rongeur est placé. Il peut être construit à partir d’une variété de matériaux (par exemple, le plexiglas), mais pour le travail sur les perturbateurs endocriniens, le matériau sans polypropylène sans BPA est optimal. L’un des trous mène à une cage d’évacuation ; Tous les autres trous sont à extrémité aveugle ou à double fond. Pour le labyrinthe de rats, de petits toboggans sur la face inférieure de la plate-forme du labyrinthe permettent de glisser dans la cage d’évacuation et les faux fonds.</td></tr><tr><td>2 in Bouchon de tuyau en polypropylène (24) 2 in 90&deg ; Coude en polypropylène noir (12) 2 po x 6 po Mamelon en polypropylène (1)</td><td>US Plastics Corp, Lima, OH</td><td>30724 32086 30712</td><td> Ceux-ci ne sont nécessaires que pour le petit rongeur (par exemple la souris) Barnes Maze. Ces adaptations sont soit des tubes/coudes aveugles, soit l’un des tubes est relié au mamelon du tuyau qui mène ensuite à la cage d’évacuation.</td></tr><tr><td>Faux fonds pour le labyrinthe de Barnes pour rats</td><td></td><td></td><td>Ceux-ci ont été fabriqués sur mesure en plastique ABS et moulés sous vide pour l’appareil du labyrinthe à rats.</em</td></tr><tr><td>>Paroi/barrière circulaire en aluminium (50 cm de haut) autour du labyrinthe</td><td>Ace Hardware, Columbia, MO</td><td></td><td>Dans le cas des petits rongeurs ( par exemple , souris), cette barrière les empêche de tomber du labyrinthe ; l’appareil à rats n’en a généralement pas besoin. Le mur peut ne pas être nécessaire pour les souris de laboratoire qui sont relativement apprivoisées</fortes>.</td></tr><tr><td>Support pour le dessus de la plate-forme du labyrinthe</td><td>US Plastics Corp, Lima, OH</td><td>42625</td><td>Le support soutient le dessus de la plate-forme du labyrinthe de sorte qu’il soit élevé au-dessus du sol (généralement, 70-100 cm) pour motiver le rongeur à localiser la cage d’évacuation. Le support peut être construit dans n’importe quel matériau.</td></tr><tr><td>Bruit blanc</td><td>SleepMate Sound Conditioner, Marpac, Rocky Point, NC</td><td>980A</td><td>Le bruit de fond peut être utilisé pour bloquer les repères acoustiques périphériques qui peuvent perturber les tests du labyrinthe de Barnes à travers les essais et</td></tr><tr><td>les animaux Luminaires et ampoules de 300 à 500 W enfermés dans des coques en aluminium. Par exemple, les lampes de travail portables halogènes Utilitech 500 W.</td><td>Les lumières Ace Hardware ou Lowes</td><td></td><td>Bright fournissent un stimulus légèrement aversif qui motive le rongeur à localiser la cage d’évacuation. Les lumières sont généralement suspendues à ~150 cm au-dessus du sommet du labyrinthe.</td></tr><tr><td>Cage d’évacuation. Pour les petits rongeurs, il peut s’agir d’une cage en polypropylène (27,8 cm x 7,5 cm x 13 cm).</td><td>Ancare, Bellmore, NY</td><td>N40 PP</td><td>La cage d’évacuation des rats a été construite sur mesure et dispose d’une rampe menant à la cage d’évacuation.</td></tr><tr><td>Tube opaque (rats uniquement) (27 cm de diamètre ; 23 cm de hauteur) avec un morceau de carton épais pour couvrir le dessus.</td><td></td><td></td><td>Le tube est placé au centre du labyrinthe et le rat est placé dans le tube par le haut qui est recouvert de carton. Une poignée à l’extérieur du tube permet de soulever plus facilement le tube, qui commence alors l’essai. Le tube peut être construit dans n’importe quel matériau, mais doit être opaque.</td></tr><tr><td>Caméra vidéo haute résolution (par exemple , caméra vidéo numérique Panasonic)</td><td>Panasonic, Secaucus, NJ</td><td>ICV19458</td><td>La caméra vidéo est positionnée au-dessus de la tête et enregistre les essais pour une analyse ultérieure.</td></tr><tr><td>Indices géométriques extra- ou intra-labyrinthe en carton de haute qualité papier de construction</td><td>n’importe quel magasin de fournitures de bureau, tel que Staples</td><td></td><td>Ces repères visuels orientent l’animal dans l’environnement du labyrinthe, fournissant des indices quant à l’emplacement spatial de la cage d’évacuation ; chez les rats, les indices extra-labyrinthe sur les murs fonctionnent bien, tandis que chez les petits rongeurs qui nécessitent un mur autour du labyrinthe, Des indices intra-labyrinthe doivent être utilisés.</td></tr><tr><td><fort>Rideau noir pour entourer le labyrinthe (petits rongeurs seulement)</fort></td><td><fort>tout magasin de tissus et d’artisanat, tel que Jo-Ann Fabrics</td><td></td><td>Un rideau noir est utilisé chez les petits rongeurs (en particulier les espèces sauvages, par exemple Peromyscus) pour maintenir l’attention à l’intérieur des limites du labyrinthe</fort>.</td></tr><tr><td>70 % d’éthanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td><td>Après chaque essai, le dessus du labyrinthe et la cage d’évacuation sont nettoyés pour éliminer les signaux d’odeur potentiels pour les rongeurs testés consécutivement.</td></tr><tr><td>Logiciel de suivi, tel qu’Ethovision, et ordinateur doté d’une carte vidéo appropriée et d’un espace disque dur important (1 To ou plus). Alternativement, les vidéos peuvent être enregistrées directement sur l’ordinateur pour une analyse ultérieure à l’aide d’un programme tel que Win TV (Hauppauge Computer Works, Inc.).</td><td>Un</td> <td>logiciel de suivi est nécessaire pour analyser les essais de latence afin de localiser la cage d’évacuation, la vitesse, la distance parcourue, le temps passé au repos, le temps passé à se déplacer, le temps passé dans les quadrants corrects par rapport aux quadrants incorrects, le temps passé autour du trou d’évacuation, le nombre d’erreurs ou d’entrées dans des trous incorrects, et la stratégie de recherche globale utilisée pour trouver la cage d’évacuation.</td><td></td></tr><tr><td>Disques durs externes, tels que Seagate ou WD, avec un minimum de 1 à 2 To de mémoire</td><td>Tout magasin de fournitures de bureau, tel que Staples.</td><td></td><td>Les enregistrements vidéo doivent être sauvegardés dans au moins un endroit distinct.</td></tr><tr><td>Programme d’enregistrement vidéo, par exemple Programme WinTV</td><td>Hauppauge Computer Works, Inc., Hauppauge, NY</td><td></td><td>Si un logiciel de suivi n’est pas disponible au moment des essais les essais doivent être enregistrés sur vidéo pour une analyse ultérieure</td></tr></tbody></table>

barnes maze stratégies de test avec les petites et grandes des modèles de rongeurs

Barnes Maze Testing Strategies with Small and Large Rodent Models

L&#39;apprentissage spatial et la mémoire des rongeurs de laboratoire est souvent évaluée par la capacité de navigation dans des labyrinthes, le plus populaire de qui sont les (Barnes) labyrinthes de l&#39;eau et des terres arides. Amélioration des performances sur des sessions ou des essais est pensé pour refléter l&#39;apprentissage et de la mémoire de l&#39;emplacement évasion cage / plate-forme. Considéré comme moins stressant que les labyrinthes de l&#39;eau, le labyrinthe Barnes est relativement simple conception d&#39;un haut de forme circulaire avec plusieurs trous équidistants sur le bord de périmètre. Tous sauf un des trous sont à double fond ou aveugles fin, tandis que l&#39;un mène à une cage d&#39;échappement. Stimuli aversifs légèrement (par exemple, plafonnier lumineux) fournissent la motivation pour localiser la cage d&#39;échappement. Latence de localiser la cage d&#39;échappement peut être mesuré pendant la session, mais des effets supplémentaires nécessitent généralement l&#39;enregistrement vidéo. De ces enregistrements vidéo, l&#39;utilisation d&#39;un logiciel de suivi automatisé peut générer une variété de paramètres qui sont semblables à celles produites dans des labyrinthes d&#39;eau (par exemple &lt;/ Em&gt; la distance parcourue, la vitesse / vitesse, le temps passé dans le quadrant correct, le temps passé en mouvement / repos, et la confirmation de latence). Type de stratégie de recherche (c.-à-aléatoire, serial ou directe) peut être classé comme bien. Barnes construction et d&#39;essais labyrinthe méthodologies peuvent différer pour les petits rongeurs, tels que des souris, des rongeurs et des grands, tels que les rats. Par exemple, alors que les indices extra-labyrinthe sont efficaces pour les rats, les rongeurs sauvages plus petits peuvent exiger intra-labyrinthe des indices avec une barrière visuelle dans le labyrinthe. Stimuli appropriés doivent être identifiés qui motivent le rongeur pour localiser la cage d&#39;échappement. Les deux Barnes et labyrinthes d&#39;eau peuvent être de temps que 4-7 essais de test sont généralement nécessaires pour détecter amélioration de l&#39;apprentissage et de la mémoire (par exemple, la performance des temps de latence plus courts ou des longueurs de trajet pour localiser la plate-forme d&#39;évasion ou de la cage) et / ou des différences entre les groupes expérimentaux. Même ainsi, le labyrinthe Barnes est une évaluation comportementale largement utilisée mesurer les capacités de navigation spatiale etleur risque de perturbation par des manipulations génétiques, neuro-comportementaux, ou l&#39;exposition médicament / substance toxique.

Souris sylvestres mâles sexuellement matures dépendent amélioré la capacité de navigation spatiale pour trouver des partenaires potentiels de reproduction, qui sont largement diffusés dans l&#39;environnement. Tant l&#39;exposition prénatale et des adultes à la testostérone sont essentiels dans l&#39;organisation et l&#39;activation de ce comportement de mâle adulte plus tard 53. En tant que tel, il a été supposé que l&#39;exposition précoce à perturbateurs endocriniens pourrait perturber ce trait plus tard c...

La terre sèche Barnes labyrinthe est largement utilisé pour mesurer la capacité de la navigation spatiale en réponse à des stimuli aversifs légèrement. Sur des jours consécutifs, la performance (par exemple, la latence pour localiser évasion cage) des sujets de contrôle améliore, indicatif de l&#39;apprentissage et de la mémoire normale. Les différences entre les rats et les souris nécessitent appareils et méthodologie changements qui sont détaillées ici.

Barnes Maze Stratégies de test avec les petites et grandes des modèles de rongeurs

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land ...

L’objectif général de cette procédure est d’examiner les capacités d’apprentissage spatial et de mémoire chez les petits rongeurs et les rats avec le labyrinthe de Barnes sur la terre ferme. Ceci est accompli en habituant d’abord les animaux de laboratoire à la salle d’essai et au labyrinthe de Barnes. L’étape suivante consiste à placer l’animal au centre du labyrinthe et à commencer à suivre sa latence pour localiser la cage d’évacuation : le suivi est arrêté lorsque l’animal entre dans la cage d’évacuation ou après 300 secondes.Les résultats peuvent montrer des perturbations de l’apprentissage spatial et de la mémoire sous forme d’augmentation des latences, d’augmentation des taux d’erreur et d’incapacité à modifier les stratégies de recherche. Les principaux avantages de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que le labyrinthe aquatique sont qu’elle est un peu moins stressante, plus facile à réaliser et plus écologiquement pertinente pour les rongeurs terrestres. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu des effets toxicologiques de l’apprentissage spatial et des perturbations de la mémoire.Il peut également être appliqué à d’autres domaines tels que les troubles neurodégénératifs, le vieillissement et les défauts cognitifs congénitaux. Les conceptions des labyrinthes de Barnes varient, mais généralement chacun comporte 12 ou 20 trous d’évacuation potentiels, dont un seul mène à la maison ou à une cage d’évacuation. La cage d’évacuation peut être située soit directement sous le trou d’évacuation au sommet du labyrinthe, soit intégrée dans le mur environnant du labyrinthe.La taille des indices peut varier d’environ 16,5 centimètres de hauteur ou de largeur à l’intérieur du labyrinthe à une ligne horizontale de 21,6 centimètres de largeur placée du sol au plafond du mur de la pièce à l’extérieur du labyrinthe. Des bouchons ou des faux fonds doivent couvrir les trous non d’évacuation pour éviter que l’animal ne tombe hors du labyrinthe. La taille de la salle d’essai peut varier, mais elle doit avoir beaucoup d’espace pour le labyrinthe.Un endroit pour les cages des animaux, une salle pour un ordinateur avec une configuration vidéo et un endroit pour que l’expérimentateur puisse s’asseoir à au moins un mètre et quart du labyrinthe. Il est important que les animaux soient exposés à des conditions environnementales uniformes, qu’ils minimisent les bruits variables ou les signaux externes qui pourraient affecter différemment les performances d’un animal. L’attribution de l’emplacement de la cage d’évacuation doit être équilibrée entre les groupes de traitement et le sexe entre les essais.Le labyrinthe est essuyé avec de l’éthanol pour éliminer les indices d’odeur, tout comme la boîte d’évasion. Cette vidéo n’inclut pas de détails sur le fonctionnement spécifique d’un logiciel de suivi, car il est probable qu’il s’agisse d’un logiciel spécifique. Cependant, un tel système est souhaitable au moment des tests systématiquement utilisés.Installez la pièce en allumant les lumières au-dessus du labyrinthe et en les plaçant. N’entrez pas dans les panneaux à l’extérieur du laboratoire 30 minutes avant le premier essai. Amenez les souris dans la salle de test dans leurs cages domestiques normales pour les aider à s’habituer.Configurez le programme de suivi. Retirez maintenant délicatement la première souris de sa cage d’accueil et placez-la dans la grande boîte en plastique couverte. Habituez l’animal à la cage d’évacuation pendant une minute.Assurez-vous que le papier qui bloque le tube est retiré de ce trou d’évacuation et que tous les autres trous sont bouchés. Placez la souris au centre du labyrinthe et recouvrez la souris d’une boîte en plastique. Après avoir placé l’animal au centre du labyrinthe, déplacez-vous tranquillement vers la zone de l’ordinateur et lancez rapidement l’enregistrement.Pendant que vous surveillez les performances de l’animal sur l’ordinateur, notez le numéro du trou, le numéro de l’essai, la stratégie de recherche et le nombre d’erreurs commises. Une erreur est définie comme le reniflage d’un trou incorrect. L’évaluation de la stratégie de recherche peut être effectuée en direct ou plus tard avec les modèles de suivi enregistrés.Une stratégie directe montre que le rongeur entre directement dans la cage d’évacuation avec trois erreurs ou moins. Un modèle en série consiste à se déplacer le long du périmètre du labyrinthe jusqu’à ce que la cage d’évacuation soit localisée. Et enfin, le motif peut être aléatoire, ce qui signifie que le labyrinthe est traversé plusieurs fois par le centre pour vérifier divers trous.Arrêtez le programme de pistage lorsque l’animal a ses quatre pattes à l’intérieur de la cage d’évacuation. Si l’animal ne parvient pas à s’échapper du labyrinthe au bout de cinq minutes, arrêtez l’enregistrement. Ensuite, poussez doucement l’animal vers le trou d’évacuation.Laissez les animaux poussés rester dans la cage d’évacuation pendant exactement deux minutes avant de les ramener dans leur cage d’origine. Vaporisez maintenant le dessus du labyrinthe avec de l’éthanol à 70 % et essuyez-le. Ensuite, retournez l’animal dans l’espace à l’extérieur de la pièce et testez-le à nouveau 30 minutes plus tard.Chaque souris est testée deux fois par jour. Avant de démarrer la souris suivante sur le labyrinthe, bouchez le trou d’évacuation précédemment correct et retirez le bouchon en papier bloquant le trou du trou d’évacuation désigné pour cela. La configuration suivante de l’objet comprend le centrage du labyrinthe sous les plafonniers, qui doivent être allumés pour s’assurer que les faux fonds qui bloquent les trous non évadés et empêchent l’animal de tomber sont bien dans le labyrinthe et que la cage d’évacuation est à l’endroit désigné.Pour le premier sujet, le haut du labyrinthe de Barnes doit être suffisamment aversif pour motiver l’animal. Pour trouver la cage d’évacuation, nous avons déterminé qu’un éclairage intense et lumineux directement au-dessus du sommet du labyrinthe sert très bien cet objectif. Assurez-vous également que l’ordinateur et l’appareil photo sont prêts et qu’un chronomètre est disponible.Activez maintenant le bruit blanc pour atténuer les bruits de fond. La chaise doit se trouver à environ un mètre du labyrinthe et y rester tout au long du test. Préparez une minuterie pour compter deux minutes, mais pour ne pas faire de bruit à l’extérieur de la pièce.Placez un panneau Ne pas entrer. Une feuille de test pour la prise de notes doit également être mise à disposition. 30 à 60 minutes avant que le premier rat ne soit testé, amenez les animaux dans leur cage domestique dans la salle d’essai pour permettre l’accoutumance.Maintenant, placez un tube pour que le rat commence l’essai au Centre de Mai sur le tube, placez une carte de titre avec l’identification de l’animal pour identifier facilement la vidéo si elle est utilisée. Enregistrez quelques secondes pour capturer la feuille d’identification de l’animal. Retirez l’animal de sa maison et placez-le doucement la tête la première dans la cage d’évacuation.Couvrez ensuite la cage d’évacuation avec un faux fond et démarrez le chronomètre de deux minutes. Au bout de deux minutes, retirez délicatement l’animal de la cage d’évacuation et placez-le au centre du tube. Remettez la feuille d’identification sur le dessus du tube et soulevez doucement l’ensemble, libérant ainsi le rat.Démarrez immédiatement le chronomètre et prenez place dans le fauteuil du testeur sur la feuille de test. Notez l’heure de la journée pour l’essai. Commencez et attendez patiemment pendant que le rat met jusqu’à cinq minutes pour trouver la cage d’évacuation.Enregistrez le temps du chronomètre. Lorsque le rat trouve la cage d’évacuation, retirez l’animal de la cage d’évacuation et remettez-le dans sa cage d’origine. Si le rat ne trouve pas la cage d’évacuation dans les cinq minutes, notez-le, puis guidez-le doucement là-bas.Après 15 secondes dans la cage, retournez le rat dans sa cage d’origine. Si le rat quitte le labyrinthe mentalement, notez l’heure et attrapez rapidement l’animal. S’il est capturé dans les 10 secondes, remettez-le au centre du labyrinthe et continuez l’épreuve.Sinon, interrompez l’essai et omettez-le de l’analyse. Dans les deux cas, notez l’heure de la chute ou du saut sur la feuille de test après l’essai, arrêtez l’enregistrement et notez tout commentaire sur l’essai entre les essais. Retirez l’urine ou les excréments du haut du labyrinthe.Vaporisez-le avec de l’éthanol à 70 % et essuyez-le soigneusement. Nettoyez également la cage d’évacuation avec de l’éthanol à 70 %. Laissez-le sécher à l’air libre et utilisez une deuxième cage d’évacuation pour le prochain essai.Alternez toujours les cages d’évacuation. Répétez maintenant le processus. Tester l’animal suivant.Testez chaque animal une seule fois par jour. Les jours suivants, parcourez le labyrinthe avec un changement. Placez les rats directement dans le tube central de la cage domestique, en omettant l’accoutumance à la cage d’évasion, point final.Chères souris, Une espèce polygame a été exposée au développement à des doses pertinentes pour l’environnement de BPA dans un régime sans phytoestrogènes, ou d’œstrogènes dans le même régime qu’un contrôle positif ou d’un régime sans phytoestrogènes comme contrôle négatif, les souris ont été évaluées à l’aide du labyrinthe de Barnes. Les deux doses les plus élevées de BPA ont entraîné une perturbation de la capacité de navigation spatiale, mais pas la dose la plus faible de BPA testée, a démontré des déficits équivalents en apprentissage spatial et une incapacité à passer à la stratégie de recherche directe au cours de la période d’essai, mâle. Chères souris, exposées à des doses plus élevées de BPA ont montré une latence prolongée par rapport aux mâles à faible dose de BPA et par rapport aux mâles témoins négatifs.Les contrôles positifs aux œstrogènes ont fonctionné tout aussi mal, ainsi qu’une latence accrue et un taux d’erreur accru. Contrairement aux souris mâles, les souris femelles exposées à l’EE 2 et à la dose moyenne de BPA, mais pas aux autres doses de BPA, présentaient des modèles masculinisés d’apprentissage spatial et de mémoire. Cela est démontré par leur utilisation anormale de la stratégie de recherche directe et, logiquement, cela s’est traduit par une latence réduite.Contrairement aux souris sylvestres polygames, leurs cousines apparentées, les souris californiennes mâles monogames ont également reçu une dose précoce de BPA et d’EE deux et ont été testées dans le labyrinthe. Les stratégies de recherche n’ont pas été affectées. Les souris mâles de Californie n’ont pas utilisé la stratégie de recherche directe comme les souris sylvestres mâles de cette espèce, le BPA et l’EE deux n’ont pas affecté les erreurs de recherche par rapport aux témoins.Notez que, par rapport aux souris sylvestres contrôlées, les souris californiennes n’ont pas diminué le nombre d’erreurs commises au cours des sept jours de test consécutifs. La latence n’a pas non plus été affectée. La différence observée dans la perturbation de la navigation spatiale entre les souris sylvestres et les souris californiennes est probablement due aux différences entre les espèces dans la vulnérabilité comportementale à l’exposition développementale au BPA.Quoi qu’il en soit, il est clair que le dosage développemental n’a pas modifié de manière mesurable ces comportements chez les souris californiennes dans le cadre du régime de test. Suite à cette procédure, d’autres méthodes telles que des évaluations de l’anxiété ou de l’activité peuvent être effectuées afin de répondre à des questions supplémentaires telles que si les animaux présentent des niveaux d’anxiété ou d’activité modifiés ou d’autres troubles cognitifs. Notamment, après son développement, cette technique a ouvert la voie à la recherche dans le domaine de la cognition pour explorer la navigation spatiale chez diverses espèces de rongeurs et de non-rongeurs.

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Cette vidéo montre comment utiliser le Barnes Maze avec une souris. La procédure de test du labyrinthe de Barnes est utilisée par les chercheurs pour évaluer l’apprentissage spatial et la mémoire chez des animaux de laboratoire après des essais répétés.

Labyrinthe de Barnes : une méthode d’évaluation de l’apprentissage spatial et de la mémoire chez les animaux de laboratoire

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Le Double-H Maze: un test comportemental robuste pour l&#39;apprentissage et la mémoire chez les rongeurs

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Une analyse comportementale pour enquêter sur le rôle de la mémoire spatiale pendant la défense Instinctive chez les souris

Cet article présente un appareil automatisé de labyrinthe en t que nous avons inventé, et un protocole basé sur cet appareil pour l’analyse axée sur le retard de prise de décisions et processus décisionnel fondé sur l’effort chez les rongeurs mobiles gratuits.

Un labyrinthe en t automatisée basée appareil et protocole d’analyse de retard - et fondé sur l’Effort de prise de décision chez les rongeurs de déplacement gratuit

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