Capsulaire sérotypage des Streptococcus pneumoniae Utilisation de la réaction Quellung

L’objectif global de cette procédure est d’effectuer un stéréotype capsulaire du streptocoque pneumoniae ou du pneumocoque en utilisant la réaction de répression. Ceci est accompli en inoculant d’abord le bouillon de perfusion cardiaque avec une culture pure de pneumocoques fraîche pendant la nuit. Dans la deuxième étape, une goutte d’inoculum est transférée sur une lame de microscope en verre.

Ensuite, le sérum antis est ajouté en volume égal sur la lame. Dans la dernière étape, les deux gouttes sont mélangées et une lamelle est placée sur la suspension. En fin de compte, la suspension peut être visualisée sous contraste de phase pour observer la réaction pulmonaire positive ou négative d’apaisement.

Cette méthode démontre la méthode de référence pour le pneumocoque. La méthode est simple, facile à réaliser et facile à interpréter. La démonstration visuelle de cette méthode est importante, car les personnes qui ne connaissent pas cette technique peuvent avoir du mal à reconnaître quelle est une densité cellulaire appropriée pour effectuer le test de qualm.

Commencez par utiliser une boucle stérile jetable d’un microlitre pour obtenir un petit balayage d’une culture pure de pneumocoques fraîche pendant la nuit, cultivée sur une plaque de gélose au sang de cheval solide et non sélective, inoculez les pneumocoques dans 100 microlitres de bouillon de perfusion cardiaque. La suspension doit sembler visiblement trouble et agiter doucement le tube pour émulsionner la solution cellulaire. Utilisez une nouvelle boucle d’un microlitre pour transférer une goutte de l’inoculum sur un microscope en verre.

Faites glisser ensuite, placez une petite lamelle circulaire sur la suspension et vérifiez la densité de la suspension sous contraste de phase à fois 400 grossissement. Si l’inoculum est trop lourd, diluez la suspension cellulaire avec plus de bouillon et mélangez doucement les cellules à nouveau si l’inoculum est trop léger. Par exemple, s’il y a moins de 50 cellules visibles, ajoutez plus de bactéries à la suspension cellulaire et mélangez à nouveau doucement.

Avec de l’expérience. La densité de la suspension cellulaire peut être jugée en secouant et en tenant la suspension jusqu’à la lumière où elle devrait apparaître visiblement trouble. Lorsqu’elle est observée au microscope, la solution cellulaire devrait être à peu près aussi dense.

Une fois que la dilution optimale des cellules bactériennes a été obtenue, transférez environ un microlitre de l’inoculum sur le microscope en verre. Glissez ensuite. À l’aide d’une nouvelle boucle, ajoutez un volume égal de température ambiante.

Antisérum sur la lame et bien mélanger les deux gouttes. Avec la boucle, placez immédiatement un petit glissement de couverture sur la suspension en prenant soin de ne pas toucher la chute avec la pince. Visualisez ensuite la suspension sous contraste de phase comme nous venons de le démontrer.

Une réaction pulmonaire négative est observée lorsque peu ou pas de gonflement des cellules pneumococciques est observé. Semblable au témoin négatif, une suspension de cellules pneumococciques sans ajout d’antisérum. Une réaction pulmonaire de type positif se produit lorsqu’un anticorps spécifique se lie à la capsule du pneumocoque, entraînant une modification de son indice de réfraction.

Lorsqu’elles sont observées sous contraste de phase, les bactéries semblent enflées et plus visibles. N’oubliez pas que lorsque vous effectuez cette procédure, vous travaillez en fait avec des micro-organismes vivants. Pour cette raison, vous devez veiller à suivre les bonnes pratiques de laboratoire, à porter des vêtements de protection, l’équipement de laboratoire approprié et à éliminer tout l’équipement et les réactifs à la fin du processus en toute sécurité.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 10 minutes environ si elle est exécutée correctement. Après avoir visionné cette procédure, vous devriez avoir une bonne idée de la façon de sérotyper le pneumocoque en utilisant la réaction pulmonaire. Cette technique est importante pour comprendre l’épidémiologie du pneumocoque, à la fois dans le portage nasopharyngé et dans une maladie invasive.