Name: Une méthode dextension cGMP applicable pour les agrégats de neurones humains des cellules souches et progénitrices dérivées de cellules souches pluripotentes ou fœtale tissu cérébral (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Découvrez une méthode de hachage mécanique pour étendre les agrégats de cellules souches neurales humaines sans dissociation enzymatique. Cette technique préserve les contacts cellulaires et permet une croissance logarithmique stable sur plus de 40 passages.

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Nous remercions le Dr Soshana Svendsen à la critique et l&#39;édition de ce rapport. Ce travail a été fourni par le NIH / NINDS 1U24NS078370-01 et le CIRM DR2A-05320.

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

<img alt="Figure 6" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51219/51219fig6highres.jpg" width="500" /> Figure 6. Schéma découper. L&#39;expansion des cellules souches du sphéroïde / progénitrices en culture selon la méthode de découpage mécanique. Étapes critiques Un aperçu du paradigme de l&#39;expansion de coupe est représentée sur la figure 6. HNPC taille de la sphère est l&#39;...

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Brandon C. Shelley 
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Clive Svendsen

A correction was made to <a href="/video/51219">A cGMP-applicable Expansion Method for Aggregates of Human Neural Stem and Progenitor Cells Derived From Pluripotent Stem Cells or Fetal Brain Tissue</a>. The corresponding author was changed.

Erratum: A cGMP-applicable Expansion Method for Aggregates of Human Neural Stem and Progenitor Cells Derived From Pluripotent Stem Cells or Fetal Brain Tissue

Il ya une longue histoire de l&#39;expansion des cellules souches neurales rongeurs en culture soit une monocouche 1-3 ou 4-7 neurosphères globales. En outre, les cellules progénitrices neurales humaines (hNPCs) isolés à partir de différentes régions du développement du système nerveux central 8-17 ont été élargies in vitro. Ces cellules sont bi-puissant, capable de se différencier en astrocytes et les neurones les deux et ont été un outil très utile pour étudier le développement neural 18,19 et 20,21 mécanisme maladie. hNPCs ont également été transplantées dans de nombreux modèles de la maladie du système nerveux central des animaux différents avec différents niveaux d&#39;intégration, à la survie et les effets fonctionnels 22-24. Traditionnellement, les rongeurs ou NPC foetales humaines dérivées sont exposés à des facteurs de croissance épidermique - souvent facteur de croissance (EGF) et / ou le facteur de croissance des fibroblastes-2 (FGF-2) et 25 à 28 - 29 à la fois adhérent et troisSystèmes de sphéroïdes dimensions sont généralement soumises à des passages en utilisant la dissociation enzymatique dans une suspension à cellule unique 30-34. La méthode standard pour développer des cellules pour la recherche ou l&#39;utilisation clinique est comme une monocouche adhérente raison d&#39;une manipulation facile. Cependant, nous avons montré que des passages monocouches et neurosphères hNPCs avec des solutions chimiques ou enzymatiques ont donné lieu à la sénescence précoce 35. En outre, la dissociation enzymatique peut entraîner une augmentation des niveaux de différenciation et des anomalies caryotypiques d&#39;après les données démontré avec des cellules souches embryonnaires de 36 à 38. Bien que la méthode standard de hNPCs de passages a produit les bonnes pratiques de fabrication (BPF) des produits de qualité qui sont passés en phase 1 des essais cliniques (cellules souches Inc., Neuralstem Inc.), la méthode autorisée seulement quelques cycles d&#39;amplification cellulaire, ce qui limite la potentiel bancaire. De toute évidence, les grandes expériences de recherche et d&#39;essais cliniques futurs pourraient bénéficier de la capacité depropager des cellules en vrac et à la sénescence retardée pour permettre la croissance à grande échelle et de banques de cellules. Pour répondre à ce besoin, nous avons développé une façon nouvelle et automatisé de neurosphères intactes mécaniquement passages par &quot;couper&quot; en petits groupes pour maintenir le contact de cellule à cellule. Ce procédé augmente considérablement leur durée de vie et la culture en suspension 39 permet une utilisation plus efficace de l&#39;espace de l&#39;incubateur par rapport aux cultures en monocouche, comme on le voit avec une méthode de culture 3D de bioréacteur alternatif 40. Le protocole permet de hachage prévu pour la production de banques à grande échelle d&#39;un échantillon foetal supérieur passage 10, un exploit peu probable en utilisant des procédés standards de repiquage. Bien que cette méthode pour hNPCs de repiquage n&#39;est pas conventionnelle, il est de plus en plus en popularité et a été récemment publié avec d&#39;autres types tels que les cellules souches neurales dérivées de l&#39;embryon humain et les cellules souches pluripotentes induites cellulaires, permettant l&#39;expansion à grande échelle pour diverses applications, notamment dans vITRO modélisation de la maladie 41-46. Surtout, un hNPC banque de cellules cGMP de qualité a déjà été produit avec le procédé de hachage, ce qui démontre que la technique peut être appliquée à de futures applications cliniques.

<table><tbody><tr><td>Bécher, 50 ml</td><td>Fisherbrand</td><td>FB-100-50</td> plusieurs <td>fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Armoire de biosécurité, classe II</td><td>Baker</td><td>SG-603A</td><td>Modèle de 4 pi ou 6 pi.&nbsp ; Modèle de 6 pi recommandé ; plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Lames, Préparation à double tranchant</td><td>Personna</td><td>74-0002</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs.&nbsp ; ATTENTION :</td></tr><tr><td>Média de congélation Sharp Cell</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6295-50ML</td><td>DMSO, centrifugeuse sans sérum</td></tr><tr><td>, seau pivotant avec inserts de 15 ml</td><td>Eppendorf</td><td>5810 R</td> plusieurs <td>fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Tubes coniques, 15 ml</td><td>Fisherbrand</td><td>S50712</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Tubes coniques, 50 ml</td><td>BD Falcon</td><td>352074</td><td>plusieurs fabricants/ fournisseurs</td></tr><tr><td>Congélateur à débit contrôlé</td><td>Planer</td><td>Kryo 750</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Cryoflacons, 2 ml</td><td>Corning</td><td>430488</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Flacon de culture, Ventilé, T12.5</td><td>BD Falcon</td><td>353107</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Flacon de culture, Ventilé, T25</td><td>BD Falcon</td><td>353081</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Flacon de culture, Ventilé, T175</td><td>BD Falcon</td><td>353045</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Flacon de culture, Ventilé, T75&nbsp ;</td><td>BD Falcon</td><td>353110</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Filtre, 0.22 &micro ; m, coupelle attachée, 1 L</td><td>Millipore</td><td>SCGPU11RE</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Filtre, 0,22 & micro ; m, tasse attachée, 150 ml</td><td>Millipore</td><td>SCGVU01RE</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Filtre, 0,22 & micro ; m, tasse attachée, 500 ml</td><td>Millipore</td><td>SCGPU05RE</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Filtre, 0,22 & micro ; m, gobelet attaché, 50 ml</td><td>Millipore</td><td>SCGP00525</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Papier filtre, cercles de 8,5 cm</td><td>Whatman/GE</td><td>1001-085</td><td></td></tr><tr><td>Pince, motif standard - Dentelé/Courbé/18 cm</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>11001-18</td><td></td></tr><tr><td>Chambre de congélation, alcool isopropylique</td><td>Nalgene</td><td>5100-0001</td><td>"Mr. Frosty"</td></tr><tr><td>Incubateur, 37 &deg ; C/5 % CO2</td><td>Forma</td><td>série 370 plusieurs</td><td>fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Hémacytomètre, Phase</td><td>Hausser Scientific</td><td>1475</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>McIlwain Tissue Chopper</td><td>Lafayette Instruments</td><td>TC752-</td><td>&nbsp ; Modification de la boîte de Pétri requise.&nbsp ; &nbsp ; MISE EN GARDE&NBSP ; Lame mobile et tranchante.</td></tr><tr><td>Micropipeteur, 1-10 &mu ; l</td><td>Gilson</td><td>F144562</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Micropipettor, 100-1 000 &mu ; l (kit de démarrage)</td><td>Gilson</td><td>F167700</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Micropipeteur, 2-20 &mu ; l (kit de démarrage)</td><td>Gilson</td><td>F167700</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Micropipeteur, 20-200 &mu ; l (kit de démarrage)</td><td>Gilson</td><td>F167700</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Tournevis, Autoclavable, 5/16</td>"<td>Steritool</td><td>10302</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur Pipets, coton</td><td>bouché Fisherbrand</td><td>13-678-8B</td> plusieurs <td>fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Boîte de Pétri, Verre, Autoclavable</td><td>Corning</td><td>3160-100</td><td></td></tr><tr><td>Aide à la pipette</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Disque de cale</td><td>McMaster-Carr</td><td>VARIABLE</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Pointes de pipette à barrière stérile, 10 &mu ; l</td><td>AvantGuard</td><td>AV10R-H</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Pointes de pipette à barrière stérile, 1 000 &mu ; l</td><td>AvantGuard</td><td>AV1000</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Pointes de pipette à barrière stérile, 20 &mu ; l</td><td>AvantGuard</td><td>AV20-H</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Pointes de pipette à barrière stérile, 200 &mu ; l</td><td>AvantGuard</td><td>AV200-H</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Pipettes jetables stériles, emballage entièrement plastique, 10 ml</td><td>Fisherbrand</td><td>13-676-10J</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Pipettes jetables stériles, emballage tout plastique, 2 ml</td><td>Fisherbrand</td><td>13-675-3C</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Pipettes jetables stériles, emballage entièrement plastique, 25 ml</td><td>Fisherbrand</td><td>13-676-10K</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Stérile Pipettes jetables, tout en plastique, 5 ml</td><td>Fisherbrand</td><td>13-676-10H</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Sachets de stérilisation, 19 x 33 cm</td><td>Crosstex</td><td>SCL</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Passoire, 40 & micro ; m</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Boîtes de culture tissulaire, 60 mm</td><td>BD Falcon</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Supports de tubes, à quatre voies imbriquées</td><td>Fisherbrand</td><td>03-448-17</td><td></td>Bain-marie</tr><tr><td></td><td>Fisherbrand</td><td>S52602Q</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Progéniteur neural Réactifs</td><td></td><td></td><td></td>de traitement spécifiques</tr><tr><td>aux cellules Cellules souches neurales Moyen d’expansion (Stemline)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3194-500ML</td><td>Important d’utiliser la marque Stemline</td></tr><tr><td>Facteur de croissance épidermique humain recombinant (EGF)</td><td>Millipore</td><td>GF316</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Facteur inhibiteur de la leucémie humaine recombinante (LIF)</td><td>Millipore</td><td>LIF1010</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>Bleu trypan (0,4 %)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-100ML</td><td>plusieurs fabricants/fournisseurs</td></tr><tr><td>TrypLE Select (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>12563-011</td><td></td></tr></tbody></table>

une méthode d&#39;extension cgmp applicable pour les agrégats de neurones humains des cellules souches et progénitrices dérivées de cellules souches pluripotentes ou fœtale tissu cérébral

A cGMP-applicable Expansion Method for Aggregates of Human Neural Stem and Progenitor Cells Derived From Pluripotent Stem Cells or Fetal Brain Tissue

Une technique d&#39;expansion cellulaire d&#39;amasser un grand nombre de cellules à partir d&#39;un seul échantillon pour des expériences de recherche et d&#39;essais cliniques bénéficierait grandement de la communauté sur les cellules souches. De nombreuses méthodes d&#39;expansion actuels sont laborieuses et coûteuses, et ceux qui impliquent la dissociation complète peuvent provoquer plusieurs types de souches et de cellules progénitrices à subir une différenciation ou la sénescence précoce. Pour surmonter ces problèmes, nous avons mis au point une méthode de repiquage mécanique automatisé dénommé &quot;hachage&quot; qui est simple et peu coûteux. Cette technique évite la dissociation chimique ou enzymatique dans les cellules simples et place permet l&#39;expansion à grande échelle de suspension, cultures sphéroïde qui maintiennent le contact cellule / cellule constante. Le procédé de hachage a été utilisée principalement pour les cellules cérébrales fœtales dérivé progénitrices neurales ou des neurosphères, et a été récemment publiée pour une utilisation avec des cellules souches neurales dérivées de cellules souches embryonnaires pluripotentes et induits. La procédure impliquantes semis neurosphères sur une culture de tissu boîte de Pétri, puis en passant une lame tranchante, stérile à travers les cellules automatiser efficacement le processus fastidieux de la main dissocier mécaniquement chaque sphère. Mise en suspension des cellules en culture fournit une surface rapport favorable surface sur volume; que plus de 500 000 cellules peuvent être cultivées dans un seul neurosphères de moins de 0,5 mm de diamètre. Dans un flacon T175, plus de 50 millions de cellules peuvent se développer dans des cultures en suspension contre seulement 15 millions en cultures adhérentes. Surtout, la procédure de hachage a été utilisé dans les bonnes pratiques de fabrication (cGMP), permettant la production de la quantité de masse de produits de cellules de qualité clinique.

<img alt="Figure 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51219/51219fig5highres.jpg" width="500" /> Le nombre de cellules Figure 5. Des données représentatives. A) prévues de hNPCs congelés à p19, puis décongelés et élargis comme monocouche adhérente utilisant dissociation enzymatique par rapport à neurosphères à des passages par la méthode de hachage. Jour 0 représente lorsque les cellules ont été décongelées à p20. B) Des images repr...

Ce protocole décrit un procédé de découpage mécanique nouvelle qui permet l&#39;expansion de souches et de cellules progénitrices neurales agrégats sphériques sans dissociation d&#39;une suspension cellulaire unique. Maintenir le contact cellule / cellule permet une croissance rapide et stable depuis plus de 40 passages.

Une méthode d&#39;extension cGMP applicable pour les agrégats de neurones humains des cellules souches et progénitrices dérivées de cellules souches pluripotentes ou fœtale tissu cérébral

A cell expansion technique to amass large numbers of cells from a single specimen for research experiments and clinical trials would greatly benefit the ...

L'objectif général de l'expérience suivante est de repiquer efficacement les neurosphères afin de maintenir le contact cellule-cellule tout au long de la durée de vie des cellules en culture. Cette technique crée les conditions d'expansion nécessaires aux cellules souches neurales humaines. Elle consiste à combiner jusqu'à deux flacons T175 contenant les mêmes cellules, puis à les transférer dans un tube conique, permettant ainsi de transférer les sphères dans une boîte de Pétri. Lors d'une deuxième étape, les neurosphères en suspension sont condensées en une masse facile à manipuler dans la boîte de Pétri, ce qui permet à la lame de découper les H NPCs en petits agrégats.Ensuite, les neurosphères passagées ou hachées sont remises en suspension afin de retirer les cellules de la boîte de Pétri et de les répartir dans de nouveaux flacons. Les résultats obtenus montrent que la technique de hachage constitue une stratégie de croissance à long terme, fondée sur les courbes d'expansion qui démontrent des taux de croissance logarithmique à long terme par rapport aux cellules passagées par l'approche enzymatique standard. La démonstration visuelle de cette technique est essentielle en tant que sphère.Les étapes de condensation sont difficiles à décrire par écrit. Il existe également plusieurs astuces pour faciliter le processus. Si l'excès de milieu n'est pas complètement éliminé de la boîte de Pétri, les sphéroïdes seront simplement déplacés dans le milieu au lieu de se diviser en amas plus petits.Commencez cette procédure en examinant la couleur du milieu du flacon contenant les H NPCs. Parcourez le flacon au microscope pour observer les cellules. Si possible, utilisez un micromètre pour examiner la taille de plusieurs sphères.Si de nombreuses sphères ont un diamètre de 300 micromètres ou plus, procédez au hachage et hachez les cellules toutes les sept à dix jours. Replacez ensuite le flacon dans l'incubateur et préparez le hacheur. Mettez l'interrupteur d'alimentation du hacheur sous tension.Dans la chambre stérile, régler l'épaisseur de découpe sur 200 micromètres et la force de la lame sur 180 degrés ou à la position neuf heures. Ensuite, vérifier que le bouton de vitesse automatique est tourné au maximum dans le sens inverse des aiguilles d'une montre. Puis déplacer le bouton de déverrouillage de la table aussi loin que possible vers la droite, et s'assurer que le support de plaque est stable.Faites tourner le manipulateur manuel dans le sens horaire pour élever le bras à son niveau maximal. Ensuite, transférez de manière aseptique une lame de coupe stérile à double tranchant sur le boulon du bras du hachoir. À l’aide d’une pince, placez le fermoir sur la lame en utilisant la pince.La partie incurvée de la boucle doit se trouver au-dessus du bord supérieur du bras. Ensuite, maintenez la boucle sur le bras et fixez l'écrou sur le boulon. À l’aide du tourne-écrou stérile, laissez l’écrou desserré d’un quart de tour.Dans cette procédure, transférez la quantité suggérée de milieu de maintenance dans le nouveau flacon. Ensuite, transférez aseptiquement les cellules de l'incubateur vers la cabine stérile. Inclinez le flacon sur un support à tubes et laissez les sphéroïdes se déposer dans le flacon.Un seul. Aspirez jusqu'à 12 millilitres de surnageant. À l'aide d'une pipette sérologique de 10 millilitres, rincez toutes les sphères faiblement adhérentes à la surface du flacon.Répétez selon les besoins et laissez les sphéroïdes se déposer entre les lavages. Ensuite, transférez le volume suggéré de milieu conditionné dans le nouveau flacon. Puis, transférez l'ensemble du milieu conditionné restant ainsi que les sphéroïdes dans un nouveau tube conique de 15 millilitres.Laisser les sphères se déposer et jeter le flacon utilisé. Ensuite, transférer lentement les cellules du tube conique de 15 millilitres vers la boîte de Pétri de 60 millimètres ou le disque d'ajustement dans le volume le plus faible possible. Conserver le milieu conditionné restant, car il sera utilisé pour rincer les cellules de la boîte après la coupe.Tentez de minimiser la surface couverte par le milieu et les sphères dans la boîte. Ensuite, commencez à concentrer le pool de sphères en transférant le surnageant à nouveau dans le tube conique de 15 millilitres. Retirez autant de milieu que possible depuis le haut du pool de cellules à l’aide d’une micropipette équipée d’une pointe avec barrière anti-aérosol.Quand il n’est pas possible d’éliminer le milieu sans les sphéroïdes, étalez le milieu. En utilisant le côté de la pipette pour augmenter la surface de contact, inclinez légèrement la boîte de Pétri et utilisez le côté de la pointe de la pipette pour faire glisser délicatement tous les sphéroïdes vers un côté du milieu. Une fois que toutes les cellules ont été déplacées, inclinez lentement la boîte de Pétri dans la direction opposée afin de permettre au milieu de se séparer des sphéroïdes.Ensuite, transférez le milieu clarifié dans le tube conique de 15 millilitres. Utilisez le côté de la pipette pour faire doucement glisser toutes les sphères vers le centre de la boîte de Pétri, de sorte que la flaque ait un diamètre de 0,5 à 2,4 centimètres.Il est important de maintenir la profondeur du bassin de sphères faible. Si le bassin est trop profond, les sphères seront déplacées lors de la découpe. Placez maintenant la boîte de Pétri sur le support de plaque et fixez-la sous les crochets du support.Utilisez le bouton de dégagement de la table pour déplacer le support de plaque vers la gauche afin que la lame soit dégagée des sphères et engagée dans l'engrenage. Ensuite, abaissez le bras du hacheur en tournant le bouton du manipulateur manuel dans le sens horaire jusqu'à ce que la lame se mette à plat sur la boîte de Pétri. Appuyez sur le support du bras tout en resserrant l'écrou.Appuyez ensuite sur le bouton de réinitialisation. Tenez fermement la boîte de Pétri d'une main tout en tournant le bouton du manipulateur automatique du bras dans le sens horaire jusqu'à la position à 90 degrés ou 12 heures, puis commencez à hacher lorsque toutes les sphères auront été coupées. Faites pivoter le support de la plaque de 90 degrés.Ensuite, desserrez le boulon, abaissez le bras et resserrez l'écrou. Répétez la procédure de hachage. Puis, de manière aseptique, transférez la boîte de Pétri du support à plaques vers un espace de travail dans l'enceinte stérile.Transférez un millilitre de milieu conditionné sur les sphéroïdes hachés. Resuspendez délicatement et transférez ensuite les sphéroïdes hachés dans un nouveau tube conique de 15 millilitres. Essayez d'éviter la formation de bulles et répétez autant de fois que nécessaire pour récupérer tous les sphéroïdes hachés.Measurez le volume des milieux conditionnés et des sphéroïdes hachés. Ajoutez la quantité appropriée de milieu d'entretien pour atteindre le volume suggéré dans la colonne E du tableau deux. Ensuite, transférez la suspension de sphéroïdes dans chaque nouveau flacon, en ne transférant la suspension que dans un seul flacon à la fois, et resuspendez les sphéroïdes entre chaque transfert. Le volume final dans chaque flacon doit correspondre au volume suggéré dans la colonne F du tableau deux. Placez les h NPCs hachés dans l'incubateur.Cette figure montre les nombres cellulaires projetés de H NPCs congelés au passage 19, puis décongelés et étendus sous forme de monocouche adhérente par dissociation enzymatique, comparés aux neurosphères passagées par la méthode de hachage. Voici les images représentatives de sphères avant et après hachage à un grossissement de 10 x. Cette image montre les H NPCs du passage de décongélation 29 qui ont été ensemencés pendant un jour et colorés pour la nestine et l'expression, tandis que cette image montre les H NPCs du passage de décongélation 29 qui ont été ensemencés pendant sept jours en l'absence de facteurs de croissance et colorés pour la GFAP et la bêta-tubuline III.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment utiliser la technique de découpage automatisée pour le passage des HBC, qui préserve le contact entre les cellules tout au long de la vie des cellules et de la culture. Ce protocole peut être adapté à de nombreux types cellulaires, comme les cellules souches neurales dérivées de cellules pluripotentes ou les cardiosphères.

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Découvrez une méthode de hachage mécanique pour étendre les agrégats de cellules souches neurales humaines sans dissociation enzymatique. Cette technique préserve les contacts cellulaires et permet une croissance logarithmique stable sur plus de 40 passages.

Une méthode dextension cGMP applicable pour les agrégats de neurones humains des cellules souches et progénitrices dérivées de cellules souches pluripotentes ou fœtale tissu cérébral (Vidéo) | JoVE Journal

Une méthode d'extension cGMP applicable pour les agrégats de neurones humains des cellules souches et progénitrices dérivées de cellules souches pluripotentes ou fœtale tissu cérébral

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