L'évaluation de la tolérance induite par la morphine hyperalgésie et analgésique chez la souris utilisant thermiques et mécaniques nociceptifs modalités

L’objectif général de l’expérience suivante est d’observer le développement de l’hyperalgésie induite par les opioïdes et de la tolérance aux analgésiques chez la souris. Ceci est réalisé en mesurant les réponses nociceptives thermiques et mécaniques de souris naïves après l’administration de morphine sur une période de temps au jour zéro comme deuxième étape. Le seuil nociceptif est mesuré quotidiennement avant l’administration de morphine le septième jour.

L’effet analgésique de la morphine est mesuré sur une période de temps à nouveau pour révéler le développement de la tolérance aux analgésiques. On obtient des résultats qui montrent une augmentation de la sensibilité à la douleur ainsi que le développement d’une tolérance aux analgésiques. Suite à l’administration répétée de morphine.

Bien que cette méthode puisse donner un aperçu du développement de l’hypersensibilité à la douleur et de la tolérance aux analgésiques chez plusieurs souris. Après un traitement chronique aux opiacés, il peut également être appliqué à d’autres opiacés ou à des souris génétiquement modifiées. Pour minimiser l’analgésie induite par le stress, les souris sont manipulées pendant cinq minutes chaque jour et habituées jusqu’à ce qu’elles entrent librement dans le dispositif de contention.

Une fois habitué, commencez le test d’immersion de la queue en réglant le thermostat à 48 degrés Celsius. Introduisez doucement la souris dans le dispositif de contention. Une fois correctement attaché, trempez les deux tiers de sa queue dans le bain d’eau et démarrez le chronomètre.

La distinction entre la réponse nociceptive et la réponse nociceptive est un élément clé de cette procédure. Un arbitrage et une pratique appropriés sont essentiels au succès. Surveillez les mouvements de l’animal et arrêtez le chronomètre.

Dès que la souris retire sa queue de l’eau chaude, notez la latence de retrait. Remettez la souris dans sa cage et testez l’animal suivant jusqu’à la fin de la série en maintenant le même ordre. Répétez les mesures de la réponse nociceptive deux fois de plus.

La latence de la réponse nociceptive en secondes pour chaque souris est déterminée comme la valeur moyenne de trois déterminations successives. Pour le test de pression de la queue, introduisez d’abord doucement la souris dans la contention et placez sa queue sous la pointe conique du JMeter anal. Une fois en place, appuyez sur l’interrupteur au pied pour appliquer une pression croissante uniforme sur la partie proximale de la queue.

Au premier signe d’une réaction nociceptive, retirez l’embout. Les réponses nociceptives peuvent inclure des difficultés, des grincements ou le retrait de la queue. Enregistrez la force actuelle en grammes qui provoque la réponse nociceptive.

Répétez cette mesure sur les parties médiane et distale de la queue de la même souris à intervalles de 32e, retournez l’animal dans sa cage d’origine et répétez ces étapes jusqu’à ce que toutes les souris soient testées. Tout d’abord, définissez deux groupes d’animaux avec des valeurs nociceptives moyennes comparables. Ensuite, mesurez et enregistrez le poids corporel de chaque animal.

Une fois que les groupes salin et morphine ont été établis, préparez une solution de morphine dans une solution saline physiologique pour une administration sous-cutanée. Mesurez les latences de la réponse nociceptive dans les essais d’immersion et de pression de queue, et enregistrez-les en temps 0,0 pour chaque groupe. Ensuite, injectez de la morphine ou du sérum physiologique à chaque animal en fonction de son groupe.

Après 30 minutes, commencez à enregistrer les réponses nociceptives chez chaque animal. Portez une attention particulière aux valeurs limites, car il est peu probable que les souris réagissent aux stimuli nocifs à ce stade précoce. En l’absence de réaction nociceptive, une coupure de 25 secondes est utilisée pour prévenir les lésions tissulaires en maintenant le même ordre de test.

Répétez les mesures nociceptives toutes les 30 minutes jusqu’à 3,5 heures après l’injection pour le traitement chronique à la morphine. Obtenir les valeurs du premier jour en mesurant la réponse nociceptive des animaux sur le TIT et le TPT, comme démontré précédemment. Préparez une solution de morphine fraîche.

Administrez des injections de morphine ou de solution saline selon l’affectation du groupe et laissez les animaux se reposer jusqu’au lendemain. Le lendemain, mesurez les réponses nociceptives sur le TIT et le TPT avant d’administrer une deuxième série d’injections. Répétez ces étapes tous les jours pendant six jours.

Le septième jour, évaluer l’analgésie induite par la morphine. Selon le paradigme de l’évolution temporelle démontré précédemment dans le test d’immersion de la queue, l’effet analgésique maximal de la morphine a été atteint après 30 minutes. Cependant, dans l’essai de pression de queue, l’effet maximal a été atteint après 60 minutes par rapport aux témoins injectés de solution saline.

Ces résultats montrent que des injections quotidiennes de morphine sur une période de traitement de sept jours ont induit une baisse significative et progressive des valeurs nociceptives basales thermiques et mécaniques. Après un traitement chronique, la valeur nociceptive basale chez les souris traitées à la morphine était significativement plus faible que celle des souris témoins injectées de solution saline. Après une morphine aiguë, la réponse nociceptive du groupe traité à la morphine chronique a augmenté de manière significative, mais n’a que légèrement dépassé la valeur nociceptive basale du témoin injecté de solution saline.

Souris mesurées à 30 minutes dans le TIT et le TPT et à 60 minutes dans le TIT : ici, les valeurs seuils nociceptives mesurées 30 minutes après l’injection de sérum physiologique ou de morphine sont tracées pour le jour zéro et le jour sept après le développement. Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la recherche sur la douleur pour explorer l’effet de l’intervention pharmacologique ou génétique dans le développement de l’hypersensibilité à la douleur et de la tolérance aux analgésiques induite par l’administration chronique de morphine.