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DOI: 10.3791/51305-v
Tammy A. Butterick1,2, Cayla M. Duffy1,2, Rachel E. Lee3, Charles J. Billington1,2,4, Catherine M. Kotz1,2, Joshua P. Nixon1,2
1Department of Veterans Affairs,Minneapolis Veterans Affairs Health Care System, 2Department of Food Science and Nutrition,University of Minnesota, 3Department of Integrative Biology and Physiology,University of Minnesota, 4Department of Medicine, University of Minnesota Medical School,University of Minnesota
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Les essais multiplex peuvent fournir des informations utiles pour les mécanismes cellulaires de base et d'éliminer les déchets de réactifs et d'expériences répétitives inutiles. Nous décrivons ici une caspase-3/7 dosage de l'activité de multiplexage, en utilisant des procédés fluorescents, luminescents et située, pour déterminer la viabilité cellulaire dans un modèle in vitro de l'hypothalamus après provocation par oxydation avec de l'acide palmitique.
L’objectif général de cette vidéo est de démontrer un test multiplex à haut rendement pour déterminer le début de l’apoptose mesurée par la caspase. Trois sept. Tout d’abord, les neurones hypothalamiques sont mis au défi par l’acide gras saturé apoptotique, l’acide palmitique.
Ensuite, la viabilité cellulaire des neurones est mesurée à l’aide d’un réactif fluorescent et d’un lecteur de microplaques après le début de l’apoptose. Le substrat lumino, DEVD, qui est une séquence d’acides aminés clivée par la caspase trois, est ajouté aux cellules. La dernière étape de la procédure consiste à mesurer la luminescence à l’aide d’un lecteur de microplaques pour déterminer l’activité de la caspase, qui augmente dans les cellules en apoptose.
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