En utilisant l'ARN interférence pour étudier la réponse immunitaire innée dans les macrophages de souris

L’objectif global de cette procédure est d’utiliser l’interférence ARN pour étudier l’effet des gènes candidats sur la réponse immunitaire innée. Dans les macrophages de souris pour ce faire, les lignées cellulaires de macrophages de souris sont tryps inisées et combinées avec une solution de transfection et les ARN SI d’intérêt, le mélange est ensuite transféré sur une plaque VETE de nucléo à 96 puits et un système de transfection Maxa à 96 puits est utilisé pour transfecter les siRNA dans les macrophages et après une incubation avec culture cellulaire, Le milieu, le LPS ou d’autres activateurs de l’immunité innée sont appliqués aux macrophages transfectés pour les stimuler. Enfin, les Eliza sont ensuite effectuées pour surveiller la production de cytokines et évaluer l’effet du traitement par siRNA sur la réponse immunitaire innée.

Le principal avantage de cette technique par rapport à la transfection médiée par les lipides est que notre test est robuste et peut être appliqué à de nombreux gènes dans les professions à haut débit. La clé de cette méthode est de travailler avec des cellules saines, de les traiter doucement et de travailler efficacement pendant le processus de transfection. Comme nous allons le démontrer, ce protocole utilise la lignée cellulaire brute de macrophages de souris 2 64 0,7, qui est cultivée comme décrit dans le document d’accompagnement.