Name: La coloration histochimique de l Arabidopsis thaliana Cellule secondaire Elements mur (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-13T23:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 39 s
Description: Apprenez la coloration histochimique des parois cellulaires secondaires d'Arabidopsis thaliana. Cette méthode permet de visualiser la composition des tissus ligneux et d'étudier la structure des cellules végétales.

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Nous sommes reconnaissants à Sabin Russell pour aide à l&#39;édition. Ce travail faisait partie de l&#39;Institut mixte bioénergie DOE (http://www.jbei.org) soutenue par le Département américain de l&#39;énergie, Bureau de la science, Bureau de la recherche biologique et l&#39;environnement, par le biais du contrat DE-AC02-05CH11231 entre Lawrence Berkeley National Laboratory et l&#39;US Department of Energy.

<ol><li>Boerjan, W., Ralph, J., Baucher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lignin+biosynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+plant+biology%22%5BJournal%5D)">Lignin biosynthesis.</a> Annual review of plant biology. 54, 519-546 (2003).</li>
<li>Vanholme, R., Demedts, B., Morreel, K., Ralph, J., Boerjan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lignin+biosynthesis+and+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+physiology%22%5BJournal%5D)">Lignin biosynthesis and structure.</a> Plant physiology. 153, 895-905 (2010).</li>
<li>Humphreys, J. M., Chapple, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rewriting+the+lignin+roadmap%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+plant+biology%22%5BJournal%5D)">Rewriting the lignin roadmap.</a> Current opinion in plant biology. 5, 224-229 (2002).</li>
<li>Adler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lignin+chemistry%E2%80%94past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Wood+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Lignin chemistry—past, present and future.</a> Wood Sci. Technol. 11, 169-218 (1977).</li>
<li>Brien, T. P., Feder, N., McCully, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polychromatic+Staining+of+Plant+Cell+Walls+by+Toluidine+Blue%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Polychromatic Staining of Plant Cell Walls by Toluidine Blue.</a> 59, 368-373 (1964).</li>
<li>Mori, B., Bellani, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+staining+for+cellulosic+and+modified+plant+cell+walls%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnic+%26+histochemistry%3A+official+publication+of+the+Biological+Stain+Commission%22%5BJournal%5D)">Differential staining for cellulosic and modified plant cell walls.</a> Biotechnic & histochemistry: official publication of the Biological Stain Commission. 71, 71-72 (1996).</li>
<li>Maeda, H., Ishida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+of+binding+of+hexopyranosyl+polysaccharides+with+fluorescent+brightener%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+biochemistry%22%5BJournal%5D)">Specificity of binding of hexopyranosyl polysaccharides with fluorescent brightener.</a> Journal of biochemistry. 62, 276-278 (1967).</li>
<li>Wood, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+in+the+interaction+of+direct+dyes+with+polysaccharides%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydrate+Research%22%5BJournal%5D)">Specificity in the interaction of direct dyes with polysaccharides.</a> Carbohydrate Research. 85, 271-287 (1980).</li>
<li>Hughes, J., McCully, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+an+optical+brightener+in+the+study+of+plant+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Stain+technology%22%5BJournal%5D)">The use of an optical brightener in the study of plant structure.</a> Stain technology. 50, 319-329 (1975).</li>
<li>Verbelen, J. P., Kerstens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+confocal+microscopy+and+congo+red+fluorescence%3A+a+simple+and+rapid+method+to+determine+the+mean+cellulose+fibril+orientation+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+microscopy%22%5BJournal%5D)">Polarization confocal microscopy and congo red fluorescence: a simple and rapid method to determine the mean cellulose fibril orientation in plants.</a> Journal of microscopy. 198, 101-107 (2000).</li>
<li>Anderson, C. T., Carroll, A., Akhmetova, L., Somerville, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+cellulose+reorientation+during+cell+wall+expansion+in+Arabidopsis+roots%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+physiology%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of cellulose reorientation during cell wall expansion in Arabidopsis roots.</a> Plant physiology. 152, 787-796 (2010).</li>
<li>Liljegren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phloroglucinol+Stain+for+Lignin%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Phloroglucinol Stain for Lignin.</a> Cold Spring Harbor Protocols. , (2010).</li>
<li>Nakano, J., Meshitsuka, G., lin, S., Dence, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNakano%2C+J+%22The+Detection+of+Lignin+Methods+in+Lignin+Chemistry%22">The Detection of Lignin Methods in Lignin Chemistry</a>. , Springer-Verlag. Berlin. (1992).</li>
<li>Sibout, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CINNAMYL+ALCOHOL+DEHYDROGENASE-C+and+-D+are+the+primary+genes+involved+in+lignin+biosynthesis+in+the+floral+stem+of+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+cell%22%5BJournal%5D)">CINNAMYL ALCOHOL DEHYDROGENASE-C and -D are the primary genes involved in lignin biosynthesis in the floral stem of Arabidopsis.</a> The Plant cell. 17, 2059-2076 (2005).</li>
<li>Teather, R. M., Wood, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Congo+red-polysaccharide+interactions+in+enumeration+and+characterization+of+cellulolytic+bacteria+from+the+bovine+rumen%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+environmental+microbiology%22%5BJournal%5D)">Use of Congo red-polysaccharide interactions in enumeration and characterization of cellulolytic bacteria from the bovine rumen.</a> Applied and environmental microbiology. 43, 777-780 (1982).</li>
<li>Yeung, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beginner%27s+guide+to+the+study+of+plant+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+19th+Workshop%2FConference+of+the+Association+for+Biology+Laboratory+Education+%28ABLE%22%5BJournal%5D)">A beginner's guide to the study of plant structure.</a> Proceedings of the 19th Workshop/Conference of the Association for Biology Laboratory Education (ABLE. 19, 365-36 (1998).</li>
<li>Turner, S. R., Somerville, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collapsed+xylem+phenotype+of+Arabidopsis+identifies+mutants+deficient+in+cellulose+deposition+in+the+secondary+cell+wall%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Online%22%5BJournal%5D)">Collapsed xylem phenotype of Arabidopsis identifies mutants deficient in cellulose deposition in the secondary cell wall).</a> The Plant Cell Online. 9, 689-701 (1997).</li>
<li>Iiyama, K., Pant, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+the+M%C3%A4ule+colour+reaction.+Introduction+of+methylated+syringyl+nuclei+into+softwood+lignin%5BTitle%5D)+AND+%22Wood+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">The mechanism of the Mäule colour reaction. Introduction of methylated syringyl nuclei into softwood lignin.</a> Wood Sci. Technol. 22, 167-175 (1988).</li>
<li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+secondary+cell+wall+deposition+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+biotechnology+journal%22%5BJournal%5D)">Engineering secondary cell wall deposition in plants.</a> Plant biotechnology journal. 11, 325-335 (2013).</li>
<li>Zhong, R., Ripperger, A., Ye, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+deposition+of+lignin+in+the+pith+of+stems+of+two+Arabidopsis+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+physiology%22%5BJournal%5D)">Ectopic deposition of lignin in the pith of stems of two Arabidopsis mutants.</a> Plant physiology. 123, 59-70 (2000).</li>
<li>Chapple, C. C., Vogt, T., Ellis, B. E., Somerville, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Arabidopsis+mutant+defective+in+the+general+phenylpropanoid+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+cell%22%5BJournal%5D)">An Arabidopsis mutant defective in the general phenylpropanoid pathway.</a> The Plant cell. 4, 1413-1424 (1992).</li>
<li>Fagard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PROCUSTE1+Encodes+a+Cellulose+Synthase+Required+for+Normal+Cell+Elongation+Specifically+in+Roots+and+Dark-Grown+Hypocotyls+of+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Online%22%5BJournal%5D)">PROCUSTE1 Encodes a Cellulose Synthase Required for Normal Cell Elongation Specifically in Roots and Dark-Grown Hypocotyls of Arabidopsis.</a> The Plant Cell Online. 12, 2409-2423 (2000).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit financier à divulguer.

Sections de la tige A. thaliana sont largement utilisés pour étudier l&#39;organisation des cellules dans la paroi de la cellule secondaire et pour examiner les différences entre qualitativement type sauvage et des plantes transgéniques. Les techniques couramment utilisées pour sectionner les spécimens sont coupe de main directe; ou lorsque les spécimens sont intégrés dans agarose ou fixateur, la coupe peut être fait avec un vibratome ou microtome. A la différence de la découpe de la main, les deux derniers per...

La paroi de cellule végétale est titulaire d&#39;une pléthore d&#39;informations à l&#39;intérieur de ses divers composants: la lignine, la cellulose, les hémicelluloses (xylane, glucuronoxylane, xyloglucane, arabinoxylane, glucane de liaison mixte, ou glucomannane), et de la pectine. Techniques histologiques fournissent des repères visuels importants dans l&#39;étude des différences dans les parois secondaires au niveau organisationnel et cellulaires. Diverses techniques histologiques ont été développés et peuvent être trouvés dans la littérature, mais ces techniques peuvent être difficiles et fastidieux pour les débutants car protocoles très détaillés avec des instructions visuelles simples sont rarement, voire jamais disponible. Le but de cette étude est de fournir des lignes directrices simples pour les techniques de coloration histologique pour obtenir des images de haute qualité. Sectionner le tissu de la tige est la première étape dans la visualisation des parois cellulaires et des formes cellulaires. Bien que les sections coupées à la main sont peu coûteux et prennent moins de temps pour se préparer, l&#39;utilisation d&#39;un vibratome offre cohérence etdonne des images de haute qualité. L&#39;utilisation d&#39;un vibratome permet de produire des données de meilleure qualité en générant même des sections avec la même épaisseur, ce qui permet de produire des images nettes et réduit de manière significative le risque de produire des différences entre les échantillons inexactes qui serait tout simplement causés par une mauvaise préparation de l&#39;échantillon. Utilisation de résines pour fixer les échantillons frais peut être un défi pour les débutants et peut-être encore temps, même pour des experts quand une analyse qui doit être fait rapidement. En outre, il devient impossible de mesurer une quelconque activité biologique de l&#39;échantillon lorsqu&#39;il a été noyé dans une résine. Une technique simple qui utilise un moule d&#39;agarose et fait maison est utile pour l&#39;enrobage tissus de la tige, et elle peut également être utilisée dans d&#39;autres applications nécessitant une dissection des tissus mous. Par rapport aux échantillons enrobage dans de la résine, ce procédé présente l&#39;avantage de conserver les tissus vivants et de réduire la manipulation de l&#39;échantillon. Sectionnement des tissus par un vibratome est très précis et génère homogenUO sections, qui, en fonction de l&#39;objectif de l&#39;étude, peuvent ensuite être utilisés avec plusieurs techniques de coloration différents. Les méthodes les plus simples pour visualiser la lignine et d&#39;autres composés aromatiques emploient les rayons ultraviolets (UV). Excitation des molécules aromatiques à base de lumière UV est une technique ancienne, mais il est encore l&#39;un des plus rapides des approches pour la visualisation de la lignine. Cependant, la visualisation UV n&#39;est effectivement pas idéal pour la détection de la lignine parce que la lumière UV va exciter d&#39;autres composés aromatiques. La lignine est composé principalement de trois blocs de construction, les monolignols (alcools hydroxycinnamyl: alcool coniférylique, alcool sinapylique, et de l&#39;alcool p-coumaryl) 1-3. Phloroglucinol tache peut fournir des indices à la mesure de cinnamaldéhydes présents dans le xylème, de fibres et de tissus de la trachée 4. Phloroglucinol est un bon indicateur de cinnamaldéhydes générales et peut différencier entre cinnamaldéhydes et d&#39;autres composés aromatiques. Les monomères d&#39;alcool sinapylique peuvent être détectéset différenciées par l&#39;utilisation de Mäule taches. le bleu de toluidine O est un colorant polychromatique et a la capacité de colorer les différents éléments de la paroi cellulaire dans des couleurs différentes donc 5,6. La principale utilisation de bleu de toluidine O est de détecter la pectine et de la lignine 5,6. L&#39;avantage d&#39;utiliser le bleu de toluidine O, c&#39;est que de nombreux éléments de la paroi cellulaire peuvent être visualisés en une seule étape. Les deux calcofluor blanc et rouge Congo sont faciles à travailler et peuvent être utilisés pour visualiser la cellulose. Calcofluor taches blanches cellulose, callose, et d&#39;autres β-glucanes non-substitués ou substitués faiblement 6-9, tandis que le congo taches rouges directement à β-(1 → 4)-glucanes et notamment de cellulose 10,11. Le but de cette étude est de fournir des lignes directrices simples pour l&#39;utilisation des techniques de coloration ci-dessus pour obtenir des images de haute qualité à partir de A. thaliana tiges.

<table><tbody><tr><td>Agarose</td><td>EMD</td><td>MERC2125</td><td>Numéro CAS : 9012-36-6</td></tr><tr><td>Phloroglucinol</td><td>Sigma</td><td>P 3502</td><td>1,3,5-trihydroxybenzène [Numéro CAS : 108-73-6]</td></tr><tr><td>Acide chlorhydrique</td><td>EMD</td><td>HX0603-75</td><td>Numéro CAS : 7647-01-0</td></tr><tr><td>Hydroxyde d’ammonium</td><td>EMD</td><td>AX1303-6</td><td>Numéro CAS : 1336-21-6</td></tr><tr><td>Toulidine Blue O</td><td>Sigma</td><td>T3260</td><td>Chlorure de blétène, chlorure de tolonium [numéro CAS 92-31-9]&nbsp ;</td></tr><tr><td>Permanganate de potassium</td><td>Sigma</td><td>223468</td><td>numéro CAS 7722-64-7&nbsp ;</td></tr><tr><td>Éthanol 190 proof</td><td>KOPTEC</td><td>V1401</td><td>Numéro CAS : 64-17-5</td></tr><tr><td>Congo Red</td><td>Sigma&nbsp ;</td><td>C6277</td><td>Disodium 3,3'-[[1,1'-biphényl]-4,4'-diylbis(azo)]bis(4-aminonaphtalène 1-sulfonate) [Numéro CAS 573-58-0]</td></tr><tr><td>Azurant 28/ Calcofluor Teinture Blanche</td><td>Sigma</td><td>F3543&nbsp ;</td><td>Acide 4,4'-Bis[[4-[bis(2-hydroxyéthyl)amino]-6-anilino-1,3,5-triazin-2-yl]amino]stilbène-2,2'-disulfonique [numéro CAS 4404-43-7]&nbsp ;</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>Leica Microtome à lame vibrante</td><td>VT1000S http://www.leicabiosystems.com/products/sectioning/vibrating-blade-microtomes/details/product/leica-vt1000-s/</td></tr> <tr><td>Razor</td><td>American Safety razor company</td><td>Article # 60-0139-0000&nbsp ;</td><td>Lame à double tranchant en acier inoxydable (Personna Super)</td></tr><tr><td>Tubes de microcentrifugation à bouchon à vis (2 ml)</td><td>VWR</td><td>16466-044</td><td></td></tr><tr><td>Tubes de microcentrifugation (0,6 ml)</td><td>Axygen Scientific</td><td>MCT-060-C</td><td></td></tr><tr><td>Mitaine</td><td>Bel-Art</td><td>380000000</td><td>SCIENCEWARE&nbsp ; Hot Hand Protector Mitt</td></tr><tr><td>Adhésif en tissu</td><td>Ted Pella Inc</td><td>10033</td><td>Magasinez à 4 &deg ; C ou 20 &deg ; C pour une conservation de 3 mois ou plus</td></tr><tr><td>Micro-ondes</td><td>Panasonic</td><td>NN-SD762S</td><td>PELCO Pro CA 44 Adhésif tissulaire instantané&nbsp ;</td></tr><tr><td>Caméra avec puce CCD sans obturateur mécanique</td><td>Hamamatsu</td><td>C4742-95</td><td></td></tr><tr><td>Caméra couleur haute vitesse&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>QImaging</td><td>MicroPublisher 5.0 RTV</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel de caméra&nbsp ;</td><td>&nbsp ; Molecular Devices</td><td>MetaMorph version 7.7.0.0</td><td></td></tr><tr><td>Imaginer l’anaylsis&nbsp ;</td><td>Adobe&nbsp ;</td><td>Lunettes Photoshop CS4</td><td></td></tr><tr><td>Micro Cover, carrées, n° 1</td><td>VWR</td><td>48366-067</td><td>22 x 22 mm (7/8 x 7/8") - Les lunettes sont résistantes à la corrosion et uniformément épaisses et plates. L’épaisseur n° 1 est de 0,13 à 0,17 mm.</td></tr><tr><td>Micro lames givrées, 1 mm</td><td>VWR</td><td>48312-003</td><td>75 x 25 mm - 1 mm Emballage</td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Alcan</td><td>BRNDPM998</td><td></td></tr><tr><td>TX2 Filtre cube</td><td>Leica</td><td>11513851/11513885</td><td>Filtre utilisé pour l’analyse du rouge Congo avec une bande passante de 560/40.</td></tr></tbody></table>

la coloration histochimique de l&#39;<em&gt; arabidopsis thaliana</em&gt; cellule secondaire elements mur

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Arabidopsis thaliana est un organisme modèle couramment utilisé pour comprendre et manipuler divers processus cellulaires chez les plantes, et il a été largement utilisé dans l’étude de la formation de la paroi cellulaire secondaire. Le dépôt de la paroi cellulaire secondaire se produit après la formation de la paroi cellulaire primaire, un processus effectué exclusivement par des cellules spécialisées telles que celles formant des tissus de vaisseaux et de fibres. La plupart des parois cellulaires secondaires sont composées de cellulose (40 à 50 %), d’hémicellulose (25 à 30 %) et de lignine (20 à 30 %). Plusieurs mutations affectant la biosynthèse de la paroi cellulaire secondaire ont été isolées, et les mutants correspondants peuvent ou non présenter des changements évidents de composition biochimique ou des phénotypes visuels, car ces mutations pourraient être masquées par des réponses compensatoires. Historiquement, les procédures de coloration ont été utilisées pour montrer les différences sur une base cellulaire. Ces méthodes sont exclusivement des moyens d’analyse visuels ; Néanmoins, leur rôle dans l’analyse rapide et critique est d’une grande importance. Le rouge Congo et le blanc calcofluor sont des colorants utilisés pour détecter les polysaccharides, tandis que le Mäule et le phloroglucinol sont couramment utilisés pour déterminer les différences de lignine, et le bleu de toluidine O est utilisé pour colorer différemment les polysaccharides et la lignine. Les techniques apparemment simples de sectionnement, de coloration et d’imagerie peuvent être un défi pour les débutants. En commençant par la préparation d’échantillons à l’aide du modèle A. thaliana, cette étude détaille les protocoles d’une variété de méthodologies de coloration qui peuvent être facilement mises en œuvre pour l’observation de l’organisation cellulaire et tissulaire dans les parois cellulaires secondaires des plantes.

Tige inclusion et la coupe: L&#39;utilisation du moule en matière plastique à incorporer le fait maison tiges dans 7% d&#39;agarose révélée être rapide et facile (figure 1). Les deux parties (A et B; figure 1) du système de flacon intégré le rendent simple pour libérer facilement la tige intégré dans agarose comme l&#39;agarose ne colle pas aux parties des flacons qui sont inertes, maintenir le système propre. Les flacons peuvent être réutilisés plusieurs fois pendant des années....

La composition de la paroi cellulaire végétale varie selon les types de tissus et peut inclure la lignine, la cellulose, les hémicelluloses et la pectine. Diverses techniques de coloration ont été développées pour visualiser les différences au niveau du type de cellule. Cet article est une compilation des techniques de coloration de la paroi cellulaire couramment utilisées.

La coloration histochimique de l&#39;<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Cellule secondaire Elements mur

Arabidopsis thaliana is a model organism commonly used to understand and manipulate various cellular processes in plants, and it has been used extensively ...

L'objectif général de cette procédure est de montrer la coloration histochimique des éléments de paroi cellulaire secondaire ANA d'Arabidopsis. Cela est réalisé en premier lieu en incluant la tige de la plante dans de l'aros. Ensuite, la tige incluse dans l'aros est désenrobée et transférée vers des disques d'échantillons, qui sont ensuite coupés en sections transversales STEM à l'aide d'un vibratome.Ensuite, les sections sont soumises à diverses procédures de coloration histochimique. Finalement, la microscopie est utilisée pour révéler les modifications différentielles des éléments de la paroi cellulaire secondaire obtenues par la coloration histochimique. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés en lien avec la paroi cellulaire, telles que les modifications des tissus maculés dans les tiges des plantes.En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés, car des étapes simples mais cruciales mentionnées dans les protocoles présentés ici n'ont pas été documentées de façon approfondie ni exposées de manière simplifiée auparavant. Pour commencer, préparez un moule maison pour l'inclusion des tiges en utilisant des flacons en plastique. T

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Dans cette vidéo, nous décrivons la technique de coloration de Wiesner pour colorer la lignine présente dans des cellules végétales spécialisées. Cette technique de coloration permet de visualiser les parois cellulaires lignifiées dans les tiges d’Arabidopsis thaliana et de quantifier la lignification des parois cellulaires de différents types de cellules.

Coloration de Wiesner pour visualiser la lignine : une technique pour tacher les dépôts de lignine présents dans les tiges d’Arabidopsis thaliana

Dans cette vidéo, nous décrivons la technique de coloration Maule pour colorer la lignine syringylique présente dans les cellules végétales spécialisées. Cette technique de coloration permet de caractériser la distribution de la lignine dans le xylème et les fibres interfasciculaires.

Coloration Maule pour la lignine : une technique pour caractériser la distribution de la lignine dans les coupes de tiges d’Arabidopsis thaliana

Dans cette vidéo, nous démontrons la méthode de coloration au rouge du Congo pour visualiser les dépôts de cellulose dans les coupes de tiges d’Arabidopsis thaliana.

Coloration rouge du Congo : une technique pour visualiser les dépôts de cellulose dans les coupes de tiges de plantes

Dans cette vidéo, nous décrivons une procédure de coloration pour visualiser le dépôt de cellulose dans les parois cellulaires d’Arabidopsis thaliana, une plante dicotylédones, en utilisant du blanc de calcofluor, qui se lie spécifiquement aux glucanes liés à β, présentant une fluorescence sous la lumière UV.

Coloration blanche au calcofluor : une méthode simple pour la visualisation par fluorescence induite par les UV des dépôts de cellulose dans les parois cellulaires des sections de tiges de plantes dicotylédones

Cette vidéo présente une technique d’immunomarquage pour localiser les protéines d’arabinogalactane (AGP) et les pectines dans les tissus végétaux. Des coupes de tissus végétaux fixes et enrobées de résine sont colorées avec des anticorps primaires et secondaires fluorescents spécifiques à l’AGP et à la pectine et un colorant fluorescent liant la cellulose pour révéler leur colocalisation spécifique au tissu dans la paroi cellulaire.

Immunolocalisation des protéines d’arabinogalactane et des pectines dans les tissus végétaux

Nous fournissons ici un protocole efficace et fiable pour immunologique, hybridation fluorescente in situ, la coloration de l'ADN suivie quantitative, imagerie à haute résolution dans des ovules d'Arabidopsis thaliana l'ensemble du montage. Cette méthode a été utilisée avec succès pour analyser des modifications de la chromatine nucléaire et de l'architecture.

Une méthode efficace pour quantitative, analyse unicellulaire de la chromatine Modification et architecture nucléaire dans l&#39;ensemble du montage ovules dans<em&gt; Arabidopsis</em

Dans ce protocole, nous décrivent des techniques pour la dissection appropriée d’Arabidopsis fleurs et siliques, quelques techniques de base de compensation et sélectionné les procédures pour les observations d’entier-montent des structures reproductrices de coloration.

Entier-Montez de compensation et la coloration des Siliques et organes fleur Arabidopsis

Le but de ce protocole est de montrer comment charger la CFDA dans différents sites des parties inférieures de l' Arabidopsis. Nous présentons ensuite le modèle de distribution de CF dans les pousses.

Mouvement de la fusillade du traceur CFDA chargé dans les tissus de l’évier inférieur de l' Arabidopsis

Ce protocole décrit en détail comment le matériel végétal pour l’immunolocalisation des protéines arabinogalactan et des pectines est fixé, incorporé dans une résine acrylique hydrophilique, sectionné et monté sur des glissières en verre. Nous montrons que des épitopes liés à la paroi cellulaire seront détectés avec des anticorps spécifiques.

Immunolocalisation fluorescente des protéines arabinogalactan et des pectines dans la paroi cellulaire des tissus végétaux

Le présent protocole décrit une méthode optimisée pour l’observation histologique des galles induites par Plasmodiophora brassicae. Les sections de vibratomes d’hypocotyles sont éliminées avant l’imagerie par fluorescence pour étudier l’implication des facteurs de transcription et des phytohormones au cours de la progression de la maladie. Ce protocole surmonte les limitations d’incorporation de résine, permettant la visualisation in planta de protéines fluorescentes.

Combinaison de la microscopie de compensation et de fluorescence pour visualiser les changements dans l’expression génique et les réponses physiologiques à Plasmodiophora brassicae

Ce protocole décrit la préparation d’échantillons intacts de la couche de cellules de l’endosperme dans les graines d’Arabidopsis thaliana . La méthode ne nécessite que l’équipement de laboratoire courant, tel qu’une aiguille d’injection et des pinces de précision, et permet l’imagerie fluorescente haute résolution de cellules vivantes de cellules endospermiennes dans les graines en développement et matures.

Préparation de tissu intact pour l’analyse microscopique de la couche de cellules de l’endosperme dans des graines d’Arabidopsis en développement et matures

Apprenez la coloration histochimique des parois cellulaires secondaires d'Arabidopsis thaliana. Cette méthode permet de visualiser la composition des tissus ligneux et d'étudier la structure des cellules végétales.

La coloration histochimique de l'

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