Détermination de l'activité locomotrice spontanée, Drosophila melanogaster

L’objectif global de cette procédure est de quantifier l’activité locomotrice spontanée des mouches des fruits. Ceci est accompli en collectant et en vieillissant d’abord des mouches expérimentales. La deuxième étape consiste à installer des moniteurs de population dans un incubateur à température contrôlée et à télécharger le logiciel approprié.

Ensuite, les mouches sont transférées dans des fichiers en verre, puis placées à l’intérieur des moniteurs de population où les moniteurs d’activité sont exécutés. La dernière étape consiste à analyser les données. En fin de compte, les moniteurs de population sont utilisés pour montrer les différences dans l’activité physique spontanée des mouches.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que l’axe géographique négatif, est qu’elle permet un enregistrement continu simple, fiable et objectif de l’activité physique spontanée de plusieurs populations de mouches. Cette méthode peut nous aider à déterminer comment différentes manipulations affectent les mouches. Suzanne Kowski, une assistante de laboratoire d’un laboratoire, fera la démonstration de la procédure pour commencer à préparer les aliments selon les étapes énumérées dans le protocole de texte ci-joint et les laisser refroidir en mélangeant constamment sur une plaque chauffante.

Disposez de cinq millilitres de nourriture dans chaque flacon en verre étroit, en vous assurant que la quantité de nourriture est inférieure à l’anneau le plus bas de la population. Surveillez une fois que les aliments ont refroidi à température ambiante. Couvrez les flacons avec des bouchons éponge et maintenez-les à quatre degrés Celsius jusqu’à deux semaines.

Réchauffez les flacons à température ambiante avant utilisation. Ensuite, le Canton S cultive des mouches dans des flacons en plastique avec de la nourriture de laboratoire standard. Conservez les flacons dans une chambre humidifiée à température contrôlée à 25 degrés Celsius sur un cycle d’obscurité légère de 12 heures.

Éliminez les mouches adultes des flacons le matin. Ensuite, séparez les mouches nouvellement enfermées par sexe sur une plaque de dioxyde de carbone dans les huit heures suivant la visite pour vous assurer que les mouches femelles sont vierges. Préparez 10 flacons de mouches parentales en plaçant des mâles et des femelles vierges âgés de cinq à 10 jours.

Mouches dans un flacon alimentaire standard avec plusieurs grains de levure. Gardez les mouches dans un incubateur à 25 degrés Celsius avec un cycle d’obscurité légère de 12 heures pendant deux jours. Passez les mouches dans un nouveau flacon en plastique tous les deux jours et conservez les flacons avec les œufs obtenus dans un incubateur à 25 degrés Celsius.

Ensuite, nettoyez et jetez les mouches qu’il a fermées le premier jour et remettez les flacons dans l’incubateur pour collecter une population de mouches plus synchronisée le deuxième jour. Ensuite, sur un tampon à dioxyde de carbone, prélevez rapidement 25 mouches mâles et 25 mouches femelles par flacon avec une cuillère en métal dans les 24 heures. Notez le jour de l’ELO sur le flacon.

Assemblez au moins cinq flacons Replicate chacun. Pour les groupes expérimentaux et témoins. Conservez les flacons dans des chambres environnementales à température contrôlée à 25 degrés Celsius avec un cycle d’obscurité légère de 12 heures.

Passez les mouches dans un nouveau flacon en plastique tous les deux jours pendant 10 jours. À l’aide d’un entonnoir, placez les moniteurs de population dans un incubateur à température contrôlée. Ensuite, connectez chaque moniteur à l’aide d’un câble téléphonique à quatre fils à l’unité d’interface d’alimentation ou PSIU via un répartiteur à cinq voies.

Connectez ensuite le câble téléphonique au PSIU. Connectez le PSIU à une prise de courant de 100 à 240 volts et branchez le connecteur de sortie du bloc d’alimentation dans l’un des gax d’accouplement PSIU. Téléchargez ensuite le logiciel USB utilisé par le PSIU pour synthétiser une liaison de données entre le programme informatique et le PSIU et les moniteurs d’activité.

Démarrez le programme. Puis sous préférences. Choisissez le port série PSIU pour Macintosh.

Sélectionnez ensuite l’intervalle de lecture. Ensuite, sélectionnez les moniteurs par leur numéro de fabricant unique. Sélectionnez la plage de moniteurs qui correspond aux numéros attribués aux moniteurs.

Assurez-vous que tous les moniteurs sont correctement connectés en recherchant le voyant vert. Un voyant rouge indique que la connexion est perdue. Une boîte noire indique que le système est éteint ou que la connexion USB n’a pas été correctement établie.

Séparez les mouches mâles et femelles du même âge. Sur une plaque de dioxyde de carbone, placez 10 mouches mâles et 10 mouches femelles à température ambiante séparée. Verre vi.

Utilisez au moins trois flacons pour chaque ligne expérimentale et de contrôle, et pour chaque sexe de mouches, gardez les flacons sur le côté jusqu’à ce que les mouches se remettent du dioxyde de carbone pour s’assurer qu’elles ne se coincent pas dans la nourriture. Laissez-les pendant deux heures à température ambiante pour récupérer de l’oxyde de carbone. Placez ensuite les flacons à l’intérieur de la population.

Moniteurs logés dans les incubateurs. Passez les mouches après trois ou quatre jours dans de nouveaux flacons pour éviter le dessèchement des aliments. À la fin de l’expérience, balayez les données pour éliminer les lectures en double et assurez-vous que les enregistrements sont complets.

À l’aide de l’analyse de fichiers 110 x, sélectionnez l’intervalle de collecte des données et supprimez les données collectées dans les premières 24 heures à la période sélectionnée. Le programme enverra le décompte total actuel de chaque moniteur à l’ordinateur et recommencera à compter à partir de zéro. Ensuite, choisissez un nom expérimental et copiez les fichiers du dossier de données de l’ordinateur pour enregistrer les données.

Commencez l’analyse des données en copiant soigneusement les données collectées dans les fichiers texte dans des colonnes de feuilles de calcul Excel. Calculez ensuite l’activité totale dans une période de temps souhaitée pour chaque moniteur qui représente la somme de l’activité collectée à trois hauteurs différentes de faisceaux infrarouges. Enfin, déterminez l’activité locomotrice moyenne et l’écart-type entre les trois moniteurs qui représentent trois réplicats biologiques à l’aide du test T d’étudiant à deux queues.

L’activité locomotrice spontanée chez la drosophile dépend du sexe de la mouche et du cycle de la lumière et de l’obscurité. Comme le montre ce graphique de l’activité moyenne des mouches mâles et femelles, la flèche marque la transition de la lumière à l’obscurité. Lorsqu’une diminution de l’activité est observée, l’activité totale des mouches mâles de 20 jours augmente lorsque les mouches reçoivent la moitié de la quantité de nourriture standard dans un régime hypocalorique par rapport à la diminution de l’activité des mouches dans un régime riche en calories.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de déterminer l’activité physique spontanée de la drosophile. Cette méthode est utile pour déterminer comment différentes manipulations génétiques ou environnementales affectent l’activité des mouches.