Name: Modélisation spontanée carcinome rénal métastatique (MRCC) chez des souris après néphrectomie (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: Découvrez la modélisation du carcinome rénal métastatique spontané chez la souris par implantation orthotopique, néphrectomie et évaluation de la charge métastatique. Ce protocole standardisé permet d'étudier la progression tumorale et l'efficacité des thérapeutiques expérimentales.

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Nous sommes reconnaissants au laboratoire du Dr Robert S. Kerbel (Université de Toronto, l&#39;Institut de recherche Sunnybrook, Toronto, Canada) pour l&#39;aide technique et l&#39;expertise dans le développement de cette procédure. Nous tenons également à remercier le Dr Sandra Sexton et le Roswell Park Cancer Institute Département de Laboratory Animal Resources. Ce travail a été soutenu par une bourse de la Fondation Alliance Roswell Park (à JMLE).

1. Orthotopique tumeur du rein Implantation <ol><li> Culture cellulaire <ol><li> Avant l&#39;implantation orthotopique, cultiver des cellules de souris RENCA LUC comme une monocouche à 75% de confluence. </li><li> À la suite de traitement à la trypsine et de la remise en suspension dans des milieux contenant du FBS à 5%, les cellules de centrifugation à 1000 tpm, 4 ° C pendant 5 minutes, en répétant trois fois pour laver dans du PBS. Puis remettre en suspension les cellules dans des milieux sans sérum à une concentration de 5 x 10 4 RENCA LUC / 5 médias sans sérum ul. Remarque: Selon la variante ou lignée cellulaire utilisée, les cellules peuvent être remises en suspension dans un rapport de 1:1 de matrigel et des milieux sans sérum pour ralentir la croissance très agressif de cellules de souris et de la diffusion après l&#39;implantation. </li></ol></li><li> Chirurgie et cellule implantation Remarque: Toutes les études animales qui y sont décrits, y compris l&#39;entretien et la détermination des paramètres expérimentaux, ont été réalisées selon le Comité de protection et d&#39;utilisation des animaux institutionnels (IACUC) protocol approuvé par Roswell Park Cancer Institute. <ol><li> Anesthésier une souris Balb / C en utilisant l&#39;isoflurane (2-3%). Pincez pied et vérifier réflexe pour assurer une anesthésie suffisante. Appliquer vétérinaire pommade pour les yeux pour éviter le dessèchement. Placez la souris en décubitus latéral droit et gauche se raser entre avant et des membres postérieurs. Appliquer de l&#39;alcool et de l&#39;iode long dorsal région lombaire pour préparer de façon aseptique zone pour l&#39;incision. </li><li> Utilisez des ciseaux chirurgicaux pour lancer une incision cutanée de 1 cm dans une direction longitudinale entre la dernière côte et la hanche. Desserrer tissu conjonctif sous la peau à l&#39;aide d&#39;un ciseau dissection émoussée. Utiliser des ciseaux chirurgicaux pour effectuer une incision de 0,5 cm dans une direction longitudinale dans la paroi abdominale. Utilisez une pince courbes pour pousser doucement vers le bas autour plaie ouverte - ce sera d&#39;extérioriser les reins et permettre l&#39;immobilisation douce d&#39;organes avant l&#39;injection. </li><li> Charger la seringue Hamilton avec 5 pl du mélange de cellules préparé. Pour implan sous-capsulairestions, deux méthodes d&#39;implantation peuvent être utilisés: <ol><li> Superficiel: Parallèlement à l&#39;rein, l&#39;aiguille d&#39;insertion orientée longitudinalement sous la capsule rénale (mais au-dessus du parenchyme) avec le bord biseauté vers le haut. Une fois l&#39;aiguille est en place, injecter toutes les cellules jusqu&#39;à ce que de petites formes de bulles blanches. Retirer lentement l&#39;aiguille de la capsule et éponger immédiatement à l&#39;injection avec un coton applicateur incliné stérile pour absorber toute fuite et empêcher la diffusion cellulaire. </li><li> Interne: Avec bord biseauté vers le haut et à partir du côté opposé de rein finale de site d&#39;implantation, à insérer l&#39;aiguille à travers l&#39;intérieur du rein jusqu&#39;à ce que l&#39;aiguille est visible (pas de perforation) l&#39;espace sous-capsulaire. Injecter toutes les cellules jusqu&#39;à ce que les formes de bulles blanches et écouvillon site d&#39;injection pour éviter toute fuite. </li></ol></li><li> Retourner doucement le rein à la cavité du corps. Fermez la paroi abdominale du corps en utilisant résorbable Vicryl 5-0. Une fois terminé, retirez la couche de peau ensemble et placer 2-3 wplaies clips. S&#39;assurer que les attaches sont fermes et régulièrement espacées afin de s&#39;assurer qu&#39;aucun exposition de la plaie. Avant d&#39;administrer le recouvrement 500 ul de NaCl à 0,9% et 100 ul de la buprénorphine (0,01 mg / ml) par voie sous cutanée au moyen d&#39;une aiguille G 25. Surveiller régulièrement le placement et la stabilité clip et retirer après 10 jours. </li></ol></li></ol> 2. Néphrectomie / ablation de la tumeur primaire <ol><li> Suivez protocole identique pour l&#39;anesthésie de la souris, l&#39;immobilisation, l&#39;incision, et l&#39;exposition de rein comme décrit dans les sections 1.2.1 et 1.2.2 (ci-dessus). </li><li> Utiliser une deuxième paire de pinces d&#39;isoler les reins en retirant doucement le tissu adipeux de liaison à partir de l&#39;extrémité caudale et la glande surrénale de l&#39;extrémité crânienne du rein. Tout en saisissant doucement le rein, utilisez résorbable Vicryl 5-0 pour faire un double noeud autour de l&#39;uretère, l&#39;artère rénale, et la veine. Lentement sécurisé puis couper au-dessus du nœud à retirer le rein. Si aucun signe de perte de sang immédiatement, ou il ya un risque de prise insuffisantede suture sur l&#39;uretère, l&#39;artère et la veine, puis utilisez cauterizer au lieu de ciseaux pour couper au-dessus noeud. </li><li> Une fois le rein est retiré, vérifiez soigneusement pour des saignements de l&#39;artère liée et utiliser cauterizer si nécessaire. Fermez la paroi abdominale du corps en utilisant 5-0 Vicryl. Tirez la couche de peau ensemble et placer 2-3 des agrafes suivant mêmes précautions que décrit dans 1.2.4. Suivre de près l&#39;animal tous les jours après la chirurgie pour des signes de détresse, des saignements ou à mobilité réduite. Suivez les directives institutionnelles pour animaux en toute sécurité. </li></ol> 3. Surveillance métastatique Progression et localisation à Endpoint <ol><li> Quantification de la maladie métastatique: surveillance bioluminescentes <ol><li> Voir méthode décrite précédemment dans JOVE pour surveiller les métastases en utilisant des cellules transfectées avec la luciférase et quantifiés à l&#39;aide du système d&#39;imagerie IVIS 11,12 Xenogen. </li></ol></li><li> Guide visuel de l&#39;autopsie d&#39;évaluation comparative de la distribution métastatiquetion <ol><li> Sacrifier des animaux selon les directives institutionnelles en utilisant des paramètres, y compris des signes de détresse, respiration laborieuse, perte de poids, etc Remarque: Une surveillance étroite des animaux est essentiel que la progression métastatique spontanée peut être très variable et rapide. </li><li> Utilisez des ciseaux chirurgicaux pour lancer une incision au-dessus de l&#39;urètre qui se poursuit jusqu&#39;à la cavité thoracique de la mandibule inférieure. Utilisez des ciseaux à bouts francs à séparer la peau du muscle de la paroi abdominale. </li><li> Initier incisions le long bras et les jambes. Peel peau loin. Examiner de près l&#39;aponévrose de la peau et la paroi abdominale des nodules, puis les ganglions lymphatiques superficiels: inguinal, brachial, axillaires et cervicales superficielle. </li><li> Faire une incision dans la paroi abdominale et couper le long des côtés latéraux gauche et droit jusqu&#39;à la membrane. Avec une coupe horizontale enlever la partie avant de la paroi abdominale pour mettre à nu les viscères. </li><li> Examiner l&#39;aspect intact des viscères fou grossièrement tumeurs notables. A noter également le contenu de l&#39;estomac et des intestins; si elles sont vides, la souris peut ne pas avoir été capable de manger. Si le contenu est sombre, cela peut indiquer une hémorragie supérieure / inférieure gastro-intestinal. </li><li> Marquer visuellement chaque organe de la présence ou de l&#39;absence de la tumeur, l&#39;attribution d&#39;un score total pour chaque groupe de souris (quatre animaux par groupe est utilisé comme exemple dans la figure 1D-i). Notes: 1) l&#39;élargissement des ganglions lymphatiques ne signifie pas nécessairement qu&#39;il s&#39;agit d&#39;une croissance de la tumeur; si elle est grandement taille, très ferme, et une couleur blanchâtre, il est probable un nodule métastatique. 2) laiteux excessive ou liquide trouble dans l&#39;abdomen indique ascite. L&#39;ascite peuvent inclure des accumulations de solides sur les organes abdominaux, en particulier entre les lobes du foie et de l&#39;estomac. 3) pour des organes tels que les poumons, de multiples nodules peuvent être présents et compté pour les comparaisons entre les animaux (voir 13 par exemple). </li><li> Identifier des tumeurs ou des anomalies flagrantes des organes abdominaux individuels: foie, la rate, les reins et le pancréas par soigneusement enlever et laver avec du PBS d&#39;un vaporisateur. </li><li> Après avoir retiré les organes abdominaux, inspecter les ganglions lymphatiques abdominaux, y compris la région lombaire, sacrale, rénal, et le ganglion lymphatique mésentérique. </li><li> Évaluer diaphragme pour preuve de la dissémination métastatique. Remarque: propager largement sur ​​la membrane peut lui faire perdre sa contractilité, conduisant à travaillé ou perte de la respiration. </li><li> Retirer la membrane et faire deux incisions latérales dans la cavité thoracique, retirer la partie frontale pour exposer les poumons et le cœur. </li><li> Retirer les poumons et le cœur en saisissant délicatement et en soulevant l&#39;œsophage et la trachée coupe au-dessus du cœur. Évaluer les tissus des nodules. Pressez coeur. Manque de cohérence élastique peut indiquer une tumeur présente. </li><li> Utilisez des ciseaux chirurgicaux pour couper linéairement par crâne. Retirez délicatement les petits morceaux de crâne jusqu&#39;à ce que til tout le cerveau est exposé. Rechercher dans tout le cerveau des nodules visibles ou des anomalies des décolorations. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li>
<li>Souza, B. M., Chaves, K. B., Chammas, R., Schor, N., Bellini, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endostatin+neoadjuvant+gene+therapy+extends+survival+in+an+orthotopic+metastatic+mouse+model+of+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Endostatin neoadjuvant gene therapy extends survival in an orthotopic metastatic mouse model of renal cell carcinoma.</a> Biomed. Pharmacother. 66, 237-241 (2012).</li>
<li>Amagai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+of+interleukin-2+and+sorafenib+improves+survival+benefits+and+prevents+spontaneous+pulmonary+metastasis+in+murine+renal+cell+carcinoma+models%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn.+J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Combination therapy of interleukin-2 and sorafenib improves survival benefits and prevents spontaneous pulmonary metastasis in murine renal cell carcinoma models.</a> Jpn. J. Clin. Oncol. 40, 503-507 (2010).</li>
<li>Steeg, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Drug+Development+Must+Consider+the+Impact+on+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Preclinical Drug Development Must Consider the Impact on Metastasis.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4529-4530 (2009).</li>
<li>Guerin, E., Man, S., Xu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+postsurgical+advanced+metastatic+breast+cancer+more+accurately+replicates+the+clinical+efficacy+of+antiangiogenic+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A model of postsurgical advanced metastatic breast cancer more accurately replicates the clinical efficacy of antiangiogenic drugs.</a> Cancer Res. 73, 2743-2748 (2013).</li>
<li>Day, C. P., Carter, J., Bonomi, C., Hollingshead, M., Merlino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+therapeutic+response+of+residual+metastatic+disease+is+distinct+from+its+primary+tumor+of+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Preclinical therapeutic response of residual metastatic disease is distinct from its primary tumor of origin.</a> Int. J. Cancer. 130, 190-199 (2012).</li>
<li>Ebos, J. M., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+therapy%3A+impact+on+invasion%2C+disease+progression%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic therapy: impact on invasion, disease progression, and metastasis.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 210-221 (2011).</li>
<li>Naito, S., Walker, S. M., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+selection+of+human+renal+cell+carcinoma+cells+with+high+metastatic+potential+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">In vivo selection of human renal cell carcinoma cells with high metastatic potential in nude mice.</a> Clin. Exp. Metastasis. 7, 381-389 (1989).</li>
<li>Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+implantation+in+essential+for+the+selection%2C+growth+and+metastasis+of+human+renal+cell+cancer+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic implantation in essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 9, 145-165 (1990).</li>
<li>Saiki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+invasive+and+metastatic+phenotype+in+human+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Characterization of the invasive and metastatic phenotype in human renal cell carcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 9, 551-566 (1991).</li>
<li>Mohanty, S., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+metastasis+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Experimental metastasis assay.</a> J. Vis. Exp. 42 (1942), (2010).</li>
<li>Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+serous+ovarian+cancer+in+immunocompetent+mice+for+in+vivo+tumor+imaging+and+monitoring+of+tumor+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses.</a> J. Vis. Exp. (45), (2010).</li>
<li>Ebos, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+metastasis+after+short-term+treatment+with+a+potent+inhibitor+of+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis.</a> Cancer Cell. 15, 232-239 (2009).</li>
<li>Yang, O. C., Maxwell, P. H., Pollard, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+cell+carcinoma%3A+translational+aspects+of+metabolism+and+therapeutic+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Renal cell carcinoma: translational aspects of metabolism and therapeutic consequences.</a> Kidney Int. 84 (4), 667-681 (2013).</li>
</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Le but de ce protocole est d&#39;évaluer la maladie métastatique spontanée cliniquement pertinente en utilisant un modèle de souris de tumeur syngénique à décrire les techniques d&#39;implantation / de résection. Actuellement, la majorité des études précliniques évaluant de nouveaux traitements expérimentaux ne comprend pas l&#39;étude de la maladie métastatique et seulement quelques-uns récapituler les étapes de la croissance de la tumeur primaire, la résection chirurgicale, et une éventuelle dissémination métastatique...

La principale cause de mortalité chez les patients atteints de carcinome à cellules rénales (RCC) est une maladie métastatique systémique qui se produit généralement après l&#39;élimination chirurgicale d&#39;une tumeur primaire de plus en plus dans le rein. Cependant, très peu de modèles précliniques de tumeurs évaluation thérapeutique expérimentale chez la souris incluent la maladie métastatique, et encore moins récapitulent fidèlement les stades cliniques de croissance localisée, la chirurgie et l&#39;initiation et la progression 1-3 micro-métastatique spontanée. Cet écart dans les tests est devenu de plus en plus important dans l&#39;évaluation de nouvelles thérapies car parfois saisissants effets anti-tumeurs observés chez des modèles animaux ne sont pas toujours traduits dans le traitement similaire de patients avec succès 4. Ces différences de résultats peuvent provenir d&#39;efficacités de drogue différentiels entre les modèles extra-utérines ou orthotopiques localisées tumeur primaire et à un stade avancé métastatique 5-7. Dans le cas de RCC, seules quelques études ont établi un employéNimal protocoles qui incluent la maladie récurrente spontanée qui imite les patients qui ont eu généralement reins porteuses de tumeurs retirées totalement ou partiellement de 2,3. Les raisons de cette pénurie dans les tests de modèle de souris varient. Tout d&#39;abord, il est le coût élevé des animaux et de la variabilité inhérente à la sélection de cellules de tumeur et son potentiel métastatique. Par exemple, des lignées de cellules de rein humain ont tendance à former des métastases rarement, et doivent être choisis sur des cycles multiples de l&#39;implantation primaire orthotopique et sélection métastatique de dériver des variants qui diffusent de manière cohérente et forment des lésions éloignés (voir la description d&#39;un tel dérivé de lignée cellulaire humaine 8-10) . A l&#39;inverse, des cellules de souris dans des modèles immunocompétents ont tendance à se comporter de manière agressive, et un faible nombre de cellules doivent être injectés avec matrigel à réduire la propagation systémique immédiate 3. Deuxièmement, des difficultés techniques dans l&#39;exécution de l&#39;implantation proprement dite, la résection chirurgicale (néphrectomie), et suivi (et quantification) metastati spontanéela croissance c peut être difficile et plusieurs variables critiques besoin considération lors de l&#39;utilisation de cette technique (voir discussion pour plus de détails). Le but de ce protocole est de décrire les étapes essentielles (ainsi que les pièges potentiels) d&#39;implantation orthotopique, la résection (néphrectomie), et la surveillance de la maladie spontanée RCC métastatique et d&#39;offrir une ligne directrice pour standardisée (et plus largement) utiliser les laboratoires scientifiques qui évaluent l&#39;efficacité des traitements expérimentaux.

<table><tbody><tr><td>Glucose élevé en DMEM avec Pyr. et L-Glutamine</td><td>Corning</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>0,25 % Trypsine EDTA</td><td>Corning</td><td>25-053-CL</td><td></td></tr><tr><td>1x DPBS sans Calcium & Magnésium</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Biosciences</td><td>354234</td><td>doit être conservé sur la glace</td></tr><tr><td>Lacryma-lubrifiant artificiel pommade ophtalmique</td><td>Akorn Animal Health</td><td>17478-162-35</td><td></td></tr><tr><td>Tondeuse de poche pour animaux</td><td>de compagnie Braintree scientific</td><td>CLP9931B</td><td></td></tr><tr><td>Tampon d’alcool</td><td>VWR</td><td>326895</td><td></td></tr><tr><td>Écouvillon de solution de bétadine</td><td>VWR</td><td>67618-152-01</td><td></td></tr><tr><td>MICRO DISSECTION sciseaux droits, émoussés - Lames de 25 mm - 4.5"&nbsp ;</td><td>Pince à</td> iris chirurgicale <td>Southpointe RS-5982</td><td></td></tr><tr><td>, dentelée, incurvée, 10 cm de long</td><td>Kent scientifique</td><td>INS15915</td><td>besoin de deux de ces</td></tr><tr><td>10 &micro ; l Seringue Hamilton</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>30 G, 45 degrés, aiguille RN</td><td>Hamilton</td><td>7803-07</td><td></td></tr><tr><td>Appicateur stérile à pointe de coton</td><td>VWR</td><td>10805-144</td><td></td></tr><tr><td>Kit de cautérisation haute température</td><td>Kent scientific</td><td>INS500392</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Vicryl enduit, aiguille coupante conventionnelle&nbsp ;</td><td>Ethicon</td><td>J834</td><td></td></tr><tr><td>Applicateur de pinces réfléchissantes pour clips de 7 mm</td><td>Kent scientific</td><td>INS500343</td><td></td></tr><tr><td>Clips reflex, 7 mm, non stériles</td><td>Kent scientific</td><td>INS500344</td><td></td></tr><tr><td>Pince amovible, 12 cm de long</td><td>Kent scientific</td><td>INS500347</td><td></td></tr><tr><td>0,9 % Chlorure de sodium</td><td>Baxter Healthcare</td><td>2B1322</td><td></td></tr><tr><td>Buprénorphine 0,01 mg/ml</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aiguille 25 G 5/8"</td><td>VWR</td><td>BD305122</td><td></td></tr><tr><td>seringue de 1 ml sans aiguille</td><td>VWR</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>Gold Bio technology</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr></tbody></table>

modélisation spontanée carcinome rénal métastatique (mrcc) chez des souris après néphrectomie

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

L&#39;un des principaux obstacles à l&#39;amélioration de l&#39;essai de nouveaux traitements expérimentaux dans le carcinome à cellules rénales (RCC) est le développement de modèles qui récapitulent fidèlement la progression de la maladie métastatique précoce et à un stade avancé. Des modèles d&#39;implantation de la tumeur typiques utilisent implantation de la tumeur primaire ectopique ou orthotopique, mais peu comprennent la maladie métastatique spontanée systémique qui imite l&#39;environnement clinique. Ce protocole décrit les principales étapes pour développer la progression de la maladie RCC met en scène similaire aux patients. En premier lieu, il utilise une lignée de cellules de tumeur de souris hautement métastatique dans un modèle orthotopique syngénique pour montrer l&#39;implantation des cellules tumorales. Les méthodes comprennent l&#39;implantation superficielle et interne dans l&#39;espace sous-capsulaire avec des cellules associées à matrigel pour éviter les fuites et la propagation rapide. Ensuite, il décrit les procédures pour l&#39;excision de la tumeur portant rein (néphrectomie), les soins de la souris pré-et post-opératoire critique. Enfin, il décrit les étapes nécessaires pour surveiller et évaluermicro-et macro progression de la maladie métastatique, y compris l&#39;imagerie de bioluminescence ainsi fournit un guide détaillé de l&#39;autopsie visuelle de marquer distribution de la maladie systémique. Le but de cette description du protocole est de faciliter l&#39;utilisation généralisée de modèles de CCR métastatiques cliniquement pertinentes pour améliorer la valeur prédictive du test thérapeutique futur.

La figure 1A montre un schéma décrivant les procédures décrites dans ce résumé du protocole. Plusieurs facteurs importants doivent être pris en considération à chaque étape. Par exemple, dans l&#39;étape 1, on montre deux méthodes pour l&#39;implantation des cellules tumorales sous-capsulaire dans le rein. Les cellules tumorales peuvent être implantés dans l&#39;espace sous-capsulaire avec un petit blanc-bulle confirmant le placement localisée des cellules avec fuite empêché par l&#39;élimination soigne...

Les modèles de métastases de carcinome à cellules rénales (RCC), la progression de la maladie spontanée peuvent être utilisées pour l&#39;évaluation des traitements dans un cadre clinique. Ce protocole illustre différentes procédures d&#39;implantation orthotopique de cellules de tumeur du rein, une néphrectomie proprement dit, et présente enfin un guide de notation visuelle de l&#39;autopsie et bioluminescent de charge métastatique et de la localisation.

Modélisation spontanée carcinome rénal métastatique (MRCC) chez des souris après néphrectomie

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

L'objectif général de cette procédure est de générer un carcinome rénal métastatique spontané cliniquement pertinent. Cela est réalisé en préparant d'abord les cellules reka Luke pour l'implantation. La deuxième étape consiste à effectuer une implantation orthotopique de cellules tumorales dans le rein.Ensuite, une fois la tumeur développée, la tumeur primitive est retirée par une néphrectomie. La dernière étape consiste à surveiller la progression métastatique spontanée après néphrectomie et à évaluer la répartition de la maladie dans divers emplacements. En définitive, ce protocole permet de suivre l'évolution de la carcinose rénale métastatique spontanée et offre une ligne directrice pour standardiser l'évaluation de l'efficacité de traitements expérimentaux.L'avantage principal de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que l'implantation ectopique, souvent superficielle ou sous-cutanée, de cellules tumorales, est qu'elle reproduit le carcinome des cellules rénales, ou CCR, tel qu'il se présente chez les patients, y compris la capacité des cellules tumorales à se disséminer dans l'organisme. Les implications de cette technique s'étendent au traitement du carcinome des cellules rénales, car c'est la maladie métastatique systémique qui constitue véritablement la cause principale de mortalité chez les patients. Les modèles murins ne traitent généralement pas la maladie métastatique spontanée pouvant parfois survenir après une néphrectomie.Bien que cette méthode puisse fournir des informations sur la maladie de CCR métastatique spontanée, elle peut également être appliquée à d'autres types de cancer où l'ablation de la tumeur primitive est habituelle et où la principale cause de mortalité est la récidive de la maladie métastatique post-chirurgicale. Cela inclut les modèles de cancer du sein et de mélanome, entre autres.En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés en raison, premièrement, de la difficulté à localiser le rein et à s'assurer que les cellules tumorales restent localisées après l'implantation et ne fuient pas. Et deuxièmement, de l'efficacité de la méthode qui doit être réalisée de manière efficace et permettre une récupération post-chirurgicale. Avant l'implantation orthotopique, cultiver les cellules reca marquées à la luciférase de souris ou les cellules reka Luke en monocouche jusqu'à une confluence de 75 % ; après trypsination, les centrifuger et les resuspendre dans un milieu contenant 5 % de FBS, puis répéter trois fois les lavages en PBS ; ensuite, resuspendre les cellules dans un milieu sans sérum à une concentration de cinq fois 10 à la puissance quatre renco Luke par cinq microlitres de milieu sans sérum.Après avoir anesthésié un rat de mer intestinal avec 2 à 3 % d'isoflurane, pincez un pied pour vérifier l'anesthésie suffisante après avoir appliqué une pommade vétérinaire sur les yeux afin d'éviter le dessèchement, placez le rat en décubitus latéral droit et rasez le côté gauche entre les membres antérieurs et postérieurs. Appliquez ensuite de l'alcool et de l'iodine sur la région lombaire dorsale. Utilisez des ciseaux chirurgicaux pour pratiquer une incision cutanée d'un centimètre de long dans le sens longitudinal entre la dernière côte et l'articulation de la hanche.Ensuite, utilisez des ciseaux de dissection contondants pour desserrer le tissu conjonctif sous la peau. Puis, utilisez des ciseaux chirurgicaux pour pratiquer une incision de 0,5 centimètre dans le sens longitudinal de la paroi abdominale. Utilisez maintenant une pince courbe pour repousser doucement les tissus autour de la plaie ouverte.Cette manipulation permet d'extérioriser le rein et d'immobiliser délicatement l'organe avant l'injection. Chargerez une seringue Hamilton avec cinq microlitres du mélange cellulaire préparé pour une implantation sous-capsulaire superficielle. Tenez l'aiguille parallèlement au rein orienté longitudinalement, avec le bord biseauté vers le haut, puis insérez l'aiguille sous la capsule rénale, mais au-dessus du parenchyme.Une fois l'aiguille en place, injectez toutes les cellules jusqu'à l'apparition d'une petite bulle blanche. Retirez lentement l'aiguille de la capsule et utilisez immédiatement un applicateur stérile avec une extrémité en coton pour obstruer le site d'injection afin d'obtenir une implantation souscapsulaire interne. Commencez par le côté du rein opposé au site d'implantation souhaité.Tenez l'aiguille avec le bord biseauté vers le haut et vers l'intérieur. Insérez-la à travers l'intérieur du rein jusqu'à ce que l'aiguille soit visible, sans toutefois percer l'espace sous-capsulaire du côté opposé. Injectez les cellules jusqu'à la formation d'une bulle blanche, puis tamponnez le site d'injection pour éviter toute fuite.Replacer délicatement le rein dans la cavité corporelle. Fermer la paroi abdominale à l’aide d’un fil de suture résorbable Vicryl 5.0. Une fois cette étape terminée, maintenir ensemble les bords de la peau et poser deux à trois agrafes chirurgicales avant la récupération.Administrer 500 microlitres de chlorure de sodium à 0,9 % et 100 microlitres de buprénorphine par voie sous-cutanée. 26 à 30 jours après l'implantation, anesthésier l'animal et exposer le rein comme précédemment. Ensuite, utiliser une pince pour retirer délicatement le tissu adipeux de connexion à l'extrémité caudale du rein et enlever la glande surrénale à l'extrémité crâniale.Utilisez une pince pour saisir délicatement le rein, puis faites glisser une suture résorbable Vicryl 5.0 autour de l'uretère, de l'artère rénale et de la veine rénale. Ensuite, faites lentement un nœud double après avoir pincé les fils avec des pinces hémostatiques. Utilisez des ciseaux pour couper au-dessus du nœud et retirer le rein.Une fois que le rein a été retiré, vérifiez attentivement tout saignement provenant de la ligature, de l'artère, et effectuez une cautérisation si nécessaire. Après avoir suturé la paroi abdominale avec du Vicryl 5,0, utilisez des agrafes chirurgicales pour fermer la peau. Surveillez l'animal quotidiennement afin de détecter tout signe de détresse, de saignement ou de mobilité réduite.Après avoir euthanasié l'animal, utilisez des ciseaux chirurgicaux pour pratiquer une incision commençant au-dessus de l'urètre et se prolongeant jusqu'à la cavité thoracique jusqu'à la mandibule inférieure. Utilisez des ciseaux à extrémité émoussée pour séparer la peau du muscle de la paroi abdominale. Ensuite, coupez la peau le long des bras et des jambes et retirez lentement la peau.Examinez attentivement la fascia cutanée et la paroi abdominale à la recherche de nodules. Ensuite, examinez les ganglions lymphatiques superficiels. Pratiquez une incision dans la paroi abdominale et coupez le long des côtés latéraux gauche et droit jusqu'au diaphragme.Par une incision horizontale, retirer la partie antérieure de la paroi abdominale afin d'exposer les viscères. Examiner l'aspect des viscères non perturbés afin de détecter d'éventuelles tumeurs visibles à l'œil nu.Remarquer également le contenu de l'estomac et des intestins afin de détecter des traces de nourriture ou d'hémorragie. Évaluer visuellement chaque organe quant à la présence ou à l'absence de tumeurs en se référant à une liste de contrôle comportant 22 sites ; les résultats sont ensuite regroupés pour les animaux d'un groupe donné afin de comparer la répartition de la maladie. Retirer ensuite soigneusement le foie et le rincer au PBS.Ensuite, examinez-le à la recherche de tumeurs macroscopiques ou d'anomalies et attribuez-lui un score comme précédemment. Puis, procédez à l'ablation et au score de la rate, du rein et du pancréas. Ensuite, inspectez les ganglions lymphatiques abdominaux, notamment les ganglions lymphatiques lombosacrés, rénaux et mésentériques.Après avoir évalué le diaphragme pour détecter tout signe de propagation métastatique, retirez le diaphragme et effectuez deux incisions latérales dans la cavité thoracique, en enlevant la partie frontale afin d'exposer les poumons et le cœur. Soulevez délicatement l'œsophage et sectionnez la trachée au-dessus du cœur. Après avoir retiré les poumons et le cœur, examinez les tissus à la recherche de nodules. Ensuite, utilisez une pince pour comprimer le cœur.Un manque de consistance élastique peut indiquer la présence d'une tumeur. Enfin, utilisez des ciseaux chirurgicaux pour inciser linéairement le crâne. Retirez délicatement de petits morceaux de crâne jusqu'à ce que l'ensemble du cerveau soit exposé.Un système de notation visuelle a été utilisé pour évaluer la maladie, la distribution et la gravité de la maladie dans cinq groupes différents d'animaux. Ces groupes présentaient une étendue et une gravité de la maladie différentes. Une mesure supplémentaire, consistant en un examen d'imagerie bioluminescente immédiatement après l'euthanasie, a été utilisée pour évaluer quantitativement les lésions métastatiques microscopiques et macroscopiques.Une fois maîtrisées, l'implantation, la néphrectomie ou la nécropsie peuvent être réalisées en cinq à dix minutes par animal, si elles sont effectuées correctement. Pour examiner si les réponses au traitement diffèrent entre les types de cellules tumorales métastatiques. Cellules issues d'un carcinome rénal métastatique.Des patients sont actuellement utilisés pour être implantés directement chez des animaux afin d'évaluer la croissance de la maladie locale et métastatique après son développement. Cette technique a permis aux chercheurs dans le domaine du CCR d'explorer la progression de la maladie cliniquement pertinente et les réponses au traitement. En particulier, si ces réponses diffèrent selon que la maladie est localisée primaire ou en croissance métastatique spontanée.N'oubliez pas que le travail avec de petits animaux subissant plusieurs interventions chirurgicales exige le strict respect des directives institutionnelles relatives aux protocoles animaux et des conditions stériles. Le confort de l'animal et sa récupération sont des variables essentielles à prendre en compte correctement lors de cette procédure.

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