Name: Bicouche lipidique des vésicules génération utilisant microfluidique jets (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Apprenez à générer des vésicules à bicouche lipidique par microfluidique à jets pour la biophysique et la biotechnologie. Cette méthode permet un contrôle précis de l'asymétrie membranaire et de l'encapsulation.

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Nous remercions Mike Vahey de la Fletcher Lab de l&#39;Université de Californie, Berkeley pour obtenir des conseils sur les paramètres de microjetting. Ce travail a été soutenu par NIH DP2 HL117748-01.

Une. Infinity Chambre Fabrication <ol><li> Concevoir la chambre de l&#39;infini (du nom de sa forme) en utilisant un ordinateur de conception assistée (CAO), et enregistrer le fichier tel qu&#39;il est compatible avec un cutter laser. Pour créer cette forme, séparés deux cercles de diamètre 0,183 à une distance de centre à centre de 0,15 po Couper la chambre de 1/8- 3/16 en acrylique clair avec la découpe au laser. La forme de l&#39;infini facilite l&#39;interface gouttelette formation bicouche et la stabilité. </li><li> Percez un trou de 1/16 en passant par le bord de la chambre à l&#39;acrylique et en forme de l&#39;infini. Répéter l&#39;opération sur le côté opposé. Couper un petit rectangle d&#39;une feuille acrylique de 0,2 mm avec des ciseaux ou un couteau à laser pour servir de fond dans les puits. </li><li> Appliquer une fine couche de colle, mais complète à séchage rapide à un côté de l&#39;acrylique de 0,2 mm et il colle à la partie inférieure de la chambre. Maintenir l&#39;acrylique de 0,2 mm fermement en place contre le fond de la chambre et distribuerla colle à l&#39;interface pour permettre à la colle pour créer un joint, mais éviter de couvrir la zone de visualisation. Veiller à aligner l&#39;acrylique de telle sorte que son bord est de niveau avec le bord de la paroi de la chambre et qu&#39;il recouvre complètement la découpe de la chambre de débordement. Ceci permettra une pénétration suffisante de jet et d&#39;éviter les fuites du puits. </li><li> Couper deux petits morceaux de caoutchouc naturel pour couvrir les trous percés. Appliquer la colle à séchage rapide autour du trou. Placez le caoutchouc sur le trou et appuyez sur tous les domaines avec une paire de pinces pour le fixer. Répétez l&#39;opération pour les deux trous percés. Assurez-vous que toutes les connexions sont joints collés complètes de manière à éviter toute fuite. </li><li> L&#39;utilisation d&#39;un 23 G, dans une aiguille, percer un trou dans le caoutchouc naturel des deux côtés de la chambre pour faciliter l&#39;insertion de la pointe de jet d&#39;encre piézo-électrique. </li></ol> 2. Préparation expérimentale Conserver la solution stock de lipides dans le chloroforme dans un congélateur à -20 ° C. Pour cette étude, soit le 1,2-diphytanoyl-sn-glycéro-3-phosphocholine (DPhPC) ou le 1,2-dioléoyl-sn-glycéro-3-phosphocholine (DOPC) a été utilisé. 2 ml de 25 mg / ml solution lipidique est généralement préparé dans ce protocole et durera deux mois lorsqu&#39;il est conservé à -20 ° C. <ol><li> Pour remettre le lipide dans le n-décane, d&#39;abord transférer à partir d&#39;un tube de réserve à un petit pot de verre, et doucement sec sous argon ou de l&#39;azote. Tenir le pot à un angle tout en séchant à exposer plus de surface pour le gaz, permettant le lipide à sécher plus vite. </li><li> Avec le capuchon de la fiole que légèrement vissé sur, laisser la solution reposer séché sous vide dans un dessiccateur pendant 1 à 2 h. Puis ajouter le n-décane à resolubiliser le lipide à 25 mg / ml. Vortex la solution lipidique brièvement et soniquer dans un bain sonique pendant 15 min. Stocker les lipides reconstitué dans le n-décane à -20 ° C. </li><li> Préparer une solution stock de saccharose. Dans un tube à centrifugation de 1,5 ml, ajouter 900 ul de 300 mM de saccharose et 100 plde 1% de méthylcellulose (MC). La méthylcellulose est ajoutée pour augmenter la viscosité de la solution, ce qui facilite la projection. Étape facultative: Ajouter un option 1 pl de colorant alimentaire de couleur sombre ou des billes fluorescentes de prêter plus de contraste ou de la fluorescence en imagerie, respectivement. Cette solution est une solution 300 mOsm de saccharose conçu pour correspondre à osmolarité cellulaire et de fournir un contraste pendant microjetting. </li><li> Aspirer la solution dans un jetable 1 ml seringue en plastique. En tenant la seringue avec la pointe vers le haut, faites glisser l&#39;arbre à plusieurs reprises pour chasser les bulles vers la pointe, et pousser le piston pour éjecter l&#39;air emprisonné. Assurez-vous d&#39;évacuer tout l&#39;air de la seringue avant de procéder, comme il va interférer avec la contraction piézoélectrique bon responsable de jet. </li><li> Installer un filtre de 0,22 um à l&#39;extrémité de la seringue. Pour empêcher l&#39;air d&#39;être piégées dans le filtre, tenir la seringue verticalement et pousser le piston jusqu&#39;à ce qu&#39;une goutte est formée au-dessus de la pointe. Note: A33 mm unité de filtre de seringue de diamètre a été trouvé pour fonctionner au mieux, mais d&#39;autres filtres que la taille d&#39;un filtre à seringue de 3 mm de diamètre peut être utilisé pour réduire le volume mort. </li><li> Dévissez l&#39;adaptateur Luer femelle du jet d&#39;encre, et en toute sécurité presser en place sur l&#39;extrémité du filtre. Encore une fois, éjecter un fluide pour éviter d&#39;emprisonner l&#39;air. Visser dans le haut de la jet d&#39;encre. Liquide doit se rendre à la pointe de l&#39;encre après qu&#39;il soit complètement fixé. </li></ol> 3. Préparant l&#39;équipement <ol><li> Avec utilisation d&#39;un serre-joint, monter l&#39;ensemble de seringue sur la platine du microscope. Fixez le fil de l&#39;encre sur le contrôleur de jet d&#39;encre. Remarque: Une étape de la coutume a été construit pour ce protocole, tandis que la mise en scène peut être déterminée par l&#39;utilisateur, il est essentiel d&#39;avoir le contrôle de xyz indépendant de la seringue et le contrôle xy du porte-échantillon. </li><li> Déterminer le grossissement et la combinaison de la lentille nécessaire pour obtenir l&#39;image souhaitée. Voici un objectif 10X et 10X oculaire sont utilisés. </li&gt; <li> Utilisez un appareil photo à haute vitesse (≥ 1.000 images par seconde) pour visualiser la projection et la génération de la vésicule. Avant imagerie, effectuer l&#39;étalonnage de l&#39;appareil nécessaire. Utiliser basée sur l&#39;image auto-déclenchement dans le logiciel de la caméra de lancer la capture d&#39;image. </li><li> Montez la chambre de l&#39;infini sur la platine du microscope. Fixez la chambre par le coller en place sur la scène. </li><li> Alignez soigneusement la pointe de jet d&#39;encre avec le trou percé dans le caoutchouc naturel (voir figure 1b). Pour ce faire, amener le jet d&#39;encre à proximité de la chambre et ajuster le positionnement à l&#39;oeil, puis faire des ajustements plus précis à travers la lentille de microscope. Procéder avec prudence, que les mouvements secondaires peuvent endommager la pointe de jet d&#39;encre. </li><li> Une fois que le jet d&#39;encre est aligné, sauvegarder l&#39;ensemble de seringue loin de la chambre pour éviter tout dommage à l&#39;encre pendant le chargement des puits. Assurez-vous que le mouvement du jet d&#39;encre est unidirectionnel de sorte qu&#39;elle reste alignée avec le trou dans la membrane. </li><li> Appuyez doucement sur la PLUNger de l&#39;ensemble de seringue jusqu&#39;à une petite forme de gouttelettes à la buse à jet d&#39;encre. Cela donnera une certaine contre-pression initiale. </li><li> Saisissez les paramètres de jets. Pour une onde bipolaire trapézoïdale, utilisez les paramètres suivants: 20 kHz de fréquence d&#39;impulsion, 3 temps ps de montée, 35 durée us d&#39;impulsion, 3 temps ps d&#39;automne, 65 V tension appliquée (impulsion d&#39;amplitude), et 100 impulsions de jet par déclenchement (nombre d&#39;impulsions) . Cependant, la tension appliquée (d&#39;amplitude des impulsions) et le nombre d&#39;impulsions (impulsions de jet par déclenchement) peuvent être modifiées pour contrôler la taille des vésicules. </li></ol> 4. Vésicule génération <ol><li> Ajouter la solution de lipide de 25 à 30 ul de suspension dans le n-décane à la chambre de débordement, qui couvre la surface entière des deux puits. </li><li> Ajouter 25 ul de glucose (de même osmolarité que la solution de saccharose) et le bord le plus extérieur d&#39;un puits, le pipetage lentement et sans à-coup. Lors du dépôt, une goutte de glucose doit former, parce que le glucose et la solution de lipide ne se mélangent pas. Ajoutez un autre 251, l de glucose à l&#39;opposé et, ce qui fera un autre goutte et former la membrane de la double couche lipidique dans le milieu de la chambre à l&#39;intérieur de 5 à 10 min. </li><li> Insérez le jet d&#39;encre à travers le caoutchouc naturel, et de guider avec précaution vers la bicouche interface gouttelette. Approche de la bicouche lentement, comme le jet d&#39;encre introduite supplantera volume et peut se rompre la bicouche. </li><li> Lorsque le jet d&#39;encre est à ~ 200 um, appliquer la projection avec les paramètres décrits dans l&#39;étape 3.8. La distance de la bicouche peut varier principalement en fonction de la tension et du nombre d&#39;impulsions, entre autres paramètres. Ce protocole recommande de plus en plus lentement paramètres (tension et le nombre d&#39;impulsions) et en observant la déformation de la bicouche. </li></ol> 5. Nettoyage de l&#39;équipement <ol><li> Détachez l&#39;ensemble de seringue de la platine du microscope, et de disposer de la 1 ml seringue de plastique et le filtre. </li><li> Pour nettoyer le jet d&#39;encre, aspirer les solutions suivantes dans l&#39;ordre en plongeant la pointe dans le solution 7-10x chaque: 70% d&#39;éthanol, solution à 2% Neutrad dans l&#39;eau chaude, 70% d&#39;éthanol, et le trou DDH 2 O. Si le jet d&#39;encre ne tient pas bien sur la pipette d&#39;aspiration, couper une pointe de pipette pour former un adaptateur. </li><li> Séchez la chambre avec le tissu. Placez la chambre de l&#39;infini dans un bécher de 250 ml avec 2% v / v Neutrad dans l&#39;eau chaude, et de traitement par ultrasons pendant 5-10 min. Après sonication, sécher les puits sous air comprimé. Toute trace d&#39;humidité dans les puits peut compromettre la stabilité de la membrane de type bicouche lipidique, de sorte qu&#39;il est également recommandé que les chambres sont placées dans une étuve à 60 ° C pendant 15 min. </li></ol>

<ol><li>Liu, A. P., Fletcher, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+under+construction%3A+in+vitro+reconstitution+of+cellular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Biology under construction: in vitro reconstitution of cellular function.</a> Nature reviews. Mol. Cell Biol. 10, 644-650 (2009).</li>
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<li>Stachowiak, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilamellar+vesicle+formation+and+encapsulation+by+microfluidic+jetting%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Unilamellar vesicle formation and encapsulation by microfluidic jetting.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 4697-4702 (2008).</li>
<li>Osaki, T., Yoshizawa, S., Kawano, R., Sasaki, H., Takeuchi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid-coated+microdroplet+array+for+in+vitro+protein+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Lipid-coated microdroplet array for in vitro protein synthesis.</a> Anal. Chem. 83, 3186-3191 (2011).</li>
<li>Liu, A. P., Fletcher, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+polymerization+serves+as+a+membrane+domain+switch+in+model+lipid+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Actin polymerization serves as a membrane domain switch in model lipid bilayers.</a> Biophys. J. 91, 4064-4070 (2006).</li>
</ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

De nombreuses techniques ont été mises au point pour la production de vésicules, comprenant électroformation, d&#39;émulsion, et la génération de gouttelettes de 14 à 16. Cependant, de nouvelles techniques expérimentales sont nécessaires pour permettre la conception de systèmes biologiques avec une similitude de plus en plus de systèmes vivants. Méthodes microfluidiques, en particulier, ont offert un niveau accru de contrôle régissant unilamellarity de membrane, monodispersité de la taille, et le contenu inte...

<html> Il est devenu de plus en plus clair que la biologie cellulaire est un problème multi-échelle qui consiste à intégrer notre compréhension des molécules aux cellules. Par conséquent, savoir précisément comment les molécules travaillent individuellement n&#39;est pas suffisante pour comprendre les comportements cellulaires complexes. Ceci est partiellement dû à l&#39;existence de comportements émergents de systèmes multi-composants, comme en témoigne la reconstitution de l&#39;actine interaction avec le réseau avec des vésicules bicouches lipidiques 4, l&#39;assemblage du fuseau mitotique dans Xenopus extrait 5, et la dynamique spatiale de bactéries mécanismes de la division cellulaire 6. Une façon de compléter l&#39;approche réductionniste de disséquer les mécanismes moléculaires des systèmes vivants est de prendre la démarche inverse de reconstituer les comportements cellulaires en utilisant un ensemble minimal de composants biologiques. Une partie essentielle de cette approche implique l&#39;encapsulation fiable de biomolécules dans un volume confiné, un élément clé de la cellule. e_content &quot;&gt; Il existe plusieurs stratégies pour encapsuler des biomolécules pour l&#39;étude de systèmes biomimétiques. Le système le plus d&#39;intérêt biologique est membranes bicouches lipidiques, qui imitent les contraintes biochimiques et physiques imposées par la membrane plasmique de la cellule. formation de vésicules unilamellaires géantes (les GUVS) par électroformation 7, l&#39;une des techniques les plus largement utilisés pour la production d&#39;GUV 14, a généralement un rendement d&#39;encapsulation pauvres en raison de son incompatibilité avec le tampon de sel trop élevée 8. électroformation exige aussi grands volumes d&#39;échantillons (&gt; 100 pi), ce qui pourrait être un problème pour travailler avec des protéines purifiées , et incorpore de manière inefficace grandes molécules en raison de la difficulté de diffusion entre les couches lipidiques peu espacées. Plusieurs approches microfluidiques pour générer des vésicules lipidiques ont été développés. Les procédés de double émulsion, qui passent des composants par l&#39;intermédiaire de deux interfaces entre les couches d&#39;eau-huile-eau (W / O / W), repose sur l&#39;évaporation d&#39;un volatile solvant pour conduire lipides formation bicouche 9. D&#39;autres ont utilisé une ligne d&#39;assemblage microfluidique qui produit un courant continu de vésicules bicouches lipidiques 10 ou en deux étapes indépendantes 11. Nous avons mis au point une autre technique basée sur l&#39;application d&#39;impulsions de fluide rapide contre une bicouche d&#39;interface des gouttelettes 12 pour produire GUVs de taille contrôlée, la composition, et l&#39;encapsulation. Notre approche, connue sous le nom de jet microfluidique, offre les avantages combinés de plusieurs techniques existantes de production de vésicules, fournissant une approche pour créer des systèmes biomoléculaires fonctionnels pour enquêter sur une série de problèmes biologiques.

<table><tbody><tr><td>Jet d’encre piézoélectrique</td><td>MicroFab Technologies</td><td>MJ-AL-01-xxx</td><td>xxx indique le diamètre de l’orifice en microns</td></tr><tr><td>Contrôleur Jet Drive III</td><td>MicroFab Technologies</td><td>CT-M3-02</td><td></td></tr><tr><td>Caméra haute vitesse</td><td>Vision Research</td><td>MiroEX2</td><td></td></tr><tr><td>DPhPC lipide sous chloroforme</td><td>Avanti</td><td>850356C</td><td>Commandé en petites aliquotes en flacons</td></tr><tr><td>PVDF 33 mm filtres, 0,2 & micro ; m</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGV033RS</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Seringues</td><td>Fisher Scientific</td><td>14823434</td><td></td></tr><tr><td>n-Decane</td><td>Acros Organics</td><td>111871000</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Acros Organics</td><td>410950010</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma-Aldrich Sigma-Aldrich</td><td>S7903-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Méthylcellulose</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9084958</td><td></td></tr><tr><td>1/8 po Acrylique</td><td>McMaster Carr</td><td>8560K239</td><td>Des conceptions CAO pour la chambre en forme d’infini sont disponibles sur demande</td></tr><tr><td>0,2 mm Acrylique</td><td>Astra Products</td><td>Clarex clear 001</td><td></td></tr><tr><td>Acrylic Cement</td><td>TAP Plastics</td><td>10693</td> Loctite 495 <td></td></tr><tr><td>Superglue</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9011323</td><td></td></tr><tr><td>Loctite 3494 Stroboscopes adhésifs de renforcement UV</td><td> Approvisionnement</td><td>30765</td><td></td></tr><tr><td>Caoutchouc naturel</td><td>McMaster Carr</td><td>85995K14</td><td></td></tr><tr><td>Des conceptions CAO</td> <td>maison N</td><td>/A</td> de<td>scène personnalisée</td> sont disponibles sur demande</tr></tbody></table>

bicouche lipidique des vésicules génération utilisant microfluidique jets

Lipid Bilayer Vesicle Generation Using Microfluidic Jetting

Bottom-up biologie synthétique présente une nouvelle approche pour l&#39;étude et la reconstitution des systèmes biochimiques et, potentiellement, les organismes minimes. Ce domaine émergent engage des ingénieurs, des chimistes, des biologistes et physiciens de concevoir et assembler des composants biologiques de base dans les systèmes complexes, fonctionnant de bas en haut. Ces systèmes bottom-up pourraient conduire à l&#39;élaboration de cellules artificielles pour des enquêtes biologiques fondamentales et des thérapeutiques innovantes 1,2. Vésicules unilamellaires géants (GUVS) peuvent servir de plate-forme de modèle pour la biologie synthétique en raison de leur structure et la taille membrane cellulaire comme. Éjection microfluidique, ou microjetting, est une technique qui permet la génération de GUVs de taille contrôlée, la composition de la membrane, une protéine transmembranaire de constitution, et l&#39;encapsulation 3. Le principe de base de cette méthode est l&#39;utilisation de plusieurs, des impulsions de fluide à haute fréquence générés par un dispositif à jet d&#39;encre piézo-actionné pour déformer une suspendu lbicouche ipid dans une GUV. Le processus est semblable à des bulles de savon à partir d&#39;un film de savon. En faisant varier la composition de la solution à jets, la composition de la solution globale, et / ou les composants inclus dans la bicouche, les chercheurs peuvent appliquer cette technique pour créer des vésicules personnalisés. Cet article décrit la procédure pour générer des vésicules simples à partir d&#39;un bicouche d&#39;interface de gouttelettes par microjetting.

Nous avons assemblé une configuration de jet microfluidique sur un microscope inversé à fluorescence conventionnelle avec une scène personnalisée assemblé à partir de pièces usinées et des micromètres manuels (Figure 1). Caractérisation du jet d&#39;encre permet de mieux comprendre le processus de génération de la vésicule. Faire varier la distance entre la buse à jet d&#39;encre bicouche lipidique et affecte la force appliquée pour provoquer une déformation de la membrane. La proximité de la bicouche s...

Jet microfluidique contre une bicouche lipidique de l&#39;interface des gouttelettes fournit un moyen fiable pour générer des vésicules avec le contrôle de l&#39;asymétrie de la membrane, l&#39;incorporation de protéines transmembranaires, et l&#39;encapsulation des matériaux. Cette technique peut être appliquée pour étudier une variété de systèmes biologiques où les biomolécules compartimentés sont souhaitées.

Bicouche lipidique des vésicules génération utilisant microfluidique jets

Bottom-up synthetic biology presents a novel approach for investigating and reconstituting biochemical systems and, potentially, minimal organisms. This ...

L'objectif général de cette procédure est de générer des vésicules à bicouche phospholipidique en exerçant un contrôle accru sur la membrane, l'unla, la molarité, la monodispersité et les composants internes. À l'aide d'un cad, une chambre est fabriquée à partir de feuilles d'acrylique et de caoutchouc naturel. Une bicouche lipidique suspendue est produite en chargeant la chambre avec des lipides et une solution.Ensuite, une imprimante à jet d'encre contenant la solution à encapsuler est installée avec l'appareil de pulvérisation. Une fois les paramètres appropriés établis, les impulsions de fluide pulvérisé produiront des vésicules à bicouche lipidique. En fin de compte, la pulvérisation microfluidique permet d'obtenir des vésicules à bicouche uniformes et reproductibles.L'avantage principal de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que l'électroformation, l'émulsion ou la génération de gouttelettes réside dans le niveau accru de contrôle exercé sur la membrane, la molarité unilatérale, la monodispersité et le contenu interne. La procédure sera démontrée par Johanna Harrow, étudiante diplômée d'un laboratoire, et sera assistée par Kara Patel, étudiante de premi

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Bicouches lipidiques supportées et des particules de la membrane sont des systèmes physiques avantageuses qui peuvent rapprocher les propriétés des membranes des cellules et être incorporés dans une variété de stratégies d'analyse. Nous démontrons ici un procédé pour préparer des microréseaux composées de bicouches lipidiques supportées revêtu de SiO 2, des perles ou des particules des vésicules de phospholipides membranaires naturelles.

Formation de biomembrane puces à ADN avec une méthode Assemblée basée à raclette

Nous décrivons un protocole de préparation de bicouches lipidiques supportées et sa caractérisation à l’aide de la microscopie à force atomique et de la spectroscopie de force.

Microscopie à force atomique imagerie et spectroscopie de force de bicouches lipidiques supportées

La préparation de bicouches lipidiques planes fonctionnalisées par du verre, la détermination de la mobilité des protéines à l’intérieur et la mesure des densités de protéines sont présentées ici. Une feuille de route pour la construction d’un microscope à réflexion interne totale à bruit réduit est esquissée, qui permet de visualiser des fluorochromes résidents d’une seule bicouche avec une résolution spatio-temporelle élevée.

Bilayers seule molécule microscopie à fluorescence sur Planar pris en charge

Nous démontrons un système stockable, transportable lipidique formation bicouche. Une membrane lipidique à deux couches peut être formée à l'intérieur de 1 heure avec un taux de succès supérieur à 80% lors d'un précurseur de membrane congelée est ramené à température ambiante. Ce système permettra de réduire les processus laborieux et expertise associés aux canaux ioniques.

Formation automatisée Lipid bicouche Membrane Utilisation d&#39;un Thin Film Polydiméthylsiloxane

Ici, nous présentons un protocole pour détecter un seul, les événements de fusion SNARE médiation entre liposomes et bicouches pris en charge dans des canaux microfluidiques utilisant TIRFM polarisée, avec une sensibilité et une seule molécule ~ 15 résolution temporelle msec. Lipid et la libération de la cargaison soluble peuvent être détectés simultanément. la taille des liposomes, des lipides diffusivité et la fusion des pores propriétés sont mesurées.

Fusion SNARE-médiée de Single protéoliposomes avec bicouches supportées Tethered dans une cellule microfluidique débit contrôlé par Polarized FRBR Microscopie

Nous présentons ici une bicouche lipidique supportée dans le contexte d'une plate-forme microfluidique pour étudier les interactions protéines-phosphoinositides en utilisant une méthode sans étiquette basée sur la modulation du pH.

PIP-on-a-chip: une étude sans étiquette des interactions protéines-phosphoinositide

Ce protocole décrit la formation de cellules imitant les vésicules unilipidiques et multilipidiques, les bicouches lipidiques soutenues et les bicouches lipidiques en suspension. Ces modèles in vitro peuvent être adaptés pour incorporer une variété de types de lipides et peuvent être utilisés pour étudier diverses interactions entre molécules et macromolécules.

Assemblage de modèles de bicouches lipidiques supportées et suspendues imitant des cellules pour l’étude des interactions moléculaires

Ici, un protocole pour effectuer et analyser la liaison, la mobilité et l’assemblage de molécules uniques sur des membranes lipidiques artificielles encombrées à l’aide de la microscopie à fluorescence interne totale à molécule unique (smTIRF) est présenté.

Diffusion et assemblage d’une molécule unique sur des membranes lipidiques encombrées de polymères

Le présent protocole décrit l’assemblage de liposomes assisté par octanol (OLA), une technique microfluidique pour générer des liposomes biocompatibles. OLA produit des liposomes monodispersés de la taille d’un micron avec une encapsulation efficace, permettant une expérimentation immédiate sur puce. Ce protocole devrait être particulièrement adapté à la biologie synthétique et à la recherche sur les cellules synthétiques.

Ensemble liposome assisté par octanol sur puce pour la bio-ingénierie

La fabrication d’un dispositif bicouche à base de polydiméthylsiloxane (PDMS) pour la production de banques combinatoires dans des émulsions eau-dans-huile (bouchons) est présentée ici. Le matériel et les logiciels nécessaires à l’automatisation de la production de bougies sont détaillés dans le protocole, et la production d’une bibliothèque quantitative de bougies fluorescentes est également démontrée.

Dispositif microfluidique bicouche pour la production de bouchons combinatoires

Cet article présente une méthode de préparation de vésicules unilamellaires géantes composées (cGUV) avec une structure vésicule dans vésicule, avec une conductivité électrique personnalisée dans les régions intérieures, annulaires et externes. L’électroformation synthétise des GUV simples, qui sont transformés en stomatocytes et en cGUVs par choc osmotique, fournissant un modèle précieux pour l’étude de la biophysique des cellules nucléées.

Synthèse de vésicules unilamellaires géantes composées : un modèle biomimétique de cellules nucléées

Apprenez à générer des vésicules à bicouche lipidique par microfluidique à jets pour la biophysique et la biotechnologie. Cette méthode permet un contrôle précis de l'asymétrie membranaire et de l'encapsulation.

Bicouche lipidique des vésicules génération utilisant microfluidique jets

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