Name: Comprendre organogenèse précoce aide dun simplifié In Situ Protocole hybridation in Xenopus (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 50 s
Description: Apprenez une méthode simplifiée d'hybridation in situ sur embryons entiers de Xenopus laevis pour visualiser l'expression génique. Ce protocole accélère l'étude de la biologie du développement.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Les auteurs tiennent à remercier les IRSC pour le soutien de Steve Deimling dans le cadre de leur bourse, ainsi que le Département de pédiatrie de l’Université Western Ontario pour son soutien à Steve Deimling, Rami Halabi et Stephanie Grover. Ces travaux ont été financés par le R2654A11 de subventions du CRSNG et un supplément d’accélération à la découverte du CRSNG

<ol><li>Ninomiya, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadherin-dependent+differential+cell+adhesion+in+Xenopus+causes+cell+sorting+in+vitro+but+not+in+the+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Cadherin-dependent differential cell adhesion in Xenopus causes cell sorting in vitro but not in the embryo.</a> J Cell Sci. 125, 1877-1883 (2012).</li>
<li>Movassagh, M., Philpott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+differentiation+in+Xenopus+requires+the+cyclin-dependent+kinase+inhibitor%2C+p27Xic1%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac differentiation in Xenopus requires the cyclin-dependent kinase inhibitor, p27Xic1.</a> Cardiovasc Res. 79, 436-447 (2008).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expression+of+alphaA-+and+betaB1-crystallin+during+normal+development+and+regeneration%2C+and+proteomic+analysis+for+the+regenerating+lens+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">The expression of alphaA- and betaB1-crystallin during normal development and regeneration, and proteomic analysis for the regenerating lens in Xenopus laevis.</a> Mol Vis. 17, 768-778 (2011).</li>
<li>Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization%3A+an+improved+whole-mount+method+for+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization: an improved whole-mount method for Xenopus embryos.</a> Methods Cell Biol. 36, 685-695 (1991).</li>
<li>Kirilenko, P., Weierud, F. K., Zorn, A. M., Woodland, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficiency+of+Xenopus+primordial+germ+cell+migration+depends+on+the+germplasm+mRNA+encoding+the+PDZ+domain+protein+Grip2%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">The efficiency of Xenopus primordial germ cell migration depends on the germplasm mRNA encoding the PDZ domain protein Grip2.</a> Differentiation. 76, 392-403 (2008).</li>
<li>Deimling, S. J., Drysdale, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf+is+required+to+regulate+anterior-posterior+patterning+in+the+Xenopus+lateral+plate+mesoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Fgf is required to regulate anterior-posterior patterning in the Xenopus lateral plate mesoderm.</a> Mech Dev. , (2011).</li>
<li>Fletcher, R. B., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+FGF+signaling+in+the+establishment+and+maintenance+of+mesodermal+gene+expression+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">The role of FGF signaling in the establishment and maintenance of mesodermal gene expression in Xenopus.</a> Dev Dyn. 237, 1243-1254 (2008).</li>
<li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSive%2C+HL+%22Early+development+of+Xenopus+laevis+%3A+a+laboratory+manual%22">Early development of Xenopus laevis : a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2000).</li>
<li>Park, E. C., Hayata, T., Cho, K. W., Han, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+cDNA+microarray+identification+of+genes+with+endodermal+organ+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Xenopus cDNA microarray identification of genes with endodermal organ expression.</a> Dev Dyn. 236, 1633-1649 (2007).</li>
<li>Horb, M. E., Slack, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoderm+specification+and+differentiation+in+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Endoderm specification and differentiation in Xenopus embryos.</a> Dev Biol. 236, 330-343 (2001).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNieuwkoop%2C+PD+%22Normal+table+of+Xenopus+laevis+%28Daudin%29+%3A+a+systematical+and+chronological+survey+of+the+development+from+the+fertilized+egg+till+the+end+of+metamorphosis%22">Normal table of Xenopus laevis (Daudin) : a systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis</a>. , Garland Pub. (1994).</li>
<li>Gebhardt, D. O., Nieuwkoop, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Influence+of+Lithium+on+the+Competence+of+the+Ectoderm+in+Ambystoma+Mexicanum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morphol%22%5BJournal%5D)">The Influence of Lithium on the Competence of the Ectoderm in Ambystoma Mexicanum.</a> J Embryol Exp Morphol. 12, 317-331 (1964).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+formation+in+artificially+activated+ectoderm+%28Rana+pipiens+and+Ambystoma+punctatum%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Pattern formation in artificially activated ectoderm (Rana pipiens and Ambystoma punctatum).</a> Dev Biol. 6, 255-279 (1963).</li>
<li>Sato, S. M., Sargent, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+approach+to+dorsoanterior+development+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular approach to dorsoanterior development in Xenopus laevis.</a> Dev Biol. 137, 135-141 (1990).</li>
<li>Smith, S. J., Kotecha, S., Towers, N., Latinkic, B. V., Mohun, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XPOX2-peroxidase+expression+and+the+XLURP-1+promoter+reveal+the+site+of+embryonic+myeloid+cell+development+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">XPOX2-peroxidase expression and the XLURP-1 promoter reveal the site of embryonic myeloid cell development in Xenopus.</a> Mech Dev. 117, 173-186 (2002).</li>
<li>Drysdale, T. A., Tonissen, K. F., Patterson, K. D., Crawford, M. J., Krieg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+troponin+I+is+a+heart-specific+marker+in+the+Xenopus+embryo%3A+expression+during+abnormal+heart+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cardiac troponin I is a heart-specific marker in the Xenopus embryo: expression during abnormal heart morphogenesis.</a> Dev Biol. 165, 432-441 (1994).</li>
<li>Carroll, T., Wallingford, J., Seufert, D., Vize, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+pronephric+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of pronephric development.</a> Curr Top Dev Biol. 44, 67-100 (1999).</li>
<li>Tonissen, K. F., Drysdale, T. A., Lints, T. J., Harvey, R. P., Krieg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XNkx-2.5%2C+a+Xenopus+gene+related+to+Nkx-2.5+and+tinman%3A+evidence+for+a+conserved+role+in+cardiac+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">XNkx-2.5, a Xenopus gene related to Nkx-2.5 and tinman: evidence for a conserved role in cardiac development.</a> Dev Biol. 162, 325-328 (1994).</li>
<li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motil+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53, 163-176 (2002).</li>
<li>Hurtado, R., Mikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+sensitivity+and+stability+in+two-color+in+situ+hybridization+by+means+of+a+novel+chromagenic+substrate+combination%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Enhanced sensitivity and stability in two-color in situ hybridization by means of a novel chromagenic substrate combination.</a> Dev Dyn. 235, 2811-2816 (2006).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont aucun intérêt financier concurrent à divulguer.

La possibilité d&#39;utiliser l&#39;hybridation in situ de visualiser le profil d&#39;expression de gènes spécifiques reste le procédé le plus couramment utilisé pour identifier des organes spécifiques ou des types de cellules dans l&#39;embryon de Xenopus. Ce est en raison de plusieurs avantages offerts par cette technique. L&#39;expression d&#39;un gène peut identifier des structures spécifiques bien avant tout signe histologique de différenciation comme le cas pour l&#39;expression de Nkx2.5</em...

Le profil d’expression d’un gène spécifique est une information importante pour déterminer le rôle potentiel de ce gène dans le développement d’un organe ou d’un type de cellule spécifique. En termes simples, s’il n’est pas exprimé au bon moment et au bon endroit, il est peu probable qu’il joue un rôle clé. Chez le xénope, comme chez la plupart des embryons précoces, le test le plus couramment utilisé pour détecter l’expression d’un gène est l’hybridation in situ en monticule entier à l’aide de sondes d’ARN antisens marquées. L’utilisation de la coloration des anticorps pour évaluer l’expression d’un gène chez le xénope devient de plus en plus courante à mesure que les chercheurs découvrent des anticorps, généralement élevés contre des protéines de mammifères, qui réagissent de manière croisée à l’homologue du xénope ou génèrent leur propre 1-3. Cependant, la grande majorité des études sur l’organogenèse du xénope utilisent encore des sondes d’ARN antisens. Lorsque des anticorps sont utilisés, chaque anticorps individuel nécessite souvent une optimisation pour la concentration ou les protocoles de fixation de l’anticorps primaire. En revanche, le protocole pour les hybridations in situ est essentiellement invariant pour différentes sondes. Le concept de base est relativement simple et un excellent protocole standard a été bien établi 4. Notre protocole est une version simplifiée du protocole original 4 qui offre toujours une excellente détection des modèles d’expression génique dans l’embryon précoce. Les embryons sont fixés puis préparés pour l’hybridation en modifiant les solutions et les températures de sorte qu’il permet une liaison à haute rigueur de la sonde d’ARN antisens marquée à son ARNm cible. La sonde non liée est emportée et les embryons sont ensuite préparés pour la liaison d’un anticorps contre l’étiquette sur les sondes d’ARN. L’excès d’anticorps est ensuite éliminé et une réaction enzymatique de couleur est utilisée pour localiser l’endroit où la sonde d’ARN est liée dans l’embryon. Il existe maintenant un certain nombre de lignées transgéniques de Xenopus qui déterminent l’expression de protéines fluorescentes dans des tissus spécifiques et celles-ci sont disponibles dans les centres de stockage de Xénope tels que la National Xenopus Resource à Woods Hole. Bien que très utile pour de nombreuses expériences nécessitant d’examiner l’organogenèse chez les embryons vivants, cette option nécessite un logement séparé pour les lignées transgéniques. 
L’hybridation in situ permet de délimiter clairement l’endroit où des organes ou des types de cellules spécifiques se formeront au début de l’embryon (Figure 1). La technique est remarquablement sensible étant donné que l’on peut détecter l’expression génique dans un petit nombre de cellules d’un seul embryon 5. Cependant, l’hybridation in situ en utilisant l’intensité de la coloration colorimétrique n’est pas considérée comme quantifiable car la réaction de couleur n’est pas linéaire. Malgré la difficulté de quantifier l’intensité de la coloration, les changements d’expression sont souvent assez perceptibles ; en particulier lorsque l’hybridation in situ montre des augmentations ou des diminutions quantifiables de la taille des domaines d’expression 6,7. 
Les avantages évidents de l’hybridation in situ en monture entière en font un test essentiel dans l’étude du développement précoce. Cependant, il s’agit d’une tâche chronophage qui nécessite de nombreuses étapes sur plusieurs jours. Ce protocole est une version simplifiée du protocole standard qui élimine plusieurs étapes sans réduire la qualité du résultat in situ. La simplification élimine également les sources de variabilité, ce qui facilite le dépannage si une hybridation in situ n’est pas optimale. Plus précisément, nous avons éliminé l’utilisation des traitements à base de protéinase K et d’ARNASE de l’embryon, deux étapes qui peuvent dépendre de la qualité du réactif et peuvent également réduire l’intensité du signal en cas d’exagération. Le protocole permet également de réaliser une certaine économie en éliminant l’utilisation de plusieurs réactifs. Enfin, ce protocole fournit également quelques lignes directrices simples pour améliorer la capture d’images des résultats d’hybridation in situ. Bien que ce protocole soit optimisé pour le travail sur les embryons de xénope, il est probable qu’au moins certaines des simplifications seront applicables aux travaux d’hybridation in situ dans d’autres systèmes embryonnaires.

<table><tbody><tr><td>Labguake Tube Shakers</td><td>VWR</td><td>17-08-2011</td><td></td></tr><tr><td>Flacons VWR</td><td>VWR</td><td>10-07-2012</td><td></td></tr><tr><td>L-Cysteine</td><td>BioShop</td><td>CYS342.500</td><td></td></tr><tr><td>Ribonucléoside Triphosphate Set, 100mM</td><td>Roche</td><td>11277057001</td><td></td></tr><tr><td>Digoxigénine-11-UTP</td><td>Roche</td><td>11209256910</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur de la Rnase (Rnase OUT)</td><td>Invitrogen&nbsp ;</td><td>10777-019</td><td></td></tr><tr><td>ARN polymérase T7</td><td>Fermentas</td><td>EPO111</td><td></td></tr><tr><td>ARN polymérase T3</td><td>Fermentas</td><td>EPO101</td><td></td></tr><tr><td>SP6 ARN polymérase</td><td>Fermentas</td><td>EPO131</td><td></td></tr><tr><td>Dnase 1</td><td>Invitrogen&nbsp ;</td><td>18047-019</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de mouton</td><td> Wisent</td><td>31150</td><td></td></tr><tr><td>Réactif bloquant</td><td>Roche</td><td>11096176001</td><td></td></tr><tr><td>BM violet Ap Substrat</td><td>Roche</td><td>11442094001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Digoxigénine-Ap Feb fragments</td><td>Roche</td><td>11093274910</td><td></td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>VWR</td><td>CAMX0485-7</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>BioShop</td><td>SOD002.10</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>EM&nbsp ;</td><td>7910</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>BioShop</td><td>EDT001.500</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>BioShop</td><td>TRS003.5</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>EM&nbsp ;</td><td>9480</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma</td><td>M-2643</td><td></td></tr><tr><td>Vadrouilles</td><td>BioShop</td><td>MOP001.250</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E-3889-25G</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde</td><td>BioShop</td><td>PAR070.500&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Formamide</td><td>&nbsp ; VWR&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>CAFX0420-4&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>ARN</td><td>Roche</td><td>10109223001</td><td></td></tr><tr><td>Acide Maléique</td><td>&nbsp ; VWR&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>CAMX0100-3</td><td></td></tr><tr><td>Citrate tri-sodique</td><td>BioShop</td><td>CIT001</td><td></td></tr><tr><td>Peroxyde d’hydrogène (solution à 30 %)</td><td>EM&nbsp ;</td><td>HX0635-2</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>BioShop</td><td>ALB001.100</td><td></td></tr><tr><td>PVP-40</td><td>ICN</td><td>195451</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll 400</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0300-10</td><td></td></tr><tr><td>Alcool benzylique</td><td>Sigma</td><td>B-1042</td><td></td></tr><tr><td>Benzyl Benzoate</td><td>Sigma</td><td>B-6630</td><td></td></tr><tr><td>Agarose ultrapure&nbsp ;</td><td>Invitrogen&nbsp ;</td><td>Référence 16500-500</td><td></td></tr></tbody></table>

comprendre organogenèse précoce aide d&#39;un simplifié<em&gt; in situ</em&gt; protocole hybridation in<em&gt; xenopus</em

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

L’organogenèse est l’étude de la façon dont les organes sont spécifiés et acquièrent ensuite leur forme et leurs fonctions spécifiques au cours du développement. L’embryon de Xenopuslaevis est très utile pour l’étude de l’organogenèse car sa grande taille le rend très approprié pour identifier les organes dès les premières étapes de l’organogenèse. À l’heure actuelle, la principale méthode utilisée pour identifier un organe ou un primordium spécifique est l’hybridation in situ sur monture entière avec des sondes d’ARN antisens marquées spécifiques à un gène exprimé dans l’organe d’intérêt. De plus, il est relativement facile de manipuler des gènes ou des voies de signalisation chez le xénope et l’hybridation in situ permet ensuite de rechercher des changements dans la présence ou la morphologie d’un organe cible. L’hybridation in situ de l’ensemble du mont est un protocole de plusieurs jours comportant de nombreuses étapes. Ici, nous fournissons un protocole simplifié avec un nombre réduit d’étapes et de réactifs utilisés qui fonctionne bien pour les tests de routine. Les robots d’hybridation in situ ont grandement facilité le processus et nous détaillons comment et quand nous utilisons cette technologie dans le processus. Une fois l’hybridation in situ terminée, capturer la meilleure image du résultat peut s’avérer frustrant. Nous fournissons des conseils sur la façon d’optimiser l’imagerie des résultats d’hybridation in situ. Bien que le protocole décrive l’évaluation de l’organogenèse chez Xenopus laevis, le même protocole de base peut presque certainement être adapté à Xenopus tropicalis et à d’autres systèmes modèles.

L&#39;utilisation de sondes spécifiques de tissus peut fournir des informations en circulation en ce qui concerne l&#39;état de développement des organes spécifiques. Dans les exemples suivants, l&#39;étape de l&#39;embryon est basée sur la table de transfert Nieuwkoop et Faber 11. Si l&#39;on utilise des sondes de gènes exprimés forme après différenciation, la troponine I cardiaque au stade 28-30, par exemple (figure 1C), la présence ou la taille d&#39;un organe différencié peut êtr...

L’embryon de Xenopus laevis continue d’être exceptionnellement utile dans l’étude du développement précoce en raison de sa grande taille et de sa facilité de manipulation. Un protocole simplifié pour l’hybridation in situ de l’ensemble du mont est fourni qui peut être utilisé dans l’identification d’organes spécifiques dans ce système modèle.

Comprendre organogenèse précoce aide d&#39;un simplifié<em&gt; In Situ</em&gt; Protocole hybridation in<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

L'objectif général de l'expérience suivante est de montrer où un gène particulier est exprimé dans un embryon intact. Cela est réalisé en fixant l'ARN sur place dans l'embryon lors d'une deuxième étape. Une sonde d'ARN antisens spécifique au gène d'intérêt est hybridée à l'ARN cible à l'intérieur de l'embryon.Cette sonde contient un épitope, généralement de la digogénine, qui peut ensuite être détecté. Ensuite, un anticorps couplé à la phosphatase alcaline est hybridé à l'épitope sur la sonde d'ARN, suivi de l'utilisation d'une coloration chromogénique. Afin de visualiser la localisation de l'ARN dans l'embryon, des résultats sont obtenus montrant précisément où le gène d'intérêt est exprimé, en fonction de la réaction colorée et des connaissances relatives à l'anatomie de l'embryon.Le principal avantage de notre protocole par rapport aux protocoles existants réside dans sa rapidité et son utilisation de moins de réactifs, sans perte apparente de qualité. Cette méthode permet de répondre à des questions fondamentales en embryologie, telles que la manière dont les tissus sont spécifiés et organisés. Bien que cette méthode puisse éclairer le développement de l'opus, elle peut égaleme

understanding-early-organogenesis-using-simplified-situ-hybridization

Research

Recherche

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

Cette vidéo montre deux couleurs monter toute l'hybridation in situ, une méthode par laquelle le profil d'expression spatiale et temporelle des deux gènes différents peuvent être visualisées dans des embryons de poulet jeunes. Cette méthode a été initialement présenté par David Wilkinson, Domingos Henrique, Phil et David Ingham Ish-Horowicz.

Double Mont entier hybridation in situ d&#39;embryons de poulet début

Xenopus embryonnaire épithéliums sont un système modèle idéal pour étudier les comportements cellulaires tels que le développement de polarité et changer de forme lors de la morphogenèse épithéliale. Histologie classique d'échantillons fixe est de plus en plus complétée par des cellules vivantes imagerie confocale. Ici nous démontrons méthodes pour isoler les tissus de grenouilles et de visualiser en direct les cellules épithéliales et de leur cytosquelette des cellules vivantes en utilisant la...

Imagerie des cellules vivantes et de l&#39;analyse quantitative des cellules embryonnaires épithéliales Xenopus laevis</em

Xenopus embryonnaire ectoderme est devenu un modèle attractif pour les études de la polarité cellulaire. Un essai est décrit, dans lequel la distribution subcellulaire des protéines fluorescentes dans les cellules est évaluée ectoderme. Ce protocole aidera aborder les questions relatives au contrôle spatial de la signalisation.

Translocation polarisée des protéines fluorescentes dans les Xenopus</emEctoderme> en réponse à la signalisation Wnt

Le poisson zèbre, un petit poisson tropical, est devenu un modèle populaire pour étudier la fonction des gènes au cours du développement des vertébrés et de la maladie. L'expression spatiale et temporelle des gènes cibles peut être déterminée...

Haute Résolution Mont entier<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridation dans les embryons de poisson zèbre pour étudier l&#39;expression des gènes et la fonction

Une technique de transplantation de "Extreme antérieur domaine" mouchoirs entre les embryons de Xenopus laevis a été développé. Tissu peut être déplacé d'un gène expression fond dans un autre, ce qui permet l'étude des besoins locaux pour le développement cranio-facial et d'interactions entre les régions du visage de signalisation.

Transplantations faciales<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryons

Le diamant mandarin (Taeniopygiaguttata) est un organisme modèle précieux ; cependant, les premiers stades de développement du diamant mandarin n’ont pas été étudiés de manière approfondie. Le protocole décrit comment disséquer des embryons précoces pour des applications développementales et moléculaires.

Dissection et analyse en aval de Zebra Finch embryons aux premiers stades de développement

Dans les embryons de xénope, les cellules du toit du blastocèle sont pluripotentes et peuvent être programmées pour générer divers tissus. Ici, nous décrivons des protocoles permettant d’utiliser des explants de toit de blastocèle d’amphibiens comme système de test pour étudier les principales caractéristiques in vivo et in vitro du développement neuronal précoce.

Stem Cell-like<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonnaires explants à étudier les caractéristiques du développement précoce Neural<em&gt; In Vitro</em&gt; Et<em&gt; In Vivo</em

Cet article présente une méthode pratique et rapide pour la visualisation de différentes populations de cellules neuronales dans le système nerveux central d'embryons de xénope utilisant immunofluorescence sur des coupes.

Évaluation de la neurogenèse primaire en<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryons Utilisation de immunocoloration

Nous décrivons un protocole simple pour développer des organoïdes épithéliales mucociliary des cellules profondes d’ectoderm isolées des embryons de Xenopus laevis. Les progéniteurs multipotents régénèrent les précurseurs épithéliales des cellules gobelet et permettent un suivi en direct de l’initiation et de la progression des transitions cellulaires à la surface des organoïdes.

Organoïdes épithéliales mucociliaires des cellules embryonnaires de Xenopus : génération, culture et imagerie vivante haute résolution

Nous fournissons des méthodes détaillées pour marquer et purifier métaboliquement les transcrits naissants pour l’analyse du transcriptome chez les embryons précoces de Xénopus en utilisant la 5-éthynyl-uridine (5-EU).

Marquage métabolique du transcriptome naissant chez Xenopus : embryogenèse précoce

Nous décrivons une méthode de constriction physique pour produire des mini-embryons à partir d’embryons à 1 cellule de Xenopus laevis .

Manipulation physique pour générer des embryons miniatures Xenopus

Apprenez une méthode simplifiée d'hybridation in situ sur embryons entiers de Xenopus laevis pour visualiser l'expression génique. Ce protocole accélère l'étude de la biologie du développement.

Comprendre organogenèse précoce aide d'un simplifié

Explorer plus de vidéos