Name: siRNA contrôle pour la ubiquitine et les régulateurs du système ubiquitine-comme des voies biologiques dans des cellules de mammifères en culture (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-24T14:45:00.000+00:00
Duration: 10 min 43 s
Description: Découvrez une méthode de criblage siRNA ciblée pour identifier de nouveaux régulateurs des systèmes ubiquitine et ubiquitine-like dans la réponse à l'hypoxie HIF1A. Cette approche rapide et économique permet d'étudier des voies biologiques spécifiques.

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Ce travail a été soutenu par le Wellcome Trust, GlaxoSmithKline (GSK) et l&#39;Institut écossais pour Signalisation cellulaire (qui fait maintenant partie de la phosphorylation de la protéine MRC et de l&#39;unité de ubiquitylation).

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</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

L&#39;utilisation d&#39;écrans de siRNA du génome dans les cellules de mammifères s&#39;est avérée extrêmement utile dans l&#39;identification de nouveaux régulateurs de voies biologiques distinctes. Ici, nous avons décrit l&#39;utilisation d&#39;un écran de siRNA ciblé ubiquitome pour identifier des régulateurs de la réponse cellulaire médiée par HIF1A à l&#39;hypoxie. Écrans ciblés sont de plus en plus attrayant car ils sont généralement moins cher, plus rapide, plus facile à gérer et rapport uniquement sur ​​les comp...

Modification des protéines avec l&#39;ubiquitine et ubiquitine (UBL) molécules représente un système biochimique expansive qui régule diverses voies biologiques et des réactions de stress. La fixation covalente d&#39;UBL à leurs protéines cibles peut avoir divers effets de régulation de la stabilité, la localisation, la fonction ou interactome du substrat 1. Les étapes enzymatiques sous-jacents UBL modification ont d&#39;abord été établies pour l&#39;ubiquitine, et maintenant servir de paradigme pour la modification avec la plupart des UBL, y compris SUMO, NEDD8, ISG15 et FAT10. Pour la modification de se produire, le groupe carboxylate de la diglycine UBL motif est d&#39;abord activée par une enzyme activant E1 pour former un thiol de haute énergie qui est transférée à la cystéine du site actif d&#39;une enzyme de conjugaison E2. Le E2 interagit ensuite avec une ligase E3 lié au substrat de servir de médiateur de transfert de la LBM sur (habituellement) un résidu de lysine cible création d&#39;une chaîne ramifiée (isopeptidique) 2 tringlerie. Les cycles successifs de modification peuvent se produire pour construire des chaînes isopeptidiques sur le substrat, ce qui peut se produire pour l&#39;ubiquitine à travers l&#39;une de ses sept lysines, ou par l&#39;intermédiaire de sa méthionine N-terminale pour créer des chaînes linéaires d&#39;ubiquitine. Ces modifications font topologies discrètes avec des fins diverses telles que la création de nouveaux motifs d&#39;interaction et le ciblage des protéines pour la dégradation avant l&#39;enlèvement UBL par des protéases spécialisées. Dans le cas de l&#39;ubiquitine E1, il existe deux enzymes, enzymes de conjugaison E2 30 à 40, au moins 600 ligases E3 et environ 100 enzymes deubiquitylating (DUB). Alors que les voies sont moins expansive pour les 10 ou si d&#39;autres UBL, la complexité globale de ubiquitome offre énorme diversité biologique dans le résultat d&#39;une modification UBL particulier. Cependant, alors que des avancées majeures dans UBL biologie ont été faits, les rôles cellulaires précises de la majorité de ces composants ubiquitome restent inconnus. L&#39;utilisation de short interfering acide ribonucléique (siRNA) a émergé comme un outil puissant pour la génétique inverse en raison de la capacité de siRNA pour cibler spécifiquement ARNm cellulaires pour destruction, permettant le rôle des gènes individuels à examiner dans différents contextes biologiques 3. Criblage du génome entier ont été utilisés pour identifier et valider de nouveaux régulateurs de nombreux processus cellulaires, et ont créé une foule de données utiles accessibles à la communauté scientifique au sens large. Cependant, alors que les écrans du génome entier ont révélé extrêmement utile, écrans ciblés sont de plus en plus populaires car ils sont moins chers, plus rapides, moins impliquer la gestion de données et de rapport uniquement sur les membres du génome où le chercheur est le plus intéressé. Par conséquent, afin de mieux comprendre les processus cellulaires UBL composants de la famille sont impliqués, nous avons constitué une bibliothèque siRNA humain ciblant tous connus et prévus des composants de la ubiquitome. Cela inclut les UBL, E1, E2 activation des enzymes conjugaisondes enzymes, des ligases E3, domaine de liaison à l&#39;ubiquitine (DLC) contenant des protéines et des DUBs. Cette bibliothèque peut être utilisée pour l&#39;écran contre un large éventail de lignées cellulaires rapporteurs de problèmes biologiques distinctes, permettant ainsi l&#39;identification objective des nouveaux composants de l&#39;UBL régissant ces voies. Le protocole suivant décrit comment effectuer une rigoureuse siRNA ciblés ubiquitome écran pour identifier de nouveaux régulateurs de la réponse de HIF1A dépendant à l&#39;hypoxie. Sous tension normale d&#39;oxygène, HIF1A est soumise à prolyl hydroxylation qui l&#39;amène à être reconnue et ciblée pour la dégradation par la maladie de Von Hippel Lindau (VHL) E3 complexe ligase 4. L&#39;hypoxie inhibe l&#39;hydroxylation prolyl conduisant à la stabilisation des HIF1A et sa liaison ultérieure à des éléments de réponse à l&#39;hypoxie (HRE) de conduire l&#39;expression du gène. Ici, nous décrivons un écran à l&#39;aide des cellules d&#39;ostéosarcome U20S exprimant de façon stable la luciférase de luciole sous le contrôle de trois copies en tandem de l&#39;HyResponse Element poxia (cellules U20S-EDH) 5. Ce protocole peut être adapté pour n&#39;importe quelle voie biologique si un solide lecture de l&#39;activité du rapporteur est réalisable et peut être couplé avec des témoins positifs et négatifs appropriés.

<table><tbody><tr><td>Distributeur automatique de liquide</td><td>Fluid-X</td><td>XPP-721</td><td>http://www.fluidx.eu/BIOTRACK/xpp-721-liquid-handling-system.html</td></tr><tr><td>Plaque de dosage à paroi blanche</td><td>Greiner Bio One</td><td>655083</td><td>http://www.greinerbioone.com/en/row/articles/catalogue/article/37_11/13221/</td></tr> <tr><td>Film de plaque transparent</td><td>Perkin Elmer</td><td>1450-461</td><td>http://www.perkinelmer.co.uk/Catalog/Product/ID/1450-461</td></tr><tr><td>Thermo</td><td>Scientific</td><td>On-Target Plus</td><td>http://www.thermoscientificbio.com/rnai-and-custom-rna-synthesis/sirna/on-targetplus-sirna/search-gene/</td></tr> <tr><td>Réactif de transfection</td><td>Invitrogen</td><td>Lipofectamine RNAimax</td><td>http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Protein-Expression-and-Analysis/Transfection-Selection/lipofectamine-rnaimx.html</td></tr><tr><td>Sérum Réduit Medium</td><td>Invitrogen</td><td>Optimem</td><td>http://products.invitrogen.com/ivgn/product/31985062?ICID=search-product</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>41965-039</td><td>http://products.invitrogen.com/ivgn/product/41965039#</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>16000-044</td><td>https://products.invitrogen.com/ivgn/product/16000044?ICID=search-product#</td></tr><tr><td>Tryspin-EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25300-054</td><td>https://products.invitrogen.com/ivgn/product/25300054?ICID=search-product#</td></tr></tbody></table>

sirna contrôle pour la ubiquitine et les régulateurs du système ubiquitine-comme des voies biologiques dans des cellules de mammifères en culture

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

Modification post-traductionnelle des protéines avec l&#39;ubiquitine et ubiquitine (UBL) molécules est en train de devenir un réseau de signalisation cellulaire dynamique qui régule diverses voies biologiques, y compris la réponse à l&#39;hypoxie, proteostasis, la réponse aux dommages de l&#39;ADN et la transcription. Pour mieux comprendre comment UBL réglementer les filières pertinentes à la maladie humaine, nous avons compilé un siRNA humain &quot;ubiquitome&quot; bibliothèque composée de 1186 siARN piscines duplex ciblant tous connus et prévus des composants de voies du système UBL. Cette bibliothèque peut être projeté contre un éventail de lignées cellulaires exprimant journalistes de diverses voies biologiques pour déterminer quels composants UBL agissent comme régulateurs positifs ou négatifs de la voie en question. Ici, nous décrivons un protocole utilisant cette bibliothèque pour identifier ubiquitome-régulateurs de la réponse cellulaire médiée par HIF1A à l&#39;hypoxie en utilisant un rapporteur de luciférase à base de transcription. Un stade de développement de l&#39;essai initialest effectuée pour établir les paramètres de dépistage appropriés de la lignée cellulaire avant d&#39;effectuer l&#39;écran en trois étapes: dépistage / déconvolution primaire, secondaire et tertiaire. L&#39;utilisation de bibliothèques ciblée sur génome entier de siRNA est de plus en plus populaire car il offre l&#39;avantage de rendre compte uniquement sur les membres de la voie avec laquelle les enquêteurs sont plus intéressés. Malgré les limites inhérentes de dépistage siRNA, en particulier les faux positifs causés par siARN effets hors-cible, l&#39;identification des véritables nouveaux régulateurs des voies en question l&#39;emportent sur ces lacunes, qui peuvent être surmontées par l&#39;exécution d&#39;une série d&#39;expériences de contrôle attentivement entreprises.

Avant le dépistage, l&#39;hypoxie-réponse des cellules U20S-EDH est établi. Cellules U20S-EDH expriment une construction rapporteur constitué de la luciférase de luciole fusionné en aval de trois copies en tandem de l&#39;élément de réponse à l&#39;hypoxie, qui est lié par l&#39;hétérodimère HIF1A/HIF1B lors de l&#39;exposition à l&#39;hypoxie (figure 1A). Les cellules sont placées dans un poste de travail de l&#39;hypoxie pour une plage de temps pour établir laquelle l&#39;exposition à l&#39;hypoxie pr...

Ici, nous décrivons une méthode pour effectuer un siRNA ciblés écran &quot;ubiquitome&quot; pour identifier de nouveaux régulateurs de l&#39;ubiquitine et ubiquitine de la réponse cellulaire médiée HIF1A à l&#39;hypoxie. Ceci peut être adapté à n&#39;importe quelle voie biologique où une lecture robuste de l&#39;activité du rapporteur est disponible.

siRNA contrôle pour la ubiquitine et les régulateurs du système ubiquitine-comme des voies biologiques dans des cellules de mammifères en culture

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

L’objectif global de cette procédure est d’identifier l’implication de nouveaux composants de l’ubiquitine et de systèmes modificateurs similaires à l’ubiquitine dans les voies biologiques, en utilisant la réponse hypoxique dépendante de HF un alpha comme exemple. Ceci est accompli en optimisant d’abord la réponse de la lignée cellulaire rapporteuse au stimulus environnemental hypoxie, afin qu’elles soient adaptées au dépistage. La deuxième étape de la procédure consiste à établir les contrôles haut et bas pour donner un facteur Z approprié pour le dépistage.Une fois les paramètres établis, le dépistage primaire de l’ARNi est effectué en trois exemplaires, après quoi les résultats sont confirmés par les écrans de déconvolution secondaires et tertiaires. En fin de compte, les résultats peuvent révéler une nouvelle ubiquitine et des régulateurs du système d’ubiquitine de la voie biologique en question. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes comme le criblage du génome entier de l’ARN, est que le criblage de ciblage est plus rapide, plus facile à réaliser, moins coûteux et ne rend compte que des membres de la voie biochimique que l’investigateur est le plus intéressé à caractériser.La réactivité à l’hypoxie de la lignée cellulaire rapporteure U2 O-S-H-R-E a prêt 2 flacons de 75 centimètres carrés de cellules dans DMM avec 10 % FBS. Lorsque les cellules sont à 80 à 90 % de confluence, aspirez le milieu d’un flacon et lavez ces cellules deux fois avec 10 millilitres de PBS. Tryps anise les cellules et les remet en suspension dans huit millilitres de DMM avec 10 % FBS, rend les cellules homogènes à l’aide d’une pipette et obtient une moyenne de deux comptages cellulaires, puis dilue les cellules à 60 000 par millilitre.Ensuite, à l’aide d’une pipette multicanaux, ajoutez 6 000 cellules à trois colonnes de cinq plaques de test 96 Well à parois blanches, incubez les cinq plaques pendant la nuit pendant l’incubation pour surmonter les effets de bord. Mettez un papier de soie humide à la base des assiettes et placez un sac en plastique rigide et transparent sur la pile d’assiettes à la fin de la journée suivante. Notez l’heure et transférez une plaque sur le poste de travail d’hypoxie réglé à 1 % d’oxygène.Ensuite, déplacez une plaque vers le poste de travail de l’hypoxie 14, 18 et 22 heures après le début de l’incubation. Ensuite, préparez 30 millilitres de tampon de lyse luciférase. Assurez-vous que le BSA peut se dissoudre pendant au moins 30 minutes dans le tampon avant d’ajouter Lucifer et le pyrophosphate de sodium.24 heures après la première édition de la plaque, déchargez le poste de travail d’hypoxie et ajoutez 100 microlitres du tampon préparé à chaque puits chargé des plaques de test pour bien époux les cellules. Couvrez les plaques d’un film transparent et secouez-les pendant 10 minutes. À 500 tr/min, transférez maintenant les plaques d’une pile vers le lecteur de plaques automatisé dans le logiciel.Sélectionnez le menu des protocoles et choisissez un BS 5 95. Mettez ensuite en surbrillance tous les puits à lire dans le menu de sélection des puits. Cliquez sur la fonction d’exécution et calculez l’activité moyenne du rapporteur par plaque.Ensuite, normalisez les données en fonction des lectures de la plaque sans traitement d’hypoxie. Une réponse robuste à l’hypoxie est essentielle pour le test et l’augmentation par dix de l’activité des rapports est excellente. Procédez en réglant les commandes et en calculant le facteur Z.L’étape de développement de l’acide est la partie la plus critique de la procédure de dépistage. Il est important d’avoir une réponse phénotypique robuste de la lignée cellulaire associée à de bons contrôles bas de gamme. Cela garantira le succès de l’écran IRNA.Effectuez l’écran principal en trois exemplaires à l’aide du format 96 puits. Sept flacons confluents de cellules suffiront. Commencez par décongeler une série de dilutions de la banque d’ubiquitine de l’ARN SI pendant au moins 30 minutes sous un capot.Ensuite, fabriquez une plaque de contrôle principale avec quatre répliques de 200 microlitres de 200 nano molaires SI. Rnas. Chargez quatre puits avec un contrôle élevé, quatre puits avec un contrôle faible, quatre puits avec un contrôle tampon uniquement et quatre puits avec un contrôle IRNA non cible. Étiquette suivante, 17 plaques de test à parois blanches entre les colonnes de contrôle.Chaque puits est chargé d’un pool de quatre siRNA ciblant ce même ARNm. Pour vous assurer que les solutions de la plaque de contrôle principale et des plaques de bibliothèque sont regroupées au fond de chacune, faites bien tourner les plaques pendant une minute à 2000 g. Ensuite, à l’aide d’un distributeur automatisé, transférez 10 microlitres de chaque puits de contrôle dans la plaque maîtresse vers chacune des 17 plaques étiquetées.Ensuite, utilisez le distributeur automatique pour transférer 10 microlitres de chaque pool d’ARN SI des plaques de bibliothèque vers une plaque de test. Préparez 40 millilitres de réactif de transfection au rapport prédéterminé à l’aide du distributeur. Transférez 10 microlitres dans chaque puits des 17 plaques de test. 40 millilitres fournissent un volume mort suffisant pour le système de distribution.Après avoir chargé le réactif de transfection, agitez les plaques pendant une minute à 500 tr/min. Ensuite, laissez-les incuber pendant 20 à 60 minutes pour former les complexes de réactifs de transfection S-I-R-N-A. Lavez maintenant 2 flacons carrés de 75 centimètres de cellules U2 O-S-H-R-E avec 10 millilitres de PBS chacune.Ensuite, essayez d’aniser les cellules et de les remettre en suspension dans huit millilitres de DM EM avec FBS, combinez les deux collections de cellules dans un tube en plastique de 50 millilitres. Calculez ensuite la densité cellulaire comme précédemment. Utilisez la valeur pour préparer une suspension de 155 millilitres de cellules à 75 000 par millilitre.Ce volume est suffisant pour charger les plaques et remplir le volume mort du distributeur sous le capot. Gardez les cellules agitées avec l’agitation magnétique. À l’aide du distributeur automatique, chargez 80 microlitres de cellules dans chaque puits des plaques de réaction.Chacun a préparé une réaction. Eh bien, contient maintenant 100 microlitres avec les ARN SI à 20 nano molaires. Notez l’heure et empilez les assiettes par groupes de cinq dans un incubateur à 37 degrés Celsius.Laissez les plaques incuber pendant 24 heures au cours des deux prochains jours. Amorcez les deux répliques de ces 17 plaques de réaction. 24 heures après le transfert de transfection, les plaques de réaction vers le poste de travail d’hypoxie.Incuber les plaques sous 1 % d’oxygène pendant 24 heures pour induire le rapporteur le lendemain, deux heures avant la fin de la période d’hypoxie. Préparez un tampon de dosage de lyse luciférase frais comme avant, 200 millilitres suffisent pour 17 plaques. Après avoir retiré les plaques de l’environnement hypoxique, utilisez le distributeur automatique pour charger chaque puits avec 100 microlitres de tampon de dosage.Ensuite, couvrez chaque plaque d’un film transparent et chargez-les dans le shaker en les secouant à 500 tr/min pendant 10 minutes. Les cellules seront complètement lysées. Procédez maintenant à la lecture des planches comme indiqué précédemment.Analyser les données prises en trois exemplaires, et identifier les ARNi d’intérêt pour les criblages suivants. Les cellules vertes U2 O-S-H-R-E contiennent un rapporteur luciférase de luciférase fusionné à trois copies en aval de l’élément de réponse à l’hypoxie. Ces éléments sont liés par des hétérodimères HIF, un hétérodimères alpha, un hétérodimères bêta, qui sont abondants pendant l’hypoxie.La réponse à l’hypoxie de ces cellules a été déterminée avant le criblage avec la banque I a en utilisant le protocole décrit. 24 heures d’hypoxie ont induit une augmentation de dix fois de l’expression de la luciférase par rapport à la ligne de base. Hi F1 alpha et FIH one I a ont été sélectionnées comme cellules de contrôle faible et haut.La transfectation avec ces témoins a montré 10 % ou 170 % du signal de luciférase de base après 24 heures d’hypoxie. Ensuite, les cellules ont été transfectées avec la banque d’ubiquitine IRNA et exposées à 1 % d’oxygène pendant 24 heures. Lors de l’analyse des plaques de réaction, un facteur Z souhaitable supérieur à 0,5 a été obtenu pour chaque plaque.Les valeurs de chaque plaque étaient affichées à l’aide d’un nuage de points, l’écran principal enregistrant les valeurs entre les commandes haute et basse. Comme prévu, il y avait un nombre à peu près égal de régulateurs IRNA positifs et négatifs, tandis que la plupart n’ont eu aucun effet significatif sur le rapporteur, les écrans secondaires et tertiaires ont poursuivi cette étude dont les détails sont donnés dans le protocole texte. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer un dépistage ciblé de l’ARNi pour identifier les composants de l’ubiquitine et les systèmes lacustres d’ubiquitine qui régulent votre voie biologique spécifique d’intérêt.Il s’agit ainsi d’un point de départ pour d’autres enquêtes.

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L'ubiquitination est une modification post-traductionnelle clés réalisée par un ensemble de trois enzymes. Des mutations de gènes impliqués dans cette modification sont associés à différentes pathologies humaines. Ici, nous décrivons les protocoles pour détecter l'ubiquitination de protéines dans des cellules en...

La détection des protéines ubiquitination

Atteindre un niveau compréhension des systèmes de processus cellulaires est un objectif de la biologie cellulaire moderne. Nous décrivons ici les stratégies pour les journalistes luciférase multiplexage de diverses fonctions cellulaires points d'extrémité pour interroger la fonction des gènes en utilisant l'échelle du génome bibliothèques ARNi.

Une plateforme de criblage à base de luciférase multiplexé pour interroger associée au cancer transduction du signal dans des cellules cultivées

Ici, nous décrivons un test de gène rapporteur basé sur des cellules comme un outil précieux pour cribler les bibliothèques chimiques à la recherche de composés modulant les mécanismes de contrôle post-transcriptionnel exercés par 3' UTR.

Haut-débit criblage de modulateurs chimique des gènes post-transcriptionnelle réglementées

Le protocole actuel détaille un procédé pour mesurer l'activité des enzymes fonctionnellement homologue désubiquitination. Sondes spécialisées modifier de manière covalente l'enzyme et permettent de détecter. Cette méthode a le potentiel d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques.

Méthode de mesure de l&#39;activité des enzymes de dé-ubiquitination dans des lignées cellulaires et des échantillons de tissus

Nous présentons une méthode pour la purification, la détection et l’identification des peptides diGly qui proviennent de protéines ubiquitinées à partir d’échantillons biologiques complexes. La méthode présentée est reproductible, robuste et surpasse les méthodes publiées par rapport au niveau de profondeur de l’analyse ubiquitinome.

Détection des sites d’ubiquitination des protéines par l’enrichissement du peptide et la spectrométrie de masse

Ce protocole vise à établir des protéomes spécifiques à l'ubiquitine (Ubquitin) et à l'ubiquitine (Ubls) afin d'identifier les altérations de ce type de modifications post-traductionnelles (PTM), associées à une condition spécifique telle qu'un traitement ou un phénotype.

Profilage des modifications post-traductions à l'ubiquitine et à l'ubiquitine et identification des modifications importantes

Cette méthode décrit l’évaluation des changements mondiaux dans la topologie de chaîne d’ubiquitine. L’évaluation est effectuée par l’application d’une approche protéomique ciblée basée sur la spectrométrie de masse.

Analyse en chaîne de l’ubiquitine par surveillance parallèle des réactions

Nous fournissons un protocole détaillé pour un test d’ubiquitylation d’un substrat spécifique et d’une ubiquitine-ligase E3 dans des cellules de mammifères. Les lignées cellulaires HEK293T ont été utilisées pour la surexpression des protéines, le substrat polyubiquitylé a été purifié des lysats cellulaires par immunoprécipitation et résolu dans SDS-PAGE. L’immunoblotting a été utilisé pour visualiser cette modification post-traductionnelle.

Évaluation de l’ubiquitylation du substrat par l’ubiquitine-ligase E3 dans les lysats de cellules de mammifères

L’expérience utilisée ici montre une méthode d’amarrage moléculaire combinée à des technologies de sonde pour prédire et valider l’interaction entre de petites molécules de la médecine traditionnelle chinoise et des cibles protéiques.

Criblage de composés de médecine traditionnelle chinoise pour inhiber l’activité d’UCHL3 sur la base de la technologie des sondes enzymatiques d’amarrage moléculaire et de désubiquitination

L’ubiquitination est un régulateur critique des fonctions intracellulaires des protéines. Ici, nous décrivons deux méthodes de lyse cellulaire pour détecter les niveaux d’ubiquitination des protéines du substrat dans les cellules de mammifères et comparons leur efficacité dans l’analyse des niveaux d’ubiquitination. La surexpression des protéines dans HEK293T cellules a été induite par transfection transitoire, et des protéines ubiquitinées ont été détectées par analyse western blot.

Stratégies comparatives pour la détection de l’ubiquitination dans les lysats cellulaires de mammifères en utilisant SMAD2/SMURF2 comme modèle

Découvrez une méthode de criblage siRNA ciblée pour identifier de nouveaux régulateurs des systèmes ubiquitine et ubiquitine-like dans la réponse à l'hypoxie HIF1A. Cette approche rapide et économique permet d'étudier des voies biologiques spécifiques.

siRNA contrôle pour la ubiquitine et les régulateurs du système ubiquitine-comme des voies biologiques dans des cellules de mammifères en culture (Vidéo) | JoVE Journal

siRNA contrôle pour la ubiquitine et les régulateurs du système ubiquitine-comme des voies biologiques dans des cellules de mammifères en culture

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