Name: Le nerf sciatique menottes modèle de douleur neuropathique chez les souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 9 s
Description: Apprenez à établir un modèle de douleur neuropathique chez la souris par compression du nerf sciatique avec un manchon en polyéthylène. Ce protocole permet d'évaluer l'allodynie mécanique et de tester l'efficacité de traitements comme la nortriptyline.

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Ce travail a été soutenu par le Centre National de la Recherche Scientifique (contrat UPR3212), l&#39;Université de Strasbourg et par un NARSAD Young Investigator Grant de la Fondation recherche sur le cerveau et le comportement (à IY). Les frais de publication sont pris en charge par le réseau Neurex (Programme Interreg IV Rhin supérieur).

Des protocoles ont été approuvés par le &quot;comité d&#39;éthique en Matière d&#39;expérimentation animale de Strasbourg&quot; (CREMEAS). 1. Base de mesure de patte de retrait seuils <ol><li> Laissez les souris à s&#39;habituer à des animaleries pendant au moins 10 jours à 2 semaines avant le lancement des procédures de test. </li><li> Habituer les souris à la von Frey test set-up et de la procédure Frey von qui sont décrits à la section 4. </li><li> Avant la chirurgie, évaluer les mécaniques les seuils de retrait de la patte avec des filaments de von Frey tels que décrits dans la section 4.3. Remarque: Répétez la procédure jusqu&#39;à ce que des jours différents au moins trois valeurs consécutives stables sont obtenus pour les seuils de retrait de la patte. </li><li> Attribuer la souris pour les différents groupes expérimentaux afin que ces groupes ne diffèrent pas d&#39;abord pour les seuils de retrait de la patte. </li></ol> 2. Procédure de chirurgie à manchette Implantatisur <ol><li> Peser l&#39;animal. Note: le poids corporel de souris devrait être supérieure à 20 g pour la procédure d&#39;insertion de la coiffe décrite ci-après. </li><li> Anesthésier les animaux par une injection intrapéritonéale de 4 ml / kg d&#39;un mélange de kétamine (17 mg / ml) et de xylazine (2,5 mg / ml) dans du NaCl à 0,9%, ce qui fournit d&#39;environ 45 min de l&#39;anesthésie. </li><li> Vérifier l&#39;absence de réflexes de patte en pinçant une patte arrière avec des pincettes et vérifier l&#39;absence de réflexes oculaires pour s&#39;assurer que l&#39;animal est complètement anesthésié. </li><li> Raser la jambe droite du genou à la hanche en utilisant un rasoir électrique. </li><li> Appliquer le gel de protection liquide pour les yeux pour les yeux avec un coton-tige. </li><li> Placez l&#39;animal sur son côté gauche et placez la patte postérieure droite sur un petit oreiller et de maintenir le membre postérieur droit de l&#39;oreiller avec du ruban adhésif. </li><li> Désinfecter le domaine de la chirurgie à la chlorhexidine et 70% d&#39;éthanol en utilisant un tampon de gaze ou un tampon de coton-tige. </li><li> Trouver le fémur à l&#39;aide de l&#39;index et de faire unincision d&#39;environ 0,5 cm, parallèlement au fémur et environ 1,5 mm en avant du fémur. </li><li> Séparez les muscles proches du fémur avec deux bâtons autoclaves. Notes: Ne jamais couper le muscle. Normalement, les couches musculaires se séparent facilement sans saignement et le nerf sciatique est alors visible. En cas de saignement, utiliser un tampon de coton-tige stérile pour absorber le sang. </li><li> Insérez deux bâtons autoclave dessous du nerf sciatique à exposer sa branche principale, et hydrater le nerf avec une solution physiologique stérile (NaCl 0,9%). </li><li> Maintenez la section 2 mm stérile préparée à l&#39;avance de la scission de PE-20 tuyaux en polyéthylène (manchette), 0,38 mm de diamètre / 1,09 mm OD, avec l&#39;aide d&#39;un bâton d&#39;acier pointu et un collier de bouledogue. <ol><li> Insérez la clé en acier pointu dans le brassard, qui peu ouvrir. </li><li> Utilisation de l&#39;ouverture latérale manchon, insérer le bouledogue à une extrémité de la manchette et parallèle à la manchette. Tourner le bouledogue (180 °) afin qu&#39;il tiendra le brassard par lecôté qui est opposé à l&#39;ouverture latérale. Fermez le bouledogue et retirer la clé en acier pointu. Remarque: La rotation est fait pour permettre la tenue sur le poignet dans une position optimale pour l&#39;insertion, la pince bulldog contribue également à maintenir le brassard partiellement ouverte. Le modèle et de la taille de la pince de bouledogue sont essentiels pour cette étape de la procédure. </li></ol></li><li> Demandez à une deuxième expérimentateur tenir les deux morceaux de bois sous le nerf et séparer les bâtons de faciliter l&#39;accès à une section du nerf sciatique qui est d&#39;environ 4 mm de long doucement. </li><li> Insérez le disque 2 mm brassard autour de la branche principale du nerf sciatique, en commençant par l&#39;insertion de la partie de la coiffe qui est distale au bouledogue autour de la partie du nerf qui est à proximité de la hanche. </li><li> Fermez le brassard doucement en exerçant une pression sur ses deux faces distales avec des pinces, sans serrer ou changer la forme du tube. Tourner le manchon afin de s&#39;assurer qu&#39;il est correctement fermé. </li><li> Suturer la couche de la peau rasée esprith noeuds chirurgicaux. </li><li> Placer la souris sur son côté gauche dans une cage de maison propre. Gardez sous la lampe de chaleur jusqu&#39;à ce que la souris est éveillé. </li><li> Ajoutez de l&#39;eau et à placer certains de bouffe directement dans la cage de la maison. </li></ol> 3. Procédure de chirurgie pour les contrôles Sham <ol><li> Appliquer la même procédure de chirurgie comme décrit ci-dessus de l&#39;étape 2.1 à l&#39;étape 2.9, puis suivez les étapes de 2.15 à 2.17. Pour les commandes fictives, omettre les étapes 2.10 à 2.14 qui ne concernent que l&#39;insertion de la coiffe. </li></ol> 4. Essais Frey von <ol><li> Placez la souris dans des boxes individuels clairs (7 cm x 9 cm x 7 cm) avec des trous, sur une plaque perforée élevée de lisse en acier inoxydable (1 mx 50 cm, 5 perforations mm cercle avec 2,5 mm entre les frontières de perforation). Note: Jusqu&#39;à 12 souris peuvent être concomitante testés sur ce set-up. Animaux opérés peuvent être testés le jour après la chirurgie. Cependant, 3 jours de récupération est recommandé de diminuer la hypersensibilité post-opératoire observé danscontrôles factices. </li><li> Laisser les animaux s&#39;habituent à 15 min avant le test. </li><li> Appliquer des filaments de von Frey à la surface plantaire de chaque patte arrière d&#39;une série de forces ascendantes. Notes: Les filaments de von Frey sont poils en plastique de diamètres calibrés. Ils sont 5 cm de long et sont fixés sur des applicateurs portables. La vitesse d&#39;application de filament, le degré de flexion et de la durée de l&#39;application peut influer sur les valeurs de seuil que l&#39;on obtient avec ce test 3. Avec la procédure actuelle chez les souris, les filaments qui sont le plus souvent utilisés sont le 0,16, 0,4, 0,6, 1, 1,4, 2, 4, 6, 8, et 10 g. <ol><li> Appliquer le filament choisi à la surface plantaire de la patte gauche jusqu&#39;à ce que le filament se plie simplement. Répétez la procédure en trois à cinq fois consécutives, puis faire la même chose à la patte droite. Une fois que le filament a été testé sur deux pattes, tester l&#39;animal suivant. Remarques: Éviter patte bords latéraux qui peuvent être plus sensibles. La réponse attendue est une patteretrait, broncher soudaine ou patte lécher. Examiner la réponse comme positif si au moins trois réponses attendues sont observées sur cinq essais. Une patte donnée est toujours testé à trois reprises, mais la quatrième et cinquième essais sont effectués que si 1 ou 2 réponse (s) a (ont) observée au cours des trois premiers essais. Chez les souris C57BL/6J, commencer les tests de pré-chirurgie avec 1,4 g filament. Après la chirurgie, commencer les essais avec 0,4 g filament. Si une réponse positive est observée avec le filament d&#39;abord testé, tester un filament de la force faible (au lieu de plus) à l&#39;étape 4.3.2. </li><li> Appliquer le même filament à l&#39;autre d&#39;animaux selon la procédure 4.3.1. Une fois que tous les animaux sont testés, commencer à nouveau sur le premier animal avec l&#39;autre filament de plus de force. Répétez la procédure jusqu&#39;à ce que toutes les souris donnent une réponse positive. Notes: test chaque animal jusqu&#39;à deux filaments consécutifs donnent une réponse positive. Considérons la valeur de gramme de filament inférieure qui a donné une réponse positive que le savoir de la patteseuil hdrawal pour cet animal. </li></ol></li></ol>

Les auteurs déclarent qu&#39;ils n&#39;ont aucun intérêt financier concurrents.

Le modèle &quot;manchette&quot; a été initialement développé chez le rat pour obtenir un de constriction chronique standardisée et reproductible avec l&#39;implantation de plusieurs manchettes autour du nerf sciatique 6. Il a ensuite été modifié pour implanter un seul brassard 7,8, même si certains groupes de recherche utilisent encore l&#39;insertion de multiples revers 19-22. Il a ensuite été adapté aux souris 9,23, qui a ouvert la possibilité d&#39;utiliser des animaux transgéniques. Le manchon est généralement de 2 mm de long, mais d&#39;autres longueurs avoir également été utilisé dans des rats 22. Le tube de polyethylene dépend de l&#39;espèce: PE-20 chez la souris 9, et PE-60 ou PE 24,25 7,8,26,27-90 chez le rat. L&#39;allodynie mécanique est mesurée avec des poils de von Frey. Dans ce test, les valeurs absolues pour les seuils de retrait de la patte peuvent dépendre de la surface sur laquelle se trouve l&#39;animal 28 ou sur la durée du filament flexion 3, mais ces facteurs ne pasaffecter la détection de l&#39;allodynie neuropathique. Le modèle &quot;manchette&quot; est d&#39;un intérêt pour l&#39;étude des mécanismes de la douleur neuropathique. Il a été utilisé pour étudier les changements morphologiques dans les fibres myélinisées et amyéliniques 6,29, et des changements fonctionnels dans les neurones sensoriels, afférents primaires et les neurones spinaux 19,21,22,30-35. Il a permis la démonstration que l&#39;activation gliale et un passage central dans neuronale gradient d&#39;anions, de participer à des changements dans l&#39;activité et dans les réponses de la moelle épinière et les neurones nociceptifs dans allodynie neuropathique 24,36-38. L&#39;influence des récepteurs du glutamate 7,39-41, de récepteurs opioïdes 16,42-45 et de récepteurs nicotiniques 46 a aussi été étudié dans ce modèle. Un autre intérêt du modèle a sa réponse aux traitements actuels de la douleur neuropathique, c&#39;est à dire., Gabapentinoïdes et les antidépresseurs. Semblables à des observations cliniques: gabapentinoïdes affichent à la fois unn effet analgésique de courte durée aiguë à forte dose et une action retardée soutenue soulager qui est observé après quelques jours de traitement, les antidépresseurs tricycliques et la sérotonine et de la noradrénaline inhibiteurs n&#39;ont pas d&#39;effet analgésique aiguë à dose pertinente, mais ils affichent un retard subi soulager action qui nécessite 1 à 2 semaines de traitement, et la recapture de la sérotonine sélective inhibiteur fluoxétine est inefficace 16. Le modèle convient donc d&#39;étudier le mécanisme moléculaire sous-jacent de ces traitements 16-18,44,45,47, qui peut révéler de nouvelles cibles thérapeutiques pour tester chez les patients 48-51. Enfin, le modèle permet également à l&#39;étude sur les conséquences de la douleur neuropathique anxio-dépressifs. Cliniquement, ces conséquences affectent environ un tiers des patients souffrant de douleurs neuropathiques, mais sont moins étudiées préclinique que les aspects sensoriels de la douleur. Dans ce modèle, une évolution en fonction du temps de l&#39;anxiété et de la dépression en formephénotypes sive comme est présent 52 et le mécanisme connexe peuvent donc être pris en compte. Les poignets et des procédures normalisées dans ce modèle de souris de la douleur neuropathique traduisent par une faible variabilité interindividuelle de la allodynie mécanique. La possibilité d&#39;utiliser des animaux génétiquement modifiés, l&#39;allodynie 17,18,44-47,52 de longue durée, la réponse aux traitements utilisés en clinique et le développement en fonction du temps des symptômes anxio-dépressifs font de ce modèle approprié pour l&#39;étude des différents aspects et conséquences de la douleur neuropathique et de ses traitements, qui ont déjà apporté de précieuses informations à ce domaine de recherche.

La douleur neuropathique est habituellement chronique et se présente comme une conséquence d&#39;une lésion ou une maladie affectant le système somatosensoriel. Inadaptés changements dans les neurones sensoriels blessés et le long de la totalité de la voie nociceptive au sein du système nerveux central participent à ce syndrome complexe. Différents modèles ont été développés chez les rongeurs pour étudier la douleur neuropathique et de ses traitements 1-3. Basé sur étiologies connues, les modèles de but de la douleur neuropathique à imitant la polyneuropathie observée dans le diabète, les blessures aux nerfs périphériques, les blessures centrales, la névralgie du trijumeau, les neuropathies consécutifs à la chimiothérapie, la névralgie post-herpétique, etc Différents modèles de une lésion nerveuse périphérique chez les rongeurs se concentrer sur le nerf sciatique. Ces modèles dépendent d&#39;une compression et / ou une section de ce nerf. En effet, le nerf sciatique offre par rapport chirurgie facile et permet de tests basés sur les réflexes de retrait de la patte. Le models de compression du nerf chronique comprennent, par exemple: la blessure par constriction chronique (ICC) 4,5, le nerf sciatique menottes 6-9, la ligature partielle nerf sciatique (PSL) 10, la ligature de nerf spinal (SNL) 11, ou la commune péronier ligature du nerf 12. Modèles dénommé &quot;lésion du nerf épargné&quot; (SNI) sont aussi largement utilisés. Ils se composent d&#39;une ligature serrée et axotomie de deux des trois branches terminales du nerf sciatique, tandis que la troisième branche reste intacte 13-15. Les différents modèles de douleur neuropathique, qui ciblent le nerf sciatique, se traduisent par une allodynie mécanique chronique (une réponse à un stimulus nociceptif normalement non nociceptive) sur la patte arrière blessée. Ici, la procédure de chirurgie détaillé pour le «modèle de manchette&quot; de la douleur neuropathique chez la souris est décrite. Elle consiste en l&#39;implantation d&#39;un brassard de polyéthylène autour de la branche principale du nerf sciatique 6-9. Thl&#39;utilisation de l&#39;e de filaments de von Frey est également décrite. Ces filaments permettent d&#39;évaluer l&#39;allodynie mécanique qui est un symptôme nociceptive de longue durée présente dans ce modèle.

<table><tbody><tr><td>Tube en polyéthylène PE-20</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PY2-59-8323</td><td>Fendu avant l’intervention</td></tr><tr><td>Kétamine</td><td>Centravet</td><td>IMA004</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine HCl</td><td>Sigma</td><td>X1251</td><td>Fraîchement préparé avant l’intervention</td></tr><tr><td>Ocry-gel</td><td>Centravet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pince</td><td>FST</td><td>11003-12</td><td>52,5 mm Pince Bulldog</td></tr> droite <tr><td></td><td>FST</td><td>p130 18038-45</td><td></td></tr><tr><td>Plaque perforée</td><td>CTTM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>von Frey filaments</td><td>Bioseb</td><td>NC-12775</td><td></td></tr></tbody></table>

le nerf sciatique menottes modèle de douleur neuropathique chez les souris

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

La douleur neuropathique est la conséquence d&#39;une lésion ou une maladie affectant le système somatosensoriel. Ce résultats de syndrome de changements inadaptés dans les neurones sensoriels blessés et le long de la totalité de la voie nociceptive au sein du système nerveux central. Il est habituellement chronique et difficile à traiter. Afin d&#39;étudier la douleur neuropathique et de ses traitements, différents modèles ont été développés chez les rongeurs. Ces modèles découlent de étiologies connues, reproduisant ainsi les blessures nerveux périphériques, lésions centrales et-métaboliques, des neuropathies infectieuses ou liés à la chimiothérapie. Les modèles murins de lésion nerveuse périphérique ciblent souvent le nerf sciatique qui est facile d&#39;accès et permet les tests nociceptifs sur la patte arrière. Ces modèles reposent sur une compression et / ou d&#39;une section. Ici, la procédure de chirurgie détaillé pour le «modèle de manchette&quot; de la douleur neuropathique chez la souris est décrite. Dans ce modèle, un brassard de PE-20 tuyaux en polyéthylène de longueur standardisée (2 mm) est unilatéralement implanted autour de la branche principale du nerf sciatique. Il induit une allodynie mécanique de longue durée, c&#39;est à dire. Une réponse nociceptive à un stimulus normalement non nociceptive qui peut être évaluée en utilisant des filaments de von Frey. Outre les procédures de chirurgie et d&#39;essais détaillés, l&#39;intérêt de ce modèle pour l&#39;étude des mécanismes de la douleur neuropathique, pour l&#39;étude de la douleur neuropathique des aspects sensoriels et anxio-dépressifs, et pour l&#39;étude des traitements de la douleur neuropathique sont également discutés.

Les données sont exprimées en moyenne ± SEM. Les analyses statistiques ont été effectuées en utilisant une analyse multi-factorielle de la variance (ANOVA) ou des tests t non appariés conformément à la conception expérimentale. Pour ces analyses, les groupes de chirurgie de feinte et de manchette ainsi que la solution saline vs traitements médicamenteux ont été considérés comme des facteurs entre les groupes. Le cas échéant, des analyses répétées de mesure ont été utilisés pour les données de cours de temps. Les comparaisons post-hoc ont été effectuées en utilisant le test de Duncan. La signification statistique a été examiné à p &lt;0,05. Lorsque vous utilisez les procédures décrites ci-dessus, les résultats de l&#39;implantation de manchette en une allodynie ipsilatéral comme illustré à la figure 1. Une fois que la souris est habitué à la procédure de test, les valeurs des seuils de retrait de la patte dans le test de von Frey restent stables dans le temps et sont pas affecté par la procédure chirurgicale en elle-même, comme illustré sur les animaux Sham. Il devrait cependant êtrea noté que l&#39;allodynie post-opératoire transitoire peut généralement être observé chez les souris Sham. Lorsque cette allodynie est présent, la réponse de retrait de la patte revient à la ligne de base après quelques jours post-chirurgie. Chez les souris de manchette, la allodynie ipsilatéral est déjà présent sur ​​le premiers jours post-chirurgie et est maintenue pendant plus de 2 mois (voir 9, et la figure 1; F8, 344 = 29,5, p &lt;0,001). L&#39;allodynie induite brassard reste ipsilatéral chez les souris C57BL/6J quand elle est mesurée par le test de von Frey, comme décrit ci-dessus, mais dans d&#39;autres conditions de la présence d&#39;une allodynie de la patte controlatérale peut également être observé 8. Les valeurs absolues de base sont généralement entre 4 et 6 g chez la souris C57BL/6J, mais le protocole d&#39;essai peuvent affecter ces valeurs. Les antidépresseurs tricycliques sont parmi les traitements cliniques de première ligne pour les douleurs neuropathiques. Dans ce modèle, l&#39;antidépresseur tricyclique nortriptyline de drogues (5 mg / kg, intrapéritonéale, deux fois par jour) relieves l&#39;allodynie neuropathique après environ 2 semaines de traitement, comme l&#39;illustre la figure 2 (F7, 91 = 15,3, p &lt;0,001; post-hoc: (CuffNor = Sham)&gt; CuffSal à p &lt;0,001 jours 29 à 34). À cette dose, aucune action analgésique aiguë de l&#39;antidépresseur est observée 16,17. Pour imiter le soulagement de la douleur durable qui est présente chez les patients prenant ces médicaments, les souris peuvent être testés avant l&#39;administration du médicament le matin plutôt qu&#39;après. Cette procédure d&#39;évaluation d&#39;un effet de longue durée amorcée par jours de traitement permet. Dans ce cas, il faut 1 à 2 semaines de traitement à observer un soulagement durable de la allodynie neuropathique. Lorsque le traitement est interrompu, une rechute est habituellement observée dans les 3 à 4 jours 18. A côté de certains antidépresseurs, gabapentinoïdes sont les autres traitements de premier choix pour les douleurs neuropathiques. La gabapentine a une action analgésique aigu et transitoire dans ce modèle 16, mais il affiche également une lon retardée et<html> g durée d&#39;action antiallodynique pour tester l&#39;animal chaque jour avant l&#39;administration du médicament (figure 3, p &lt;0,001). Cette action est plus rapide que avec des médicaments antidépresseurs. <img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1.jpg" /> Figure 1. Mécanique seuils de retrait de la patte dans le modèle de manchette de la douleur neuropathique chez les souris. Souris C57BL/6J mâles adultes ont été habitués à la procédure von Frey jusqu&#39;à une ligne de base stable a été obtenu (la ligne de base est représenté au point 0 sur le graphique). Ces deux pattes ont été testés. Les souris de manchette affichent allodynie mécanique ipsilatéral comme montré par les seuils de retrait de la patte abaissés (n = 10 par groupe). tp_upload/51608/51608fig2.jpg &quot;/&gt; Figure 2. Action retardée antiallodynique d&#39;un antidépresseur tricyclique. Après deux semaines après la chirurgie, les souris ont reçu un traitement par voie intrapéritonéale deux fois par jour (matin et soir) avec soit 0,9% de NaCl ou 5 mg / kg de chlorhydrate de nortriptyline (n = 5 ou 6 par groupe ). Le test de von Frey a été effectuée avant le traitement du matin. Avec cette procédure, on observe une action antiallodynique retardé de nortriptyline, qui nécessite environ 12 jours de traitement. <img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3.jpg" /> Figure 3. L&#39;action antiallodynique d&#39;un gabapentinoid. Après trois semaines après la chirurgie, les souris ont reçu un traitement par voie intrapéritonéale deux fois par jour (matin et soir) avec soit 0,9% de NaCl ou 10 mg / kg gabapentine (n = 5 par groupe). Le critère de von Frey a été effectuée avant le traitement du matinment. Avec cette procédure, on observe une action antiallodynique retard et durable de la gabapentine. Les données sont présentées avant de commencer les traitements et à la 6e journée de soins.

La douleur neuropathique est une conséquence d&#39;une lésion ou d&#39;une maladie affectant le système somatosensoriel. Le «modèle de manchette» de la douleur neuropathique chez les souris se compose de l&#39;implantation d&#39;un brassard de polyéthylène autour de la branche principale du nerf sciatique. L&#39;allodynie mécanique est testée en utilisant des filaments de von Frey.

Le nerf sciatique menottes modèle de douleur neuropathique chez les souris

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

L'objectif général de cette procédure est de mettre en place un modèle murin de douleur neuropathique suite à une compression du nerf périphérique. Après la préparation de l'animal pour la chirurgie, la branche principale du nerf sciatique est exposée et un manchon en polyéthylène est inséré autour du nerf. Ensuite, la plaie est fermée.Pour évaluer la sensibilité de la patte, les souris sont placées dans des boîtes transparentes posées sur une plaque d'acier perforée. Une série de filaments de Von Frey de calibre croissant est ensuite appliquée sur la patte jusqu'à ce que l'animal réagisse de manière constante à la pression. En fin de compte, la présence d'une allodynie mécanique durable et ipsilatérale à la patte opérée peut être observée en traçant les seuils mécaniques obtenus lors du test de Von Frey en fonction du temps.Ce modèle peut aider à répondre à des questions essentielles dans le domaine de la douleur, telles que les mécanismes sous-jacents à la douleur neuropathique. Il peut également être utilisé pour étudier les traitements actuels afin d'évaluer de nouveaux agents thérapeutiques ou pour analyser les conséquences anxio-dépressives de la douleur neuropathique. Une démonstration visuelle de cette méthode est toutefois essentielle, car l'implantation du manchon constitue une étape difficile à expliquer sans support visuel.Pour évaluer le seuil mécanique de retrait de la patte, placez d'abord les souris à s'habituer dans des boîtes individuelles transparentes posées sur une plaque d'acier perforée ; jusqu'à 12 animaux peuvent être testés en parallèle lors de l'essai. Utilisez des filaments de von Frey. Ces poils en plastique de diamètres calibrés sont fixés à un applicateur manuel.Lors de la flexion, chaque filament exerce une pression proportionnelle à son diamètre. Chez la souris, les filaments les plus couramment utilisés varient de 0,16 à 10 grammes. Commencez par la pression la plus faible.Lors de la mesure des seuils pour tester les souris, appliquez le filament sur la patte postérieure gauche jusqu'à ce que les filaments commencent à fléchir. Évitez les bords latéraux de la patte, qui peuvent être plus sensibles. L'animal réagit à l'application du filament.Si la patte tressaille ou est retirée, répétez l'application deux fois supplémentaires ; si l'animal réagit aux trois applications, testez l'autre patte. Sinon, appliquez les filaments un total de cinq fois avant de tester l'autre patte. Testez chaque souris consécutivement avec le filament de von Frey choisi, puis répétez le processus avec le filament suivant.Si un animal réagit trois fois au même filament, cela est considéré comme un résultat positif. Lorsque deux filaments consécutifs obtiennent des résultats positifs, arrêtez le test sur cette patte. Le seuil de retrait de la patte correspond à la plus faible des deux valeurs en grammes pour une souris donnée.Ces valeurs peuvent différer entre les deux pattes. Répétez cette procédure quotidiennement jusqu'à l'obtention d'au moins trois valeurs seuils consécutives stables. Ensuite, procédez à la chirurgie.Enregistrez le poids de l'animal, qui doit être supérieur à 20 grammes, et anesthésiez l'animal avec de la kétamine et de la xylazine. Vérifiez l'absence de tout réflexe podal ou oculaire. Appliquez un gel protecteur sur les yeux à l’aide d’un coton-tige.Ensuite, rasez la jambe droite de l'animal depuis le genou jusqu'à la hanche. Puis positionnez l'animal avec la patte postérieure droite surélevée sur un petit coussin, et fixez cette patte avec du ruban adhésif. Désinfectez la peau exposée au moyen de chlorhexidine et d'éthanol à 70 %.Commencez par une palpation pour localiser le fémur. Ensuite, effectuez une incision de 0,5 centimètre parallèle au fémur, à environ 1,5 millimètre en arrière du fémur. À l’aide de bâtonnets stérilisés au autoclave, séparez les muscles proches du fémur, sans les sectionner.Le tronc principal du nerf sciatique doit être mis en évidence. En cas de saignement, veillez à l'essuyer avec un coton-tige pour les témoins factices. Cette étape termine la chirurgie pour les souris à être cerclées.Insérez deux bâtonnets sous le nerf sciatique pour exposer la branche principale du nerf. Ajoutez un jet de solution saline physiologique pour hydrater le nerf. Saisissez maintenant un manchon fendu à l’aide d’un bâtonnet en acier pointu et d’une pince hémostatique.Insérez ensuite le clamp bulldog et faites-le pivoter de 180 degrés afin qu'il maintienne le manchon du côté opposé à l'ouverture latérale du manchon. Fermez maintenant le bulldog et retirez le bâtonnet pointu. Demandez ensuite à un assistant de tenir les deux bâtonnets sous le nerf et de les écarter doucement.Pour permettre l'accès au nerf, insérez le manchon de deux millimètres autour de la branche principale du nerf sciatique. Commencez par insérer la partie du manchon située distalement par rapport au clamp de type bulldog autour de la partie du nerf située proximalement par rapport à la hanche. Fermez ensuite délicatement le manchon à l’aide d’une pince afin de vous assurer qu’il est correctement fermé.Retournez-le. Maintenant, retirez les bâtonnets et sutures la peau fermée. À l’aide de nœuds chirurgicaux, transférez la souris dans sa cage d’habitation propre en la plaçant sur son côté gauche.Gardez-le au chaud avec la lampe chauffante jusqu'à ce qu'il se réveille. Ajoutez de la nourriture et de l'eau supplémentaires dans la cage afin que la souris puisse se nourrir. Les animaux peuvent être testés pour des seuils de retrait anormalement bas le jour suivant l'intervention chirurgicale, mais il est préférable d'attendre trois jours afin de réduire l'hypersensibilité postopératoire avec cette procédure.Les souris soumises à l'application du manchon présentent une allodynie homolatérale pendant plus de deux mois par rapport aux témoins faux opérés. Le traitement des souris par cinq milligrammes par kilogramme de nortriptyline, un antidépresseur tricyclique, deux fois par jour, soulage l'allodynie neuropathique après environ deux semaines de traitement.Si le traitement était interrompu, les souris présentaient généralement une rechute en trois à quatre jours. Ce modèle est également sensible à un autre traitement contre la douleur neuropathique : les gabapentinoïdes. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment localiser la branche principale du nerf sciatique chez des souris anesthésiées et y insérer une gaine.Dans ce modèle de douleur neuropathique, le test du filament de von Frey permet en outre d'évaluer les seuils mécaniques et d'étudier les réponses aux médicaments.

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Le modèle du nerf Epargnée blessures animal est décrit ici comme un modèle murin de douleur neuropathique périphérique suivantes dénervation partielle du nerf sciatique par lesioning les branches du tibia et du nerf péronier commun, laissant le nerf saphène reste intacte. Modification du comportement résultant d'allodynie mécanique est quantifiée par des filaments de von Frey.

Les blessures du nerf Epargnée (SNI) Modèle d&#39;allodynie mécanique induite chez la souris

Grâce à la simplicité de la chirurgie et le résultat robuste du comportement, de constriction chronique du nerf sciatique est l'un des modèles animaux pré-éminents de la douleur neuropathique. Dans les 24 heures suivant la chirurgie, hypersensibilité à la douleur est établi et peut être mesurée quantitativement l'aide d'un von Frey esthésiomètre (essais mécaniques) et le compteur analgésie plantaire (essai thermique).

Constriction chronique du nerf sciatique et les essais hypersensibilité à la douleur chez le rat

Dans cette vidéo, nous développons un modèle murin in vivo d’invasion périneurale en injectant des cellules cancéreuses du pancréas dans le nerf sciatique. Ce modèle permet de quantifier l’étendue de l’invasion et d’étudier les interactions entre les cellules cancéreuses et les nerfs.

Modèle d’invasion périneurale murine : génération d’un modèle in vivo pour simuler l’invasion périneurale dans le nerf sciatique de souris

Le modèle de la section du nerf tibial est un modèle bien toléré, validé et reproductible de l'atrophie du muscle squelettique. Le protocole chirurgical de modèle est décrit et démontré dans C57Black6 souris.

Tibial Nerve Transection - un modèle standardisé pour dénervation induit l&#39;atrophie musculaire chez les souris

La chirurgie modifiée est une méthode simplifiée pour le modèle de lésion nerveuse épargnée par la souris ou le rat qui ne nécessite qu’une seule ligature et une incision pour blesser les nerfs péroniers et suraux communs.

Modèle modifié de chirurgie de lésion nerveuse épargnée de douleur neuropathique chez la souris

Le test mécanique d’évitement des conflits est utilisé comme une lecture non réflexive de la sensibilité à la douleur chez la souris qui peut être utilisée pour mieux comprendre les réponses affectives-motivationnelles dans une variété de modèles de douleur murine.

Test mécanique d’évitement des conflits pour mesurer le comportement de la douleur chez la souris

La ligature partielle du nerf sciatique induit une douleur neuropathique chronique de longue durée, caractérisée par des réponses exagérées aux stimuli thermiques et mécaniques. Ce modèle murin de douleur neuropathique est couramment utilisé pour étudier des thérapies innovantes pour la gestion de la douleur. Cet article décrit en détail l’intervention chirurgicale pour améliorer la standardisation et la reproductibilité.

Ligature partielle du nerf sciatique : un modèle murin de douleur neuropathique chronique pour étudier l’effet antinociceptif de nouvelles thérapies

Nous présentons un protocole d’utilisation de l’aiguilletage sous-cutané de Fu dans un modèle de lésion de constriction chronique pour induire une douleur du nerf sciatique chez le rat.

Efficacité de l’aiguilletage sous-cutané de Fu sur la douleur du nerf sciatique : changements comportementaux et électrophysiologiques dans un modèle de rat de constriction chronique

Les lésions de constriction chronique du nerf infraorbitaire distal chez la souris induisent des changements dans le comportement spontané (augmentation de l’activité de toilettage du visage) et le comportement nocifensif en réponse à la stimulation tactile (hyperréactivité à la stimulation des cheveux de von Frey) qui sont des signes de douleur continue et d’allodynie et servent de modèle pour la douleur neuropathique du trijumeau.

Lésion de constriction chronique du nerf sous-orbitaire distal (DIoN-CCI) chez la souris pour étudier la douleur neuropathique du trijumeau

Ce protocole présente un modèle de rat reproductible utilisant des nerfs sensoriels pour imiter la douleur du névrome humain et évaluer les traitements chirurgicaux, offrant ainsi un outil précieux pour la recherche translationnelle sur le névrome.

Nouveau modèle chirurgical de rongeur pour l’étude des options de traitement de la douleur du névrome à l’aide de la réinnervation musculaire ciblée par le nerf saphène

Apprenez à établir un modèle de douleur neuropathique chez la souris par compression du nerf sciatique avec un manchon en polyéthylène. Ce protocole permet d'évaluer l'allodynie mécanique et de tester l'efficacité de traitements comme la nortriptyline.

Le nerf sciatique menottes modèle de douleur neuropathique chez les souris

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