Le nerf sciatique menottes modèle de douleur neuropathique chez les souris

L’objectif global de cette procédure est d’établir un modèle murin de douleur neuropathique après compression des nerfs périphériques. Après avoir préparé l’animal pour la chirurgie, la branche principale du nerf sciatique est exposée et un brassard en polyéthylène est inséré autour du nerf. Ensuite, la plaie est refermée.

Pour tester la sensibilité de la patte, les souris sont placées dans des boîtes transparentes sur une plaque d’acier perforée. Une série de filaments Von Fray de plus en plus grands sont ensuite appliqués sur la patte jusqu’à ce que l’animal réagisse de manière cohérente à la pression. En fin de compte, la présence d’une allodynie mécanique de longue durée et ipsilatérale à la patte opérée peut être observée en traçant les seuils mécaniques obtenus à partir du test de Von Fray au cours du temps.

Ce modèle peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la douleur, telles que les mécanismes sous-jacents à la douleur neuropathique. Il peut également être utilisé pour étudier les traitements actuels, pour tester les agents néo-thepathiques ou pour étudier les conséquences anxi-dépressives de la douleur neuropathique. La démonstration visuelle de cette méthode est cependant critique car l’implantation du brassard est une étape difficile à expliquer sans support visuel.

Pour évaluer le seuil de retrait mécanique des pattes, placez d’abord les souris pour l’habitation dans des boîtes individuelles transparentes sur une plaque d’acier perforée, jusqu’à 12 animaux peuvent être testés en parallèle pour le test. Utilisez des filaments von Frey. Ces poils en plastique de diamètres calibrés sont fixés à un applicateur portable.

Lors de la flexion, chaque filament exerce une pression proportionnelle à son diamètre. Chez la souris, les filaments les plus souvent utilisés vont du point 16 à 10 grammes. Commencez par la pression la plus légère.

Lorsque vous mesurez des seuils pour tester les souris, appliquez le filament sur la patte arrière gauche jusqu’à ce que les filaments commencent à se plier. Évitez les bords latéraux de la patte, qui peuvent être plus sensibles. L’animal réagit à l’application du filament.

Si la patte tressaille ou est retirée, répétez l’application deux fois de plus, et si l’animal réagit aux trois applications, testez l’autre patte. Sinon, appliquez les filaments au total cinq fois avant de tester l’autre patte. Testez chaque souris consécutivement avec le filament von Frey choisi, puis répétez le processus avec le filament suivant.

Si un animal réagit trois fois au même filament, cela est considéré comme un résultat positif. Lorsque deux filaments consécutifs obtiennent des scores positifs, arrêtez le test sur cette patte. Le seuil de retrait de la patte est la plus basse des deux valeurs en grammes pour une souris donnée.

Ces valeurs peuvent différer entre les deux pattes. Répétez cette procédure tous les jours jusqu’à ce qu’au moins trois valeurs seuils consécutives soient stables. Procédez ensuite à la chirurgie.

Notez le poids de l’animal, qui doit être supérieur à 20 grammes, et anesthésez-le avec de la kétamine et de la xylazine. Vérifiez l’absence de réflexes de la patte ou de l’œil. Appliquez un gel protecteur sur les yeux à l’aide d’un coton-tige.

Ensuite, rasez la jambe droite du genou à la hanche. Placez ensuite l’animal avec la patte arrière droite vers le haut sur un petit oreiller et fixez cette patte avec du ruban adhésif. Désinfectez la peau exposée avec de la chlorhexidine et de l’éthanol à 70 %.

Commencez par palper pour trouver le fémur. Faites ensuite une incision de 0,5 centimètre parallèle au fémur à environ 1,5 millimètre en arrière du fémur. Maintenant, à l’aide de bâtonnets d’autoclave, séparez le muscle près du fémur, mais ne les coupez pas.

La branche principale du nerf sciatique doit être rendue visible. S’il y a un saignement, assurez-vous de l’éponger avec un écouvillon pour les contrôles simulés. Cela termine l’opération pour que les souris soient menottées.

Insérez deux bâtonnets sous le nerf sciatique pour exposer la branche principale du nerf. Ajoutez une giclée de solution saline physiologique pour hydrater le nerf. Saisissez maintenant un brassard fendu avec un bâton d’acier pointu et une pince bouledogue.

Insérez ensuite le bouledogue et faites-le pivoter de 180 degrés pour qu’il maintienne le brassard à l’opposé de l’ouverture latérale du brassard. Fermez maintenant le bouledogue et retirez le bâton pointu. Ensuite, demandez à un assistant de tenir les deux bâtons sous le nerf et de les séparer doucement.

Pour permettre l’accès au nerf, insérez le brassard de deux millimètres autour de la branche principale du nerf sciatique. Commencez par insérer la partie du brassard qui est distale au bouledogue autour de la partie du nerf qui est proximale à la hanche. Fermez ensuite doucement le brassard à l’aide d’une pince pour vous assurer qu’il est correctement fermé.

Retournez-le. Maintenant, retirez les bâtonnets et suturez la peau. À l’aide de nœuds chirurgicaux, transférez la souris dans sa cage d’origine propre, en plaçant la souris sur son côté gauche.

Gardez-le au chaud avec la lampe chauffante jusqu’à ce qu’il se réveille. Ajoutez de la nourriture et de l’eau supplémentaires dans la cage pour que la souris puisse se nourrir. Les animaux peuvent être testés pour de mauvais seuils de sevrage le lendemain de la chirurgie, mais il est préférable d’attendre trois jours pour diminuer l’hypersensibilité post-chirurgicale avec cette procédure.

Le brassard aux souris présente une allodynie ipsilatérale pendant plus de deux mois par rapport aux témoins simulés. Traiter les souris avec cinq milligrammes par kilogramme de nortriptyline. Un antidépresseur tricyclique deux fois par jour soulage l’allodynie neuropathique après environ deux semaines de traitement.

Si le traitement était interrompu, les souris rechutaient généralement au bout de trois à quatre jours. Ce modèle est également sensible à un autre traitement de la douleur neuropathique : les gabapentinoïdes. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de découvrir la branche principale du nerf sciatique dans le mize anesthésié et d’insérer un couvercle autour de celle-ci.

Dans ce modèle de douleur neuropathique, le test One Effiloch permet en outre d’évaluer les seuils mécaniques et d’étudier les réponses médicamenteuses.