Name: Analyseur portable à base dimpédance en temps réel comme un outil pour délimiter voies moléculaires impliquées dans la neurotoxicité et la neuroprotection dans une lignée cellulaire neuronale (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Découvrez une technique d'impédance pour suivre en temps réel la cytoprotection dans des lignées cellulaires neuronales. Cette méthode permet d'étudier le rôle des voies de seconds messagers dans la neuroprotection.

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Le soutien financier des expériences présentées dans l’étude a été fourni par le programme Marie Heim-Vögtlin du Fonds national suisse de la recherche scientifique.
Nous remercions Mme Johanna Nyffeler d’avoir développé un ensemble de programmes MATLAB modifiés pour le dépistage des différences statistiquement significatives dans les données de l’analyseur de cellules en temps réel, et le Dr Yama Abassi pour sa discussion utile.

Préparation 1 <ol><li> Placez la station de la temps réel analyseur de cellules dans un incubateur de culture de tissu fixée à 37 ° C et 5% de CO 2. Effectuer toutes les manipulations de culture cellulaire et de traitements pharmacologiques dans une hotte de culture de tissu dans des conditions stériles. </li><li> NOTE: neuronale lignées cellulaires nécessitant différents réglages de température par rapport à des conditions normales de culture, doivent être ajustés en conséquence. Pour les lignées cellulaires faiblement adhérentes, utiliser les agents de revêtement pour faciliter l&#39;interaction des cellules avec les microélectrodes d&#39;or dans le fond des puits de la plaque E-96. </li><li> Préparer 1,000X solutions stock des composés pharmacologiques pour le traitement de culture cellulaire (agents neuroprotecteurs ou deuxième inhibiteurs de voies de messagerie dans le solvant approprié - diméthylsulfoxyde ou de l&#39;eau stérile) et de les stocker à -20 ° C. Utilisez le solvant comme véhicule dans les traitements suivants. </li><li> Culture des cellules de neuroblastome humain SK-N-SH dans du DMEM / F1Deux milieu supplémenté avec 10% de sérum bovin fœtal (FBS) (milieu de prolifération) dans des flacons de culture cellulaire avec 175 cm 2 de surface de densité d&#39;environ 75%. Garder nombre de passage de cellules dans une plage (environ 10 passages) pour vérifier la cohérence entre les expériences en termes de taux de prolifération cellulaire et de la réponse de cytotoxicité. Les nombres inférieurs de passage sont préférés. </li><li> Laver la couche adhérente de cellules SK-N-SH avec du PBS, et trypsiniser avec une solution de trypsine-EDTA à 0,05% pendant 5 min à 37 ° C. Centrifuger les cellules à 170 xg pendant 5 min pour éliminer la trypsine. Remettre en suspension les cellules dans du milieu de prolifération de 10 ml. Compter les cellules avec Sceptre compteur de cellules et d&#39;ajuster le nombre de cellules à 300 000 cellules / ml en diluant les cellules avec un milieu de prolifération. </li></ol> 2. placage et la prolifération des cellules SK-N-SH <ol><li> Ajouter milieu de prolifération de 100 ul dans chaque puits de la plaque de E-96 et le laisser pendant 30 min dans la hotte de culture de tissu à la température ambiante pour équilibrer. Insérez le E-Plate 96 dans la station d&#39;analyse de cellules en temps réel dans l&#39;incubateur à CO2 à 37 ° C. </li><li> Démarrez le logiciel de l&#39;analyseur de cellules en temps réel. Sur la page Mise sélectionner les puits inclus dans l&#39;expérience et entrent dans les boîtes de saisie des informations sur le type de cellule, le nombre de cellules, les noms et les concentrations de composés chimiques utilisés pour le traitement des cellules. NOTE: Pour les fins du présent protocole au moins 4 répétitions sont recommandés pour chaque traitement. </li><li> Sur la page du logiciel de l&#39;annexe déterminer &quot;Steps&quot; inclus dans l&#39;expérience, en sélectionnant le nombre de balayages de mesure l&#39;indice cellulaire et l&#39;intervalle entre les balayages pour chaque étape. Depuis l&#39;étape 1 est prédéterminée pour la mesure de fond, sélectionnez «Ajouter une étape» et réglez l&#39;étape 2 pour mesurer l&#39;indice cellulaire toutes les 15 minutes pendant 96 heures. NOTE: Pour les traitements, dans lequel les effets avec une cinétique rapide sont attendus, mis balayages à intervalles plus rapprochés. </li><li> Cliquez sur Démarrer pour lancer l&#39;étape prédéterminée automatiquement 1et mesurer l&#39;impédance des supports de fond. Cette valeur est soustraite automatiquement par le logiciel au niveau de chaque point de données une fois que les cellules sont ajoutées aux puits. </li><li> Utilisation préparé précédemment dans l&#39;étape 1.5), suspension de cellules de 300 000 cellules / ml dans du milieu de prolifération. 30 000 cellules / puits pour la toxicité cellulaire / études de neuroprotection et 15 000 cellules / puits pour des études de prolifération de cellules. Sortez le E-Plate et ajouter 100 suspension cellulaire par puits pour la toxicité cellulaire / études de neuroprotection et ajouter 50 ul suspension de cellules et milieu de prolifération de 50 pi par puits pour les études de la prolifération cellulaire. Le nombre de cellules étalées par puits doit être optimisée pour chaque lignée cellulaire de façon empirique. </li><li> Agitez doucement le E-Plate 96, même pour le placage des cellules. Laisser la plaque E-96 à 30 min dans la hotte de culture de tissu à la température ambiante pour permettre aux cellules de se déposent uniformément sur le fond des puits. </li><li> Insérez le E-Plate 96 dans la station d&#39;analyse cellulaire en temps réel et commencer à l&#39;étape 2 de l&#39;annexe pâge. Surveiller les valeurs de l&#39;indice de la cellule à travers l&#39;expérience en regardant les courbes de cellules sur la page de terrain et les données de l&#39;indice cellulaire premières sur la page Index portable du logiciel. </li></ol> 3. la privation de sérum <ol><li> 24 heures après l&#39;étalement des cellules, mettre en pause l&#39;expérience, et retirez le E-Plate 96 de la station d&#39;analyse cellulaire en temps réel. Diluer deuxième inhibiteurs de messager des stocks 1,000X avec un milieu sans sérum / DMEM F12 - 200 × la concentration finale. Traiter les cellules avec 1 pi inhibiteurs de la seconde piste de messagerie pour être testés pour leur implication dans la neurotoxicité / neuroprotection 30 min avant de commencer la cytotoxicité, pour inhiber les voies respectives. Retour le E-Plate 96 de la gare et reprendre les mesures expérimentales de l&#39;indice de la cellule. </li><li> Après 30 min de pause à nouveau l&#39;expérience. Retirez délicatement milieu de prolifération pleinement de l&#39;E-Plate 96 puits avec une pipette (ou multi-canal pipette), en prenant soin de ne pas perturber la couche de cellules adhérentesen orientant le bord de la pointe de la pipette à l&#39;angle du puits. Ajouter 200 pl / puits de DMEM sans sérum / milieu F12 (milieu de privation de sérum). Assurer un échange rapide d&#39;un milieu de culture cellulaire pour réduire au minimum l&#39;agitation mécanique des cellules. </li><li> Diluer les composés à tester pour leurs effets neuroprotecteurs de 1,000X actions avec le milieu DMEM / F12 sans sérum à 200 × la concentration finale. Ajouter 1 composés de pi à tester leurs effets neuroprotecteurs et 1 pi inhibiteurs de la seconde piste de messagerie dans les puits individuels selon le plan expérimental. </li><li> Dans les cellules pour des études de prolifération ne changez pas moyen. Diluer les composés à tester de 1,000X actions à 200 × la concentration finale dans le milieu de la prolifération, de traiter avec 1 l par puits et continuer à la culture en milieu de prolifération. </li><li> Reprendre l&#39;expérience pour poursuivre Index cellulaires mesures toutes les 15 minutes pendant 96 heures comme indiqué précédemment. </li></ol> 4. données Analyse <ol><li> Pour neurotoxicité / données de neuroprotection normaliser l&#39;indice cellulaire au dernier point de temps avant le traitement pharmacologique ou changement de milieu pour réduire les variations entre les expériences en sélectionnant &quot;Cell normalisée Index&quot; et &quot;normaliser Time&quot; sur la page de la parcelle. </li><li> Mettez en surbrillance les puits sur la page de la parcelle pour les conditions expérimentales d&#39;intérêt et cliquez sur &quot;Ajouter&quot; pour tracer les courbes normalisées de l&#39;indice de la cellule. Observer la cinétique de l&#39;effet neurotoxique / neuroprotecteur, ou de messagers deuxième inhibition que les courbes de l&#39;indice cellulaire normalisées en fonction du temps. </li><li> Respecter les courbes de l&#39;indice de portable pour les traitements médicamenteux testés en milieu de prolifération en fonction du temps d&#39;évaluer si un effet sur la prolifération est impliqué dans l&#39;effet neuroprotecteur / neurotoxique. </li><li> Exporter l&#39;info expérimental pour tous les points Cell temps Indice de la page du logiciel Indice de cellules dans un fichier Excel pour lancer l&#39;évaluation statistique des résultats <br/&gt; NOTE: Dans une première étape dans l&#39;analyse statistique, un ensemble de programmes MATLAB modifiés qui utilisent le test t de Welch, avec le p-valeur tracée semilogarithmically, utiliser axe inversé sur l&#39;échelle de temps (à condition que les fichiers de code supplémentaires). Ces programmes permettent la détection des valeurs de p au-dessus de l&#39;évolution temporelle de l&#39;ensemble de l&#39;expérience en temps réel de l&#39;analyseur de la cellule, et ainsi faciliter la sélection de points dans le temps pour l&#39;analyse statistique plus détaillée. Voir le matériel complémentaire pour des informations détaillées sur les programmes. </li><li> Pour l&#39;analyse statistique des différences cellulaires valeurs de l&#39;indice sous différentes conditions de traitement à des moments spécifiques, sélectionnez des valeurs de l&#39;indice cellulaire à des moments respectifs à partir du fichier Excel exporté. Analyser les valeurs de l&#39;indice de la cellule pour les points de temps choisis avec un sens ou dans les deux sens l&#39;analyse de variance (Anova) suivie d&#39;un test post-hoc en utilisant un logiciel statistique. </li></ol>

<ol><li>Cavallucci, V., D'Amelio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matter+of+life+and+death%3A+the+pharmacological+approaches+targeting+apoptosis+in+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Pharm.+Des%22%5BJournal%5D)">Matter of life and death: the pharmacological approaches targeting apoptosis in brain diseases.</a> Curr. Pharm. Des. 17 (3), 215-229 (2011).</li>
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<li>Limame, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+dynamic+cell+viability%2C+migration+and+invasion+assessments+by+novel+real-time+technology+and+classic+endpoint+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of dynamic cell viability, migration and invasion assessments by novel real-time technology and classic endpoint assays.</a> PLoS One. 7 (10), e46536(2012).</li>
<li>Diemert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impedance+measurement+for+real-time+detection+of+neuronal+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Impedance measurement for real-time detection of neuronal cell death.</a> J. Neurosci. Methods. 203 (1), 69-77 (2012).</li>
<li>Kustermann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+label-free%2C+impedance-based+real+time+assay+to+identify+drug-induced+toxicities+and+differentiate+cytostatic+from+cytotoxic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+In+Vitro%22%5BJournal%5D)">A label-free, impedance-based real time assay to identify drug-induced toxicities and differentiate cytostatic from cytotoxic effects.</a> Toxicol In Vitro. 27 (5), 1589-1595 (2013).</li>
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<li>González-Maeso, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallucinogens+recruit+specific+cortical+5-HT%282A%29+receptor-mediated+signaling+pathways+to+affect+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Hallucinogens recruit specific cortical 5-HT(2A) receptor-mediated signaling pathways to affect behavior.</a> Neuron. 53 (3), 439-452 (2007).</li>
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<li>Galante, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+toxicity%2C+conformation+and+morphology+of+typical+initial+aggregation+states+of+A%CE%B21-42+and+A%CE%B2py3-42+beta-amyloids%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Biochem.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Differential toxicity, conformation and morphology of typical initial aggregation states of Aβ1-42 and Aβpy3-42 beta-amyloids.</a> Int. J. Biochem. Cell. Biol. 44 (11), 2085-2093 (2012).</li>
<li>Sheline, C. T., Cai, A. L., Zhu, J., Shi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+or+target+deprivation-induced+neuronal+death+causes+oxidative+neuronal+accumulation+of+Zn2%2Band+loss+of+NAD%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Serum or target deprivation-induced neuronal death causes oxidative neuronal accumulation of Zn2+and loss of NAD.</a> Eur. J. Neurosci. 32, 894-904 (2010).</li>
</ol>

Les frais de publication de la vidéo-article en cours ont été parrainés par &quot;ACEA Biosciences&quot;.

Le protocole actuel présente l&#39;utilité d&#39;une cellule d&#39;analyse en temps réel pour évaluer de façon continue et dans des conditions sans étiquette / les effets neuroprotecteurs des composés neurotoxiques dans des lignées cellulaires neuronales et pour mieux comprendre les secondes voies de messagers impliqués dans l&#39;effet. Même si l&#39;utilité du temps réel analyseur de cellules pour étudier la cytotoxicité et les effets des médicaments sur la prolifération cellulaire est gén...

La mort cellulaire neuronale joue un rôle critique dans la pathophysiologie de nombreux troubles liés au cerveau 1. La disponibilité d&#39;informations fiables et à haut débit dans des tests de toxicité in vitro est essentiel d&#39;avoir un meilleur aperçu des mécanismes de la neurotoxicité et d&#39;aider à sélectionner des molécules neuroprotectrices comme candidats thérapeutiques dans le développement de médicaments 2. Cependant, il ya beaucoup de limitations à la plus largement utilisée in vitro neurotoxicité assays.They évaluer la neurotoxicité / neuroprotection à un seul point dans le temps ne permet pas la résolution cinétique; utilisent souvent l&#39;étiquette ou de la sonde qui peut interférer avec les voies de signalisation et de limiter d&#39;autres études dans la même population de cellules, et sont souvent de main-d&#39;œuvre, et dans de nombreux cas ne fournit pas une approche mécanistique. Dans la présente étude, nous avons démontré l&#39;utilité d&#39;une cellule d&#39;analyse en fonction de l&#39;impédance en temps réel afin de déterminer la neurotoxicité et de neuroprotection dans une lignée cellulaire neuronale, en temps réel et sans marqueur sousconditions et permettent de mieux comprendre les mécanismes en aval à travers l&#39;analyse de la seconde piste de messagerie impliqués dans l&#39;effet. Des études antérieures ont confirmé la validité de la cellule d&#39;analyse en temps réel afin de déterminer la cytotoxicité, ainsi que les effets sur la prolifération cellulaire dans les lignées cellulaires par comparaison avec des techniques classiques 3,4,5,6. Par exemple, une bonne corrélation a été observée entre les lectures de la norme viabilité cellulaire WST-1 essai et cellulaires valeurs de l&#39;indice à plusieurs points dans le temps dans des conditions de prolifération basale et après deux paradigmes différents toxiques dans les cellules HeLa 3. Dans A549 et MDA-MB-231 cellules prolifération et la cytotoxicité provoquée par le paclitaxel de stabilisation des microtubules ont montré des valeurs très similaires lors de l&#39;évaluation par la mesure de l&#39;indice cellulaire et la sulforhodamine utilisé en standard B (SRB) essai 4. Dans la lignée cellulaire neuronale de neurones de l&#39;hippocampe immortalisés Index HT-22 cellulaires mesures ont été validés pour leur capacité to détecter la prolifération cellulaire, la cytotoxicité et la glutamate cytoprotection contre le 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl) largement utilisé du 2,5-diphényl-bromure (MTT) 5. Dans la même étude, les résultats d&#39;analyse de MTT et les mesures de l&#39;indice cellulaire aussi bien corrélées à la mesure neuronale des cellules progénitrices prolifération, cytotoxicité après les facteurs de croissance privation et de sauvetage de la cytotoxicité par le pan-caspase inhibiteur QVD 5. La cytotoxicité induite dans des cellules NIH 3T3 par Vandetanib (récepteur du facteur de croissance de l&#39;endothélium vasculaire et d&#39;un inhibiteur du récepteur du facteur de croissance épidermique) a montré des résultats similaires avec des valeurs mesurées de l&#39;indice cellulaire ou neutre essai d&#39;absorption rouge 6. Récemment, nous avons utilisé le système d&#39;analyse de cellules en temps réel pour évaluer les effets neuroprotecteurs de la figure 2A de la sérotonine (5-HT 2A) agoniste du récepteur de chlorhydrate de (±) -2,5-diméthoxy-4-iodoamphétamine (DOI) dans une lignée cellulaire neuronale ( cellules SK-N-SH) et criblés pour la participation du second voies de messagerie par le biais de la surveillance de l&#39;effet de leur inhibition chimique sur la neuroprotection observée 7. Fait intéressant, le récepteur 5-HT 2A a agonistes fois hallucinogènes et nonhallucinogenic (comme DOI et lisuride, respectivement), ce qui peut activer les deux secondes voies de messagerie communs et distincts 8. Les avantages de la technique présentée est qu&#39;il permet de recueillir des informations en temps réel sur la survie des cellules au cours de jours, pour délimiter les voies de seconds messagers impliqués, afin d&#39;évaluer la contribution possible des effets de prolifération à la neuroprotection, et pour sélectionner un temps optimal des études supplémentaires de point final sur la même population de cellules. Un diagramme schématique du flux de travail dans le protocole actuel est présenté sur la figure 1.

<table><tbody><tr><td>xCELLigence&nbsp ; Ensemble de système SP RTCA</td><td>ACEA Biosciences</td><td>N° : 00380601030</td><td>Se compose d’un analyseur RTCA, d’une station SP RTCA et d’une unité de contrôle RTCA</td></tr><tr><td>E-plate 96</td><td>N° ACEA Biosciences</td><td>N° : 05232368001</td><td>Pour la culture des cellules, insérées dans la station SP RTCA</td></tr> CELLULES <tr><td>SK-N-SH ATCC</td><td>(EN PARTENARIAT AVEC LGC Standards)</td><td>HTB-11</td><td>Peut être remplacé par une autre lignée cellulaire neuronale adhérente d’intérêt</td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8437</td><td>Milieu de culture cellulaire</td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal</td><td>Life Technologies</td><td>16140-063</td><td>Suppléments de prolifération, mais pas de milieu de privation sérique</td></tr><tr><td>Fiole de culture tissulaire T175</td><td>Sarstedt</td><td>83.1812.302</td><td>Pour la culture de cellules, qui seront ensuite plaquées sur la E-Plate 96</td></tr><tr><td>0,05 % Trypsine-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25300-054</td><td>Pour la trypsinisation de cellules cultivées dans des flacons de culture tissulaire</td></tr><tr><td>Compteur de cellules Scepter 2.0 Compteur de cellules</td><td>Merck Millipore</td><td>PHCC20060</td><td>Compteur de cellules automatisé</td></tr><tr><td>Saline tamponnée au phosphate</td><td>Life Technologies</td><td>10010-015</td><td>Pour le lavage des cellules</td></tr> <tr><td>(&plusmn ;)-Chlorhydrate DOI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D101</td><td>5-HT2A agoniste pour le traitement par culture cellulaire</td></tr><tr><td>LY-294002</td><td>Inhibiteur de PI3-K</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>L9908</td> pour le traitement par culture cellulaire.</tr><tr><td>Maléate de lisuride</td><td>Tocris Bioscience</td><td>4052</td><td>Composé à activité agoniste 5-HT2A pour le traitement de la culture cellulaire</td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4540</td><td>Pour dissoudre le LY-294002 et le maléate de lisuride</td></tr></tbody></table>

analyseur portable à base d&#39;impédance en temps réel comme un outil pour délimiter voies moléculaires impliquées dans la neurotoxicité et la neuroprotection dans une lignée cellulaire neuronale

Real-Time Impedance-based Cell Analyzer as a Tool to Delineate Molecular Pathways Involved in Neurotoxicity and Neuroprotection in a Neuronal Cell Line

De nombreux troubles liés au cerveau ont mort des cellules neuronales impliquées dans leur physiopathologie. Amélioration des modèles in vitro pour étudier les effets neuroprotecteurs ou neurotoxiques de drogues et les voies en aval concernés aiderait mieux comprendre les mécanismes moléculaires de neuroprotection / neurotoxicité et pourrait faciliter le développement de médicaments. Cependant, de nombreux tests in vitro existantes sur la toxicité comportent des limites importantes - plus évaluer la neurotoxicité et la neuroprotection à un seul point du temps, ne permettant pas d&#39;observer l&#39;évolution temporelle et la cinétique de l&#39;effet. En outre, la possibilité de recueillir des informations sur les voies de signalisation impliquées dans la neuroprotection aval en temps réel serait d&#39;une grande importance. Dans le protocole en vigueur, nous décrivons l&#39;utilisation d&#39;une cellule d&#39;analyse en fonction de l&#39;impédance en temps réel pour déterminer les effets neuroprotecteurs de la serotonine 2A (5-HT 2A) des agonistes du récepteur dans une lignée de cellules neuronales dans le cadre sans marquage et en temps réel conditions à l&#39;aide de mesures d&#39;impédance. De plus, nous démontrons que les inhibiteurs de la seconde piste de messagerie peuvent être utilisés pour délimiter les molécules en aval impliqués dans l&#39;effet neuroprotecteur. Nous décrivons également l&#39;utilité de cette technique pour déterminer si un effet sur la prolifération cellulaire contribue à un effet neuroprotecteur observé. Le système utilise des plaques spéciales microélectroniques dénommé E-plaques qui contiennent alternance réseaux de microélectrodes d&#39;or sur la surface inférieure des puits, servant de capteurs cellulaires. L&#39;affichage de l&#39;impédance est modifiée par le nombre de cellules adhérentes, la viabilité des cellules, la morphologie, et l&#39;adhérence. Un paramètre sans dimension appelé l&#39;indice cellulaire est dérivé à partir des mesures d&#39;impédance électrique et est utilisée pour représenter l&#39;état de la cellule. Dans l&#39;ensemble, le temps réel analyseur de cellules à base d&#39;impédance permet en temps réel, l&#39;évaluation sans étiquette de la neuroprotection et la neurotoxicité, et l&#39;évaluation de la deuxième participation de voies de messagerie, contribuant à plusévaluation détaillée et à haut débit de composés neuroprotecteurs potentiels in vitro, pour la sélection des candidats thérapeutiques.

<html> Privation de sérum conduit à diminuer dans les piles valeurs de l&#39;indice, qui peuvent être surveillés en permanence avec la cellule d&#39;analyse en temps réel Stimuli neurotoxiques aux cellules conduisent à une diminution de cellulaires valeurs de l&#39;indice, qui peut être surveillé en temps réel avec la technique présentée et dont la dynamique dépend de la relance neurotoxique spécifique et le type de cellule étudiée. Figure 2 montre l&#39;augm...

Des tests de neurotoxicité in vitro améliorés aideraient à identifier de nouveaux composés neuroprotecteurs. L’utilité d’un analyseur de cellules basé sur l’impédance en temps réel pour déterminer la cytotoxicité et la cytoprotection dans les lignées cellulaires neuronales et pour délimiter l’implication des secondes voies messagères, permettant ainsi de mieux comprendre le mécanisme de la neuroprotection, est présentée.

Analyseur portable à base d&#39;impédance en temps réel comme un outil pour délimiter voies moléculaires impliquées dans la neurotoxicité et la neuroprotection dans une lignée cellulaire neuronale

Many brain-related disorders have neuronal cell death involved in their pathophysiology. Improved in vitro models to study neuroprotective or neurotoxic ...

L'objectif général de cette procédure est d'utiliser une technique basée sur l'impédance pour suivre en temps réel la cytoprotection d'une lignée cellulaire neuronale afin de préciser le rôle des voies de messagerie secondaire dans le processus de protection. Ceci est réalisé en premier lieu en cultivant une lignée cellulaire neuronale dans des conditions prolifératives dans un analyseur cellulaire en temps réel basé sur l'impédance. Dans la deuxième étape, potentiellement pertinente.Les voies de messagerie secondaire sont inhibées pharmacologiquement avant de soumettre la lignée cellulaire à des traitements neuroprotecteurs. Ensuite, l'état de la lignée cellulaire neuronale est suivi à l'aide d'un analyseur cellulaire en temps réel dans différentes conditions expérimentales. Enfin, une analyse statistique peut être utilisée pour évaluer l'implication en temps réel des voies de messagerie secondaire dans la cytoprotection des cellules neuronales.L'avantage principal de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que les tests de neurotoxicité en point final, est qu'elle permet d'évaluer en temps réel et dans des conditions sans marquage la protection Tito et la toxi

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Mesures basées sur l’impédance de l’invasion des cellules cancéreuses du cerveau

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Préparation et essai d&#39;impédance basée sur biopuces fluidiques avec des cellules RTgill-W1 pour l&#39;évaluation rapide des échantillons d&#39;eau potable pour la toxicité

Ce protocole décrit une stratégie générale pour régénérer des microélectrodes or déployèrent commerciales équipés pour un analyseur de cellules libres étiquette visant à économiser sur les haute marche frais ofmicrochip analyses. Le processus de régénération comprend la digestion trypsique, lavage à l’éthanol et l’eau et une étape de filature, ce qui permet une utilisation répétée des micropuces.

Régénération des microélectrodes or rangés, équipé d’un analyseur de cellule en temps réel

Le cancer est une maladie mortelle en raison de sa capacité à métastaser à différents organes. Déterminer la capacité des cellules cancéreuses à migrer et à envahir dans diverses conditions de traitement est crucial pour évaluer les stratégies thérapeutiques. Ce protocole présente une méthode pour évaluer les capacités métastatiques en temps réel d’une lignée de cellules cancéreuses de glioblastome.

Mesure en temps réel de la migration et de l’invasion des cellules cancéreuses

Nous décrivons une approche pour détecter et capturer des sous-populations cellulaires invasives en temps réel. La conception expérimentale utilise l’analyse cellulaire en temps réel en surveillant les changements dans l’impédance électrique des cellules. Le cancer invasif, les cellules immunitaires, endothéliales ou stromales dans les tissus complexes peuvent être capturés et l’impact des co-cultures peut être évalué.

Détection et capture en temps réel de sous-populations cellulaires invasives provenant de co-cultures

Ici, nous démontrons l’utilisation de l’impédance électrique cellulaire (CEI) comme méthode très simple et directe pour étudier l’infection par le virus Zika et sa réplication dans les cellules humaines en temps réel. En outre, le test CEI est utile pour l’évaluation des composés antiviraux.

Plateforme d’impédance électrique cellulaire pour évaluer les inhibiteurs du virus Zika en temps réel

L’étude suivante évalue le profil toxicologique d’un cadre métallo-organique sélectionné à l’aide de la détection d’impédance cellule-substrat électrique (ECIS), une technique de criblage à haut débit en temps réel.

Détection électrique cellule-substrat pour l’évaluation en temps réel des profils toxicologiques des structures organométalliques

Nous démontrons ici la technique d’utilisation de biocapteurs basés sur l’impédance : ECIS et cellZscope, pour mesurer la force de la barrière endothéliale cérébrale. Nous détaillons la préparation et la technique d’ajout de divers stimuli à un modèle in vitro de l’endothélium cérébral. Nous mesurons, enregistrons et donnons une analyse représentative des résultats.

Mesure des changements dans l’intégrité de la barrière endothéliale cérébrale à l’aide de deux biocapteurs basés sur l’impédance en réponse aux cellules cancéreuses et aux cytokines

Nous avons développé un programme informatique pour analyser la morphologie des neurones. En combinaison avec deux ouverts existants des outils d'analyse de source, notre programme effectue une analyse Sholl et détermine le nombre de neurites, points de branchement, et des conseils neurites. Les analyses sont effectuées de telle sorte que les modifications locales dans la morphologie des neurites peut être observée.

Analyse automatisée des Sholl morphologie neuronale numérisés à de multiples échelles

Découvrez une technique d'impédance pour suivre en temps réel la cytoprotection dans des lignées cellulaires neuronales. Cette méthode permet d'étudier le rôle des voies de seconds messagers dans la neuroprotection.

Analyseur portable à base dimpédance en temps réel comme un outil pour délimiter voies moléculaires impliquées dans la neurotoxicité et la neuroprotection dans une lignée cellulaire neuronale (Vidéo) | JoVE Journal

Analyseur portable à base d'impédance en temps réel comme un outil pour délimiter voies moléculaires impliquées dans la neurotoxicité et la neuroprotection dans une lignée cellulaire neuronale

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