Les tests olfactifs pour les modèles murins de maladies neurodégénératives

L’objectif global de cette procédure est d’évaluer la fonction olfactive chez la souris. Ceci est accompli en plaçant d’abord les souris sur la restriction alimentaire ou le logement individuel. La deuxième étape consiste à préparer les stimuli olfactifs, à mettre en place la salle d’essai et à habituer les souris à la zone d’essai afin que les tests puissent être effectués.

Ensuite, effectuez les procédures de test sur les souris et analysez les données enregistrées sur la vidéo. En fin de compte, ces tests peuvent être utilisés pour mesurer les capacités olfactives dans des modèles murins génétiques de maladies neurodégénératives et dans des études cliniques de médicaments pour tester des thérapies potentielles. Bien que les déficits olfactifs soient bien documentés dans les maladies neurodégénératives, l’olfaction n’est pas systématiquement mesurée dans de nombreux modèles de maladies.

Par conséquent, notre objectif est d’assembler une batterie de tests pour mesurer plusieurs aspects de l’olfaction et des souris qui peuvent être facilement mis en œuvre dans une expérience. Ces tests peuvent aider à répondre à des questions clés liées à la relation entre les maladies neurodégénératives, la pathologie et l’olfaction, ainsi qu’à identifier le potentiel thérapeutique de nouveaux composés. Pour commencer cette procédure, donnez à la souris une à deux pastilles à utiliser quotidiennement pendant le test.

Ensuite, au moins deux jours avant le test, notez le poids de la souris, puis la nourriture limitée à 90 % de son poids corporel tous les jours du test. Habituez la souris pendant une heure avant le test en plaçant la cage domestique dans la salle de test avec juste un couvercle de filtre. Pendant l’habitation, remplissez une cage propre avec une litière propre jusqu’à trois centimètres de haut et assurez-vous que la litière est uniformément répartie dans toute la cage.

Enterrez une pastille de céréales sucrées à 0,5 centimètre sous la litière dans la cage d’essai afin qu’elle ne soit pas visible. Après cela, transférez la souris de sa cage d’accueil à la cage de test et placez un couvercle supérieur de filtre sur la cage. Commencez à compter cinq minutes avec une minuterie.

Arrêtez la minuterie lorsque la souris découvre la pastille et commence à la manger. Si la souris ne trouve pas la pastille dans les cinq minutes, terminez l’essai et enregistrez un score de 300 secondes pour cette souris. Déplacez la pastille vers le haut de la litière pour permettre à la souris de la manger.

Après le procès, retournez la souris dans sa cage d’origine. Videz maintenant la litière de la cage d’essai et nettoyez la cage avec une solution de nettoyage. Répétez la procédure pour chaque souris et changez de gants avant et après chaque souris.

Ensuite, donnez à la souris juste assez de nourriture pour maintenir 90 % de son poids corporel. Effectuez les tests du deuxième au cinquième jour de la même manière que le premier jour de test, mais enterrez la pastille à un endroit différent de la cage pour chaque essai sur les tests. Le sixième jour, au lieu de porter la pastille sous la litière, placez-la sur la litière.

Notez le temps pendant lequel la souris doit trouver et commencer à manger la pastille dans cette étape. Placez cinq blocs étiquetés de A à E dans la cage de la souris propre pendant 24 heures. Le lendemain et une heure avant le test, retirez la bouteille d’eau et le bac d’alimentation et transférez les cinq blocs de la cage ainsi qu’une poignée de litière dans un sac en plastique étiqueté avec l’identification de l’animal.

Ensuite, habituez l’animal dans sa cage domestique sans le bac d’alimentation des bouteilles d’eau, et bloquez pendant une heure avant le test. Maintenant, alignez toutes les cages de souris sur une table avec au moins 10 centimètres entre les cages. Ensuite, étiquetez la carte avec les détails importants de l’expérience et enregistrez l’étiquette sur vidéo pendant deux à trois secondes.

Retirez les blocs A à D du sac en plastique avec l’identification de cette souris et placez-les au milieu de la cage afin qu’ils soient clairement visibles sur la caméra vidéo. Assurez-vous qu’il y a environ un centimètre d’espace entre les blocs. Replacez maintenant le haut du filtre sur la cage.

Démarrez la minuterie et la bande vidéo pendant 30 secondes. Après 30 secondes, arrêtez l’enregistrement. Retirez les blocs de la cage et placez-les à l’extérieur de la cage entre les essais.

Changez de gants, puis passez à la souris suivante. Procédez ainsi pour un total de six essais pour chaque souris, en vous assurant qu’il y a un intervalle d’essai d’environ cinq minutes. Lors de la septième épreuve, retirez le bloc D de sa propre cage et ajoutez le bloc E de la cage d’une autre souris.

Donc, si la souris est exposée aux blocs A, B et C de sa propre cage d’habitation et au bloc E de la cage d’une autre souris, notez dans le livre de laboratoire le bloc E auquel chaque souris est exposée et l’emplacement alternatif du bloc E.In la cage de chaque souris, enregistrez une bande vidéo pendant 30 secondes. Après les sept essais, remettez l’animal à une nouvelle jauge propre avec ses compagnons de cage d’origine. Nettoyez les blocs utilisés dans l’essai avec un détergent doux et de l’eau et laissez-les sécher à l’air libre pour être utilisés.

Mais au lieu d’utiliser des blocs qui ont l’odeur d’une souris, utilisez des cartouches de mouchoirs contenant du coton parfumé avec différentes paires d’extraits. Ensuite, habituez la souris dans la salle de test. Préparez les cartouches de mouchoirs parfumés dans une pièce séparée.

Placez une petite boule de coton dans une cartouche propre, puis ajoutez cinq microlitres d’extrait au coton. Enclenchez le haut de la cartouche sur le coton et placez-le dans une boîte ou un sac dédié étiqueté avec ce parfum. Changez de gants entre les parfums.

Suivez ensuite les procédures du test en bloc en utilisant 1 cent, une cartouche de tissu pour les six premiers essais et le deuxième cent une cartouche de tissu pour le septième essai. Cette figure montre la latence pour trouver la pastille dans le type sauvage et les souris A TP 13 A deux knock-out dans le test de la pastille enterrée. Cette figure montre le temps passé à renifler le nouveau bloc E dans le test de bloc entre le type sauvage et les souris ATP 13 A à deux knock-out.

Et il s’agit de la cartouche reniflée entre-temps consentie chez les souris de type sauvage à travers six essais et l’introduction d’une cartouche avec l’odeur nouvelle à l’essai sept dans le test d’accoutumance dis-habituation. Lors de la réalisation de cette batterie de tests, il est important de ne pas oublier de prendre toutes les mesures pour réduire les signaux olfactifs extérieurs. Changez toujours de gants aussi souvent que possible et évitez de porter du parfum ou de l’eau de Cologne.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’évaluer la fonction olfactive et les modèles murins de maladies neurodégénératives à l’aide de cette batterie de tests simples.