Vessie muscle lisse bande de contractilité comme une méthode pour évaluer urinaires inférieures Pharmacologie

L’objectif global de cette procédure est d’évaluer les propriétés physiologiques et pharmacologiques du tissu musculaire lisse de la vessie. Ceci est accompli en disséquant la vessie du rat, en l’ouvrant en une feuille plate et en coupant des bandes contenant le muscle lisse et les nerfs de l’urothélium. Dans un deuxième temps, le tissu est attaché à un transducteur de force relié à des amplificateurs et des stimulateurs pour mesurer la contractilité musculaire.

Dans l’étape suivante, le ton de base et la viabilité tissulaire sont établis, puis les bandelettes sont exposées à une stimulation pharmacologique et/ou électrique. En fin de compte, les effets des stimuli sur la contractilité du tissu musculaire lisse de la vessie peuvent être mesurés. Cette méthode est utilisée pour caractériser les effets de composés pathologiques et pharmacologiques sur l’ensemble de la vessie, ainsi que sur des composants spécifiques du tissu de la vessie tels que les nerfs musculaires lisses de l’urothélium, chez l’homme et chez l’animal.

Cette technique a été largement utilisée lors du développement de thérapies pour divers dysfonctionnements de la vessie, car elle représente une méthode de dépistage rapide, facile et reproductible des agents pharmacologiques dans un environnement bien défini et contrôlé. Après avoir confirmé l’anesthésie par la perte d’un membre arrière, retirez le réflexe, rasez l’abdomen de l’animal, puis exposez les organes pelviens via une incision abdominale médiane. Ensuite, identifiez la vessie et l’urètre, puis coupez au niveau du col de la vessie près de l’urètre proximal.

Pour retirer la vessie, placez immédiatement le tissu dans un plat recouvert d’un protège-seuil rempli d’une solution Creb aérée. Ensuite, après avoir sacrifié l’animal, insérez des broches de dissection de tissu à travers le dôme de la vessie, le col et les uretères pour stabiliser le tissu en vue d’une dissection ultérieure sans étirer le tissu. Coupez la vessie de tissu étranger, puis ouvrez le tissu de la base au dôme pour créer une feuille plate de cirrhose côté vers le bas et côté luminal vers le haut.

Placez des broches de dissection à chaque coin du tissu, puis retirez la vessie, le cou et le tissu du dôme. Ensuite, coupez le tissu dans le sens de la longueur, de la base au dôme, en bandes d’environ deux par huit millimètres, en attachant un clip de tissu aux deux extrémités de chaque bande. Transférez les bandelettes dans les chambres d’expérimentation en fixant une extrémité de chaque bandelette à un capteur de force et l’autre à une tige fixe.

Maintenant, étirez doucement les tissus jusqu’à ce que la tension de base atteigne un gramme. Au début, le tissu a tendance à se détendre, ce qui se traduit par une diminution de la tension de base. Lavez les bandes environ toutes les 15 minutes avec des crébles aérés chauds et ajustez la tension de base à un gramme.

Après chaque lavage, laissez les mouchoirs s’équilibrer pendant environ une à deux heures jusqu’à ce qu’ils ne se détendent plus. Une fois que la tension de base est stable, ajoutez du chlorure de potassium directement dans le bain pendant cinq minutes ou jusqu’à ce qu’une réponse plafonnante soit atteinte pour tester la viabilité des tissus. Ensuite, lavez les mouchoirs trois à cinq fois avec des crebs aérés chauds pour permettre aux tissus de revenir à leur état d’avant le traitement.

Pour la stimulation pharmacologique des muscles lisses, ajoutez des médicaments issus de solutions concentrées directement dans le bain. Par exemple, pour la stimulation du carbahol, ajoutez 10 microlitres de chacune des concentrations du stimulus à chaque bain de tissu de 10 millilitres. Dès que la réponse de la concentration précédente atteint un plateau.

Dans les bandes parallèles, ajoutez des quantités égales du véhicule pour la stimulation neuronale du muscle lisse ou la stimulation du champ électrique. Réglez la durée du train sur trois à 10 secondes et l’intervalle entre les trains sur au moins une minute d’intervalle. Après avoir établi la fréquence des stimuli du train, exécutez une courbe de réponse en fréquence allant de 0,5 à 50 hertz pour établir l’intensité du stimulus.

Augmentez systématiquement la tension jusqu’à ce que l’amplitude des contractions atteigne un plateau, en maintenant la fréquence constante. Une fois les paramètres de stimulation établis, attendez environ 20 à 30 minutes pour que la stimulation du champ électrique, les contractions évoquées se stabilisent avant le test de dépistage de drogues. Ensuite, pour tester les effets de l’alpha-bêta-méthylène a TP et de l’atropine sur la stimulation du champ électrique, par exemple, effectuez deux courbes de réponse en fréquence de contrôle, puis ajoutez 10 microlitres d’alpha bêta-méthylène a TP à la bandelette de test et 10 microlitres de véhicule aux bandelettes de contrôle.

L’alpha-bêta-méthylène A TP stimule directement les récepteurs puriques du muscle lisse et désensibilise ces récepteurs, provoquant une contraction initiale. Une fois que la réponse est revenue à la ligne de base, répétez les courbes de réponse en fréquence dans toutes les bandes. Ajoutez 10 microlitres d’atropine à la bandelette de test, et 10 microlitres de véhicule aux bandelettes de contrôle, et répétez les courbes de réponse en fréquence à la fin de la stimulation du champ électrique.

Vérifiez la sélectivité de la stimulation du champ électrique en bloquant la transmission neuronale avec le bloqueur des canaux sodiques tétra à toxine. Enfin, déclipsez les bandes. Bloquez-les doucement sur un morceau de papier de soie pour éliminer tout excès de liquide et mesurez le poids de chaque bande sur une balance pour déterminer les effets sur le tonus musculaire lisse.

À l’aide d’un logiciel d’analyse de données approprié, sélectionnez une fenêtre d’au moins 10 à 30 secondes avant et au sommet de la réponse induite par le médicament, et mesurez l’amplitude de la contraction pour déterminer les effets des traitements expérimentaux sur les contractions évoquées par les neuraux. Mesurez l’amplitude, la durée et l’aire sous la courbe d’au moins trois contractions avant et au sommet de la réponse induite par le médicament. Enfin, normalisez les données pour comparer les résultats entre les bandelettes et les traitements pharmacologiques.

L’activité myogénique spontanée est une caractéristique musculaire lisse qui change au cours du développement postnatal et de la pathologie. Dans cette expérience représentative, les bandelettes de rats nouveau-nés présentent des contractions rythmiques de grande amplitude et de basse fréquence, tandis que les bandelettes de rats adultes présentent une activité de petite amplitude à haute fréquence après une lésion de la moelle épinière. Le modèle néonatal réapparaît otin, l’ouverture du canal A-K-C-N-Q diminue l’amplitude de l’activité spontanée dans les bandelettes du tonus musculaire lisse du rat adulte et les propriétés de contractilité, qui peuvent être influencées par l’urothélium et la muqueuse sont des facteurs importants pour le bon fonctionnement de la vessie pendant le stockage de l’urine et la miction.

Par exemple, dans ce graphique, l’augmentation dépendante de la concentration dans le tonus musculaire lisse. L’activation des récepteurs muscariniques dans les bandelettes de vessie de porc est illustrée par l’appel carique. Une réduction de la contractilité musculaire en réponse au traitement par carbahol est observée en présence de la muqueuse.

Comme le montre ce graphique, cinq récepteurs HT quatre sont exprimés principalement dans les nerfs parasympathiques, et leur activation augmente les niveaux d’acétylcholine. Ces graphiques illustrent l’efficacité et la puissance différentes de l’effet excitateur de la cisapride, un agoniste des cinq récepteurs HT quatre, sur la vessie humaine par rapport aux bandelettes d’iléon. Les différences d’espèces qui existent dans un certain nombre de récepteurs peuvent être évaluées à l’aide de cette méthode de bandelette vésicale.

Par exemple, ces données montrent que les antagonistes des récepteurs de la bombésine ont des effets excitateurs sur la vessie du rat alors qu’ils n’ont aucun effet sur les bandelettes de la vessie de la souris ou du porc. Pour la stimulation pharmacologique, il est important de faire attention à la concentration, au moment et à la durée de l’application du médicament. Afin d’éviter des effets non spécifiques sur d’autres récepteurs ou la désensibilisation des récepteurs ciblés pour la stimulation neuronale, il est important de choisir les paramètres corrects pour la stimulation du champ électrique en fonction de l’objectif de l’expérience, et de s’assurer que le stimulus n’active pas directement le muscle lisse.