Un modèle d'apprentissage latéralisé odeur chez les rats nouveau-nés pour dissection Formation Neural Circuits Soutenir la mémoire

Ce protocole introduit l’apprentissage précoce latéralisé de la préférence olfactive chez le rat en utilisant des occlusions aiguës uniques. Ceci est accompli en construisant d’abord des bouchons de nez amovibles en polyéthylène. La deuxième étape consiste à occlure le Bélier souhaité avant l’entraînement comportemental.

Ensuite, préparez la litière parfumée, puis entraînez l’animal dans la litière parfumée tout en le caressant avec un pinceau. La dernière étape consiste à tester la préférence d’odeur latéralisée à l’aide d’un appareil de test à deux choix. En fin de compte, l’immunohistochimie de la protéine de liaison à l’élément de réponse C amp phosphorylée ou P crib est utilisée pour démontrer le silençage unilatéral de l’activité neuronale en raison de l’isolement unique et de la réversibilité de la méthode.

Le principal avantage de cette technique est que nous sommes en mesure de réduire la variabilité et le nombre d’animaux grâce à la nature de notre conception expérimentale de contrôle intra-animal avant la couche postnatale 11, en raison de l’absence de projections antérieures matures de MA, que deux hémisphères olfactifs ne sont pas connectés. Cela nous permet de manipuler un hémisphère indépendamment de l’autre grâce à l’occlusion d’alimentation unique. Les hémisphères occlus servent de contrôle intra-animal.

Bien que cette technique se concentre sur l’apprentissage olfactif chez le rat nouveau-né, ses implications nous permettront de répondre à des questions fondamentales concernant les processus neuronaux pendant l’apprentissage et la mémoire, tels que la plasticité synaptique, la métaplasie et leurs mécanismes moléculaires sous-jacents. Les conclusions tirées des études utilisant cette méthode peuvent être généralisées aux principes de base de l’apprentissage et de la mémoire et des mammifères, en particulier pendant les périodes critiques postnatales. Cela nous aidera à construire un contexte prometteur pour des thérapies potentielles pour la perte de mémoire associée à des conditions physiopathologiques.

Cette méthode est également très adaptée à d’autres processus olfactifs tels que la perception des odeurs et le revêtement des odeurs. Le bouchon nasal est fabriqué à partir d’un tube en polyéthylène 20 et de trois fils de suture en soie zéro. Tout d’abord, coupez un petit morceau de polyéthylène 22 à environ 0,8 centimètre.

Enfilez ensuite la suture en soie à travers le tube préparé de manière à ce qu’il y ait du fil de chaque côté de la section du tube. À une extrémité du fil à l’extérieur du bouchon, faites un nœud. Tirez la section du tube vers le bas sur le nœud du fil.

Le nœud doit se loger à l’intérieur du tube. Coupez les deux extrémités du fil, de sorte qu’environ deux millimètres de fil dépassent d’une extrémité du tube. Pour commencer cette procédure, retirez le chiot de la digue et placez-le dans un plat sécurisé recouvert de litière ordinaire.

À l’aide d’un coton-tige, tamponnez une gelée anesthésique locale, 2 % de xylocaïne sur le Bélier à occlure. Laissez le chiot reposer dans le plat pendant environ trois minutes. Lucin chez le chiot est l’étape la plus critique de cette procédure.

Le remède doit être pris lors de l’insertion du bouchon nasal pour éviter les saignements et les lésions tissulaires. Ensuite, prenez le chiot et tenez-le doucement mais fermement dans la main non dominante avec la main dominante, prenez un nez, bouchez et tamponnez la même gelée anesthésique locale autour de la pointe à partir de laquelle le fil ne dépasse pas. Cela agira à la fois comme un anesthésique pour toute douleur mineure associée à l’insertion du bouchon et un lubrifiant à l’intérieur de la nes.

Insérez doucement le bouchon nasal en tenant fermement le chiot et en tournant lentement le bouchon avec des poussées très douces jusqu’à ce que le bouchon soit complètement inséré et que seul le filetage de deux millimètres dépasse du Bélier. Il ne devrait y avoir aucun saignement de l’un ou l’autre Bélier pendant ce processus. Les petits qui saignent lors de l’insertion du bouchon nasal ne peuvent pas être utilisés pour l’expérience.

Laissez l’animal se reposer dans le plat pendant cinq minutes afin de s’habituer au bouchon Avant de commencer l’entraînement pour éviter la contamination par les odeurs, préparez la litière parfumée dans une hotte et, tout en portant de nouveaux gants, placez 500 millilitres de litière de copeaux de bois dans un sac en plastique. À l’aide d’une seringue, prélevez 0,3 millilitre d’extrait de menthe poivrée et vaporisez-le sur la litière dans le sac en plastique. Attachez le sac, secouez vigoureusement le sac et laissez la litière reposer dans le sac pendant cinq minutes, placez la litière parfumée dans une boîte d’entraînement en acrylique transparente et peu profonde de 20 x 20 x cinq centimètres découverte dans la hotte pendant cinq minutes avant de l’utiliser.

Une fois la litière préparée, jetez les gants usagés. Ne laissez pas les gants entrer en contact avec les animaux. Placez 500 millilitres de litière non parfumée dans une autre boîte d’entraînement en acrylique propre et assurez-vous qu’elle n’entre pas en contact avec de la litière parfumée ou des gants usagés.

Commencez le paradigme de conditionnement des odeurs en plaçant le chiot habitué sur la litière parfumée pour une odeur expérimentale. Plus les chiots positifs pour l’AVC. Caressez le chiot pendant 30 secondes.

À l’aide d’un petit pinceau, effectuez des mouvements circulaires rapides principalement autour de la région postérieure du chiot. Les caresses induisent la libération de noradrénaline dans le bulbe olfactif et le cortex olfactif. Cela sert de stimulus inconditionnel.

Laissez le chiot se reposer pendant 30 secondes. Répétez les 30 secondes de caresses, suivies de 30 secondes de repos pour un total de 10 minutes. Lorsque les 10 appariements de caresses et d’odeurs sont terminés, retirez le chiot de la boîte de conditionnement.

Retirez le bouchon nasal et remettez le chiot à la digue pour le contrôler. Odeur uniquement les chiots négatifs du système d’exploitation. Placez le chiot habitué sur la litière parfumée pendant 10 minutes sans aucune caresse.

Après 10 minutes, retirez le chiot de la boîte de conditionnement. Retirez le bouchon nasal et remettez le chiot à la digre. Des tests de préférence d’odeur latéralisée sont effectués à différents moments après la dernière séance de formation.

Les tests sont effectués dans une chambre d’essai en acier inoxydable de 30 x 20 x 18 centimètres qui est placée sur deux boîtes d’entraînement en acrylique séparées par une zone neutre de deux centimètres. Une boîte d’entraînement contient de la literie parfumée tandis que l’autre boîte contient de la literie propre et non parfumée. Préparez une litière parfumée à la menthe poivrée et une litière non parfumée comme indiqué précédemment, et placez chaque boîte sous les côtés opposés de la chambre d’essai.

Deux centimètres de distance. Placez le treillis en plastique sur le sol de la grille métallique de la chambre d’essai. Retirez le P de la digue et placez une noisette ferme de graisse silicone inodore sur le Bélier qui est occlus.

Pendant la formation, la graisse peut être réappliquée tout au long de la première procédure d’essai si nécessaire. Placez le chiot dans la zone neutre de la chambre de test. Laissez le chiot explorer la chambre pendant une minute en notant le temps qu’il a passé des deux côtés de la chambre, c’est-à-dire sur de la menthe poivrée ou une litière au parfum neutre.

Transférez le chiot dans une chambre de rétention en plastique couverte et laissez-le reposer pendant une minute. Répétez les essais pendant un total de 10 minutes, en changeant l’orientation initiale du chiot dans la chambre afin de contrôler les préférences de direction. Immédiatement après le test, essuyez la graisse du Bélier.

Insérez un bouchon nasal en polyéthylène dans l’Aries opposé, en suivant la même procédure d’isolement RY démontrée précédemment, et laissez l’animal se reposer pendant 10 minutes. Par la suite, des tests de préférence d’odeur latéralisée sont effectués sur le chiot. Encore. Une fois les tests terminés, retirez le bouchon et retournez le chiot à la digre.

Une seule isolement étroit pendant l’entraînement aux odeurs et aux caresses conduit à une mémoire des odeurs latéralisée qui est confinée aux NRI épargnés. Lorsque les chiots sont testés pour une préférence olfactive avec le même niary isolé que pendant l’entraînement, ils montrent une préférence pour l’odeur conditionnée. Cela n’a pas été observé lorsque les tests ont été effectués avec l’autre personne isolée.

En revanche, les groupes de contrôle des odeurs uniquement ne montrent pas de préférence d’odeur, quelle que soit la naise occluse. Au cours des tests, l’entraînement latéralisé des odeurs entraîne une activation latéralisée du système olfactif lors de l’exposition aux odeurs, l’immunohistochimie du bulbe olfactif ou OB et du cortex piriforme antérieur ou d’un PC a montré significativement moins de Creb phosphorylé dans l’hémisphère occlus après l’exposition aux odeurs par rapport à l’hémisphère épargné par le controlatéral. La coloration de Nissel met en évidence des corps cellulaires comparables dans la couche cellulaire mitrale de l’OB et dans la couche cellulaire pyramidale de la PC des deux hémisphères.

24 heures après l’ablation du bouchon nasal, l’expression du crabe des pois Suite à l’exposition aux odeurs dans les cellules mitrales de l’OB et les cellules pyramidales dans le PC sont comparables entre les hémisphères occlus et épargnés. Cela indique que l’effet d’un seul essai d’isolement est transitoire et réversible et n’entraîne pas de dommages neuronaux visibles à long terme qui pourraient affecter la perception des odeurs et l’activation neuronale des odeurs pendant les tests. Une fois maîtrisée, l’occlusion NA peut être réalisée en moins de cinq minutes si elle est effectuée correctement.

Lors de cette procédure, il est important d’être extrêmement prudent lorsque vous bouchez la narine. Toute force excessive ou technique inappropriée peut provoquer des saignements et donc des dommages à la narine Suite à cette procédure. D’autres méthodes telles que l’électrophysiologie ex vivo et les techniques moléculaires peuvent être utilisées pour répondre à des questions supplémentaires concernant la plasticité synaptique.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’utiliser des occlusions étroites unilatérales temporaires afin de latéraliser l’apprentissage des odeurs et de disséquer les circuits neuronaux qui sous-tendent la formation de la mémoire.