Name: Construction des chambres de vapeur utilisée pour exposer des souris à lalcool pendant léquivalent de toutes trois trimestres de développement humain (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 27 s
Description: Découvrez la construction de chambres de vapeur d'alcool personnalisables pour exposer des souris pendant l'équivalent des trois trimestres de grossesse humaine. Ce modèle permet d'étudier les effets de l'alcool sur le développement fœtal.

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Pris en charge par les Instituts nationaux de la santé accorde R01-AA015614, R01-AA014973, T32-AA014127 et K12-GM088021. Les auteurs remercient Samantha L. Blomquist pour l&#39;assistance technique et les Drs. Kevin Caldwell et Donald Partridge pour évaluer critique du manuscrit et de la vidéo.

Toutes les procédures d'animaux ont été approuvés par l'Université du Nouveau Mexique Sciences-santé Centre institutionnel de protection des animaux et l'utilisation Comité. 1. Assemblée Chambre de vapeur <ol><li> Feuilles coupe en polycarbonate avec une scie circulaire ou une scie sauteuse pour les dimensions indiquées dans la vidéo pour le haut, en bas, devant, derrière, sur les côtés et la porte (figure 1 et tableau 1). </li><li> Avec une scie sauteuse ou circulaire, couper une ouverture de 8 pouces de haut par 16 pouces de large dans le milieu de la face avant. </li><li> Mesurer et marquer les trous de la charnière de piano sur le 18 pouces par 10 feuille de polycarbonate de pouce qui va devenir la porte de la chambre. </li><li> Dans la porte, percez contre évier trous avec un foret de 5/16 de pouce de forage, et avec une mèche de 3/16 de pouce, percez le trou pour les vis. Assurez-vous de percer des trous contre l'évier à l'intérieur de la porte pour les têtes de vis. </li><li> Préparer les feuilles de polycarbonate pour le soudage. </li><li> Assemblez vientnt, les panneaux arrières et latérales sur le panneau de fond en utilisant souder # 16. </li><li> Sceller toutes les lacunes entre les panneaux de souder # 16. </li><li> Fixez le panneau supérieur avec à souder # 16. </li><li> Utiliser des brides de barres ou manuels lourds à tenir tout en place, tandis que les soudures guérir. </li><li> Attacher une 1 pouce par un morceau de polycarbonate de 12 pouces sur la face avant 1 pouce au-dessous de l'ouverture pour la fixation de la charnière de porte. </li><li> Attendre au moins 24 heures pour souder à guérir. </li><li> Couper 2 morceaux de tuyaux PER de 12 pouces de long et 1 morceau de longue tuyaux PER de 1 pouce. </li><li> Avec une mèche de 5/16, percer un trou dans chacun des tubes de PEX 12 pouces environ 1 à 2 pouces d'une extrémité. </li><li> Fixez 2 x 12 pouces tuyaux PER à un connecteur en T 3/8 pouces avec les trous situés hors du connecteur. </li><li> Boucher les extrémités ouvertes du tube PEX 3/8 pouces bouchons. </li><li> Fixez la charnière de piano à la face avant et la porte à l'aide 4-40 des vis et écrous. </li><li> Utilisation de la porte en tant que guide, mark les trous nécessaires à la charnière à piano sur l'entretoise 1 pouce sur la face avant de la chambre. </li><li> Avec une mèche de 3/16 de pouce, percez les trous dans le panneau avant de la charnière piano. </li><li> Fixez la porte et la charnière de piano sur le panneau avant à l'aide 4-40 des vis et écrous. </li><li> Assembler les pinces à genouillère comme le montre la vidéo avec une rondelle et un écrou de part et d'autre de la branche latérale. </li><li> Mark et foret 3/16 trous de pouce pour la genouillère sur le panneau avant et attachent genouillère avec 4-40 des vis et écrous. </li><li> Ajouter 3/8 pouces joints à boudin en caoutchouc à l'intérieur de la porte. </li><li> Avec un peu de forage ennuyeux 5/8 de pouce, percer un trou dans le centre du panneau supérieur pour le port d'entrée. </li><li> Percez un trou de 1/2 pouce de fond / centre du panneau arrière de l'orifice de sortie. </li><li> Assembler l'orifice de sortie en poussant la partie filetée de la 3/8 pouce adaptateurs traversant la paroi à travers la paroi arrière de la chambre à vapeur dans le trou d'orifice de sortie. Fixez l'écrou dul'intérieur de la chambre à maintenir en place. </li><li> Retirez la protection de feuilles de polycarbonate. </li><li> Fixer la pièce de tuyaux PER de 1 pouce au connecteur en T et forcer le tube PEX à travers le trou dans la partie supérieure de la chambre de l'intérieur. </li><li> Fixez un coude à 90 3/8 de pouce vers le haut de la tuyaux PER de 1 pouce de l'extérieur. REMARQUE: Percez un trou de 1/2 pouce dans la porte et insérer un joint cloisons 1/2 pouce dans le trou. </li><li> Répétez les étapes 1-22 pour l'air que la chambre de contrôle. </li></ol> 2. Rack et de l'Assemblée Air livraison <ol><li> Si vous placez les chambres sur le chariot / support mentionné dans la liste des matériaux, assembler le panier selon les instructions du fabricant. </li><li> Avec des noix et des boulons de rechange, attachez un morceau de polycarbonate de la ferraille à la crémaillère de tenir les régulateurs de débit d'air. </li><li> N'importe où sur la pièce de polycarbonate, marquer et percer 3/4 trous de pouce pour les régulateurs de débit d'air ferraille et attacher les régulateurs avec les écrousfourni. </li><li> Fixez 3/8 pouces à travers les murs adaptateur pour les ports des régulateurs de débit d'air d'entrée et de sortie. </li><li> Assemblez le ballon de l'éthanol avec la pierre d'aération, # 8 bouchon et la libération rapide en ligne connecteurs. </li><li> Utilisation de 3/8 de pouce de tube TYGON, connecter les régulateurs de débit de la pompe à air et le ballon de l'éthanol comme le montre la figure 1. </li><li> Pour la seule chambre air, attacher l'orifice de sortie du régulateur de débit d'air à l'entrée 3/8 de pouce 90 coude avec des tubes en TYGON 3/8 de pouce, comme indiqué sur la figure 1. </li></ol><img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51839/51839fig1highres.jpg" width="500"> Figure 1. Représentation schématique de la configuration des chambres de vapeur. Un connecteur en T est relié à la pompe à air à faible bruit. Un côté du connecteur en T est connecté directement à un régulateur de débit d'air pour l'air de la chambre uniquement en phase vapeur. Les autres side est divisé à nouveau et fixée à 2 régulateurs de débit d'air différents, l'un pour l'air et l'autre pour l'éthanol. La chambre à air est relié directement au régulateur comme indiqué. Pour la chambre de vapeur d'éthanol, un régulateur de débit d'air est reliée à la pierre de l'aérateur immergé dans de l'éthanol liquide dans la fiole de filtration. L'orifice du bras latéral du récipient de filtre est reliée à la sortie du régulateur d'air, comme indiqué. La vapeur d'éthanol fusionné et de l'air est alors reliée à l'entrée de la chambre de vapeur d'éthanol. Les tubes de sortie (non représentés) sont connectés à une sortie de ventilation de la pièce. 3. Essai Chambers et de la vapeur d'ajuster les niveaux de l'éthanol <ol><li> Ajouter 600 ml d'éthanol 190 proof dans le flacon de filtre, insérer la pierre d'aération, et raccorder le tube à l'entrée de la branche latérale du ballon. </li><li> Fermer les portes de la chambre et tourner sur la pompe à air. </li><li> Régler les régulateurs de débit d'air de telle sorte que la moitié environ autant d'air s'écoule à travers le liquide comme de l'alcool de l'air est mélangé avec. Adjust le seul écoulement d'air de l'air à l'écoulement combiné de l'alcool et de l'air de la chambre de l'éthanol. </li><li> Permettre aux chambres à s'équilibrer pendant au moins 30 min avant de mesurer la concentration en éthanol de l'air. </li><li> Mesurer la concentration en éthanol de l'air en extrayant l'air de 5 ml avec une aiguille 18G et une seringue de 60 ml à travers le septum. Diluer l'échantillon avec de l'air de la chambre en tirant le piston jusqu'à 60 ml (01h12 dilution). Mesurer le niveau de l'éthanol de l'air en utilisant un alcootest conformément aux instructions du fabricant. La dilution de l'air de la chambre est nécessaire pour atteindre les niveaux de vapeur d'alcool à l'intérieur de la plage de détection de l'alcootest. NOTE: Si vous utilisez différents niveaux d'exposition à l'alcool la dilution peut être nécessaire d'ajuster. </li><li> Comme point de départ, régler les régulateurs de débit d'air que nécessaire pour atteindre une concentration en alcool de l'air de l'ordre de 4,5 à 5 g / dl (g d'alcool vaporisé par dl de l'air). </li></ol> 4. L'Elevage <ol><li> les femmes de la maison de Groupe C578BL / 6 souris (vieux 2-3 mois) pendant au moins 1 semaine à synchroniser les cycles ovariens. </li><li> Maison individuelle mâles C57BL / 6 (vieux 2-5 mois) pendant au moins 2 semaines. </li><li> Après la synchronisation, mettre une seule femelle avec un seul mâle pour 5 jours pour permettre l'accouplement. </li><li> Après l'accouplement, les mâles et supprimer individuellement les femmes de la maison et placez-les dans des chambres. </li></ol> 5. Pré-et post-natal exposition éthanol vapeur <ol><li> Exposer barrages enceintes à la vapeur d'éthanol pendant 4 heures par jour à partir de 10 heures au cours du cycle de lumière (lumière allumée de 6 heures-18 heures), sauf le jour de la naissance pour éviter chiot mort. </li><li> Peser barrages jour de gestation (G) 5, G13-G14, G18 et G20 à surveiller la grossesse; literie a été modifié le jour que les femmes ont été pesés à minimiser la manipulation. </li><li> Chaque jour remplacer la nourriture pour les groupes d'éthanol exposée pour éviter la consommation de pellets avec toute l'éthanol absorbé en eux. </li><li> Le jour de l'naissance ne pas exposer les animaux. Après la naissance d'exposer les femelles et les petits pour 4 heures par jour à partir de 10 heures à partir de P1-P12. </li><li> Peser chiots sur P2, P8, P12, P25 et; et changer la literie sur P8 et P12 pour minimiser la manipulation supplémentaire. </li><li> Immédiatement après la dernière exposition (P12), transférer les cages à une chambre standard de logement des animaux. </li></ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Ici, nous décrivons en détail les méthodes pour la construction de chambres d&#39;inhalation de vapeurs. Les matériaux et les outils nécessaires pour construire les chambres sont disponibles à partir d&#39;un certain nombre de fournisseurs commerciaux et les étapes de la construction des chambres sont relativement simples. Le système que nous décrivons ici ne contient pas les vannes de ligne de contrôle pour prévenir le refoulement et le mixage. Nous n&#39;avons pas pu mesurer toute l&#39;éthanol détectable dans l&#39;a...

Boire pendant la grossesse peut nuire au fœtus, causant des altérations persistantes dans de nombreux organes et systèmes qui réduisent de manière significative la qualité de vie pour les personnes touchées et leurs familles. On estime qu&#39;environ 10-30% des femmes boivent pendant la grossesse aux États-Unis, avec 1-8% de boire dans un 1,2 motif de frénésie. La gamme des effets produits par l&#39;exposition à l&#39;éthanol au cours du développement du fœtus est collectivement connu sous le nom de troubles du spectre de l&#39;alcoolisation foetale (ETCAF). Des estimations récentes indiquent que ETCAF est un problème majeur de santé publique avec une prévalence aussi élevée que 2-5% aux États-Unis 3. La manifestation la plus grave de FASDs est le syndrome d&#39;alcoolisation fœtale (SAF), qui se caractérise par un retard de croissance, des anomalies cranio-faciales, et des déficits neurocomportementaux, y compris les troubles d&#39;apprentissage. La prévalence du SAF a été estimée à 0,2-0,7% aux États-Unis 3. Les traitements actuellement disponibles pour FASDs sont que partiellement efficaceset le développement de traitements plus efficaces est limitée par la mauvaise compréhension des fondements moléculaires et cellulaires de ce spectre complexe de troubles. Les données des anomalies congénitales nationales Prevention Study (NBDPS) indiquent que les femmes enceintes boivent plus souvent au cours du 1 er trimestre, avant la grossesse a été détectée, suivie par l&#39;abstinence durant les derniers stades de gestation 2. Le NBDPS également constaté que le deuxième modèle le plus courant de la consommation d&#39;éthanol pendant la gestation implique potable dans tous les trimestres de la grossesse 2. Les raisons en sont le manque de sensibilisation sur les effets potentiellement nocifs de l&#39;exposition du fœtus à l&#39;éthanol (même à faibles doses), l&#39;accès limité à des soins prénatals, l&#39;histoire positive pour les troubles neuropsychiatriques, et l&#39;abus de dépendance ou à l&#39;éthanol 4. Fait intéressant, le NBDPS indiqué que le troisième modèle le plus courant de la consommation impliqué l&#39;abstinence pendant la 1 <sup&gt; Ère et 2 ème trimestres suivis par le secteur au cours de la 3 ème trimestre, quand on suppose souvent que l&#39;alcool est sûr parce que l&#39;organogenèse a été presque complétée. Cependant, le 3 ème trimestre est une période de forte sensibilité à des lésions du système nerveux induite par l&#39;éthanol-parce que c&#39;est une période où les circuits neuronaux subissent profond raffinement 2. Le NBDPS également identifié d&#39;autres modèles, moins fréquentes de la consommation d&#39;alcool qui se produisent pendant la grossesse, y compris la consommation tout au long de la 1 ère et 2 ème trimestres suivis par l&#39;abstinence pendant la 3 e trimestre 2. Dans une tentative pour modéliser les différents modes de consommation d&#39;éthanol observés chez les femmes enceintes, un certain nombre de paradigmes de développement d&#39;exposition à l&#39;éthanol ont été établies au moyen de diverses espèces animales, des rats et des souris étant 5,6 plus courante. La durée de la grossesse chez ces animaux généralement lasct environ 3 semaines, ce qui correspond à la 1 ère et 2 ème trimestres de la grossesse humaine. De nombreuses études sur des rongeurs ont évalué l&#39;impact de différentes doses et les modes d&#39;exposition à l&#39;éthanol au cours de cette période. Des exemples de procédés fréquemment utilisés pour administrer de l&#39;éthanol à des souris et des rats enceintes comprennent l&#39;administration par l&#39;intermédiaire d&#39;une alimentation de 7,8, l&#39;addition d&#39;éthanol à l&#39;eau de boisson 9,10, boire volontaire des solutions sucrées 11 saccharine, gavage gastrique 12, 13 l&#39;inhalation des vapeurs de liquides , et sous-cutanée ou injection intrapéritonéale 14. Les résultats de ces études ont récapitulé plusieurs des déficits observés chez l&#39;homme avec FASDs, démontrant que l&#39;exposition durant les premiers stades de la grossesse est suffisante pour endommager les circuits neuronaux dans le cerveau (revue dans 6,15). Des expériences avec des rongeurs ont également démontré que l&#39;exposition au cours de l&#39;équivalent de la 3 ème </sup&gt; Trimestre de la grossesse humaine, ce qui correspond à peu près aux 1-2 premières semaines de vie postnatale chez le rat et la souris, peut altérer de manière significative le développement du cerveau. L&#39;exposition au cours de cette période a été modélisé par l&#39;administration de l&#39;éthanol à des rats ou des souris néonatales. L&#39;éthanol a été administré à ces animaux en utilisant une variété de méthodes, y compris par l&#39;intermédiaire de l&#39;alimentation par gastrostomie chez les animaux élevés artificiellement, 16-18 intubation intra-gastrique 19, 20 injection sous-cutanée, l&#39;inhalation de vapeurs et 21,22. Ces études ont démontré de manière convaincante que la poussée de croissance du cerveau est une période de grande vulnérabilité aux effets sur le développement de l&#39;éthanol 6. Comme mentionné ci-dessus, de boire pendant tous les trimestres de la grossesse est un motif commun de la consommation d&#39;éthanol chez les femmes 2. Cependant, relativement peu d&#39;études ont évalué l&#39;impact de ce type d&#39;exposition en utilisant des modèles animaux. Certaines de ces études ont pris Advantage des animaux de grande taille où la 3ème trimestre équivalent se produit in utero au lieu de la période néonatale, comme dans le cas des rats et des souris. Ces modèles animaux comprennent les primates non humains, les moutons 23,24 et 25 à 27. Cependant, ces modèles animaux n&#39;ont pas été largement utilisé dans la recherche de FASDs, en partie, à cause du coût élevé et la nécessité pour les établissements de soins spécialisés. Rongeurs ont été le plus souvent utilisé pour caractériser l&#39;effet de tout trimestre exposition à l&#39;éthanol sur le développement foetal 5. Les cobayes ont été particulièrement avantageuse à cet égard compte tenu de leur vaste développement prénatal et similitudes dans la maturation du cerveau à celle des humains 28,29. Avec cobayes, il a été possible de caractériser l&#39;effet de l&#39;exposition à l&#39;éthanol in utero qui comprend la période de développement équivalent de la troisième trimestre humaine 3. Le coût relativement élevé de ces animaux, ainsi que la durée relativement longue de leur grossesse(~ 67 jours), a limité leur utilisation à quelques laboratoires travaillant sur la recherche ETCAF. En raison de leur rapport coût-efficacité et une large utilisation dans la recherche biomédicale, les chercheurs ont utilisé des rats pour modéliser l&#39;exposition à l&#39;éthanol pendant tous les trimestres de la grossesse. Dans les études initiales, les rats ont été exposés pendant la grossesse par les régimes alimentaires liquides suivies par l&#39;administration d&#39;éthanol par gastrostomie à élevés artificiellement les nouveau-nés (jours après la naissance (P) 1-10) résultant en des niveaux de production d&#39;éthanol dans le sang de pointe (BEC) dans les barrages de 0,08 g / dl et dans les chiots 0,16 g / dl. Ce paradigme a provoqué des modifications durables dans la myélinisation du nerf optique et réduit le nombre de fibres gliales Bergmann dans le cervelet 30-32. De même, Maier et collaborateurs utilisant des conditions d&#39;élevage artificiels administrés éthanol aux barrages de rats enceintes de manière excessive comme par intubation intragastrique suivie par l&#39;administration néonatale pendant une partie de la 3 ème trimestre équivalent (P4-9) 33,34. PBEC maternelle et chiot EAK ont été de 0,3 g / dl à la fois jour de gestation 20 et P6. Cette exposition paradigme de tout-trimestre a entraîné un retard de croissance était significativement supérieure à celle observée chez les petits exposés pendant des périodes sélectionnées de gestation 33. De plus, les rats exposés à de l&#39;éthanol au cours de l&#39;équivalent de tous les trimestres de la grossesse ont présenté une réduction dans le nombre de Purkinje du cervelet et les cellules granulaires qui était supérieure à celle observée chez les animaux exposés pendant 34 autres périodes. La réduction du nombre de cellules de l&#39;hippocampe ont également été signalés avec ce paradigme, mais ces effets semblent être principalement une conséquence de l&#39;exposition au cours de la 3 ème trimestre équivalent 35. Une méthode qui implique l&#39;administration d&#39;éthanol par gavage intragastrique pour les rats et les souris enceintes néonatale a également été utilisé pour modéliser toute exposition de trimestre 36. Cette méthode, qui a abouti à CAE de 0,13 g / dl dans les barrages (de jour de gestation 17) et 0,24 g / dl chez les petits P6, lon induitealtérations g durables dans les niveaux de neurotransmetteurs monoamines dans l&#39;hippocampe et l&#39;hypothalamus, et une expression accrue d&#39;ADN méthyltransférases de méthyle et de CpG protéine 2 de liaison de l&#39;hippocampe 37,38. L&#39;utilisation d&#39;un paradigme d&#39;exposition similaire (BEC = 0,14 à 0,2 g / dl dans les barrages et 0,2 g / dl chez les petits), Gil-Mohapel et al. 39 a détecté une augmentation du nombre de nouveaux neurones immatures dans le gyrus denté de rats adultes que peut représenter un mécanisme de compensation pour une lésion neuronale induite par l&#39;éthanol ou une altération de la maturation des neurones adultes de souche. Les enquêteurs ont également tenté de modéliser toute exposition trimestre de l&#39;éthanol en exposant barrages par les régimes alimentaires liquides ou l&#39;eau potable durant la grossesse et l&#39;allaitement 9,40. Cependant, l&#39;utilité de l&#39;exposition des chiots par le lait de leur mère est limitée car elle se traduit généralement dans les CEB faible chiot (par exemple, de 0,002 à 0,05 g / dl; 41,42). Les souris ont également été utilisés extensvement à caractériser les effets de l&#39;exposition à l&#39;éthanol de développement. Ce modèle animal de nombreuses actions des forces décrites ci-dessus pour le modèle animal de rat, avec l&#39;avantage supplémentaire que de nombreuses souches de souris génétiquement modifiées sont disponibles 5. Souris ont été utilisés avec succès pour caractériser les effets de l&#39;éthanol au cours de la 1 ère, 2 ème ou 3 ème trimestres de la grossesse 43,44. Cependant, l&#39;impact de toute exposition de trimestre sur ces animaux n&#39;a pas été bien caractérisée, car il est techniquement plus difficile à exposer des souris pendant l&#39;équivalent de tous les trimestres de la grossesse humaine. Par exemple, l&#39;élevage artificiel et gavage gastrique, qui ont été utilisés avec succès chez le rat, nécessitent des procédures plus spécialisées dans les souris 45. Au meilleur de notre connaissance, une seule étude à ce jour a tenté d&#39;étudier l&#39;effet de toute exposition trimestre de l&#39;éthanol en utilisant des souris; ces animaux ont été exposés à une solution d&#39;éthanol dans de l&#39;eau potable During grossesse et l&#39;allaitement 46. BEC maternels étaient de 0,07 g / dl et chiot BEC n&#39;ont pas été déterminées, mais devrait être une fraction de ceux dans les barrages. Ici, nous décrivons un nouveau modèle pour l&#39;exposition tout trimestre éthanol de souris où l&#39;alcool est administré à deux barrages enceintes et les nouveau-nés par des chambres d&#39;inhalation de vapeurs. chambres de vapeur ont été construits sur la base d&#39;une conception précédente 47. Nous fournissons des instructions détaillées sur la façon de construire les chambres d&#39;inhalation et d&#39;appliquer les procédures d&#39;exposition. Nous fournissons également des informations sur les CAE qui peuvent être obtenus et l&#39;impact de l&#39;exposition sur la survie des nouveau-nés et de la croissance.

<table><tbody><tr><td>Polycarbonate 1/4 » transparent 48 » x 24</td> » <td>McMaster-Carr</td><td>8574K23</td><td>10</td></tr><tr><td>Joint d’ampoule en caoutchouc mousse 3/8 » l x 7/32"h</td><td>McMaster-Carr</td><td>93085K67</td><td>10 pi</td></tr><tr><td>Soudé #16</td><td>McMaster-Carr</td><td>7515A11</td><td>3</td></tr><tr><td>Charnière piano 12 » de long</td><td>McMaster-Carr</td><td>1658A11</td><td>2 x 1 pi</td></tr><tr><td>Sauterelles à genouillère standard</td><td>McMaster-Carr</td><td>5126A26</td><td>8</td></tr><tr><td>Tube PEX 1/2"</td><td>McMaster-Carr</td><td>51275K88</td><td></td></tr><tr><td>Raccord de tube en T barbelé de 10 pieds (noir) Pqt 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K608</td><td>1</td></tr><tr><td>Raccord à bouchon cannelé (noir) Pqt 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5462K79</td><td>1</td></tr><tr><td>Raccord de tube à coude barbelé (noir) Pqt 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K596</td><td>1</td></tr><tr><td>Adaptateurs muraux traversants 3/8", tube à tuyau fileté</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K851</td><td>1</td></tr><tr><td>Vis à métaux Phillips 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>91772A112</td><td>1</td></tr><tr><td>Vis à métaux écrou hexagonal 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>90480A005</td><td>1</td></tr><tr><td>Débitmètre à montage sur panneau 2-20</td><td>McMaster-Carr</td><td>41945K76</td><td>3</td></tr><tr><td>flacons, FILTRE 1 000 ml 6/PAQUET</td><td>VWR</td><td>89001-800</td><td>deux</td></tr><tr><td>Precision Seal Septa</td><td>VWR</td><td>89084-490</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Black Rubber Stopper #8 1 trou</td><td>VWR</td><td>59581-367</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBE TYGON R3603 3/8X9/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-556</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBE TYGON R3603 1/4X11/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-502</td><td>1</td></tr><tr><td>Pierre d’aération P2120</td><td>VWR</td><td>32573-007</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8" T-connectors Pk de 20</td><td>VWR</td><td>46600-060</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Dissectionneurs coniques Pk de 10</td><td>VWR</td><td>46600-110</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8 Tuyau cannelé valve en ligne Raccord en ligne</td><td>Colder Products Company</td><td>HFCD17612</td><td>1</td></tr><tr><td>Pompe à air de capacité moyenne</td><td>LMI Fabricants</td><td>DB60L</td><td>1</td></tr><tr><td>Nexelate Wire Shelving 36 « L X 24 » P X 63 « H</td><td>T9A990135</td><td>industrielle mondiale</td><td>1</td></tr><tr><td>Roulettes de potence Ensemble de (4) Roue en polyuréthane de 5</td>" <td>Global</td><td>industrial T9A500591</td><td>1</td></tr></tbody></table>

construction des chambres de vapeur utilisée pour exposer des souris à l&#39;alcool pendant l&#39;équivalent de toutes trois trimestres de développement humain

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

L&#39;exposition à l&#39;alcool pendant le développement peut entraîner une constellation d&#39;anomalies morphologiques et comportementales qui sont collectivement connus comme des troubles causés par l&#39;alcoolisation fœtale (ETCAF). A la fin la plus sévère du spectre est le syndrome d&#39;alcoolisation fœtale (SAF), caractérisé par un retard de croissance, une dysmorphie cranio-faciale, et les déficits neurocomportementaux. Des études sur des modèles animaux, y compris les rongeurs, ont permis d&#39;élucider de nombreux mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans la physiopathologie de l&#39;ETCAF. administration de l&#39;éthanol à des rongeurs enceintes a été utilisé pour modéliser l&#39;exposition humaine au cours des premier et deuxième trimestres de la grossesse. Troisième trimestre de la consommation d&#39;éthanol chez l&#39;homme a été modélisée à l&#39;aide rongeurs nouveau-nés. Cependant, quelques études sur des rongeurs ont caractérisé l&#39;effet de l&#39;exposition à l&#39;éthanol pendant l&#39;équivalent de trois trimestres de la grossesse humaine, un modèle d&#39;exposition qui est commun chez les femmes enceintes. Ici, nous montrons comment construire des chambres de vapeur de facilement omatériaux btainable qui peuvent chacune accueillir jusqu&#39;à six cages de souris standard. Nous décrivons un paradigme de la chambre de vapeur qui peut être utilisé pour modéliser une exposition à l&#39;éthanol, avec un minimum de manipulation, pendant les trois trimestres. Nos études montrent que les barrages enceintes développées tolérance métabolique importante à l&#39;éthanol. Cependant, les souris néonatale n&#39;a pas développé la tolérance métabolique et le nombre de fœtus, le poids du fœtus, le poids du placenta, le nombre de chiots / portée, le nombre de morts chiots / portée, et du poids des petits n&#39;ont pas été significativement affectée par l&#39;exposition à l&#39;éthanol. Un avantage important de ce modèle est son applicabilité à des études sur des souris génétiquement modifiées. De plus, ce paradigme minimise la manipulation des animaux, un facteur de confusion important dans la recherche d&#39;alcoolisme foetal.

La figure 2A montre que les souris enceintes et les enfants nouveau-nés ont été exposés à des concentrations de vapeur d'éthanol relativement stables dans les chambres. Celles-ci vont entre 4-6 g / dl. Figure 2B montre les BEC obtenus chez les souris enceintes en fonction du temps. CAE ont été mesurées en utilisant un alcool déshydrogénase standard basé d'essai 48. Au G5, CAE a augmenté rapidement à ~ 60 mM de 2 heures après le début de l'exposition et a atteint un sommet à l...

Nous démontrons la construction des chambres à vapeur de l&#39;alcool à l&#39;aide de matériaux facilement disponibles qui abritent simultanément 6 cages de souris. Nous décrivons en outre leur utilisation dans un modèle de souris de l&#39;exposition d&#39;alcoolisation fœtale équivalent à tous les trois trimestres de la grossesse humaine. Ce paradigme expose des animaux pendant la gestation et après la naissance 1-12 jours.

Construction des chambres de vapeur utilisée pour exposer des souris à l&#39;alcool pendant l&#39;équivalent de toutes trois trimestres de développement humain

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

Dans cette vidéo, nous allons montrer comment construire et assembler des chambres à vapeur d’alcool. Nous décrirons également un paradigme d’inhalation d’alcool qui expose les Maas pendant l’équivalent des trois trimestres du développement humain. Les chambres sont hautement personnalisables en fonction des niveaux d’alcoolémie souhaités ou des paradigmes d’exposition.Notre conception de chambre peut accueillir jusqu’à six cages de souris de taille standard où les souris ont un accès supplémentaire à la nourriture et à l’eau. Ce paradigme produit des taux d’alcoolémie relativement élevés chez les souris enceintes et les chiots sans l’utilisation de rosol. Nous entendons le laboratoire de Fernando Valenzuela à l’Université du Nouveau-Mexique.Dans cette vidéo, nous allons démontrer l’assemblage de chambres à vapeur d’éthanol en polycarbonate et décrire leur utilisation dans un modèle murin d’exposition fœtale à l’alcool au cours des trois trimestres. Toute personne ayant des compétences de base en menuiserie sera en mesure de construire les chambres et les dimensions peuvent être modifiées pour répondre aux besoins individuels. Les chambres peuvent être logées dans l’animalerie tout au long de l’exposition et minimiseront le stress lié au transport et à la manipulation des animaux.En raison des différences dans les stades de développement, l’administration d’éthanol aux rongeurs enceintes a été utilisée pour modéliser l’exposition humaine au cours des premier et deuxième trimestres, tandis que l’administration d’éthanol aux nouveau-nés est utilisée pour modéliser l’exposition au troisième trimestre. Ces chambres sont conçues pour abriter plusieurs cages de souris simultanément et exposer les mères enceintes ainsi que les nouveau-nés hébergés avec leur mère. Parmi les avantages de l’utilisation de ce paradigme d’exposition à l’alcool, citons la capacité d’imiter les trois trimestres de développement, la réduction du stress des mères et des petits enceintes, ainsi que la flexibilité dans votre contrôle sur le niveau d’exposition à l’éthanol.Sur cinq morceaux individuels de 24 x 48 pouces d’un quart de pouce d’épaisseur, les feuilles de polycarbonate transparentes mesurent et marquent les dimensions données pour le haut, le bas, l’avant, l’arrière, les côtés et la porte. Ces dimensions permettront de construire une chambre de 32 pouces de large, 22 pouces de profondeur et 14 pouces de haut. Une chambre de cette taille conviendra adéquatement à six cages de souris standard mesurant 11 pouces et demi sur sept pouces et demi sur cinq pouces et demi de haut.Il est important de se rappeler qu’il ne s’agit que d’une seule chambre, et que ce processus devra être répété pour aboutir à deux chambres identiques, une chambre pour l’exposition à l’alcool et une chambre pour les expositions contrôlées à l’air uniquement. Les feuilles de polycarbonate peuvent être découpées à l’aide d’une scie circulaire équipée d’une lame de 80 dents ou d’une scie sauteuse équipée d’une lame spécifique plastique ou plexiglas. Coupez les feuilles de polycarbonate aux dimensions mesurées en faisant attention autant que possible pour assurer des coupes droites.Cela réduira les espaces pendant le processus d’assemblage une fois que toutes les pièces sont coupées. Mesurez un rectangle de huit pouces sur 16 pouces au centre du panneau avant pour créer une ouverture pour la porte. À l’aide d’un foret de trois huit pouces, percez un trou à l’intérieur de chaque coin.Les trous sont utilisés pour insérer la sous-lame de gabarit à travers la feuille de polycarbonate et découper l’ouverture. Si vous utilisez une scie circulaire, une coupe plongeante peut être effectuée. Quelques coupes dans le dos peuvent être nécessaires pour nettoyer les bords près des coins.Une fois que tous les bords sont coupés, la pièce maîtresse peut être retirée et il vous reste une ouverture dans le panneau avant. Pour commencer le montage de la porte, marquez les trous nécessaires pour fixer la charnière à piano à la porte. À l’aide de cinq trous de perçage de 16e pouce au niveau des marques, ces trous de fraisage accepteront la tête de la vis et ne doivent être percés qu’à mi-chemin de la feuille de polycarbonate.À l’aide de trois forets de 16 pouces, complétez les trous à travers la feuille en utilisant les trous de fraisage comme guide avant l’assemblage. Retirez environ deux pouces du revêtement protecteur des feuilles de polycarbonate pour permettre la soudure des pièces. Le processus d’assemblage peut aller vite, il peut donc être utile de disposer le bas, l’arrière, l’avant et les côtés avant de souder les pièces ensemble.Pour souder le polycarbonate, utilisez la soudure à prise rapide sur ciment à solvant 16. Pour commencer l’assemblage, ajoutez un cordon de soudure généreux sur le bord inférieur de la pièce latérale. Essuyez immédiatement toute goutte de soudure avec une serviette en papier.Placez le côté sur la pièce inférieure avec de l’aide. Assemblez le reste des parois jusqu’au fond de la chambre. N’oubliez pas que pour les dimensions données, les pièces latérales s’adapteront entre le panneau avant et le panneau arrière.Une fois les murs assemblés, remplissez les espaces entre les joints de l’intérieur avec le Weldon. Pour fixer le haut de la chambre, ajoutez une quantité généreuse de Weldon au sommet de chaque paroi. Placez le panneau supérieur sur les murs et alignez les bords.Utilisez des pinces à barres pour maintenir tout en place pendant que la soudure durcit. Alternativement, des manuels lourds peuvent être utilisés pendant le processus de durcissement pour s’assurer que la porte reposera au ras de l’extérieur de la chambre. Un morceau de polycarbonate d’un pouce sur 12 pouces doit être soudé au panneau avant à un pouce en dessous de l’ouverture.La charnière se fixera à cette entretoise et permettra à la porte de sceller la chambre. Pour construire le tube d’entrée, coupez deux morceaux de tube en polyéthylène d’un demi-pouce de 12 pouces de long. Coupez également un morceau d’un pouce de tube en polyéthylène d’un demi-pouce pour administrer l’alcool vaporisé ou la perceuse à air.Un trou de cinq trous de 16e pouce à environ un pouce de l’extrémité de chacun des morceaux de tube de polyéthylène de 12 pouces. Assemblez le système de distribution d’air à l’aide de deux prises de trois huit pouces et d’un connecteur en T de trois huitièmes de pouce. Assurez-vous que les trous que vous avez percés dans le tube en polyéthylène sont les plus éloignés du connecteur en T.Fixez la charnière à piano à la porte, en vous assurant que les trous du comptoir sont orientés vers le haut. À l’aide de quatre vis et écrous mécaniques 40, fixez la charnière à piano à la porte. Utilisez la porte comme guide et marquez les trous pour la charnière à piano sur l’entretoise d’un pouce sur le panneau avant avec trois forets de 16e pouce.Percez les trous dans le panneau avant pour fixer la porte à l’aide de quatre vis et écrous mécaniques 40. Fixez la porte et la charnière à piano au panneau avant. Serrez à l’aide d’une clé.Assemblez la maintien. Sauterelle comme indiqué. Marquez les trous de la sauterelle sur le panneau avant en utilisant la porte comme guide.Répétez cette opération pour deux sauterelles le long du haut et une de chaque côté de la porte avec trois forets de 16e pouce. Percez les trous pour les sauterelles. Fixez les sauterelles à l’aide de quatre vis et écrous mécaniques 40.Avec les écrous à l’intérieur de la chambre, serrez à l’aide d’une clé pour assurer une chambre étanche à l’air. Coupez et fixez trois joints en caoutchouc de huit de pouces de large le long du bord de la porte. Lorsque la porte est fermée, l’ampoule formera un joint étanche à l’air entre la porte et le panneau avant de la chambre.Marquez le centre du panneau supérieur pour créer un orifice d’entrée pour la chambre avec un foret de forage de cinq huit pouces. Percez le trou pour l’orifice d’entrée. Créez un port de sortie en perçant un trou d’un demi-pouce au centre inférieur du panneau arrière.Insérez un adaptateur mural traversant de trois pouces de huit pouces dans l’orifice de sortie et fixez-le par l’intérieur de la chambre. À ce stade, le revêtement de protection peut être retiré. Installez le système de distribution d’air à travers le trou du panneau supérieur de l’extérieur.Insérez un coude de trois pouces de huit pouces à 90 degrés Percez un trou d’un demi-pouce à l’avant de la porte. Insérez ensuite un septa de joint d’un demi-pouce dans le trou. Celui-ci servira d’orifice pour mesurer la vapeur d’éthanol.À ce stade, la coupe et le perçage sont terminés et les chambres peuvent être nettoyées. Assemblez le support et placez les deux chambres et l’air pub sur le support. Pour aider à organiser le système de flux d’air, fixez un morceau de polycarbonate à la coque inférieure et qui peut être utilisé pour aider à monter les régulateurs de flux d’air marquer et percer une prise de perçage de trois quarts de pouce pour les trois régulateurs de flux d’air dans le morceau de polycarbonate.Fixez les régulateurs de débit d’air au polycarbonate à l’aide des écrous fournis. Fixez un adaptateur mural traversant de trois pouces de huit pouces à chaque orifice du régulateur pour la chambre à vapeur d’éthanol. Un régulateur de débit d’air contrôlera la quantité d’air qui bouillonne à travers l’alcool liquide, et un autre contrôlera la quantité d’air mélangée à l’alcool vaporisé.Le dernier contrôlera la quantité d’air pour la deuxième chambre d’air uniquement. Assemblez la fiole d’alcool comme indiqué. Utilisation d’un tube de trois huit pouces.Assemblez le système de distribution d’air comme illustré sur le schéma à l’aide de connecteurs en T ou en Y pour diviser les lignes. Une seule pompe fournit un débit d’air suffisant pour les chambres de contrôle de l’air uniquement et les chambres d’alcool. Connectez trois tubes de huit pouces aux orifices de sortie.Ajoutez 600 mils d’un éthanol à 90 degrés dans le flacon et connectez-vous au système. Pour tester le niveau de vapeur d’éthanol, utilisez une seringue et une aiguille pour aspirer cinq mils d’air à travers la septine. Retirez l’aiguille et diluez l’échantillon d’air de un à 12 en tirant la seringue jusqu’à 60 ml.Avec l’air ambiant, poussez lentement l’air à travers l’éthylomètre pour mesurer les vapeurs d’éthanol. Les niveaux d’éthanol vaporisé doivent être corrélés aux niveaux d’alcoolémie animale pour chaque système individuel. Une fois que les chambres sont situées dans l’animalerie, n’oubliez pas d’évacuer les chambres directement dans le système de ventilation de la pièce.Les souris femelles âgées de deux à trois mois ont été hébergées en groupe pendant au moins une semaine, tandis que les souris mâles âgées de deux à cinq mois ont été hébergées individuellement pendant deux semaines. Les souris femelles ont été accouplées avec des mâles logés individuellement pendant cinq jours pour permettre l’accouplement. Après l’accouplement, les femelles ont été retirées des mâles logés individuellement dans une nouvelle cage et placées dans les chambres à vapeur.Les animaux ont été exposés à l’éthanol pendant quatre heures par jour. Pendant le cycle de lumière de G cinq à G 20. Les femelles ont été pesées périodiquement pour surveiller la gestation.Les animaux n’ont pas été exposés le jour de la naissance pour éviter la mort des petits. Le premier jour postnatal, les chiots et les mères sont replacés dans les chambres et exposés jusqu’à la postnatale. Les chiots du jour 12 ont été pesés périodiquement pour surveiller la croissance.Pour commencer l’inhalation de vapeur, place. Les mères enceintes logées individuellement dans l’alcool et l’air uniquement. Des chambres ferment et scellent les portes.Ajoutez la fiole d’éthanol liquide, connectez-vous au système et allumez la pompe. Les régulateurs de débit d’air contrôlent la quantité d’air qui entre dans l’éthanol liquide et la quantité d’air mélangée à la vapeur d’éthanol. Le rapport entre la vapeur d’éthanol et l’air contrôle les niveaux finaux de vapeur d’éthanol dans les chambres.Le débit d’air de contrôle de l’air uniquement est réglé sur le débit d’air combiné de l’éthanol et de l’air. Après l’exposition à la vapeur d’éthanol, la nourriture est modifiée pour éliminer la nourriture qui aurait pu absorber l’éthanol vaporisé. Les portes des chambres à alcool et à air seulement sont fissurées pour permettre l’échange d’air avec la pièce.Dans cette vidéo, nous avons montré comment assembler des chambres à vapeur d’éthanol et décrit un paradigme d’inhalation de vapeur d’alcool chez la souris qui expose les animaux pendant les trois trimestres humains équivalents. Le niveau de vapeur d’alcool peut facilement être ajusté pour modéliser les niveaux d’alcoolémie faibles ou élevés. L’un des avantages de ces chambres est qu’elles sont suffisamment grandes pour abriter plusieurs cages à un moment donné.Cela permet aux animaux d’être logés dans les chambres tout au long de l’exposition. Cela minimise tout stress causé à l’animal lors de la manipulation ou du transport. De plus, ce paradigme peut être adapté à n’importe quel trimestre d’intérêt et/ou niveau d’exposition pendant la construction.Il est essentiel que toutes les coupes soient droites et carrées pour assurer une chambre étanche à l’air lors du soudage des pièces de polycarbonate. Il est important de se déplacer rapidement et efficacement car les soudures sèchent rapidement. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez être en mesure de construire vos propres chambres d’inhalation de vapeur.

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