Une méthode hautement reproductible et facile à Effectuer In Vivo Oculaire énucléation chez la souris après ouverture des yeux

L’objectif global de cette procédure est de retirer avec succès un œil d’une souris anesthésiée d’une manière très simple et reproductible. Pour ce faire, il suffit d’abord de déplacer le globe oculaire en appuyant doucement sur le canthus à l’aide d’une pince incurvée. La deuxième étape de la procédure consiste à guider la pince derrière l’œil, à saisir fermement le nerf optique.

La troisième étape consiste à faire des mouvements circulaires. Avec la main tenant la pince, le corps de la souris se déplacera dans la même direction. La dernière étape consiste à augmenter progressivement la vitesse des mouvements pour assurer la constriction du nerf optique, entraînant le détachement du globe oculaire.

En fin de compte, l’œil peut être utilisé pour étudier longitudinalement la voie visuelle AFR, par exemple en révélant différents processus de plasticité de privation sensorielle dans le cerveau de la souris. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, qui utilisent souvent la suture et la dissection contondante, est que notre méthode d’iation est simplement basée sur la constriction du nerf optique, ce qui entraîne un saignement minime ou nul et est très facile à apprendre. Commencez par anesthésier la souris à l’aide d’une injection intrapéritonéale d’un mélange de kétamine et de meine dans une solution saline.

Confirmez la sédation en vérifiant les réflexes de la souris. Pincez les orteils avec une pince et vérifiez qu’il n’y a pas de réponse réflexe. S’il n’y a pas de réponse, utilisez un applicateur à embout de coton et de l’éthanol à 70 % pour nettoyer les paupières et la zone autour de l’œil.

S’il n’y a pas de réponse de clignement des yeux, procédez avec l’œil en nucléation. Placez la souris sur une surface stable, plane, lisse et sèche. Stérilisez les pointes de la pince dentelée incurvée dans un stérilisateur à billes de verre.

La meilleure taille d’embout à utiliser est de 0,5 par 0,4 millimètre. Ensuite, appuyez doucement sur le canthus avec la pince jusqu’à ce que le globe oculaire soit déplacé de l’orbite et que le nerf optique soit accessible. Ensuite, guidez la pince derrière l’œil et appuyez fermement et maintenez le nerf optique avec le nerf optique saisi Commencez lentement à déplacer la pince en cercles dans la direction de la moindre résistance.

En gardant la souris contre la table d’opération, la souris doit être sécurisée. Son corps doit également bouger. Accélérez progressivement jusqu’à ce qu’après sept à 15 mouvements circulaires, le nerf optique se contracte et que le globe oculaire se détache.

Si les rotations sont trop rapides ou si les forceps sont tirés trop fort, le nerf se brisera prématurément et des supplications s’ensuivront. Commencez par inverser l’anesthésie. Donnez à la souris une injection intrapéritonéale de chlorhydrate d’aamaz dans une solution saline.

Ensuite, administrez par voie intramusculaire 0,05. Des millilitres d’analgésiques préparés tels que le méloxicam et l’analgésique doivent être administrés toutes les 24 heures. Maintenant, appliquez une pommade oculaire sur l’œil restant pour prévenir la déshydratation de la cornée.

S’il avait été appliqué avant l’opération, il aurait été étalé sur la table. Déplacez la souris dans une cage de maintien, contrôlez la température corporelle de la souris à l’aide d’une plaque chauffante ou d’une couverture pendant qu’elle récupère lorsque l’animal reprend le contrôle de sa motricité, transférez-la dans sa cage d’origine. Une ablation réussie de l’œil se caractérise par l’absence de saignement ou de dommages physiques apparents au tissu orbitaire ou à l’orbite.

L’œil énucléé doit avoir les caractéristiques d’un globe intact comme une cornée et une choroïde lisses. Le nerf optique doit être resserré à la base de la rétine. La longueur restante du nerf sur l’animal doit montrer une coupe nette et la zone cérébrale environnante ne doit pas être endommagée.

Une expérience a été menée à l’aide de ces techniques, suivie de la détection de l’ARNm Z 2 68 par hybridation radioactive en C deux pour découvrir l’activité neuronale induite visuellement dans le cortex cérébral. Contrairement aux contrôles stimulés visuellement, les souris avec les deux yeux et nucléés ont montré une activité basale dans les cortex visuels gauche et droit en raison de l’absence totale d’apport visuel. Ainsi, les frontières entre le cortex visuel et le cortex non visuel ont été découvertes.

L’énucléation monoculaire a révélé que les deux régions induites par le monoculaire étaient hypoactives dans le cortex visuel controlatéral au colorant éliminé. Ces régions sont situées médialement et latéralement par rapport à la zone binoculaire centrale. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins d’une minute si elle est exécutée correctement.

Par conséquent, il s’agit d’une méthode efficace pour examiner l’activité, la plasticité ou d’autres phénomènes dans la voie visuelle ORL.