Non-Terminal techniques d'échantillonnage de sang chez les cobayes
11 octobre 2014
Même si un modèle connu, le cochon de Guinée représente actuellement un créneau en sciences des animaux de laboratoire et des données limitées sont disponibles sur l'exécution de la plupart des procédures. Ici, nous présentons quatre approches différentes pour non-terminal dans les techniques de prélèvement sanguin in vivo chez soit des cobayes conscients ou anesthésiés.
L’objectif général de cette vidéo est d’illustrer la méthodologie de quatre techniques différentes de prélèvement sanguin chez les cobayes. Les procédures illustrées ne sont pas définitives, sauf si le volume ou le nombre d’échantillons dépasse les lignes directrices pour le prélèvement sanguin. Chez les animaux de laboratoire, nous voyons ici la cause de la veine latérale et de la veine tarsienne.
La veine ous s’étend dorsalement et latéralement sur l’articulation tarsienne. Un maximum de trois échantillons doit être prélevé sur chaque patte arrière, et environ 100 à 400 microlitres de sang peuvent être prélevés par échantillon. L’équipement nécessaire comprend un rasoir électrique, un bain d’eau chaude, une serviette propre, du coton, un désinfectant tel que de l’alcool à 70 %, des aiguilles stériles, 21 tubes de collecte ou des tubes de collecte plus petits.
Et si l’objectif est de mesurer la glycémie et l’échantillonneur AccuCheck, le prélèvement sanguin de la veine céphée ou du tarsien peut être effectué chez les cobayes sans anesthésie. Le cochon d’Inde est immobilisé par un assistant qualifié et une technique septique doit être utilisée. Les poils recouvrant la zone tarsienne sont rasés à l’aide d’un rasoir électrique et la patte arrière lavée et réchauffée dans un bain d’eau tiède.
En plus de nettoyer la jambe, cela rend les veines dilatées et plus visibles. La patte arrière est prolongée et la stase est obtenue en appliquant une légère pression vers le bas juste au-dessus du genou, ce qui permet à la veine de devenir visible immédiatement avant l’échantillonnage. La zone rasée est essuyée avec un désinfectant.
La veine est perforée à l’aide d’une aiguille ou d’une lancette, et le sang peut être recueilli dans un tube capillaire ou microtique. Lorsque le sang a été prélevé, la stase est atténuée et une légère pression est appliquée avec un morceau de coton Pour faciliter l’hémostase, les artères et les veines superficielles de la surface dorsale de l’oreille de cochon d’Inde peuvent être observées ici. Ces vaisseaux peuvent être utilisés pour l’échantillonnage sanguin lorsque seul un très petit volume est nécessaire.
Un exemple pourrait être pour les mesures de glycémie. Le cochon d’Inde est doucement retenu tout en laissant l’oreille accessible. Le site de ponction doit être préparé de manière septique avant l’échantillonnage, mais le rasage n’est pas nécessaire.
Une légère pression peut être appliquée à la base de l’oreille pour rendre les veines plus visibles. La veine est perforée à l’aide d’une aiguille ou d’une lancette et le sang est recueilli dans un tube capillaire ou immédiatement analysé pour déterminer la glycémie à l’aide du système d’échantillonnage AccuCheck. Lorsque le sang a été prélevé, une légère pression doit être appliquée sur le site de ponction pour faciliter l’hémostase.
Cette photo illustre la position du cobaye pour le prélèvement de sang jugulaire et la cause de la veine jugulaire. La procédure est exclusivement réalisée sur un animal anesthésié. Le matériel nécessaire comprend des médicaments pour l’anesthésie et un rasoir électrique, un désinfectant tel qu’un stéthoscope à 70 % d’alcool, une pommade oculaire neutre, des seringues d’un millilitre, des aiguilles stériles, généralement 23 ou 25.
L’héparine Gorge et l’EDTA peuvent être utilisés pour rincer les seringues avant le prélèvement afin de prévenir la coagulation. Il existe une variété de protocoles d’anesthésie pour les cochons d’Inde. Dans ce cas, les animaux sont anesthésiés par une anesthésie équilibrée avec un mélange de sinus et de butif sine et butif injecté par voie sous-cutanée dans le cou.
Ce mélange peut être dilué avec une solution saline pour rendre le dosage plus précis. Après l’injection, le cochon d’Inde doit être remis dans sa cage et laissé au calme. L’effet d’environnement est généralement observé après environ 10 minutes et dure de 30 à 40 minutes avant l’échantillonnage.
La profondeur de l’anesthésie est évaluée en vérifiant les réflexes et une pommade oculaire neutre est administrée pour protéger les yeux. La veine jugulaire est approchée avec le cochon d’Inde placé sur le dos et les pattes avant rétractées en quartiers. La zone est rasée et préparée de manière aseptique, la clavicule est palpée et une aiguille de 23 gorge montée sur une seringue d’un millilitre est insérée à environ un centimètre sur le côté de la ligne médiane, juste crânio-dorsalement à la clavicule.
La seringue doit être maintenue légèrement inclinée vers le haut et médialement. Dès que la peau est pénétrée, une légère pression négative est appliquée sur la seringue car la jugulaire est située assez superficiellement et une profondeur d’insertion d’environ trois à quatre millimètres est suffisante. Lorsque l’échantillon a été prélevé, relâchez la tension des pattes avant et appliquez une légère pression sur le côté de la perforation.
L’animal peut ensuite être renvoyé dans une cage de récupération, mais doit être surveillé pour assurer l’hémostase et la récupération de l’anesthésie. Lorsque le cochon d’Inde est complètement rétabli de l’anesthésie, il peut retourner dans son enclos. Les caractéristiques anatomiques du cochon d’Inde sont légèrement différentes de celles des autres modèles de rongeurs, et la modulation des techniques d’échantillonnage est nécessaire pour tenir compte des différences spécifiques aux espèces et pour obtenir des échantillons de qualité suffisante dans les plus brefs délais.
À long et à court terme. In vivo, les études nécessitent souvent des prélèvements sanguins répétés. Le choix de la technique doit être mûrement réfléchi afin de réduire le stress et l’inconfort et d’assurer la survie, ainsi que le respect des exigences de taille d’échantillon et d’accessibilité.
Toutes les méthodes décrites ont été testées de manière approfondie et appliquées avec succès pour des prélèvements sanguins répétés in vivo. Dans les études menées dans notre centre de recherche, le cochon d’Inde représente un créneau dans les sciences animales expérimentales, mais les données disponibles sur l’exécution des procédures de base sont limitées. Dans cet article vidéo, nous avons présenté quatre approches différentes pour l’échantillonnage de sang in vivo non terminal chez des animaux conscients ou anesthésiés, à condition que les volumes et le nombre d’échantillons ne dépassent pas les directives pour le prélèvement de sang chez les animaux de laboratoire.
Ces procédures sont recommandées pour les cobayes lorsque des prélèvements sanguins répétés sont nécessaires. Dans votre protocole d’étude.
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques
Aperçu
Cette vidéo démontre quatre techniques d'échantillonnage sanguin non terminales chez le cobaye, tant à l'état conscient qu'anesthésié. Ces méthodes sont essentielles pour les chercheurs travaillant avec cet organisme modèle, pour lequel des données procédurales sont limitées.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Sciences expérimentales animales
- Techniques vétérinaires
- Méthodologies d'échantillonnage sanguin
Contexte
- Les cobayes constituent un modèle spécialisé dans la recherche expérimentale.
- Peu de données sont disponibles sur les procédures de prélèvement sanguin chez cette espèce.
- Les techniques non terminales sont essentielles pour des pratiques de recherche éthiques.
- La compréhension des directives de prélèvement sanguin est cruciale pour le bien-être animal.
Objectif de l'étude
- Illustrer des techniques sûres et efficaces de prélèvement sanguin.
- Fournir des lignes directrices concernant les volumes maximaux d'échantillons et la fréquence de prélèvement.
- Élargir la base de connaissances des chercheurs utilisant des cobayes.
Méthodes utilisées
- Démonstration du prélèvement sanguin à partir de la veine latérale du cou et de la veine tarsienne.
- Utilisation d'équipements spécifiques tels que des aiguilles stériles et des tubes de collecte.
- Recommandations concernant le volume maximal de sang par prélèvement.
- Procédures applicables aux animaux conscients et anesthésiés.
Résultats principaux
- Démonstration réussie de quatre techniques de prélèvement sanguin.
- Établissement de limites de volume d'échantillon sécuritaires.
- Instructions claires concernant le matériel nécessaire et les préparatifs.
- Mise en évidence des considérations éthiques liées au prélèvement sanguin.
Conclusions
- Les techniques présentées sont essentielles pour la recherche impliquant des cobayes.
- Une formation adéquate et le respect des directives garantissent le bien-être animal.
- Des recherches supplémentaires peuvent s'appuyer sur ces méthodologies.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle dans l'industrie
Le prélèvement sanguin non terminal chez les cobayes permet des études longitudinales in vivo en rendant possible la collecte répétée d'échantillons de haute qualité tout en préservant le bien-être animal. Cette capacité est essentielle pour les évaluations précliniques de pharmacocinétique et de pharmacodynamie, où les prélèvements sériés renseignent sur l'engagement ciblé et la réduction des risques mécanistiques. Ces techniques comblent une lacune méthodologique dans un modèle spécialisé mais pertinent sur le plan translationnel, améliorant ainsi la fiabilité des données dans les flux de travail de découverte précoce.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Valeur scientifique : Permet la vérification d'hypothèses grâce à la mesure sériée de biomarqueurs in vivo.
- Valeur opérationnelle : Fournit un accès reproductible à des données d'exposition systémique pour les études de modulation de cible.
- Valeur prédictive : Facilite la caractérisation de la relation dose-réponse et le renforcement de la confiance en la cible.
Tests et développement de dosages
- Valeur scientifique : Génère des échantillons quantifiables de plasma ou de sérum pour les lectures de tests.
- Valeur opérationnelle : Standardise le moment de prélèvement et la manipulation des échantillons au cours des campagnes de criblage.
- Préparation aux tests : Garantit un volume et une qualité suffisants pour les flux analytiques en aval.
Recherche translationnelle et préclinique
- Continuité translationnelle : Relie la validation préclinique de cibles en phase de découverte au profilage préclinique de sécurité.
- Atténuation des risques : Réduit la variabilité des paramètres d'exposition grâce à un échantillonnage standardisé.
- Pertinence du modèle : Exploite les similitudes physiologiques entre le cobaye et l'humain pour une détection prédictive des risques.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Ces méthodes d'échantillonnage s'intègrent aux flux de travail de biologie de la découverte en fournissant des matrices biologiques fiables pour l'analyse des voies cibles et l'évaluation des composés candidats.
- Biologie de la découverte : Facilite l'élucidation des voies biologiques par la mesure sériée de marqueurs pharmacodynamiques.
- Criblage : Permet une évaluation cohérente des composés grâce à un prélèvement d'échantillons standardisé et reproductible.
- Analytique : Fournit des résultats quantifiables (par exemple, concentration, niveaux de biomarqueurs) pour l'analyse comparative entre conditions.
- Recherche translationnelle : Assure la continuité avec les études précliniques en préservant l'intégrité des échantillons et la conformité éthique.
- Réutilisation institutionnelle : Met en place une capacité réutilisable pour des études longitudinales sur des cobayes dans différents projets.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive grâce à une variabilité induite par l'échantillonnage et des artéfacts de stress réduits.
- Valeur opérationnelle : Renforce la standardisation et l'extensibilité des prélèvements in vivo entre différents sites.
- Valeur stratégique : Améliore la qualité des décisions « aller/ne pas aller » en fournissant des données longitudinales fiables.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation ajustée au risque en se basant sur des indicateurs cohérents d'engagement ciblé.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une formation aux techniques aseptiques et à la manipulation des animaux pour des procédures réalisées sous anesthésie ou chez des animaux conscients.
- Dépend d'équipements tels que des tondeuses électriques, des bains thermostatés et des outils de prélèvement stériles.
- Exige le respect des recommandations spécifiques à l'espèce concernant le volume sanguin prélevé (maximum 100–400 µL/échantillon, ≤3 prélèvements/patte postérieure).
- Implique des adaptations selon la visibilité et l'accessibilité de la veine, en fonction de la souche, de l'âge ou de l'état de santé de l'animal.
- Comprend des limites pratiques telles que la difficulté de visualisation chez les animaux pigmentés ou obèses, ainsi que la nécessité d'une compétence opératoire pour éviter la formation d'un hématome.
