Name: Essai simple pour la quantification de lévitement social en Drosophila melanogaster (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: Apprenez à quantifier l'évitement social chez Drosophila melanogaster grâce à un protocole utilisant un labyrinthe en T. Cette méthode permet d'étudier les interactions sociales et les facteurs génétiques influençant le comportement.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nous remercions Rachelle Kanippayoor pour son aide dans l’identification de la nouvelle souche de type sauvage comme étant de l’espèce melanogaster. R.W.F., O.F. et A.F.S étaient responsables de la conception de la recherche ; R.W.F., M.N. et O.F. ont réalisé les expériences. R.W.F., M.N., O.F. et A.F.S. ont analysé les données ; R.W.F., I.S.M. et A.F.S. ont rédigé le manuscrit. 
Ce travail a été soutenu par des bourses de recherche PSC-CUNY, financées conjointement par le Congrès du personnel professionnel et la City University of New York à A.F.S. ; par un financement interne de l’Université Western à A.F.S. et I.S.M. ; par un soutien à la formation de l’Alliance nationale pour la santé hispanique Alliance/Merck Ciencia (Science) Hispanic Scholars Program et une bourse universitaire de la Yale Graduate School of Arts and Sciences à R.W.F.

1. Matériel et réactifs créés interne (Voir liste des matières pour les autres) <ol><li> Préparer un Drosophila appareils d&#39;anesthésie froid pour effectuer des travaux à la mouche. <ol><li> Coupez une feuille de polyéthylène poreux pour couvrir une petite boîte en plastique (12,7 cm de long, 10,2 cm de large), typiquement le couvercle supérieur de la boîte de pointes de pipette (12,7 cm de long, 10,2 cm de large, 3,8 cm de profondeur). </li><li> Remplissez la boîte avec de la glace pilée, couvrir avec la feuille de polyéthylène poreux. </li></ol></li><li> Préparer un appareil T-labyrinthe; adapter l&#39;appareil décrit précédemment en détail 28-31. </li><li> Préparer un aspirateur à la mouche comme décrit 32. </li><li> Préparer un appareil de réponse d&#39;phototaxie vol pour déplacer dans et hors des flacons d&#39;essai sans contrainte: <ol><li> Utilisation d&#39;un appareil à contre-courant, comme décrit par 29,33. </li></ol></li></ol> NOTE: Le labyrinthe en T peut également être utilisé à d&#39;autres fins, tel que décrit par 28. <ol start="5"><li> Assurer homconditions d&#39;éclairage ogeneous: effectuer l&#39;expérience sur un banc recouvert d&#39;une couverture de banc blanc, et en face d&#39;un tableau blanc. NOTE: Pour ces expériences, les souches de mouches Drosophila melanogaster utilisés étaient les types sauvages: Canton-S, l&#39;Oregon et Samarkand vole de nos stocks de laboratoire 34; Elwood mouches ont été recueillies à l&#39;automne 2011 dans le quartier Elwood de Huntington, à Long Island, New York, USA. </li></ol> 2. Préparer les mouches avant l&#39;expérience 1-2 jours avant d&#39;effectuer l&#39;expérience: <ol><li> Maintenir les mouches sur le milieu de semoule de maïs-agar-mélasse-levure norme à 25 ° C sur un cycle de 12 heures de lumière / obscurité. </li><li> Recueillir les répondeurs mouches sous anesthésie froides 1-2 jours avant d&#39;effectuer l&#39;expérience <ol><li> Transférer les mouches des bouteilles dans lesquelles ils ont été soulevés dans 50 ml tubes Falcon en utilisant un entonnoir. </li><li> Placez le tube Falcon avec les mouches sous le niveau de la glace, dans unisolé seau à glace. </li><li> Placez l&#39;appareil d&#39;anesthésie froid avec de la glace pilée à -4 ° C pour se détendre. </li><li> Attendez 5 min pour les mouches d&#39;entrer dans le coma de refroidissement. </li><li> Transférer les mouches sur la feuille de polyethylene poreux de l&#39;appareil d&#39;anesthésie froid. </li><li> Recueillir les répondeurs mouches sur l&#39;appareil d&#39;anesthésie froid. A RT, sous un stéréomicroscope, séparer vieille 3-7 jours mâle de mouches femelles et maintenir ces mouches dans des groupes de 40. </li></ol></li><li> Recueillir vol d&#39;émetteur 1-2 jours avant d&#39;effectuer l&#39;expérience. <ol><li> Recueillir doucement Canton-S mixité vole de leurs bouteilles, en utilisant un aspirateur à bouche, le contrôle de leur nombre. </li><li> Maintenir ces mouches dans le groupe de 60 à 100, car ils seront les émetteurs. </li><li> Préparer autant d&#39;échantillons d&#39;émetteurs comme points de données nécessaires. </li></ol></li><li> Prévoyez au moins une nuit de récupération après la collecte des intervenants et des émetteurs, afin de minimiser tout effet de confusion de l&#39;anesthésie froideet la collecte bouche d&#39;aspiration sur le comportement. </li><li> Ouvrez le sac de flacons d&#39;essai, pour permettre l&#39;air en plastique odeur fade dans le sac pour être remplacé par de l&#39;air frais, au moins un jour avant l&#39;expérience. </li></ol> 2 h avant d&#39;effectuer l&#39;expérience: <ol start="6"><li> Se assurer que la température dans la salle où l&#39;expérience est réalisée est de l&#39;ordre de 23 à 25 ° C, même avec la lumière et de l&#39;humidité supérieure à 30%. </li><li> Transférez les intervenants et les mouches émetteurs de fruits dans des flacons de produits alimentaires frais pour se assurer que ces mouches ne sont pas affamés. </li><li> Laissez les mouches des fruits se adapter à l&#39;environnement pendant 2 heures, sur le banc sur lequel l&#39;expérience sera effectuée. </li></ol> 3. Effectuer l&#39;expérience évitement social <ol><li> Effectuez chaque expérience au même moment de la journée, dans une gamme de 3-4 heures dans l&#39;après-midi entre le temps Zeitgeber ZT5 et ZT9. </li><li> Placez le labyrinthe en T sur le pavé de martèlement, et serrer la pince à vis de sorte til est ascenseur stable. </li><li> Transfert vol d&#39;intervenants dans un flacon de test frais. Aligner cette fiole contenant vol d&#39;intervenants sur la partie supérieure de la T-labyrinthe. </li><li> Inclinez l&#39;appareil T-labyrinthe et appuyez sur le tapis battait si les mouches des fruits tombent dans l&#39;ascenseur. </li><li> Déplacez la partie supérieure de l&#39;ascenseur pour descendre de sorte que les mouches sont entre la partie supérieure et inférieure de la T-labyrinthe, mais attention à garder l&#39;ascenseur au-dessus du point de choix - pour empêcher les mouches de se échapper. </li><li> Obtenir flacons avec DSO (voir la section 5 pour générer DSO sans flacons qui étaient auparavant occupés par les mouches). <ol><li> Alors que les vol d&#39;intervenants se adaptent à ce nouvel environnement, placer vol d&#39;émetteur dans un flacon de test. </li><li> Placez un morceau de coton pour fermer le flacon de sorte que les mouches des fruits ne échappent pas. </li><li> Mécaniquement agiter cette fiole sur un mini-tourbillon comme suit: vortex pendant 15 secondes, retirer la cuvette du vortex pendant 5 sec. Répétez trois fois pour un total de 55 sec. </li><li> Remove vol d&#39;émetteur du flacon frais - en transférant dans un flacon alimentaire - et rapidement placer cette fiole remplie DSO dans l&#39;une des deux côtés de l&#39;appareil T-labyrinthe. </li><li> Alternez le côté de placement pour le flacon DSO pourvoir dans chaque nouvelle course. </li></ol></li><li> Placer un flacon d&#39;essai frais de l&#39;autre côté du labyrinthe en T. </li><li> Apportez l&#39;ascenseur complètement en bas, de sorte que les mouches des fruits peuvent choisir entre le flacon de test fraîche et le flacon de test avec DSO, et démarrer la minuterie. </li><li> Laissez les mouches choisir entre le flacon et le flacon frais DSO, pendant 1 min, à moins d&#39;indication contraire. </li><li> Après 1 min, déplacer l&#39;ascenseur jusqu&#39;à séparer les mouches dans le flacon frais, DSO flacon, et ceux qui sont coincés dans l&#39;ascenseur. </li><li> Comptez le nombre de mouches dans chaque flacon, et dans l&#39;ascenseur. </li><li> Répétez cette opération pour chaque génotype / état. </li></ol> 4. Analyser les données évitement social <ol><li> Comptez le nombre de mouches des fruits dans chaque flacon pour chaque genotype, et transférer les données vers un tableur. </li><li> L&#39;utilisation d&#39;un tableur, calculer l&#39;indice de performance (PI) pour chaque génotype en soustrayant le nombre de mouches dans le flacon DSO à partir du nombre de mouches dans le flacon DSO-libre, puis en divisant par le nombre total de mouches. </li><li> Comparez les moyens de le PiS l&#39;aide du logiciel d&#39;analyse statistique pour l&#39;analyse des résultats. <ol><li> Idéalement, préparer 2-3 répétitions internes pour chaque expérience, et trois répétitions indépendantes, effectuées à des jours différents, avec différents bouteilles ou traverse 30. </li><li> Utilisez la distribution des tests statistiques gaussiennes, que les données suivent une distribution normale. </li><li> Lorsque l&#39;essai d&#39;un effet (ce est à dire, la densité - Figure 2), utiliser un ANOVA à une voie, avec post-test de comparaison multiple (colonne par colonne), ou un t-test simple de comparer chaque résultat à un contrôle. </li><li> Lorsque expériences de groupe sont effectuées, tester les deux conditions et les sexes (les flacons vides, a souligné und mouches hors contrainte; et l&#39;effet de genre - Figure 1), en utilisant une ANOVA à deux voies. </li></ol></li></ol> 5. Générer flacons précédemment occupé par mouches atones - Effectuer Au lieu de 03.05 à 03.06 <ol><li> Utilisez phototaxie pour préparer flacons occupés par des mouches qui ne ont pas été sollicitées, comme témoin. </li><li> Transférez les mouches dans un flacon de test, et enclenchez dans l&#39;appareil à contre-courant, avec des flacons frais vides dans la position opposée. </li><li> Poser l&#39;appareil horizontalement avec le flacon distale directement en face d&#39;une lumière blanche froide fluorescente 15 W, et couvrir d&#39;un drap noir. </li><li> Laissez les mouches se déplacent doucement dans le flacon frais. Cela peut prendre plusieurs minutes. Une fois que la plupart des mouches marchent vers la lumière dans le flacon distale, démarrer le minuteur pendant 1 min. </li><li> Retirez délicatement le tissu noir, changer l&#39;emplacement de la lumière, de récupérer avec le drap noir, et permettent vol de quitter le flacon de test. </li><li> A cette époque, initiate l&#39;expérience de choix comme dans 3.2 à 3.5. Passer 3.6 et 3.7. </li><li> Déplacer le curseur de l&#39;appareil, afin de séparer les mouches qui a quitté le flacon de test à partir de l&#39;autre côté. </li><li> Utilisez le flacon de test libéré dans le labyrinthe en T tout de suite pour l&#39;expérimentation des choix, comme dans 3.7. </li></ol>

<ol><li>Fry, S. N., Rohrseitz, N., Straw, A. D., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TrackFly%3A+virtual+reality+for+a+behavioral+system+analysis+in+free-flying+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">TrackFly: virtual reality for a behavioral system analysis in free-flying fruit flies.</a> J Neurosci Methods. 171, 110-117 (2008).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J Vis Exp. 24, 1096(2009).</li>
<li>Dankert, H., Wang, L., Hoopfer, E. D., Anderson, D. J., Perona, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+monitoring+and+analysis+of+social+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated monitoring and analysis of social behavior in Drosophila.</a> Nat Methods. 6, 297-303 (2009).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nat Methods. 6, 451-457 (2009).</li>
<li>Simon, J. C., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+chamber+for+studying+the+behavior+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A new chamber for studying the behavior of Drosophila.</a> PLoS One. 5, 8793(2010).</li>
<li>Wang, L., Dankert, H., Perona, P., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inaugural+Article%3A+A+common+genetic+target+for+environmental+and+heritable+influences+on+aggressiveness%5BTitle%5D)+AND+%22in+Drosophila.+Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Inaugural Article: A common genetic target for environmental and heritable influences on aggressiveness.</a> in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5657-5663 (2008).</li>
<li>Schneider, J., Dickinson, M. H., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+structures+depend+on+innate+determinants+and+chemosensory+processing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Social structures depend on innate determinants and chemosensory processing in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 2, 17174-17179 (2012).</li>
<li>Miyamoto, T., Amrein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+male+courtship+by+a+Drosophila+pheromone+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Suppression of male courtship by a Drosophila pheromone receptor.</a> Nat Neurosci. 11, 874-876 (2008).</li>
<li>Villella, A., Hall, J. C., Jeffrey, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+3+Neurogenetics+of+Courtship+and+Mating+in+Drosophila.+%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Chapter 3 Neurogenetics of Courtship and Mating in Drosophila. </a> Advances in Genetics. 62, 67-184 (2008).</li>
<li>Ejima, A., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Courtship+Initiation+Is+Stimulated+by+Acoustic+Signals+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Courtship Initiation Is Stimulated by Acoustic Signals in Drosophila melanogaster.</a> PLoS ONE. 3, 3246(2008).</li>
<li>Mery, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Public+Versus+Personal+Information+for+Mate+Copying+in+an+Invertebrate%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Public Versus Personal Information for Mate Copying in an Invertebrate.</a> Current Biology. 19, 730-734 (2009).</li>
<li>Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+taste+of+the+Drosophila+gustatory+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">A taste of the Drosophila gustatory receptors.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 19, 345-353 (2009).</li>
<li>Billeter, J. -C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+cells+tag+sexual+and+species+identity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster.</a> Nature. 461, 987-991 (2009).</li>
<li>Krupp, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+experience+modifies+pheromone+expression+and+mating+behavior+in+male+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster.</a> Curr Biol. 18, 1373-1383 (2008).</li>
<li>Kent, C., Azanchi, R., Smith, B., Formosa, A., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+context+influences+chemical+communication+in+D.+melanogaster+males%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Social context influences chemical communication in D. melanogaster males.</a> Curr Biol. 18, 1384-1389 (2008).</li>
<li>Levine, J. D., Funes, P., Dowse, H. B., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resetting+the+Circadian+Clock+by+Social+Experience+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Resetting the Circadian Clock by Social Experience in Drosophila melanogaster.</a> Science. 298, 2010-2012 (2002).</li>
<li>Ganguly-Fitzgerald, I., Donlea, J., Shaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Waking+Experience+Affects+Sleep+Need+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Waking Experience Affects Sleep Need in Drosophila.</a> Science. 313, 1775-1781 (2006).</li>
<li>Billeter, J. -C., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Who+is+he+and+what+is+he+to+you%3F+Recognition+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Who is he and what is he to you? Recognition in Drosophila melanogaster.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 23, 17-23 (2013).</li>
<li>Suh, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+population+of+olfactory+sensory+neurons+mediates+an+innate+avoidance+behaviour+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila.</a> Nature. 431, 854-859 (2004).</li>
<li>Bonini, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Tribute+to+Seymour+Benzer+1921-2007%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">A Tribute to Seymour Benzer 1921-2007.</a> 180, 1265-1273 (2008).</li>
<li>Castermans, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobeachin+gene+is+disrupted+by+a+translocation+in+a+patient+with+idiopathic+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Genetics%22%5BJournal%5D)">The neurobeachin gene is disrupted by a translocation in a patient with idiopathic autism.</a> Journal of Medical Genetics. 40, 352-356 (2003).</li>
<li>Medrihan, L., et al. Neurobeachin, a protein implicated in membrane protein traffic and autism, is required for the formation and functioning of central synapses. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMedrihan%2C+L+%22J+Physiol%22">J Physiol</a>. 587, 5095-5106 (2009).</li>
<li>Simon, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+assay+to+study+social+behavior+in+Drosophila%3A+measurement+of+social+space+within+a+group%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">A simple assay to study social behavior in Drosophila: measurement of social space within a group.</a> Genes Brain Behav. 11, 243-252 (2012).</li>
<li>Venkatesh, T., et al. Cold Spring Harbor Meeting: From Molecules to Circuit Behavior. , Cold Spring Harbor Laboratories. Cold Spring Harbor, NY. (2013).</li>
<li>Hamilton, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+mutation+in+the+dopamine+transporter+gene+associates+dopamine+dysfunction+with+autism+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">De novo mutation in the dopamine transporter gene associates dopamine dysfunction with autism spectrum disorder.</a> Mol Psychiatry. 18, 1315-1323 (2013).</li>
<li>Gadow, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+dopamine+gene+variants%2C+emotion+dysregulation+and+ADHD+in+autism+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Developmental+Disabilities%22%5BJournal%5D)">Association of dopamine gene variants, emotion dysregulation and ADHD in autism spectrum disorder.</a> Research in Developmental Disabilities. 35, 1658-1665 (2014).</li>
<li>Fernandez, R. W., Akinleye, A. A., Nurilov, M., Rouzyi, Z., Simon, A. F. 54th Annual Drosophila Research Conference, , (2014).</li>
<li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+Locomotor%2C+Learning%2C+and+Memory+Deficits+in+Drosophila+Models+of+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration.</a> J Vis Exp. , 2504(2011).</li>
<li>Connolly, J. B., Tully, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aConnolly%2C+JB+%22Drosophila%3A+A+Practical+Approach%22">Drosophila: A Practical Approach</a>. Roberts, D. B. 1, IRL. New York, NY. 265-317 (1998).</li>
<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical-conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+%5BA%5D%22%5BJournal%5D)">Classical-conditioning and retention in normal and mutant Drosophila melanogaster.</a> J Comp Physiol [A]. 157, 263-277 (1985).</li>
<li>Krashes, M. J., Waddell, S. Drosophila Aversive Olfactory Conditioning. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKrashes%2C+MJ+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22">Cold Spring Harbor Protocols</a>. 2011, (2011).</li>
<li>Ejima, A., Griffith, L. C. Ch. 30. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEjima%2C+A+%22Drosophila+Neurobiology%2C+A+Laboratory+Manual%22">Drosophila Neurobiology, A Laboratory Manual</a>. Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring, NY. 475-481 (2010).</li>
<li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+mutants+of+Drosophila+melanogaster+isolated+by+countercurrent+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Behavioral mutants of Drosophila melanogaster isolated by countercurrent distribution.</a> PNAS. 58, 1112-1119 (1967).</li>
<li>Simon, A. F., Shih, C., Mack, A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+control+of+longevity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Steroid control of longevity in Drosophila melanogaster.</a> Science. 299, 1407-1410 (2003).</li>
<li>Vaux, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+methods%3A+Know+when+your+numbers+are+significant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Research methods: Know when your numbers are significant.</a> Nature. 492, 180-181 (2012).</li>
<li>Stowers, L., Logan, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphism+in+olfactory+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphism in olfactory signaling.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 20, 770-775 (2010).</li>
<li>Simon, A. F., Liang, D. T., Krantz, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+decline+in+behavioral+performance+of+Drosophila+melanogaster+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Ageing+and+Development%22%5BJournal%5D)">Differential decline in behavioral performance of Drosophila melanogaster with age.</a> Mechanisms of Ageing and Development. , 127-647 (2006).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Ce protocole décrit une procédure détaillée pour le test d&#39;évitement social. Canton-S sera seulement d&#39;éviter un flacon dans lequel vole ont déjà été sollicitées mécaniquement, et que le sexe et le nombre d&#39;intervenants ne affecte pas que la performance d&#39;évitement social. Cependant, fond génétique des intervenants a une influence majeure. Voici plusieurs étapes critiques pour réaliser cette expérience avec succès: 1) transférer toujours les mouches 2 h avant l&#39;expérience...

L&#39;objectif de cette méthode est de quantifier facilement un nouvel aspect du comportement social simple dans Drosophila melanogaster, indépendant de la cour et de l&#39;agression. Les interactions sociales sont essentielles pour le bon développement et la santé des individus au sein d&#39;une société, ainsi que la fonctionnalité d&#39;un groupe social dans son ensemble. La grande complexité de ces interactions nécessite de grandes tailles d&#39;échantillon et un système qui permet une simplification du comportement que les bases génétiques et neuronales du comportement social sont encore mal compris. Drosophila melanogaster est un modèle génétique puissant qui peut être utilisé pour identifier la génétique et bases neurales des interactions sociales. En effet, D. melanogaster a un répertoire de comportements sociaux complexes et des mesures directes de socialisation ont déjà été fait 1-7. Cependant, la plupart de ces efforts ont été axés sur les comportements sociaux relativement complexes, comme agresinteractions sive 3,6, divers aspects de la cour 3,8-12, et comment l&#39;expérience sociale affecte d&#39;autres comportements tels que l&#39;apprentissage, ou rythme circadien 13-17. En outre, beaucoup de ces tests reposent sur l&#39;analyse des modèles d&#39;interaction complexes des groupes de mouches, par suivi vidéo et de logiciels pour analyser l&#39;abondance résultant des données. Ces analyses sont inestimables, et ouvrent de nouvelles perspectives importantes telles que la dynamique des interactions mouche mouche dans les groupes 7. Une limitation, cependant, est l&#39;inaccessibilité de ces tests à la communauté en général, et de la connaissance limitée des mécanismes sous-jacents reconnaissance des autres. En d&#39;autres termes, la base de l&#39;émission d&#39;un signal par un individu et sa reconnaissance par une autre est encore mal comprise 18. En revanche, vole également présenter un comportement simple, évitement social, où les individus se éloignent d&#39;un signal émis par les mouches stressées: D. melanogaster stress odorante ou DSO 19. Dans un dosage à haut débit, ce comportement peut être quantifiée comme l&#39;évitement d&#39;un signal de stress émis par d&#39;autres mouches, ou évitement social 19. Les mouches sont placées dans un appareil T-labyrinthe et ont le choix pour éviter un flacon contenant DSO. En utilisant ce dosage, CO 2 se est révélée être une composante de l&#39;ASM, et une partie du circuit neural nécessaire pour répondre à CO 2 a été disséqué 19. L&#39;essai d&#39;évitement sociale présentée ici est conceptuellement similaire aux tests comportementaux simples développées dans le laboratoire de Seymour Benzer qui ont permis à des générations de chercheurs pour disséquer des comportements complexes 20. Analyse des évitement social peut être réalisée en utilisant de manière rentable le test T-labyrinthe, permettant pour une étude plus généralisée du comportement social. Par exemple, l&#39;utilisation de ce test nous avons récemment démontré que les risques génétiques différents pour l&#39;autisme ont des effets contrastés b socialedosages ehavior. Mutants pour un gène candidat pour l&#39;autisme - neurobeachin 21,22 - les déficiences actuelles à la fois dans l&#39;espace social (décrits ailleurs 23) et évitement social 24. La signalisation dopaminergique anormale est également proposé de jouer un rôle dans l&#39;étiologie de l&#39;autisme chez les humains 25,26. Contrairement aux résultats obtenus avec neurobeachin, nous avons trouvé que la performance d&#39;évitement sociale était pas affectée par une augmentation ou une diminution du taux de la monoamine vésiculaire Drosophila Transporter (VMAT) dans des cellules dopaminergiques, bien que l&#39;espace social est directement corrélée à ces niveaux de VMAT 27. Les résultats contrastés obtenus avec neurobeachin et VMAT soulignent la possibilité d&#39;identifier diverses formes de comportement asocial, et donc les différents circuiteries neuronaux sous-jacents moduler la réponse à d&#39;autres.

<table><tbody><tr><td>Microscope stéréo à zoom&nbsp ;</td><td>Nikon·s ; &nbsp ;</td><td>SMZ-645</td><td>N’importe quel autre oscilloscope standard pour la manipulation des mouches fonctionnerait</td></tr><tr><td>Petits pinceaux&nbsp ;</td><td></td><td></td><td>pour repousser les mouches</td></tr><tr><td>Polyéthylène poreux, 12 » x 12 » Feuille</td><td>Flystuff - Genesee</td><td>46-100</td><td>http://www.flystuff.com/ProductInfo.php?productID=46-100 Feuille de plastique poreuse pour la boîte d’anesthésie froide</td></tr><tr><td>Mini-Alarm Minuterie/Chronomètre</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stylos</td><td></td><td></td><td></td>Sharpie</tr><tr><td>Ruban</td><td></td><td></td><td></td>adhésif</tr><tr><td>Mini vortex</td><td>Fisher</td><td>14-955-151&nbsp ;</td><td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail Pour l’agitation mécanique des mouches - n’importe quel vortex fonctionnerait.</td></tr><tr><td>Corning Life Sciences DL No. :352017, tube à essai Falcon ; à fond rond ; jetable ; sans fermeture, 14 ml ; 17 x 100 mm</td><td>Fisher</td><td>14-959-8 &nbsp ;</td><td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalogId=29104&productId=2771811&distype=0&highlightProductsItemsFlag=Y&fromSearch=1&searchType=PROD&hasPromo=0 Ceux-ci s’enclenchent en place dans le labyrinthe en T fabriqué en interne et l’appareil à contre-courant (voir texte)</td></tr><tr><td>des boules</td><td></td><td></td><td>de coton pour fermer les flacons après l’expérience.</td></tr><tr><td>Planche à trois volets et couverture</td><td></td><td></td> de banc blanche <td>pour fournir un fond blanc et une lumière homogène.</td></tr><tr>Couverture <td></td><td></td><td></td><td>de banc blanc</td></tr><tr><td>Pad</td><td></td><td></td> de martèlement <td>n’importe quel tapis de souris fonctionne.</td></tr><tr><td>grand tissu</td><td></td><td></td> noir <td>pour couvrir l’appareil à contre-courant en réponse à la phototaxie.</td></tr><tr><td>lumière blanche froide&nbsp ;</td><td>Home Depot</td><td>1000516563</td><td>http://www.homedepot.ca/product/illume-26-fluorescent-plug-in-linear/911423 toute lumière linéaire similaire avec une ampoule fluorescente blanc froid à 13-15 W fonctionnerait</td></tr></tbody></table>

essai simple pour la quantification de l'évitement social en drosophila melanogaster

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster est un modèle émergent pour étudier différents aspects des interactions sociales. Par exemple, les mouches évitent les zones précédemment occupées par des congénères stressés en raison d’un odorisant libéré pendant le stress connu sous le nom d’odorisant de stress de la drosophile (dSO). Grâce à l’utilisation de l’appareil T-maze, on peut quantifier l’évitement du dSO par les mouches répondeuses dans un test très abordable et robuste. Les conditions nécessaires à l’obtention d’une bonne performance sont présentées ici. Une expérience stressante est nécessaire pour que les mouches émettent du dSO, ainsi qu’un nombre suffisant de mouches émettrices pour provoquer une réponse d’évitement robuste à la présence de dSO. Le patrimoine génétique, mais pas la taille de leur groupe, a fortement modifié l’évitement du dSO par les mouches répondeuses. Les souches Canton-S et Elwood affichent une meilleure performance pour éviter le dSO que les souches Oregon et Samarcande. Ce test comportemental permettra d’identifier les mécanismes sous-jacents à ce comportement social et d’évaluer l’influence des gènes et des conditions environnementales sur l’émission et l’évitement du dSO. Un tel test peut être inclus dans des batteries de tests de diagnostic simples utilisés pour identifier les déficiences sociales des mutants ou les conditions environnementales d’intérêt.

Le test d'évitement social est un test robuste quantifier la capacité de Drosophila melanogaster de reconnaître un signal de stress (DSO) émis par d'autres mouches, et d'évaluer ainsi un aspect des interactions sociales. Le test est effectué en utilisant un appareil couramment utilisé dans divers essais de comportement connus comme un labyrinthe en T, qui présentent les mouches avec un choix entre deux options différentes - gauche ou à droite 19,28-31. Dans ce cas, l'efficacité avec laquelle les mouc...

Ici, nous présentons un protocole pour quantifier l’évitement des individus stressés. Ce paradigme est à la fois puissant et facile à utiliser et peut être utilisé pour évaluer l’influence des gènes et de l’environnement sur un type d’interaction sociale chez Drosophila melanogaster.

Essai simple pour la quantification de l'évitement social en Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Le but de cette procédure est de quantifier la réponse des mouches au signal social émis par des individus stressés. Pour ce faire, il faut d’abord collecter les mouches, les mouches répondeuses et les mouches émettrices au plus tard deux jours avant l’expérience. La deuxième étape consiste à transférer les mouches émettrices et répondantes dans des flacons frais deux heures avant l’expérience et à les laisser s’habituer à la pièce à environnement contrôlé où le test sera effectué.Ensuite, les mouches répondeuses sont placées dans les TMA et étant donné le choix entre un flacon dans lequel les mouches ont été préalablement stressées, contenant ainsi l’odorant de stress de la drosophile, et un flacon frais, la dernière étape consiste à compter le nombre de mouches répondeuses dans le flacon frais, dans le flacon DSO et dans l’élévateur pour quantifier leur réponse au DSO. En fin de compte, le labyrinthe en T est utilisé pour mesurer l’évitement par les mouches d’un signal de stress social, en particulier l’odorant de stress gillo. J’ai eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque j’étais post-doctorant à Caltech.À cette époque, Greg Sue et son directeur de thèse David Anderson étudiaient la peur ou l’évitement social chez Phyla, mais il n’existait aucun test pour cela. Ils m’ont approché parce que je faisais beaucoup de tests de comportement dans le laboratoire de S brands et en effectuant des expériences de phototaxi et d’apprentissage olfactif, j’avais remarqué que les mouches étaient attirées par les flacons dans lesquels d’autres mouches avaient passé un certain temps sans être dérangées tout en évitant les flacons dans lesquels les mouches avaient été stressées à ce moment-là par un choc électrique. Évêque. La démonstration de cette méthode est essentielle car le processus expérimental du test d’évitement social nécessite une certaine pratique pour être rapide et efficace dans le transfert du bios sans perdre de mouches ou de DSL.Le principal avantage de cette technique pour examiner les interactions sociales par rapport aux méthodes existantes telles que le suivi vidéo assisté par ordinateur, est qu’il s’agit d’un test facile à maîtriser et à mettre en œuvre, mais très puissant pour quantifier l’évitement social des individus stressés. Pour commencer l’expérience, coupez une feuille de polyéthylène poreuse pour couvrir une boîte de 12,7 centimètres sur 10,2 centimètres. Remplissez la boîte de glace pilée et couvrez-la avec la feuille pour compléter l’appareil d’anesthésie froide de la drosophile.Effectuez l’expérience sur un banc recouvert d’un couvercle de banc blanc et d’un tableau blanc à l’avant pour assurer des conditions d’éclairage homogènes. Ensuite, préparez l’appareil de l’aspirateur à mouche vortex, le thermomètre et la minuterie. Un à deux jours avant l’expérience, le côlon anesthésie les mouches.Transférez les mouches avec un entonnoir dans un tube de 50 millilitres et placez le tube dans un seau à glace isolé sous le niveau de la glace. Attendez cinq minutes que les mouches entrent dans un coma glacial. Transférez ensuite les mouches sur la feuille de polyéthylène poreuse à température ambiante et triez les mouches répondeuses au microscope stéréoscopique.Séparez les mouches mâles de trois à sept jours des mouches femelles et maintenez ces mouches dans un groupe de 40 mouches émettrices de sexe mixte de Canton. À l’aide d’un aspirateur buccal, laissez les mouches s’échapper. Une nuit de récupération pour minimiser tout effet confondant de la collecte sur le comportement.Ensuite, ouvrez le sac de flacons de test pour remplacer l’air vicié et sentant le plastique dans le sac par de l’air frais. Avant l’expérience, assurez-vous que la température de la salle d’essai est de 25 degrés Celsius, que la pièce est éclairée uniformément et que l’humidité est supérieure à 30 %Deux heures avant l’expérience, transférez les mouches répondeuses et émettrices dans des flacons d’aliments frais et permettez aux mouches de s’adapter à l’environnement sur la paillasse où l’expérience sera effectuée. Placez le labyrinthe de thé sur le tampon de martèlement et serrez le clip de vis pour que l’élévateur soit stable.Ensuite, transférez les mouches répondantes dans un flacon de test frais et enclenchez le flacon contenant les mouches répondantes sur le dessus du labyrinthe de thé. Ensuite, inclinez l’appareil du labyrinthe de thé et tapotez-le sur le tapis de martèlement pour que les mouches à fruits tombent dans l’élévateur. Déplacez la partie supérieure de l’ascenseur vers le bas pour placer les mouches entre les sections supérieure et inférieure des TMA et assurez-vous que l’ascenseur est au-dessus du point de choix pour empêcher les mouches de s’échapper pendant que les mouches d’intervention s’adaptent au nouvel environnement.Placez les mouches émettrices dans un flacon d’essai frais et garnissez-le d’un morceau de coton. Agitez le flacon sur un mini vortex de cette manière. Les mouches émettront du DSO, transféreront les mouches dans un flacon de nourriture et placeront rapidement le flacon rempli de DSO dans l’un des deux côtés de l’équipe.A alterner le côté de placement du flacon rempli de DSO. À chaque nouvelle série, placez un flacon d’essai frais de l’autre côté de l’équipe A, puis abaissez complètement l’élévateur pour que les mouches à fruits puissent choisir entre le flacon d’essai frais et le flacon rempli de DSO. Démarrez immédiatement la minuterie.Au bout d’une minute, déplacez l’élévateur vers le haut pour séparer les mouches dans le flacon frais et le flacon DSO des mouches coincées dans l’élévateur. Comptez le nombre de mouches dans chaque flacon et dans l’élévateur. Répétez cette opération.Pour chaque génotype et/ou groupe de condition, la taille des mouches répondeuses n’influence pas leur évitement du DSO. Après avoir réalisé l’expérience sur une plage de 10 à 80 mouches, un test T n’a montré aucune signification statistique parmi les indices de performance ou IP des mouches répondeuses. Le nombre de mouches émettrices a un impact sur l’évitement du DSO par les mouches, comme le montre ce graphique, qui représente différents essais.En utilisant 10 à 160 mouches émettrices chacune. Un évitement substantiel a tout de même été détecté avec seulement 10 mouches stressées. Le choix, le moment et le patrimoine génétique des mouches des fruits affectent la réponse au DSO, comme le montre ce graphique, qui illustre une réponse des souches de Canton et d’Elwood.Les deux génotypes présentent un évitement plus fort du DSO que l’Oregon et certaines souches de markin après son développement. Cette technique a permis aux chercheurs dans le domaine des neurosciences d’identifier le circuit neurologique sous-jacent à la perception et à l’évitement du CO2, l’un des composants du DSO. Il a également été utilisé pour étudier le rôle des gènes candidats à l’autisme dans l’impact sur le comportement social.Dans Joseph Ano Gaster. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins de cinq minutes par répétition. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer un test d’évitement social, de la préparation des mouches émettrices et répondeuses avant de les tester à la génération des biographies de terrain DSL et à la manipulation des coéquipiers pour fournir aux répondeurs un choix binaire.

straightforward-assay-for-quantification-social-avoidance-drosophila

Research

Recherche

JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Dans cet article, vidéo, nous décrivons une nouvelle méthode permettant la construction de gradients odorant avec des géométries stable et contrôlable. Nous illustrer brièvement comment ces gradients peuvent être utilisées pour dépister les défauts olfactifs (anosmie complète et partielle) et d'étudier les caractéristiques plus subtiles du comportement chimiotaxie.

Haute résolution de mesure du comportement Odor-Driven dans les larves de drosophile

Comportement des dosages pour mesurer des fonctions locomotrices, l'apprentissage et les capacités de...

Déficits locomoteur Dosage, apprentissage et mémoire dans Drosophile Modèles de la neurodégénérescence

Drosophila melanogaster est un système modèle génétiquement et comportemental souple qui a été utilisée pour comprendre la base moléculaire et cellulaire de nombreux processus biologiques importants pour plus d'un siècle 1. Drosophile a été bien exploitée afin de mieux comprendre la base génétique du comportement à la mouche.

Méthodes de dosage à Drosophila Comportement

Cette vidéo décrit une méthode simple pour quantifier la locomotion des mouches et montre le test d’escalade effectué. Le test de montée à la mouche est un test général de la fonction motrice qui repose sur une réponse négative de la géotaxie.

Essai d’escalade à la mouche : une méthode pour tester la locomotion générale chez Drosophila melanogaster

Dans cet article, vidéo, nous décrivons un test automatisé pour mesurer l'effet de la faim ou de satiété sur le comportement dépend olfactif de recherche de nourriture dans le fruit de mouche adulte Drosophila melanogaster.

Une simple mouche Essai de comportement alimentaire dans Drosophila

L’effet des gènes et de l’environnement sur l’espace social de Drosophila melanogaster peut être quantifié à l’aide d’un paradigme analytique puissant mais simple. Nous montrons ici différents facteurs qui peuvent affecter cet espace social, et qui doivent donc être pris en considération lors de la conception d’expériences dans ce paradigme.

Conditions affectant espace social<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Ce protocole décrit un test à haut débit pour tester les préférences de ponte de Drosophila melanogaster à une résolution d’un seul animal.  Ce test fournit une plate-forme simple, efficace et évolutive pour identifier les gènes et les composants de circuit qui contrôlent un processus de prise de décision simple.

High Throughput Assay pour examiner les préférences de ponte de l&#39;individu<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Ce protocole introduit un essai de tache de lumière pour étudier le comportement phototactic larvaire de Drosophila. Dans cet analyse, un point lumineux est généré sous forme de stimulation lumineuse, et le processus d'évitement de la lumière larvaire est enregistré par un système d'imagerie infrarouge à base de lumière.

Essai sur place légère pour l'analyse de Drosophila Larval Phototaxis

Ce travail décrit un paradigme comportemental simple qui permet l’analyse de l’apprentissage associatif aversif chez les mouches des fruits adultes. La méthode est basée sur la suppression du comportement négatif inné de la géotaxie en raison de l’association formée entre un contexte environnemental spécifique et un choc électrique.

Drosophile Le comportement d’évitement passif comme nouveau paradigme pour étudier l’apprentissage aversif associatif

Le présent protocole évalue l’activité locomotrice de la drosophile en suivant et en analysant le mouvement des mouches dans une arène faite à la main à l’aide du logiciel open source Fiji, compatible avec des plugins pour segmenter les pixels de chaque image sur la base d’un enregistrement vidéo haute définition pour calculer des paramètres de vitesse, de distance, etc.

Une technique simple pour doser l’activité locomotrice chez la drosophile

Le trouble du spectre autistique (TSA) est associé à un comportement social et communicatif altéré et à l’émergence d’un comportement répétitif. Pour étudier l’interrelation entre les gènes TSA et les déficits comportementaux dans le modèle de la drosophile , cinq paradigmes comportementaux sont décrits dans cet article pour mesurer l’espacement social, l’agressivité, la parade nuptiale, le toilettage et le comportement d’habituation.

Paradigmes pour l’évaluation comportementale dans le modèle de trouble du spectre autistique de la drosophile

Apprenez à quantifier l'évitement social chez Drosophila melanogaster grâce à un protocole utilisant un labyrinthe en T. Cette méthode permet d'étudier les interactions sociales et les facteurs génétiques influençant le comportement.

Essai simple pour la quantification de l'évitement social en Drosophila melanogaster

Explorer plus de vidéos