L'isolement et l'aide de sections d'encéphalopathie mésentérique artère et la veine comme les essais biologiques pour tester vasoactivité dans l'intestin grêle

L’objectif global de cette procédure est d’isoler des coupes transversales d’artères et de veines mésentériques bovines dans un multigramme afin de permettre le criblage de composés expérimentaux pour leur activité vaso. Pour ce faire, il faut d’abord prélever un échantillon de tissu mésentérique sur l’animal. Dans la deuxième étape, l’échantillon est nettoyé et les récipients sont sectionnés.

Ensuite, les sections sont montées et équilibrées sur le myogreffon. Dans la dernière étape, les vaisseaux isolés sont exposés aux composés d’intérêt. En fin de compte, ce bioessai sur les artères et les veines peut être utilisé pour évaluer l’activité vaso des composés et les effets qu’ils ont sur le flux sanguin dans les vaisseaux sanguins mésentériques bovins.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que la mesure du flux sanguin in vivo, est qu’avec cette technique, les tissus d’un seul animal peuvent être exposés à plusieurs composés simultanément. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu de syndromes animaux très spécifiques qui peuvent provoquer une vasoconstriction tels que la fétuque, la toxicose ou l’ergotisme, elle peut également être appliquée à d’autres scénarios susceptibles d’intéresser les chercheurs, tels que les produits pharmaceutiques en cours de développement ou les produits naturels. De plus, il pourrait également être appliqué non seulement à la vascularisation du bétail, mais aussi à la vascularisation de n’importe quelle autre espèce de mammifère.

Après avoir retiré les vaisseaux sanguins du tissu mésentérique, à l’aide d’une paire de pinces, placez l’échantillon de tissu sur une surface de coupe et immergez-le partiellement dans des crebs glacés. Ensuite, à l’aide d’un bijoutier numéro cinq, de pinces et de bruit, les ciseaux à iris dissèquent soigneusement la graisse et les tissus conjonctifs entourant les vaisseaux. Après avoir séparé l’artère et la veine, identifiez l’ouverture du vaisseau à une extrémité de la section et saisissez soigneusement le fascia entourant le vaisseau avec la pince.

Glissez ensuite la pointe des ciseaux sous le fascia surélevé pour faire une coupe avec les ciseaux parallèlement au récipient. Après l’incision initiale, coupez de chaque côté du vaisseau pour détacher davantage la graisse et les tissus conjonctifs, et pour nettoyer le vaisseau. Placez les vaisseaux sanguins nettoyés dans un tube frais de tampon de lumière Krebs Henzel et conservez le tube à quatre degrés Celsius jusqu’à 24 heures.

Lorsque vous êtes prêt, utilisez un trancheur de tissus pour obtenir des coupes transversales cohérentes du vaisseau d’intérêt dans le nombre souhaité de sections de deux millimètres, puis examinez chaque section à un grossissement de 12,5 x pour vous assurer que chaque échantillon ne présente pas d’anomalies, de branches, de valves ou de dommages superficiels acquis pendant le processus de dissection et de nettoyage. Conservez les sections de récipient tranchées acceptables immergées dans le tampon de lumière Krebs Henzel à quatre degrés Celsius pendant un maximum de 30 minutes. Ensuite, insérez doucement les supports à travers la lumière de chaque échantillon, et utilisez le micro positionneur sur le myo greffon pour augmenter progressivement la tension afin de monter le vaisseau sur le myo greffon.

En prenant soin de ne pas étirer les récipients au-dessus d’une lecture de deux à trois grammes. Une fois que toutes les chambres sont couvertes, aspirez le tampon de chaque chambre et remplissez-les de cinq millilitres de tampon frais. Une fois que toutes les sections du récipient se sont équilibrées pendant 1,5 heure pour atteindre une tension de repos stable d’un gramme à 500 microlitres de chlorure de potassium de 1,32 molaire à une concentration finale de 0,12 molaire dans la solution de 5,5 millilitres, baignant le récipient.

N’ajustez pas la tension manuellement, car la réponse maximale au chlorure de potassium sera utilisée pour normaliser les données de traitement, remplacez la solution par un tampon de lumière Krebs Henzel frais à intervalles de 15 minutes jusqu’à ce que la tension soit revenue à la valeur de base d’un gramme. Une fois que la tension est revenue à la ligne de fond, ajoutez les étalons en aliquotes de 25 microlitres dans chaque chambre selon le protocole expérimental. Lorsque la dernière norme a été ajoutée, démarrez une minuterie de neuf minutes.

À la fin de l’incubation, retirez le tampon contenant le traitement des chambres et ajoutez cinq millilitres de tampon frais dans chaque chambre. Ensuite, démarrez une minuterie de 2,5 minutes une fois terminée, répétez ce rinçage de 2,5 minutes. Une seconde fois à la fin du deuxième rinçage, aspirez les chambres.

Ensuite, après avoir ajouté une nouvelle mémoire tampon une fois de plus, démarrez une minuterie pour compter à rebours jusqu’au début de la deuxième édition standard. Comme on l’a observé au cours des périodes d’incubation de neuf minutes illustrées ici, il y a des augmentations progressives de la réponse aux normes qui, avec l’augmentation des concentrations du traitement, l’ajout de chlorure de potassium à la fin de l’expérience est essentiel car il confirme la viabilité du tissu. Cet essai biologique peut être utilisé pour évaluer l’activité vaso des composés expérimentaux sur les vaisseaux sanguins qui fournissent des nutriments à l’intestin grêle, ainsi que sur les vaisseaux sanguins qui transportent les nutriments absorbés.

Par exemple, dans cette expérience, aucune différence n’a été observée dans les réponses contractiles artérielles ou veineuses après cinq traitements à l’hydroxytryptamine. Inversement, la réponse contractile de la veine mésentérique aux concentrations croissantes de noradrénaline était supérieure à celle de l’artère mésentérique. À la suite de cette procédure, la méthode pourrait être modifiée pour inclure dans le tampon des agonistes ou des antagonistes qui présentaient un intérêt particulier pour le chercheur.

Cela permettrait au chercheur de mieux comprendre l’implication de récepteurs très spécifiques et les mécanismes à l’origine des réponses vasculaires observées lors de l’expérience myo. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de collecter, de traiter et d’isoler les vaisseaux sanguins. Pour une mon expérience.