Name: Technique de porc approvisionnement du foie et la transplantation orthotopique utilisant un Active Porto-Caval Shunt (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 27 s
Description: Apprenez la transplantation hépatique orthotopique chez le porc avec un shunt porto-cavo-jugulaire actif. Cette technique assure une hémodynamique stable et évite la congestion intestinale pendant la greffe.

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L’étude a été financée par des subventions de recherche de la Fondation de recherche sur la transplantation d’organes de Roche (ROTRF) et d’Astellas. Markus Selzner a été soutenu par un prix de développement de carrière de l’ASTS. Matthias Knaak a été soutenu par la bourse de recherche Astellas. Nous remercions Uwe Mummenhoff et la famille de Birmingham pour leur généreux soutien.

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Expérimentale porcine OLTx est une procédure difficile pour un cadre de recherche sans les ressources de soins intensifs d&#39;un scénario clinique. Les complications possibles sont l&#39;instabilité hémodynamique, l&#39;hémorragie, l&#39;ischémie d&#39;organes, l&#39;hypothermie, et métabolique, ainsi que des voies respiratoires, de décompensation. Pour tout groupe de recherche, de formation procédurale suffisante de la technique chirurgicale 5 ainsi que le 14,15 de l&#39;anesthésie de porc est obligatoire afin d&#39;obtenir des résultats représentatifs et reproductibles. Beaucoup de subtilités techniques ont été décrites dans la littérature, en particulier en ce qui concerne la phase de reconstruction vasculaire 5. Le protocole décrit ci-dessus OLTx fournit les informations requises pour un modèle de cava-remplacement ressemblant OLTx humaine. Les résultats fournis démontrent la survie de l&#39;animal fiable et la récupération de la greffe dans les deux modèles de DBC et DCD. Le protocole est applicable dans les scénarios de survie à court terme utilisés dans la greffe reperfusion expep é riences, par exemple, ainsi que dans les modèles de survie à long terme telles que des études de tolérance. Un grand obstacle de OLTx porcine est relativement mauvaise tolérance de cava et veine clampage. La congestion splanchnique pendant la phase anhépatique provoque l&#39;hypertension veineuse et capillaire dommages qui peuvent conduire à l&#39;ischémie intestinale majeure et d&#39;instabilité hémodynamique au point d&#39;un choc irréversible même après reperfusion d&#39;organes 7. Depuis la veine cave est complètement noyé dans le parenchyme hépatique, une procédure de piggy-back cava-préservation est pas possible. L&#39;occlusion totale de la veine cave dans la phase de reconstruction de la veine porte atteinte à la stabilité hémodynamique du porc. Bien que quelques rapports montrent que OLTx porcine peut être accompli au cours de cava et veine occlusion totale de moins de 25 min 16,17, une technique de dérivation porto-cave-jugulaire pour le temps de la reconstruction vasculaire est l&#39;option la plus sûre et plus pratique 7- 9,18. Dans èmeL&#39;expérience de e auteurs, un passif porto-jugulaire dérivation est pas optimale pour maintenir le plan hémodynamique de porc stable au cours de la phase anhépatique. Le modèle de dérivation, y compris la décompression active tant de cava infrahepatic et la veine porte, permet une phase de reconstruction calme des anastomoses veine cave et portail sus-hépatiques, même avec le temps de serrage prolongé en raison de complications imprévues. Contrairement aux rapports précédents 7, une splénectomie est pas obligatoire lorsque le cathéter portail contournement est prélevé. Les deux artère splénique et la veine sont fermées à mi-chemin le long de la longueur de la rate en laissant la moitié proximale suffisamment perfusé. Les complications comme des saignements ou une embolie de l&#39;air due à dérivation déconnexion sont évitables en assurant que la dérivation est soigneusement placé et fixé correctement. Dans survie à long terme OLTx expériences, l&#39;anastomose biliaire est considéré comme un point faible en raison de son taux élevé de complications 19. Le tissu biliaire est très fragile et needs soin particulier lorsqu&#39;il est manipulé. De nombreuses techniques d&#39;anastomose différents ont été décrits 5,19. Une anastomose bout-à-bout est techniquement simple et avec un minimum de complications associées 19. Un fil de suture d&#39;une aiguille continu sans enlèvement de copeaux notamment de grandes sections de tissu conjonctif péribiliaire semble être supérieure à une suture interrompue. La voie biliaire est placé sous tension inutile lorsque les points individuels de la suture interrompue sont noués. Cela peut entraîner des déchirures du tissu et les fuites biliaires consécutifs. Le matériau de suture - résorbables ou non résorbables - est généralement pas important, compte tenu de sa durée de vie limitée jusqu&#39;à ce que le porc est terminée. Pour les modèles de survie à long terme sur plusieurs mois, sutures absorbables - comme dans OLTx humaine - sont préférables. Soins spécifiques doivent être prises avec le post-opératoire suivi. Une alimentation suffisante et alimentation en fluide, un protocole de soulagement de la douleur fiable, et un bon immunosuppressionrégime sont obligatoires. Pour les expériences à long terme, immunosuppression apparaît particulièrement important. Comparé à d&#39;autres mammifères, porcs montrent un taux de rejet immunologique étonnamment bas après OLTx 20,21. Infiltrations de cellules rondes sont maximales au cours de la deuxième semaine après la transplantation et diminuent spontanément même sans immunosuppression. Le rejet est rarement la cause de décès après porcine OLTx 22. Cependant, même avec le protocole d&#39;immunosuppression impliquant l&#39;administration de Steroides et iv inhibiteurs de la calcineurine po mentionné ici, le rejet de greffe est indiqué par une légère augmentation des transaminases à partir de environ 4 jours après OLTx et confirmée par champ apparent portail infiltration de cellules rondes. inhibiteurs de la calcineurine peuvent être donnés soit 23,24 po ou iv 25,26; deux méthodes présentent des inconvénients. Même avec les aides de l&#39;application orale, la quantité réelle d&#39;atteindre le tractus gastro-intestinal reste insaisissable. D&#39;autre part, en perfusion intraveineuse continuela plume d&#39;un cochon avec un animal actif est difficile. Par conséquent, l&#39;application intraveineuse doit être effectuée sous forme de bolus, ce qui se traduit par des pics élevés de concentration de médicament avec des effets toxiques potentiels. Néanmoins, les deux procédés d&#39;application semblent permettre la survie à long terme. Semblable à un contexte clinique, la prophylaxie ulcère de stress post-opératoire est recommandé. Saignements post-opératoires d&#39;ulcères gastro-duodénaux est un problème fréquent et peut être liée à une insuffisance hépatique 27. Après quelques cas de saignements gastro-intestinaux dans les deux groupes OLTx, les auteurs ont commencé la prophylaxie réguliers avec le pantoprazole et ne subissent pas de saignements gastro-intestinaux depuis. Entretien rigoureux des conditions stériles peropératoire, comparables aux conditions dans une salle d&#39;opération clinique et antibioprophylaxie en découlent, diminue le risque de complications infectieuses. En conclusion, cet article provides d&#39;information pratique pour établir un programme OLTx porcine dans un cadre de recherche. Dévouement suffisante, la pratique et le travail d&#39;équipe est important afin de diminuer la période d&#39;apprentissage, afin de produire des résultats fiables, et de réduire les coûts et le nombre d&#39;animaux de recherche.

Transplantation hépatique (OLTx) est la seule option de traitement pour les patients atteints d&#39;une maladie du foie en phase terminale ou d&#39;un carcinome hépatocellulaire avancé. Pour les 25 dernières années, le nombre de candidats sur la liste d&#39;attente a augmenté progressivement et dépasse de loin le nombre de greffons disponibles. Dans la plupart des régions de la transplantation, de 20 à 30% des patients sur la liste d&#39;attente pour une transplantation du foie meurent sans avoir reçu une greffe d&#39;organe ou sont retirées de la cote en raison de la progression de la maladie. Stratégies visant à accroître le bassin de donneurs et, par conséquent, le nombre de greffons disponibles, sont désespérément nécessaire. Extended critères d&#39;attribution d&#39;organes, prolongée préservation de greffe, et d&#39;induction de la tolérance immunologique représentent toujours des défis majeurs cliniques 1-3. Par conséquent, la recherche expérimentale OLTx est essentiel afin d&#39;optimiser la pratique OLTx clinique. Porcine OLTx est un modèle expérimental bien établi qui ressemble OLTx humain dans de nombreuses façons, y compris ltaille de Iver, l&#39;anatomie, la physiologie et 4-6. Ainsi, il est devenu une méthode expérimentale standard dans des domaines de recherche tels que les techniques chirurgicales, la physiologie, l&#39;immunologie, la préservation, et les lésions d&#39;ischémie-reperfusion. De nombreuses techniques de passation des marchés de la greffe, hépatectomie bénéficiaire, et, en particulier, la reconstruction vasculaire, ont été décrits dans la littérature 5. Le choix de la technique appropriée varie en fonction de la préférence du chercheur et capacité technique. Contrairement à la situation humaine, la congestion splanchnique pendant la phase anhépatique représente un problème important dans OLTx porcin. Ischémie intestinale ultérieure et les dommages vasculaires congestive peuvent causer de graves instabilité hémodynamique, mettant en péril la survie de porc et, par conséquent, le succès de l&#39;expérience 7-9. Par conséquent, la décompression intestinale suffisante est obligatoire, en particulier dans les paramètres expérimentaux techniquement moins raffinés. Nousing un porto-cave-jugulaire shunt actif pour la durée de la phase anhépatique est une option fiable pour éviter la congestion intestinale. Le système peut être utilisé pour des expériences de reperfusion précoce ainsi que des scénarios de survie à long terme. Le protocole suivant contient toutes les informations pour un modèle de transplantation hépatique stable et reproductible chez les porcs, y compris les donateurs marchés du foie, de l&#39;exploitation bénéficiaire, y compris hépatectomie et techniques de bout-en-bout de reconstruction du navire, et les soins post-opératoires.

<table><tbody><tr><td>Sulfate d’atropine 15 mg/30 ml</td><td>Rafter 8 Produits</td><td>238481</td><td></td></tr><tr><td>Buprénorphine 0,3 mg/ml</td><td>RB Pharmaceuticals LDT S.O</td><td>.</td><td></td></tr><tr><td>Céfazoline 1 g</td><td>Partenaires pharmaceutiques du Canada Inc.</td><td></td><td></td>2237138</tr><tr><td>Cyclosporin solution buvable 5 000 mg/50 ml</td><td>Novartis Pharmaceuticals Canada Inc.</td><td></td><td></td>2150697</tr><tr><td>Citrate de fentanyl 0,25 mg/5 ml</td><td>Sandoz Canada Inc.</td><td></td><td></td>2240434</tr><tr><td>Héparine 10 000 iU/10 ml</td><td>Leo Pharma A/S</td><td>453811</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane 99,9 %, 250 ml</td><td>Partenaires pharmaceutiques du Canada Inc.</td><td></td><td></td>2231929</tr><tr><td>Chlorhydrate de kétamine 0 mg 5000 mg/50 ml</td><td>Bimeda-MTC Santé animale inc.</td><td></td><td></td>612316</tr><tr><td>Sonnerie lactée s + 5 % Dextrose, 0,5 L</td><td>Baxter Corporation</td><td>61131</td><td></td></tr><tr><td>Sonnerie lactée' s, 1 L</td><td>Baxter Corporation</td><td>61085</td><td></td></tr><tr><td>Métronidazole 500 mg/100 ml</td><td>Baxter Corporation</td><td>870420</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam 50 mg/10 ml</td><td>Partenaires pharmaceutiques du Canada Inc.</td><td></td><td></td>2242905</tr><tr><td>Pantoprazole 40 mg</td><td>Sandoz Canada Inc.</td><td></td><td></td>2306727</tr><tr><td>Chlorure de potassium 40 mEq/20 ml</td><td>Hospira Healthcare Corporation</td><td>37869</td><td></td></tr><tr><td>Propofol 1 000 mg/100 ml</td><td>Pharmascience Inc.</td><td></td><td></td>2244379</tr><tr><td>Sulfate de protamine 50 mg/5 ml</td><td>Partenaires pharmaceutiques du Canada inc.</td><td></td><td></td>2139537</tr><tr><td>solution saline 0,9 %, 1 L</td><td>Baxter Corporation</td><td>60208</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonate de sodium 50 mEq/50 ml</td><td>Hospira Healthcare Corporation</td><td>261998</td><td></td></tr><tr><td>Solu-Medrol 500 mg</td><td>Pfizer Canada Inc.</td><td></td><td></td>2367963</tr><tr><td>Acide tranexamique 1 000 mg/10 ml</td><td>Pfizer Canada Inc.</td><td></td><td></td>2064413</tr><tr><td>Université du Wisconsin Solution, SPS-1</td><td>Organ Recovery Systems</td><td>SPS-1</td><td></td></tr><tr><td>Xylocaïne endotrachéale 10 mg/50 ml</td><td>AstraZeneca</td><td>2003767</td><td></td></tr><tr><td>Appose ULC 35 W agrafeuse cutanée</td><td>Covidien Canada</td><td>803712</td><td></td></tr><tr><td>Maxon, 1</td><td>Covidien Canada</td><td>606173</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 0</td><td>Covidien Canada</td><td>S606</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 2-0</td><td>Covidien Canada</td><td>S405</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 3-0</td><td>Covidien Canada</td><td>S404</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 4-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP581X</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 5-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP725X</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 6-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP733X</td><td></td></tr><tr><td>Cathéter i.v, 18 G</td><td>BD Canada</td><td>381147</td><td></td></tr><tr><td>Cathéter Cook TPN, 9.5 Fr</td><td>Cook Medical Company</td><td>C-TPNS-9.5-90</td><td></td></tr><tr><td>PSI Kit pour cathéter à gaine, 8.5 Fr</td><td>Arrow International</td><td>ASK-09803-UHN</td><td></td></tr><tr><td>Ligne de pompe à perfusion</td><td>Smith Medical ASD Inc.</td><td>21-0442-25</td><td></td></tr><tr><td>Liver Admin Set (ligne de rinçage)</td><td>CardioMed Supplies Inc</td><td>17175</td><td></td></tr><tr><td>Mallinckrodt, Tube trachéal, 6,5 mm</td><td>Covidien Canada</td><td>86449</td><td></td></tr><tr><td>Med-Rx Tube de raccordement</td><td>d’aspiration Benlan Inc.</td><td>70-8120</td><td></td></tr><tr><td>Sac d’organe</td><td>CardioMed Supplies Inc</td><td>2990</td><td></td></tr><tr><td>Embout d’aspiration</td><td>Tyco Healthcare Group LP</td><td>8888501023</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab, Crayon de cautère</td><td>Covidien Canada</td><td>E2515H</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab, Électrode de retour patient</td><td>Covidien Canada</td><td>E7507</td><td></td></tr><tr><td>Connecteur de dérivation 3/8 » x 1/4 »</td><td>Raumedic AG</td><td>955083-001</td><td></td></tr><tr><td>Connecteur de dérivation 3/8 » x 3/8 » Luer Lock</td><td>Raumedic AG</td><td>955163-001</td><td></td></tr><tr><td>Connecteur de dérivation Y 3/8 » x 3/8 » x 1/4 »</td><td>Raumedic AG</td><td>961360-002</td><td></td></tr><tr><td>Tube de dérivation 1/4 » x 1/16 »</td><td>Raumedic AG</td><td>039505-010</td><td></td></tr><tr><td>Tube de dérivation 3/8 » x 3/32 »</td><td>Raumedic AG</td><td>039535-005</td><td></td></tr><tr><td>Pompe centrifuge Rotaflow</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>HC 2821</td><td></td></tr><tr><td>Anneau de serrage de tuyau en acier inoxydable, 5mm</td><td>oetiker</td><td>16700007</td><td></td></tr><tr><td>Écarteur abdominal</td><td>Medite GmbH</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DE Bakey &ndash ; Beck, Pince de cava infrahépatique</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB519R</td><td></td></tr><tr><td>Deithrich, Pince atraumatique (veine porte)</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB525R</td><td></td></tr><tr><td>Gregory Bulldog Clamp, courbé</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB382R</td><td></td></tr><tr><td>Gregory Bulldog Clamp, droit</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB381R</td><td></td></tr><tr><td>Potts &ndash ; De Martel, Ciseaux</td><td>Aesculap Inc.</td><td>BC648R</td><td></td></tr><tr><td>Satinsky, Pince à Cave Suprahépatique</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB605R</td><td></td></tr><tr><td>Pince à tube symétrique</td><td>Codman Instruments</td><td>198010</td><td></td></tr><tr><td>Appareil d’anesthésie,</td><td>Équipement d’anesthésie Optimax Moduflex</td><td>SN5180</td><td></td></tr><tr><td>Débitmètre de dérivation, HT 110</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td></td><td></td>HT110B11106</tr><tr><td>Sonde de débitmètre, H6XL</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td>Pompe de thérapie thermique H6Xl689</td><td></td></tr><tr><td>, T/Pump</td><td>Gaymar Industries Inc</td><td>TP500-G89D19</td><td></td></tr><tr><td>Pompe à perfusion 3 000</td><td>SIMS Graseby LTD.</td><td></td><td></td>SN300050447</tr><tr><td>Isoflurane Vapor 19.1</td><td>Draeger Medical Canada Inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Moniteur, Datex AS 3</td><td>Instrumentarium Corp./ Hitachi</td><td>D-VHC14-23-02</td><td></td></tr><tr><td>Unité d’entraînement centrifuge Rotaflow</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>952301</td><td></td></tr><tr><td>Console Rotaflow</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>706035</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de thérapie</td> thermique <td>Gaymar Industries Inc</td><td>TP26E</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab Force Tx</td><td>Valleylab Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>216151480 ventilateur, AV 800</td><td>DRE Équipement médical</td><td>40800AVV</td><td></td></tr><tr><td>Warm Touch, système de réchauffement du patient</td><td>Nellcor/ Covidien Canada</td><td>5015300A</td><td></td></tr></tbody></table>

technique de porc approvisionnement du foie et la transplantation orthotopique utilisant un active porto-caval shunt

Technique of Porcine Liver Procurement and Orthotopic Transplantation using an Active Porto-Caval Shunt

Le succès de la transplantation hépatique a entraîné une pénurie dramatique d’organes. Chaque année, un nombre considérable de patients inscrits sur la liste d’attente pour une transplantation hépatique meurent sans avoir reçu de greffe d’organe ou sont retirés de la liste en raison de la progression de la maladie. Même après une transplantation réussie, le rejet et les effets secondaires de l’immunosuppression restent des préoccupations majeures pour la survie du greffon et la morbidité des patients. 
La recherche expérimentale sur les animaux a été essentielle au succès de la transplantation hépatique et joue toujours un rôle central dans le développement de la pratique clinique de la transplantation. En particulier, le modèle de transplantation hépatique orthotopique porcine (OLTx) est optimal pour la recherche clinique en raison de sa ressemblance étroite avec la taille humaine, l’anatomie et la physiologie. 
La décompression de la congestion intestinale pendant la phase anhépatique de l’OLTx porcin est importante pour garantir une survie fiable des animaux. L’utilisation d’un shunt porto-caval-jugulaire actif permet d’obtenir une excellente décompression intestinale. Le système peut être utilisé pour des expériences de survie à court et à long terme. Le protocole suivant contient toutes les informations techniques pour un modèle de transplantation hépatique stable et reproductible chez le porc, y compris les soins postopératoires aux animaux.

Dans une première étude de la transplantation, un modèle de donneur à cœur arrêté (HBD, n = 5) a été comparé à un modèle DCD (n = 10) est exposé à 45 min d'ischémie chaude in situ. Dans les deux groupes, les greffes ont été conservés sur de la glace pendant 10 heures après la passation des marchés. Dans le groupe HBD, 100% des porcs bénéficiaires survécu jusqu'à la fin de suivi de 5 jours après la transplantation. Dans le groupe DCD, seulement 50% des porcs bénéficiaires ont survécu pendant 5 jours en raison de problèmes de coagulation ou de décompensation métabolique, à la suite de la fonction hépatique post-opératoire diminué. Tous les échantillons de sang ont été prélevés à partir du cathéter veineux central. Après centrifugation, des échantillons de sérum ont été prélevés et analysés pour lésion hépatocellulaire (aspartate aminotransférase, AST), la fonction biliaire (bilirubine totale et la phosphatase alcaline), et la fonction hépatique (INR). Le décours temporel de chaque marqueur est représenté sur les figures 2-5. <p class="jove_content" ast niveaux ont atteint un pic apr heures u l dans le groupe hbd et dcd p="0,13)" renvoy des valeurs presque normales jours. de m les phosphatase alcaline nettement augment par rapport au alors que la bilirubine totale stable pmol tout long il a progressivement jusqu jour grand montre une h blessures biliaire particuli ce groupe. inr comme marqueur fonction montr tendance similaire aux culmin restaur avaient inf avec> Figure 1. Schéma du shunt porto-cave-jugulaire. La dérivation est rempli avec la solution de Ringer lactate. Puis la partie cave est serré avec une pince de tube, les pièces jugulaires et spléniques sont reliées aux cathéters préétablis, la dérivation est ouvert, et la pompe centrifuge est commencé après serrage de la veine porte. Après résection du foie, la partie cave de la rocade est inséré et fixé dans la veine cave infrahepatic souche, crânienne aux veines rénales. La pince de tube est libéré pour permettre la décompression caval, en plus de la décompression du portail. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig2.jpg"> Figure 2. aspartate aminotransférase (AST) (HBD n = 5, DCD n = 10). AST est un marqueur sensible de lésion hépatocellulaire. L'arrière de pointeer 24 heures est plus faible dans le HBD que dans le groupe DCD, suggérant une lésion de reperfusion moins hépatique; l'écart-type plus petit montre des résultats plus homogènes dans le groupe HBD. <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig3.jpg"> Figure 3. La bilirubine totale (HBD n = 5, DCD n = 10). La bilirubine totale, comme un marqueur de clairance biliaire et de l'intégrité de la voie biliaire, montre une tendance stable et homogène avec des valeurs inférieures à 10 pmol / L dans le groupe HBD. La courbe de la bilirubine dans le groupe DCD augmente progressivement au fil du temps et montre un écart type élevé, suggérant blessures biliaire dans seulement une partie du groupe expérimental. <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig4.jpg"> Figure 4. phosphatase alcaline (HBD n = 5, DCD n = 10). Phosphatase alcaline is un indicateur de lésion biliaire. Les valeurs pour le groupe HBD sont plus faibles que celle du groupe DCD, ce qui implique des blessures moins biliaire. <img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig5.jpg"> Figure 5. INR (HBD n = 5, DCD n = 10). Une valeur élevée de l'INR indique fonction hépatocellulaire diminution due à une diminution libération de facteurs de coagulation. Dans les deux groupes DBC et DCD, les valeurs de l'INR reviennent à des valeurs normales 5 jours après la transplantation, ce qui suggère la récupération de la fonction hépatique. Les valeurs pour le groupe HBD apparaissent inférieure.

La recherche expérimentale sur les animaux joue un rôle central dans le développement de la pratique clinique de la transplantation. Le modèle de transplantation hépatique orthotopique porcine (OLTx) ressemble beaucoup aux conditions humaines et est fréquemment utilisé dans la recherche clinique. Le protocole suivant contient toutes les informations nécessaires pour un modèle OLTx porcin fiable utilisant un shunt porto-caval-jugulaire actif.

Technique de porc approvisionnement du foie et la transplantation orthotopique utilisant un Active Porto-Caval Shunt

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation ...

L’objectif global de cette procédure est d’effectuer de manière fiable une allogreffe hépatique chez les porcs, assurant une hémodynamique animale stable avant et après l’opération. Ceci est accompli en mettant d’abord en œuvre un shunt jugulaire porte cave actif avant de clamper transversalement la veine CVA et la veine porte afin d’éviter la congestion intestinale pendant la phase d’implantation. Ensuite, une greffe de foie orthotopique par technique de remplacement du cave est réalisée, en commençant par l’anastomose du câble supra-hépatique.Ensuite, la veine porte est anastomose et le foie est reperfusé. Enfin, la dérivation jugulaire porte cavale est retirée et l’anastomose restante de la veine cva infra-hépatique, de l’artère hépatique et du canal cholédoque est terminée. En fin de compte, le porc a été sevré de l’anesthésie et surveillé de près en postopératoire.Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que l’occlusion vasculaire totale ou l’inance passive, est que dans cette technique particulière, la congestion splénique pendant la phase anabolique est complètement évitée. De cette manière, nous prévenons l’hypertension veineuse et les lésions capillaires qui peuvent entraîner une ischémie intestinale majeure et une instabilité hémodynamique Après avoir excisé le foie d’un porc donneur et anesthésié le porc receveur selon le protocole textuel, placé un porc receveur en position couchée sur une table chirurgicale au-dessus d’un coussin chauffant. Après l’intubation, utilisez la géométrie du chapeau pour confirmer qu’elle a été correctement effectuée avec l’oxymétrie de pouls sur la queue ou l’oreille du porc.Surveillez la fréquence cardiaque et la saturation en oxygène. Effectuez la technique Seldinger pour insérer un inducteur de gaine dans la veine jugulaire externe gauche qui sera utilisé plus tard pour un pontage jugulaire à câble porte actif. Après avoir inséré un cathéter de nutrition parentérale totale dans la veine jugulaire externe droite dans des conditions stériles, disséquez l’artère carotide droite et insérez un cathéter en polypropylène pour une surveillance invasive de la pression artérielle.Ensuite, utilisez deux attaches en soie zéro pour entourer l’artère afin de permettre une ligature d’urgence. Ensuite, faites une laparotomie médiane et insérez un écarteur abdominal pour obtenir un accès suffisant au quadrant supérieur droit. Ensuite, par étapes intermédiaires, divisez le ligament hépato-duodénal près du foie entre les liens.Identifier, diviser et marquer les branches de l’artère hépatique et du canal biliaire. Ensuite, disséquez l’artère hépatique dans le sens rétrograde jusqu’à ce qu’elle atteigne la division de l’artère gastroduodénale. Ensuite, libérez la veine porte du tissu adhérent à l’aide d’une veine AVC mobilisée par électrocautérisation à partir du rétropéritoine du côté droit pour exposer l’hélium de la rate à environ la moitié de la longueur de la rate.Nettoyez soigneusement l’artère splénique et la veine des couches péritonéales adhérentes. Ensuite, utilisez 4 2 0 attaches en soie pour entourer à la fois l’artère splénique et la veine. Insérez un inducteur à gaine française 8,5 avec deux trous supplémentaires dans l’extrémité du cathéter dans la veine splénique pointant distalement vers la veine porte avec l’une des deux attaches zéro.Fixez le cathéter distalement à son insertion et utilisez une autre attache à deux zéros pour fermer la veine proximale à l’insertion. Ensuite, remplissez une solution saline dans une dérivation composée d’une tête de pompe centrifuge, d’un tube jugulaire et d’un afflux provenant d’une branche portique et d’une branche cavale. Placez une pince à tube sur l’extrémité proximale du tube caveau.Connectez ensuite le portail et l’ouverture jugulaire de la dérivation aux deux cathéters introducteurs de gaine et utilisez un anneau de serrage de tuyau en métal pour sceller la connexion. Placez la tête de pompe centrifuge dans sa position de pompe trois minutes après avoir administré 1000 milligrammes d’acide texa et 10 000 UI d’héparine par voie intraveineuse. Ouvrez les pinces des deux cathéters introducteurs de gaine et clampez transversalement la veine porte.Ensuite, démarrez la pompe centrifuge à environ 1 500 coups par minute. Ensuite, à l’aide d’une pince transversale dorsale, la veine hépatique infra CVA juste crânienne aux veines rénales. Appliquez une pression ferme sur le tissu hépatique pour extraire une partie du sang restant.Ensuite, à l’aide d’une pince transversale statsky, la veine cave hépatique supérieure, y compris un bord diaphragmatique, tout en rétractant le foie de manière coddique. Maintenant, coupez la veine extra-hépatique AVC directement à sa frontière avec le tissu hépatique, et coupez la veine porte près de l’hélium hépatique à environ quatre centimètres crâniens de la pince CVA infra hépatique. Découpez un trou dans la paroi antérieure de la veine cave dans ce trou.Positionnez le connecteur de l’ouverture du câble de dérivation avec un verrou de leurre orienté vers l’avant avec un zéro attaches en soie. Fixez le connecteur dans le cva infra hépatique. Ouvrez ensuite le collier de serrage de la branche de câble de la dérivation.Enfin, ouvrez la pince CVA infra hépatique pour permettre un pontage jugulaire à câble en plus du pontage jugulaire porte existant. Après avoir augmenté la vitesse de la pompe à environ 2 500 coups par minute, vérifiez que le débit de dérivation du côté jugulaire est compris entre 900 et mille millilitres par minute. Utilisation de quatre sutures en polypropylène monofilament zéro.Fermez les trois ostéos ostéos de la veine phrénique du côté du receveur au niveau du point d’ouverture des CVA sup-hépatiques. Quatre sutures en polypropylène monofilament à double bras à l’intérieur, à l’extérieur aux deux coins du CVA hépatique SUP du côté receveur. Après avoir placé l’organe du donneur dans la cavité abdominale, coupez l’AVC de la veine hépatique du donneur pour l’adapter au côté receveur.À l’aide des aiguilles intérieures des points d’angle latéraux du receveur, faites-en un point d’angle extérieur à l’intérieur sur chacun des côtés de l’AVC du donneur super hépatique. Une fois que le receveur et le donneur sont approximatifs, attachez les deux extrémités de la suture gauche. Ensuite, faites un point extérieur à l’intérieur de la paroi arrière du kava récipient à côté de la cravate et passez sur la paroi arrière.Idéalement, en évitant la paroi du kava avec la suture restante, passez sur la paroi avant à partir du coin gauche. Attachez ensuite ensemble les deux sutures utilisées pour les parois arrière et avant. Après avoir coupé la veine porte donneuse à une longueur appropriée, utilisez six sutures en polypropylène monofilament zéro pour effectuer une anastomose de la veine porte de bout en bout, comme cela vient d’être démontré peu de temps avant de terminer la paroi avant, utilisez une autre ligne de rinçage pour intuber la lumière de la hava infra hépatique et avec un litre de sérum physiologique à température ambiante.Rincez la solution UW via la veine porte hava infra-hépatique. Ensuite, complétez l’anastomose et attachez les sutures en laissant environ 0,5 centimètre de facteur de croissance. Placez ensuite une autre pince arrière deba sur le cva infra hépatique du donneur.Ouvrez le clamp AVC hépatique S et vérifiez qu’il n’y a pas de saignement. Ouvrez ensuite la pince à porte pour reperfuser le foie, rélampez le côté receveur de la veine cave infra-hépatique et placez une pince à tube sur la partie câble de la dérivation. Après avoir arrêté la pompe centrifuge, coupez les attaches du connecteur de câble et retirez-le.Renvoyez le sang restant de la dérivation au porc par le cathéter jugulaire. Fermez maintenant la pince, le cathéter jugulaire, et débranchez le pontage. Ensuite, après avoir administré 100 milligrammes de sulfate de protamine pour antagoniser une héparine, utilisez cinq sutures monofilament zéro pour effectuer une anastomose de bout en bout de l’AVC infra hépatique.Encore une fois, répercuté infra hépatique inférieur CVA en relâchant les deux pinces. Après avoir coupé une plaque aortique autour du tronc cœliaque du donneur, placez une pince de bouledogue sur l’artère hépatique commune à proximité de la jonction de l’artère gastroduodénale. Une fois que l’artère hépatique a été rincée avec de l’héparine, utilisez six sutures en polypropylène monofilament zéro pour anestico.L’ostéo artériel de bout en bout dans une technique de parachute de course, puis reperfuser en ouvrant d’abord les pinces distales puis proximales bulldog avec 2 6 0 sutures monofilaments. Utilisez la technique de la course pour anesti mos le canal biliaire d’un bout à l’autre. Après avoir vérifié l’hémostase, retirez le cathéter d’introduction de la gaine de la veine splénique.Utilisez les deux attaches restantes pour fermer les extrémités proximale et distale avec la suture résorbable monofilament de taille un. Fermez la paroi abdominale. Enfin, utilisez soit une agrafeuse cutanée, soit deux sutures zéro pour fermer la peau.Se référer au protocole textuel pour les soins postopératoires. Dans notre première étude de transplantation, 100 % des porcs receveurs recevant des foies d’un donneur cardiaque battant ou HBD ont survécu jusqu’à la fin du suivi cinq jours après la transplantation. Cependant, seulement 50 % des porcs recevant du foie de donneurs après une mort circulatoire ou un TDC ont réussi à l’analyse de suivi de cinq jours d’échantillons de sang provenant de lésions hépatocellulaires.La fonction biliaire et hépatique a montré que les taux de ST atteignaient un pic après 24 heures dans les deux groupes. C’était beaucoup plus élevé dans le groupe DCD par rapport au groupe HCD et retour à des valeurs presque normales après cinq jours. De même, comme le montre ce graphique, les valeurs de phosphatase alcaline ont augmenté de façon marquée après 36 heures dans le groupe DCD par rapport au groupe HBD, comme le montre le présent document.Alors que la bilirubine totale était stable dans le groupe HPD, elle a progressivement augmenté dans le groupe DCD jusqu’au cinquième jour et montre un écart-type élevé suggérant une lésion biliaire dans seulement une partie du groupe expérimental. Dans cette figure, l’INR en tant que marqueur de la fonction hépatique a montré une tendance similaire aux valeurs A ST qui ont culminé à 24 heures et ont été rétablies à des valeurs presque normales. Après cinq jours Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de l’utilisation d’un pontage veineux actif lors d’une transplantation hépatique orthotopique de porc.De cette façon, nous assurons des conditions stables et douces tout au long de la procédure.

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Nous présentons une révision facile à mettre en place de la classique à deux revers technique pour la transplantation hépatique chez le rat.

Une transplantation hépatique orthotopique chez le rat

Transplantation hépatique orthotopique chez le rat est un modèle expérimental indispensable pour la recherche biomédicale. Nous présentons ici nos procédures chirurgicales de transplantation hépatique orthotopique chez le rat à la reconstruction de l'artère hépatique à l'aide d'une greffe partielle de 50%.

Interventions chirurgicales pour un modèle de rat de transplantation hépatique orthotopique partielle avec reconstruction artérielle hépatique

Transplantation hépatique auxiliaire fournit un support temporaire en insuffisance hépatique aiguë, jusqu'à la régénération du foie défaillant. La transplantation hétérotopique auxiliaire du foie (HALT) avec artérialisation de la veine porte (PVA) rend une fonction hépatique suffisante. Nous avons développé une technique analogue chez le rat afin d'examiner l'influence de l'artérialisation de la veine sur la morphologie et la fonction de la greffe.

Hétérotopique auxiliaire Rat Liver Transplantation avec un débit régulé veine porte artérialisation dans l&#39;insuffisance hépatique aiguë

La reconstruction de la veine sus-hépatique (SHVC) reste une étape difficile dans une transplantation hépatique orthotopique rat. Dans cet article, nous montrons un protocole étape par étape pour la reconstruction de SHVC chez le rat en utilisant une technique nouvelle anastomose magnétique.

Un modèle de Rat de la Orthotopic Transplantation hépatique en utilisant une Technique nouvelle anastomose magnétique pour la Reconstruction de veine sus-hépatique

Ce protocole vise à décrire l’isolement et ex vivo livraison de gène porcin hépatocytes pour guérir des modèles de maladies métaboliques par autogreffe de cellules. Bien que ce modèle particulier bénéficie d’avantages uniques qui favorisent une thérapie réussie, l’application est une base pertinente pour traiter les indications et autres maladies.

Des gènes induite par le vecteur de la thérapie génique des hépatocytes Ex Vivo pour Transplantation autologue chez le porc

Dans ce protocole, un modèle de transplantation hépatique orthotopique porcine après entreposage statique à froid d’organes de donneurs pendant 20 h sans pontage veino-veineux pendant la greffe est décrit. L’approche utilise une technique chirurgicale simplifiée avec minimisation de la phase hépatique et une gestion sophistiquée du volume et du vasopresseur.

Transplantation hépatique porcine sans pontage veino-veineux comme modèle de donneur à critères étendus

Le modèle porcin de perfusion hépatique normothermique (NMP), décrit ici, peut être utilisé avec succès pour étudier la NMP en tant que stratégie de préservation, outil d’évaluation de la viabilité et plate-forme pour la réparation d’organes. Il a une grande valeur translationnelle, mais il est techniquement difficile et demande beaucoup de main-d’œuvre.

Perfusion hépatique isolée normomère porcine

Dans ce protocole, nous discutons de la mise en œuvre d’un modèle de transplantation hépatique orthotopique réussie (OLT) chez la souris. De plus, les adjuvants permettant d’analyser plus en détail la perméabilité de l’allogreffe après une OLT réussie chez une souris sont également discutés, en particulier à l’aide de la microtomodensitométrie (microCT).

Transplantation hépatique orthotopique réussie chez la souris à l’aide de l’angiographie par microtomodensitométrie

Ce protocole décrit la méthodologie d’établissement d’un modèle porcin utilisant une perfusion automatique (MP) à température variable pour la préservation du foie du donneur, suivie d’une transplantation hépatique orthotopique (OLTx). Il vise à promouvoir le taux de réussite d’OLTx en utilisant le don de donneurs après mort circulatoire (DCD) hépatique et à établir un modèle stable.

Conservation du don de porcs après mort circulatoire (DDC) par perfusion et transplantation hépatique orthotopique

Ce protocole fournit des informations techniques pour la reconstruction vasculaire à l’aide de la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris.

Reconstruction vasculaire avec la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris

Apprenez la transplantation hépatique orthotopique chez le porc avec un shunt porto-cavo-jugulaire actif. Cette technique assure une hémodynamique stable et évite la congestion intestinale pendant la greffe.

Technique de porc approvisionnement du foie et la transplantation orthotopique utilisant un Active Porto-Caval Shunt

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