Name: Quantification de Orofacial phénotypes dans Xenopus (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 26 s
Description: Apprenez à quantifier les phénotypes orofaciaux chez Xenopus laevis en combinant mesures dimensionnelles et morphométrie géométrique. Cette méthode permet d'analyser finement le développement facial et les défauts congénitaux.

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Fonds de démarrage à A. Dickinson engagement soutenu ce travail. Les auteurs tiennent à remercier Dan Nacu pour son talent artistique dans la création de la représentation schématique.

<ol><li>Mossey, P. A., Little, J., Munger, R. G., Dixon, M. J., Shaw, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleft+lip+and+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cleft lip and palate.</a> Lancet. 374, 1773-1785 (2009).</li>
<li>Kennedy, A. E., Dickinson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Median+facial+clefts+in+Xenopus+laevis%3A+roles+of+retinoic+acid+signaling+and+homeobox+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Median facial clefts in Xenopus laevis: roles of retinoic acid signaling and homeobox genes.</a> Dev Biol. 365, 229-240 (2012).</li>
<li>Kennedy, A. E., Dickinson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Analysis+of+Orofacial+Development+and+Median+Clefts+in+Xenopus+Laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Quantitative Analysis of Orofacial Development and Median Clefts in Xenopus Laevis.</a> Anat Rec (Hoboken). , (2014).</li>
<li>Dickinson, A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positioning+the+extreme+anterior+in+Xenopus%3A+cement+gland%2C+primary+mouth+and+anterior+pituitary%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Positioning the extreme anterior in Xenopus: cement gland, primary mouth and anterior pituitary.</a> Semin Cell Dev Biol. 18, 525-533 (2007).</li>
<li>Dickinson, A. J., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+primary+mouth+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of the primary mouth in Xenopus laevis.</a> Dev Biol. 295, 700-713 (2006).</li>
<li>Dickinson, A. J., Sive, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Wnt+antagonists+Frzb-1+and+Crescent+locally+regulate+basement+membrane+dissolution+in+the+developing+primary+mouth%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The Wnt antagonists Frzb-1 and Crescent locally regulate basement membrane dissolution in the developing primary mouth.</a> Development. 136, 1071-1081 (2009).</li>
<li>Barnett, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syndrome+Transcription+Factor+is+critical+for+neural+crest+cell+function+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Syndrome Transcription Factor is critical for neural crest cell function in Xenopus laevis.</a> Mech Dev. 129, 324-338 (2012).</li>
<li>Gonzales, B., Yang, H., Henning, D., Valdez, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+functional+characterization+of+the+Xenopus+orthologue+of+the+Treacher+Collins+syndrome+%28TCOF1%29+gene+product%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Cloning and functional characterization of the Xenopus orthologue of the Treacher Collins syndrome (TCOF1) gene product.</a> Gene. 359, 73-80 (2005).</li>
<li>Reisoli, E., De Lucchini, S., Nardi, I., Ori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+2B+receptor+signaling+is+required+for+craniofacial+morphogenesis+and+jaw+joint+formation+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Serotonin 2B receptor signaling is required for craniofacial morphogenesis and jaw joint formation in Xenopus.</a> Development. 137, 2927-2937 (2010).</li>
<li>Schuff, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FoxN3+is+required+for+craniofacial+and+eye+development+of+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">FoxN3 is required for craniofacial and eye development of Xenopus laevis.</a> Dev Dyn. 236, 226-239 (2007).</li>
<li>Slater, B. J., Liu, K. J., Kwan, M. D., Quarto, N., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cranial+osteogenesis+and+suture+morphology+in+Xenopus+laevis%3A+a+unique+model+system+for+studying+craniofacial+development%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cranial osteogenesis and suture morphology in Xenopus laevis: a unique model system for studying craniofacial development.</a> PLoS One. 4, (2009).</li>
<li>Vandenberg, L. N., Adams, D. S., Levin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normalized+shape+and+location+of+perturbed+craniofacial+structures+in+the+Xenopus+tadpole+reveal+an+innate+ability+to+achieve+correct+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Normalized shape and location of perturbed craniofacial structures in the Xenopus tadpole reveal an innate ability to achieve correct morphology.</a> Dev Dyn. 241, 863-878 (2012).</li>
<li>Bugaighis, I., Mattick, C. R., Tiddeman, B., Hobson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+Facial+Morphometry+in+Children+with+Oral+Clefts%5BTitle%5D)+AND+%22Cleft+Palate+Craniofac+J%22%5BJournal%5D)">3D Facial Morphometry in Children with Oral Clefts.</a> Cleft Palate Craniofac J. , (2013).</li>
<li>Farkas, L. G., Katic, M. J., Forrest, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+anatomy+of+the+face+in+Down%27s+syndrome%3A+anthropometric+proportion+indices+in+the+craniofacial+regions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Craniofac+Surg%22%5BJournal%5D)">Surface anatomy of the face in Down's syndrome: anthropometric proportion indices in the craniofacial regions.</a> J Craniofac Surg. 12, 519-524 (2001).</li>
<li>Scheuer, H. A., Holtje, W. J., Hasund, A., Pfeifer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognosis+of+facial+growth+in+patients+with+unilateral+complete+clefts+of+the+lip%2C+alveolus+and+palate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Craniomaxillofac+Surg%22%5BJournal%5D)">Prognosis of facial growth in patients with unilateral complete clefts of the lip, alveolus and palate.</a> J Craniomaxillofac Surg. 29, 198-204 (2001).</li>
<li>Parsons, K. J., Andreeva, V., James Cooper, W., Yelick, P. C., Craig Albertson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenesis+of+the+zebrafish+jaw%3A+development+beyond+the+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Morphogenesis of the zebrafish jaw: development beyond the embryo.</a> Methods Cell Biol. 101, 225-248 (2011).</li>
<li>Farkas, L. G., Katic, M. J., Forrest, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+anatomy+of+the+face+in+Down%27s+syndrome%3A+age-related+changes+of+anthropometric+proportion+indices+in+the+craniofacial+regions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Craniofac+Surg%22%5BJournal%5D)">Surface anatomy of the face in Down's syndrome: age-related changes of anthropometric proportion indices in the craniofacial regions.</a> J Craniofac Surg. 13, 368-374 (2002).</li>
<li>Cooper, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bentho-pelagic+divergence+of+cichlid+feeding+architecture+was+prodigious+and+consistent+during+multiple+adaptive+radiations+within+African+rift-lakes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Bentho-pelagic divergence of cichlid feeding architecture was prodigious and consistent during multiple adaptive radiations within African rift-lakes.</a> PLoS One. 5, (2010).</li>
<li>Klingenberg, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+alcohol+exposure+alters+the+patterns+of+facial+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Prenatal alcohol exposure alters the patterns of facial asymmetry.</a> Alcohol. 44, 649-657 (2010).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+cleft+palate+in+mice+with+a+targeted+mutation+of+the+LIM+homeobox+gene+lhx8%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Isolated cleft palate in mice with a targeted mutation of the LIM homeobox gene lhx8.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96, 15002-15006 (1999).</li>
<li>Allam, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spectrum+of+median+craniofacial+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">The spectrum of median craniofacial dysplasia.</a> Plast Reconstr Surg. , 812-821 (2011).</li>
<li>Sive, H. L., Grainger, R., Harlard, R. Early development of Xenopus laevis: a laboratory manual. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2000).</li>
<li>Cross, M. K., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obtaining+eggs+from+Xenopus+laevis+females%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Obtaining eggs from Xenopus laevis females.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
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<li>Nieuwkoop, P. D. aF. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNieuwkoop%2C+PDaFJ+%22Normal+Table+of+Xenopus+laevis+%28Daudin%29%3A+A+Systematical+and+Chronological+Survey+of+the+Development+from+the+Fertilized+Egg+till+the+End+of+Metamorphosis%22">Normal Table of Xenopus laevis (Daudin): A Systematical and Chronological Survey of the Development from the Fertilized Egg till the End of Metamorphosis</a>. , Garland Publishing Inc. (1994).</li>
<li>Abdi, H., Williams, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principal+Component+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22WIREs+Computational+Statistics%22%5BJournal%5D)">Principal Component Analysis.</a> WIREs Computational Statistics. 2, (2010).</li>
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</ol>

Les auteurs ont rien à divulguer.

Xenopus laevis est devenu un outil utile pour disséquer les mécanismes de développement de développement oro-facial sous-jacent; Cependant, il n&#39;y a actuellement aucun protocole décrivant taille et la forme des changements de cette région chez les grenouilles. La méthode décrite ici contribuera de manière significative dans le domaine du développement oro-faciale en permettant une quantification plus rigoureuse des phénotypes oro-faciales chez le xénope et autres vertébrés. <p class="jove_conte...

Parmi les types les plus répandus et les plus dévastatrices de malformations congénitales humaines sont celles qui touchent la bouche et du visage, comme les fentes faciales 1. Les enfants atteints de malformations oro-faciales structures subissent des chirurgies multiples tout au long de leur durée de vie et luttent avec défigurations faciales, de la parole, de l&#39;ouïe et des problèmes d&#39;alimentation. Par conséquent, faciliter de nouvelles recherches dans le développement cranio et oro-facial est primordiale pour la prévention et le traitement de ces types d&#39;anomalies congénitales chez les humains. Xenopus laevis a émergé comme un nouvel outil pour disséquer les mécanismes qui régissent le développement cranio-facial (quelques exemples 2,3,4 -11). Par conséquent, une méthode quantitative pour analyser taille et la forme des changements au cours du développement de la tête et le visage de cette espèce pourrait être très puissant 3. Ici, nous présentons une telle méthode; combinant les mesures de taille traditionnels avec la morphométrie géométrique adaptées d&#39;une étude Xenopus 12 </sup&gt; et un grand nombre d&#39;études analysant la forme du visage humain 13-15. Le but de ce protocole est de permettre aux chercheurs de quantifier la taille du visage et des formes de distinction entre les différents phénotypes oro-faciales au cours du développement normal et anormal. Cette analyse permettra de mieux différencier les défauts cranio-faciales subtiles telles que celles découlant des effets synergiques de gènes et / ou des facteurs environnementaux. En outre, cette méthode de quantification pourrait également révéler même légère amélioration ou de sauvetage d&#39;un défaut oro-facial. Ceci permet donc un guide utile dans l&#39;analyse des agents thérapeutiques potentiels. La combinaison de mesures faciales et morphométrie géométrique que nous présentons ici permet une analyse statistique plus complet de la taille et la forme de la région oro-faciale que les protocoles actuels qui utilisent en grande partie l&#39;un ou l&#39;autre 15-18. En outre, nous présentons une méthode simple pour évaluer à la fois la médiane et plans latéraux dele visage sans nécessiter d&#39;équipement d&#39;imagerie en trois dimensions sophistiqués utilisés dans les études actuelles 13,19. Nous démontrons ce protocole sur Xenopus laevis embryons traités avec un inhibiteur du récepteur de l&#39;acide rétinoïque qui induit le développement bucco-faciale anormale et une fente palatine 2,3 médian. La quantification des dimensions et de la forme de la région orofaciale dans ces embryons ont révélé des changements dans le milieu du visage qui est analogue à l&#39;homme avec des fentes palatines similaires et des modèles de souris 20,21. Cependant, ce protocole peut être utilisé pour évaluer les effets d&#39;autres composés sur le développement orofaciale, tels que des substances naturelles, des herbicides ou des protéines telles que des facteurs de croissance. En outre, la taille et de la forme change oro-faciales résultant de la perturbation de l&#39;expression des gènes par la perte ou le gain d&#39;expériences de fonction (en utilisant morpholinos antisens ou bacs à légumes / Talens) peuvent également être quantifiés en utilisant ce protocole. Enfin, nous avons développé cette méthode specifically à évaluer Xenopus morphologie; cependant, il est facilement modifiée pour l&#39;analyse de tout vertébré. D&#39;autres applications pourraient aussi inclure l&#39;utilisation de ce protocole pour comparer espèces étroitement apparentées pour les études évolutives ou écologiques. Bien que l&#39;exemple que nous fournissons ici utilise ce protocole pour décrire l&#39;analyse de la région oro-faciale, il pourrait facilement être modifié pour l&#39;analyse d&#39;autres régions, des organes ou structures. Ce protocole de quantification orofaciale deviendra une ressource précieuse pour la communauté de la recherche, ainsi que d&#39;un excellent outil d&#39;enseignement pour les étudiants de premier cycle comme une vidéo de démonstration.

<table><tbody><tr><td>Microscope de dissection</td><td>Zeiss équipé d’une</td><td></td><td>caméra AxioCamICC1</td></tr><tr><td>Dumont #5 Pince en inox</td><td>Outils de science fine</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel stérile et jetable</td><td>Sklar</td><td>06-2015</td><td></td></tr><tr><td>Plaque 24 puits</td><td>Fisher Scientific</td><td>087721</td><td></td></tr><tr><td>Standard Pipettes de transfert jetables</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-7M</td><td></td></tr><tr><td>Boîtes de Pétri de 150 mm x 15 mm</td><td>Falcon</td><td>351058</td><td></td></tr><tr><td>Incubateurs</td><td>Ectotherm</td><td></td><td>réglés à 15 &deg ; C ou 20 &deg ; C</td></tr><tr><td>Pâte à modeler</td><td>Premo, ou autre pâte</td><td></td> à modeler non toxique <td>en noir ou blanc</td></tr><tr><td>Aiguille à taquiner droite</td><td>Thermo Scientific</td><td>19010</td><td></td></tr><tr><td>Tube capillaire (pour aiguilles)</td><td>FHC</td><td>30-30-1</td><td>Borosil 1,0 mm OD x 0,5 mm ID/Fibre, 100 mm chacun</td></tr><tr><td>Extracteur d’aiguille, Modèle P-97</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>Extracteur d’aiguille : P-97 Tireur de micropipette Flaming/ Bown Filament : FB300B</td><td>Pour les filaments, utilisez des filaments carrés Sutter de 3,00 mm de large.</td></tr><tr><td>Pipettes</td><td>Gilson</td><td>F144802, F123600, F123602</td><td></td></tr><tr><td>BMS-453</td><td>Tocris</td><td>3409</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Bioanalytique américain</td><td>AB00435-01000</td><td></td></tr><tr><td>Cystéine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>52-90-4</td><td></td></tr><tr><td>Poudre de paraformaldéhyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>boîtes de Pétri</td><td>Falcom</td><td>353003, 351058</td><td>100 mm de diamètre et 150 mm de diamètre</td></tr><tr><td>100 % éthanol</td><td>VWR</td><td>89125-170</td><td></td></tr></tbody></table>

quantification de orofacial phénotypes dans xenopus

Quantification of Orofacial Phenotypes in Xenopus

Xenopus est devenu un outil important pour disséquer les mécanismes qui régissent le développement cranio-faciale et des anomalies. Une méthode pour quantifier le développement bucco-faciale permettra une analyse plus rigoureuse des phénotypes orofaciaux sur l&#39;abrogation des substances qui peuvent génétiquement ou moléculaire manipuler l&#39;expression des gènes ou la fonction des protéines. L&#39;utilisation de deux images tridimensionnelles des chefs embryonnaires, dimensions telles de taille traditionnels que la largeur bucco-faciale, la hauteur et Area-sont mesurés. En outre, une mesure de la rondeur de l&#39;ouverture de bouche embryonnaire est utilisé pour décrire la forme de la bouche. Morphométrie géométrique de ces images en deux dimensions est également effectuée pour fournir une vue plus sophistiqué de l&#39;évolution de la forme de la région oro-facial. Sites d&#39;intérêt sont affectés à des points spécifiques de la région oro-faciale et coordonnées sont créés. Une analyse en composantes principales est utilisé pour réduire les coordonnées de point de repère aux principaux composants qui constituent une discrimination alors le traitementgroupes. Ces résultats sont affichés sous forme de nuage de points dans lequel les individus avec des formes oro-faciales similaires se regroupent. Il est également utile pour effectuer une analyse discriminante, qui compare statistiquement les positions des points de repère entre les deux groupes de traitement. Cette analyse est affichée sur une grille de transformation où les changements de position de point de repère sont considérés comme des vecteurs. Une grille se superpose à ces vecteurs de sorte qu&#39;un motif de déformation est affichée pour montrer où les positions historiques importantes ont changé. les changements de forme dans l&#39;analyse de la fonction discriminante sont basées sur une mesure statistique, et peuvent donc être évalués par un p-valeur. Cette analyse est simple et accessible, nécessitant seulement un stéréoscope et logiciel freeware, et donc sera une recherche et d&#39;enseignement ressource précieuse.

Ici, une analyse quantitative de la taille et de la forme orofaciale a été démontrée pour comparer les embryons traités avec un inhibiteur du récepteur de l'acide rétinoïque (un inhibiteur de RAR) à des témoins non traités. Les embryons ont été traitées avec une concentration de 1 uM de cet inhibiteur chimique de l'étape 24 à 30 (26 à 35 hpf), lavées, fixées et, à l'étape 42 (82 hpf). Ils ont ensuite été traités et analysés comme décrit dans le protocole. Les résultats sont données originales, mais cohérent avec les obs...

Procédé pour quantifier la taille et la forme de orofaciale embryons de Xenopus laevis a été développé. Dans ce protocole, les mesures traditionnelles de taille sont combinés avec la morphométrie géométrique pour permettre des analyses plus poussées de développement oro-faciale et des anomalies.

Quantification de Orofacial phénotypes dans Xenopus

Xenopus has become an important tool for dissecting the mechanisms governing craniofacial development and defects. A method to quantify orofacial ...

L’objectif général de la procédure suivante est de décrire les phénotypes faciaux oraux des embryons de xap Levis de manière statistique quantitative. Ceci est réalisé en montant d’abord des têtes d’embryons xip détachées dans un moule en argile pour la documentation photographique à l’aide des images. Les dimensions faciales sont mesurées pour fournir des informations sur la taille de la région buccale du visage.Ensuite, des repères sont appliqués via la morphométrie géométrique pour évaluer la forme de la région faciale buccale. Les résultats montrent des changements significatifs de taille et de forme dans la région faciale buccale de l’Opus sur la base d’analyses statistiques des dimensions faciales et de la position relative du point de repère. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu de l’opus ou du développement facial, elle peut également être appliquée à d’autres études morphologiques de vertébrés, telles que des comparaisons d’espèces étroitement apparentées à des fins évolutives ou écologiques.Cette section explique comment fabriquer des plats en argile pour contenir des têtes d’embryons pour leur documentation photo. Tout d’abord, aplatissez de la pâte à modeler dans un plat de n’importe quelle taille et lissez-la pour couvrir toute l’assiette. Ensuite, enfoncez légèrement une aiguille à taquiner droite dans l’argile à un angle de 45 degrés.Tenez fermement l’aiguille et déplacez lentement le plat pour créer une ligne enfoncée. Ensuite, utilisez une pipette en verre pour faire des dépressions circulaires peu profondes le long de chaque ligne. Dans chaque dépression, une tête d’embryon peut être placée avant le chargement.Les têtes ont rempli le plat de PBT. Les détails sur la culture de zap piss sont décrits dans le protocole textuel ainsi que des détails sur la fixation des embryons. Pour ce protocole, fixez les embryons entre les stades 42 et 45.Tout d’abord, placez les embryons fixés dans une boîte de Pétri de 150 millimètres contenant environ 100 millilitres de PBT. Maintenant, coupez-leur la tête. Tout d’abord, tenez un embryon à l’aide d’une paire de pinces et utilisez un scalpel pour faire une incision sur la face postérieure de l’intestin.Deuxièmement, faites une incision sur la face antérieure de l’intestin près du cœur pour retirer complètement la tête. À l’aide d’une pipette, transférez les têtes dans le plat en argile. Il est essentiel que les têtes d’embryons soient placées dans l’argile exactement dans la même orientation pour la photographie.Pour assurer le succès, utilisez les rangées dessinées dans l’argile comme guides. Il est également avantageux que la même personne capture toutes les images dans la même journée. Pour une vue de face, les photographies positionnent les têtes postérieures vers le bas dans les dépressions.Utilisez des pinces pour manipuler les têtes et l’argile environnante de sorte que les têtes soient fixées face à la caméra et ne soient pas inclinées pour une vue latérale. Les photographies positionnent les têtes de manière à ce que leurs côtés soient tous orientés dans la même direction. Manipulez les têtes et l’argile environnante, de sorte que les glandes de ciment pointent toutes vers le bas dans le même angle.Maintenant, à l’aide de n’importe quel microscope de dissection doté de capacités de capture d’images, collectez des images des têtes de têtards. Utilisez plusieurs lumières pour éviter les ombres excessives et utilisez le grossissement le plus élevé possible. Photographiez chaque tête de la même manière.Enregistrez ensuite les images non compressées et à la résolution la plus élevée possible. À partir des images, mesurez les dimensions du visage buccal. Tout d’abord, déterminez la largeur de la face.Identifiez les points où la partie ventrale de chaque œil rencontre les périphéries du visage et mesurez la distance entre ces points. Vous trouverez des détails sur la mesure de la hauteur du visage et de la zone buccale du visage dans le protocole textuel. Portez une attention particulière à la détermination de la longueur du museau Sur les images latérales, tracez une ligne verticale qui marque l’antérieur de l’œil.Mesurez ensuite la distance horizontale entre le point le plus antérieur où le visage rencontre le bord dorsal de la glande de ciment et la ligne verticale marquant l’avant de l’œil. D’autres dimensions telles que la largeur et la rondeur de la bouche sont expliquées dans le protocole textuel pour cette analyse, les coordonnées faciales des points de repère doivent être normalisées et enregistrées dans un fichier. Les points de repère doivent capturer la forme de l’image et être utilisables dans toutes les images.N’utilisez donc pas de structures qui peuvent ne pas exister dans tous les échantillons. Ouvrez maintenant le premier fichier image. Pour évaluer, sélectionnez l’onglet plugins dans la barre d’outils principale et choisissez le sélecteur de points.Dans le menu déroulant, sélectionnez l’onglet Ajouter des points et positionnez les points de repère sur l’image. Ils apparaissent comme multicolores. Les croix passent d’un point de repère à l’autre à l’aide de l’outil Déplacer les croix.Une fois que tous sont placés, sélectionnez l’onglet Afficher les résultats dans la barre d’outils principale et choisissez l’option d’affichage. Cela affiche les coordonnées du point de repère. Ensuite, copiez les coordonnées dans un tableur dans une rangée vide au-dessus du type de données collé LM est égal à suivi du nombre de points de repère dans l’échantillon dans la ligne ci-dessous.L’ID du type de données collé est suivi du nom identifiant l’échantillon. Chaque échantillon doit avoir un identificateur unique. Répétez ce processus jusqu’à ce que tous les exemples d’images aient été mappés et saisis dans la feuille de calcul.Ensuite, copiez les colonnes avec un exemple d’identification et les coordonnées de chaque point de repère et enregistrez-les dans un document texte. Ouvrez ensuite le logiciel morphométrique. Dans ce logiciel, sélectionnez créer un nouvel ensemble de données dans le menu principal.Nommez le fichier et l’ensemble de données dans l’écran contextuel et importez le fichier en tant que TPS. Sélectionnez maintenant un fichier texte de coordonnées pour créer l’ensemble de données. Ensuite, effectuez un ajustement et un alignement de Procustes.Tout d’abord, mettez en surbrillance l’ensemble de données dans l’onglet de l’arborescence du projet. Choisissez ensuite les préliminaires dans la barre d’outils principale et les nouveaux procuste s’adaptent dans le menu déroulant. Parmi les sélections disponibles, choisissez aligné par axe principal.Sélectionnez ensuite l’option permettant d’effectuer l’ajustement de crusty dans le menu déroulant des préliminaires, sélectionnez générer la matrice Covance et sélectionnez Exécuter. Maintenant, à partir de l’onglet des résultats, affichez les corrélations de la matrice de Covance. Pour distinguer les échantillons expérimentaux et les échantillons du groupe témoin, créez un fichier de classificateur en attribuant chaque échantillon de l’ensemble de données à la variable de classificateur appropriée.Dans une feuille de calcul, créez une colonne intitulée ID et créez une colonne intitulée Traitement. Ensuite, répertoriez chaque échantillon dans la colonne ID et attribuez-le à un groupe. Dans la colonne de traitement, enregistrez-le sous forme de fichier texte et dans le logiciel morphométrique, importez-le via l’option choisir la correspondance par identifiant.Maintenant, sous l’onglet Comparaison, créez une transformation d’analyse de fonction discriminante dans le menu contextuel. Dans le cadre de cette fonction, assurez-vous que l’ensemble de données approprié est sélectionné et que le type de données est les coordonnées d’ajustement de Procuste. Mettez en surbrillance les paires de groupes à comparer, puis exécutez un test de permutation de 1000.Pour afficher la carte vectorielle des coordonnées, allez dans le menu graphique et sélectionnez l’onglet différence de forme. Si l’image est inversée, faites apparaître le menu contextuel dans l’espace de tracé pour retourner le diagramme dans la bonne orientation. De plus, dans le menu contextuel, remplacez le graphique par une grille de transformation pour superposer les vecteurs sur les détails d’une grille lors de la création d’une analyse en composantes principales.Analyse en composantes du principe du nuage de points. Les grilles de transformation CVA, Scatterplot et CVA sont toutes fournies dans le protocole texte. Les embryons ont été traités avec un récepteur micromolaire de l’acide rétinoïque ou un inhibiteur de RAR du stade de développement 24 au stade 30, puis fixés au stade 42 et photographiés des embryons témoins traités au DMSO développés.Normalement, le traitement par inhibiteur de RAR a entraîné un rétrécissement du visage, des anomalies oculaires et une bouche de forme triangulaire malformée. Après avoir effectué une analyse morphométrique géométrique, la variance a été évaluée par l’analyse en composantes principales. Les embryons traités ont été clairement distingués des témoins.Le long de l’axe PC un, les flèches identifient les valeurs aberrantes statistiques au sein d’un groupe. Les différences morphologiques ont ensuite été évaluées par une analyse de fonction discriminante. Des changements spectaculaires dans la position des points de repère latéraux indiquent un rétrécissement de la forme du visage.Un léger décalage vers l’extérieur de la position des narines est noté par les flèches. Il y a aussi une déformation notable dans la région médiane du visage. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’utiliser une combinaison de mesures de taille traditionnelles et de morphométrie géométrique pour évaluer la taille et la forme du visage embryonnaire de Theus.

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