Détection de l'antigène leucocytaire humain biomarqueurs du cancer du sein Utilisant la technologie des biocapteurs Sans étiquette

L’objectif global de cette procédure est de mesurer les antigènes tumoraux associés à l’antigène leucocytaire humain ou HLA dans les fluides des patients afin de les stabiliser à l’immunothérapie pertinente. Ceci est accompli en immobilisant d’abord des anticorps imitant le récepteur des lymphocytes T, connus sous le nom de TCRM sur la surface de la MICROPLAQUE. La deuxième étape consiste à ajouter l’échantillon du patient avec une dilution en série des monomères HLA du peptide cible pour générer une courbe standard, qui permet de quantifier l’antigène cible dans les échantillons de patients.

Ensuite, la liaison de l’antigène cible à l’anticorps sur le système d’essai biologique à marquage libre est surveillée jusqu’à ce que l’équilibre soit atteint. La dernière étape consiste à analyser les données résultantes en utilisant la courbe standard pour quantifier la quantité d’antigène cible dans les échantillons de patients. En fin de compte, la technologie des biocapteurs sans marquage est utilisée pour détecter les biomarqueurs du cancer dans les échantillons de patients.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux techniques existantes telles que le MSS lc, est la détection rapide à haut débit des antigènes associés à HLA. Cela permet de stratifier rapidement les patients atteints de cancer aux modalités de traitement, car il sert de plate-forme de détection de biomarqueurs. Bien que cette méthode soit liée au criblage de biomarqueurs du cancer, le système est en fait applicable à de nombreuses applications, notamment les tests cellulaires, le criblage hybride d’immunophénotypage ou le criblage de banques de petites molécules.

Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous développions un anticorps thérapeutique imitant le récepteur des lymphocytes T. Nous nous sommes demandé comment nous allions identifier les patients qui bénéficieraient le plus de ce type de thérapie. Kristen Dahl, une étudiante diplômée en biotechnologie travaillant dans mon laboratoire, fera la démonstration de cette procédure.

Commencez par pré-incuber la solution saline tamponnée au phosphate ou PBS à 28 degrés Celsius pour minimiser les décalages de résonance liés à la température. Ajoutez 50 microlitres de solution saline tamponnée au phosphate ou de PBS pH 7,2 dans les puits de plaques revêtues de dérivés de l’avadon. Ensuite, ouvrez le logiciel du scanner d’essais biologiques.

Suivez l’assistant de configuration pour définir la procédure expérimentale, qui comprend la sélection des blancs, des étalons et des échantillons dans la disposition de la plaque, le réglage de la température, le nombre de balayages par minute et la durée de l’expérience. Insérez ensuite la plaque de test préparée dans le scanner de bioessais sans marquage et démarrez le premier balayage. La ligne de base est l’ensemble initial de scans collectés au début de l’expérience.

S’il s’agit de la première lecture effectuée sur cette plaque spécifique, laissez le scanner fonctionner suffisamment longtemps pour équilibrer la température et éliminer la dérive de la ligne de base. Une fois que la ligne de base s’est stabilisée ou après au moins cinq balayages, interrompez la lecture et éjectez la plaque. Videz le PBS et ajoutez 50 microlitres de RL 21, un anticorps biotinylé, à tous les puits sauf ceux de contrôle sur la plaque.

Ajoutez ensuite 50 microlitres de PBS dans les puits de contrôle. Ensuite, réinsérez la plaque dans le scanner d’essai biologique et reprenez la lecture jusqu’à ce que la saturation soit atteinte. Après environ 1,5 heure, interrompez la lecture et éjectez la plaque.

Ensuite, lavez la plaque trois fois avec 200 microlitres par puits de PBS plus 0,05 % de Tween 20 ou PBST. Suivez le lavage avec trois rinçages de 200 microlitres par puits de PBS pH 7,2 sans détergent. Tapotez l’excès de PBS de l’assiette sur du papier absorbant avant de passer à l’étape suivante.

Ensuite, ajoutez 50 microlitres de PBS à tous les puits actifs. Ensuite, réinsérez la plaque dans le scanner d’essai biologique et reprenez la lecture pour surveiller la résonance après lavage. Après la lecture, arrêtez la lecture et éjectez la plaque.

Pour ajouter l’analyte. Retirez le PBS et ajoutez 50 microlitres par puits d’un tampon de dosage approprié pour ce test. Le sérum humain normal disponible dans le commerce a été dilué de un à 20 dans du PBS.

Ensuite, ouvrez le logiciel du scanner d’essais biologiques et suivez l’assistant de configuration. Pour définir la procédure expérimentale, insérez la plaque dans le scanner d’essai biologique et commencez une lecture de ligne de base Une fois que la ligne de base s’est stabilisée ou après au moins cinq balayages, interrompez la lecture et éjectez la plaque. Retirez ensuite le tampon de dosage des puits.

Ensuite, ajoutez aux témoins des peptides monomères pertinents ou non pertinents HLAA oh 2 0 1 à des concentrations allant de 0,625 à 10 microgrammes par millilitre dans le tampon de dosage. Ajoutez ensuite 50 microlitres des étalons dans les puits de contrôle de la plaque. Ensuite, ajoutez 50 microlitres de l’analyte dans le tampon de test dans les puits d’échantillon de la plaque.

Pour ce test, du sérum humain enrichi disponible dans le commerce a été utilisé. Réinsérez la plaque dans le scanner d’essai biologique et reprenez la lecture jusqu’à ce que la saturation soit atteinte environ 30 à 60 minutes après la saturation, interrompez la lecture et éjectez la plaque. Procédez au lavage de la plaque trois fois avec 200 microlitres par puits de PBST, suivi de trois rinçages avec 200 microlitres par puits de PBS comme auparavant, puis ajoutez 50 microlitres de tampon de dosage à tous les puits actifs.

Maintenant, réinsérez la plaque dans le scanner d’essai biologique et reprenez la lecture pour surveiller la résonance post-lavage avant d’arrêter la lecture et d’éjecter la plaque. Enfin, analysez les données à l’aide du logiciel de scanner d’essais biologiques ou exportez les fichiers de données brutes vers le logiciel d’analyse statistique de votre choix. Le logiciel du scanner d’essais biologiques génère automatiquement la courbe de liaison en fonction de la disposition de la plaque fournie lors de la configuration expérimentale.

RL 21 A-T-C-R-M biotinylé ou IgG deux A a été immobilisé sur la plaque de test AVID AVIDAN Les résultats représentatifs montrent la détection de l’antigène tumoral cible F-L-S-L-H-L-A dans un échantillon de plasma de patient à l’équilibre et après le lavage. L’IgG deux A est utilisée comme témoin pour les sections de tissu de liaison non spécifiques qui ont été colorées avec un témoin positif et des témoins négatifs. Et pour RL 21, une coloration du tissu tumoral par RL 21 A confirme la présentation des complexes F-L-S-L-H-L-A.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de mesurer les biomarqueurs associés au HLA dans les fluides des patients à l’aide d’anticorps imitant les récepteurs des lymphocytes T et de surveiller la liaison de l’antigène cible à l’anticorps sur le système de bioessai sans marquage. Lors de cette procédure, il est important de ne pas oublier d’incuber tous les tampons d’échantillon avant de les utiliser afin d’éviter les pics de température et d’utiliser le tampon d’échantillon approprié pour chaque étape.