Name: Localisation, identification, et lexcision des dépôts adipeux murin (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Apprenez à localiser et exciser les dépôts adipeux chez la souris adulte avec une dissection minimale et sans contamination. Cette méthode permet des analyses histologiques et moléculaires fiables du tissu adipeux.

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NOTE: Toutes les procédures d&#39;animaux ont été effectuées avec l&#39;approbation de la Commission institutionnelle de protection des animaux et l&#39;utilisation (IACUC) de l&#39;Université de Cincinnati et en conformité avec le Guide de soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire des National Institutes of Health (NIH Publication Aucun . 85-23, révisée en 1996). 1. Euthanasier et stériliser la souris <ol><li> Placez la souris dans une sélection contenant une dose supratheraputic de l&#39;isoflurane et de permettre de respirer à l&#39;effet. Une fois que la souris est euthanasié, retirer de la boîte. </li><li> Cervicale disloquer tant que second moyen d&#39;euthanasie. </li><li> Stériliser la surface externe de la souris par le nettoyage de l&#39;animal avec 70% d&#39;éthanol. </li></ol> 2. Identification et isolement de Trois différents dépôts adipeux <ol><li> Le tissu adipeux brun (BAT) Isolement: <ol><li> Assurez-vous que la fourrure est humide de la purification de l&#39;alcool pour aider à couper à travers l&#39;épiderme et du derme layers. </li><li> Placez la souris dans une position couchée avec son dos contre la table. </li><li> Prenez la peau juste en dessous du diaphragme avec une pince, un ascenseur et inciser avec des ciseaux. </li><li> Couper transversalement autour de la circonférence de la souris pour exposer le péritoine. </li><li> Révéler le dépôt de BAT en forme de papillon par dégantage la moitié supérieure de la souris. Tenez les appendices et de l&#39;abdomen dans une main et en tirant la peau vers le haut vers la tête. </li><li> Orienter la souris, de sorte qu&#39;il est positionné à plat ventre sur la table. Faites attention de ne pas contaminer le dépôt exposée avec des cheveux. </li><li> Instruments chirurgicaux et les changements à une nouvelle paire de gants. </li><li> Repérez les omoplates et le dépôt correspondant. Retirez soigneusement toute adipeux blanc superficielle sommet le papillon puis disséquer le papillon de la graisse brune interscapulaire. Soyez prudent pour éviter le muscle étroitement associé à la graisse brune. NOTE: L&#39;utilisation d&#39;un microscope de dissection est recommandé pour l&#39;enlèvement de la white adipeux, ainsi que dans la séparation du tissu adipeux brun à partir de la scapula. </li><li> Retirer le gras de dépôt et de transférer à un tube de 2 ml à centrifuger. </li><li> Si l&#39;ARN ou la protéine est à extraire, geler le tissu par immersion dans l&#39;azote liquide et conserver à -80 ° C. Congeler l&#39;échantillon à la fois à prévenir la dégradation. Si la culture, couvrir le tissu dans DMEF-12 et mis sur la glace jusqu&#39;à ce que tous les échantillons sont prélevés pour la culture (info supplémentaire). </li></ol></li><li> Isolement de tissu adipeux sous-cutanée (SQ), un tissu adipeux blanc Depot (WAT): <ol><li> Mettez sur une nouvelle paire de gants pour éviter la contamination croisée entre les dépôts de graisse. </li><li> Révélez la inguinale, triangulaires dépôts de la SQ par De gantage la moitié inférieure de la souris. Tenez les appendices supérieurs et du thorax dans une main et en tirant la peau vers le bas vers les pieds de l&#39;autre main. </li><li> Orientez la souris en position couchée tout en faisant attention de ne pas contaminer le dépôt exposée avec des cheveux. </li><li> Surgica Cleaninstruments de l et le changement à une nouvelle paire de gants. </li><li> Disséquer soigneusement les triangles de graisse de la SQ. Veillez à ne pas contaminer l&#39;échantillon avec le muscle, la graisse, les glandes mammaires voisin ou en coupant des vaisseaux et de contaminer l&#39;échantillon de sang. NOTE: L&#39;utilisation d&#39;un microscope de dissection est recommandé si les frontières ne sont pas clairement définis. </li><li> Retirer dépôts de graisse et transfert à 2 ml microtubes. </li><li> Si l&#39;ARN ou la protéine est à extraire, geler le tissu par immersion dans l&#39;azote liquide et conserver à -80 ° C. Congeler l&#39;échantillon à la fois à prévenir la dégradation. </li><li> Pour la coloration, fixer ou intégrer en octobre Si la culture, couvrir le tissu dans DMEF-12 et mis sur la glace jusqu&#39;à ce que tous les échantillons sont prélevés pour la culture (info supplémentaire). </li></ol></li><li> Isolement de gonadique Fat un tissu adipeux viscéral (VAT) et le tissu adipeux blanc (WAT) Depot: <ol><li> Mettez sur une nouvelle paire de gants pour éviter la contamination croisée entre les dépôts de graisse. </li><li> Avec la SCIssors, couper transversalement le péritoine, directement au-dessous du diaphragme. Couper le péritoine du diaphragme et le milieu du rectum coronaire pour exposer les organes abdominaux. </li><li> Repérez les testicules ou des ovaires et d&#39;identifier le tissu adipeux blanc ci-joint, connu sous le nom adipeux de l&#39;épididyme chez les hommes ou adipeux gonadique chez les femmes. </li><li> Instruments chirurgicaux et les changements à une nouvelle paire de gants </li><li> Disséquer soigneusement les deux dépôts de graisse épididyme des testicules, épididyme et canal déférent. Ou si féminine, décortiquer soigneusement les deux coussinets adipeux gonadiques par les ovaires. </li><li> Retirer dépôts de graisse et les transférer à deux tubes ml à centrifuger. </li><li> Si l&#39;ARN ou la protéine est à extraire, geler le tissu par immersion dans l&#39;azote liquide et conserver à -80 ° C. Congeler l&#39;échantillon à la fois à prévenir la dégradation. </li><li> Pour la coloration, fixer ou intégrer en octobre Si la culture, couvrir le tissu dans DMEF-12 et mis sur la glace jusqu&#39;à ce que tous les échantillons sont prélevés pour la culture (info supplémentaire). </li&gt; </ol></li></ol> 3. Isolement de tissu adipeux périvasculaire (TVAP) <ol><li> Isolement du Cœur: <ol><li> Placez la souris dans une position couchée avec des appendices supérieurs et inférieurs étendus vers l&#39;extérieur. </li><li> Appendices sécurisées à l&#39;aide du sparadrap. </li><li> Après avoir positionné la souris comme indiqué ci-dessus, créer des tensions en soulevant la pointe du sternum avec une pince. Couper horizontalement à travers la membrane, ce qui expose la partie inférieure de la cavité thoracique. </li><li> Tout en maintenant la tension, en soulevant la pointe du sternum, couper à travers la cage thoracique supérieurement vers la tête, juste à côté du sternum. </li><li> Ramassez la cage thoracique juste inférieure à la clavicule, et couper le long de la longueur inférieure de la clavicule sur vers l&#39;aisselle dans les deux directions. La cavité thoracique et son contenu (cœur, poumons, etc.) devraient maintenant être clairement visible. </li><li> Nettoyez la cavité thoracique de sang étrangère et fluide en utilisant ga stérileuze pour absorber le fluide. Si des organes ou des récipients collecteurs être sûr de profuse (info supplémentaire). </li><li> Une fois la zone dégagée de fluide, couper les vaisseaux des bronches et attachés à supprimer les poumons, ce qui permet une meilleure exposition du cœur. </li></ol></li><li> Localisation et Excision de tissu adipeux périvasculaire aortique (TVAP): <ol><li> Retirez les organes suivants de mieux identifier les parties inférieures de l&#39;aorte: foie, de l&#39;estomac, la rate, le pancréas, les intestins, et du côlon. </li><li> D&#39;abord commencer par l&#39;identification de l&#39;estomac et l&#39;œsophage. Couper l&#39;œsophage à la jonction gastro-œsophagienne de l&#39;estomac pour libérer du corps. </li><li> Ensuite, identifier les intestins et le mésentère environnante. Couper superficiellement par mésentère, car il se trouve très près à la partie rénale de l&#39;aorte, puis &quot;exécuter l&#39;intestin.&quot; </li><li> Couper le colon libre comme près du rectum que possible. Ainsi, la libération de l&#39;estomac, de l&#39;intestin et du colon de la souris. </li><li> Rédéplacer l&#39;estomac, de l&#39;intestin, du colon, du pancréas et de la rate en coupant à travers le mésentère de fixation et les vaisseaux. Le pancréas et de la rate devraient venir gratuit avec l&#39;estomac, de l&#39;intestin et du côlon. </li><li> Retirer le foie en coupant à travers les veines hépatiques et de fixation mésentère, retirez tous les lobes. </li><li> Coupez la couche de graisse viscérale et entourent les reins. Laissez les reins attachés à l&#39;aorte in vivo pour servir de marqueurs pour différents segments géographiques de l&#39;aorte. </li><li> Rincer la zone avec PBS 1x stérile et retirer tout le liquide par absorption avec une gaze stérile. </li><li> Utilisation de micro-ciseaux et micro-pinces, séparer l&#39;aorte de son attache dorsal à la colonne vertébrale et de son attache ventral à l&#39;oesophage. </li><li> Isoler l&#39;aorte et en suivant l&#39;aorte détacher la longueur de l&#39;aorte descendante à partir de l&#39;origine dans le coeur de la bifurcation dans la région iliaque. </li><li> Identifier et isoler les vaisseaux sous-clavière. Isoler ces naviresà partir du cou à la racine aortique pour mieux exposer la jonction de l&#39;aorte et la racine dans le cœur. </li><li> Retirez le thymus puis couper l&#39;artère brachiocéphalique, l&#39;artère carotide commune gauche et l&#39;artère sous-clavière gauche, permettant un mouvement du cœur. </li><li> Avec l&#39;aide d&#39;un microscope de dissection, voir le tissu adipeux (TVAP) couche périvasculaire entourant l&#39;aorte. </li><li> En prenant grand soin de ne pas pincer ou serrer la TVAP, tirez doucement le chemin de la TVAP de l&#39;aorte avec des micro-pince. Couper doucement la fixation de la TVAP de l&#39;aorte avec des micro-ciseaux à partir de la région thoracique juste au-dessus de l&#39;endroit où se trouve le diaphragme. REMARQUE: Un microscope de dissection est recommandé. </li><li> Répéter ce procédé, la totalité de la longueur de l&#39;aorte, de finition dans la région de l&#39;aorte sous-rénale, qui est situé juste au-dessus de la bifurcation iliaque du navire aortique. </li><li> Si arc aortique TVAP est souhaitée, utilisé la même méthode pour supprimer la TVAP de la moindre curvature de l&#39;arc. </li><li> Placez échantillons de TVAP dans 2 ml tube (s) à centrifuger. </li><li> Si l&#39;ARN ou la protéine est à extraire, geler le tissu par immersion dans l&#39;azote liquide et conserver à -80 ° C. Congeler l&#39;échantillon à la fois à prévenir la dégradation. Si la culture, couvrir le tissu dans DMEF-12 et mis sur la glace jusqu&#39;à ce que tous les échantillons sont prélevés pour la culture (info supplémentaire). REMARQUE: les dépôts adipeux supplémentaires à considérer si intéressé par une analyse complète de dépôt adipeux comprennent: rétropéritonéale, mésentérique, omental, péricardique et poplitée. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents ou d’autres conflits d’intérêts.

L&#39;obésité peut mener à une grande foule de morbidités et la pleine compréhension du rôle que joue adipeux ne est pas bien compris; recherche donc poursuivi dans le domaine de adipeux est nécessaire. Des modèles animaux, en particulier des modèles murins sont idéales pour la recherche initiale à la progression des maladies et des essais de traitements pharmaceutiques potentiels. En utilisant ces modèles, l&#39;isolement et l&#39;excision des dépôts adipeux précise est un outil extrêmement important et nécessaire dans...

Adipeux fait une apparition remarquée sous les projecteurs des médias, due à l&#39;augmentation spectaculaire de l&#39;obésité au cours des dernières décennies du 20e siècle. L&#39;obésité touche actuellement plus d&#39;un tiers des adultes et 17% des enfants et des adolescents aux États-Unis (US) 1. Couvrant tous les groupes ethniques, les recherches statistiques entourant l&#39;épidémie d&#39;obésité a montré que les Noirs non hispaniques ont le plus haut taux ajusté selon l&#39;âge de l&#39;obésité (49,5%) par rapport aux Américains d&#39;origine mexicaine (40,4%), les tous les Hispaniques (39,1%), et non hispaniques blancs (34,3%) 2. L&#39;effet économique de l&#39;obésité est aussi une préoccupation croissante pour le système de soins de santé. En 2012, il a été estimé que le coût annuel des soins médicaux de l&#39;obésité aux États-Unis en 2005 était de $ 190,2 milliards, près de 21% du budget global de dépenses médicales. Malheureusement, l&#39;obésité infantile a été estimée à responsable de 14 milliards de dollars en coûts médicaux directs seul. Statistiquement, on a déterminé que le coût médical moyen deles personnes souffrant d&#39;obésité était $ 2741 plus d&#39;un an que ceux sans cette morbidité 3-5. L&#39;obésité est un facteur de risque majeur pour une variété de conditions telles que: le diabète de type 2, la dyslipidémie, les maladies cardiovasculaires, le cancer, les troubles musculo-squelettiques et l&#39;inflammation chronique. L&#39;obésité est profondément liée à la pathogenèse du syndrome métabolique et d&#39;autres maladies chroniques 8.6. Avec de telles connexions drastiques et négatives entre l&#39;obésité et d&#39;autres comorbidités, la recherche scientifique a attiré l&#39;attention de mieux comprendre l&#39;épidémie actuelle et les divers rôles joués par les pivots et adipeux. Historiquement, le tissu adipeux a été considéré comme négligeable et a été vu comme un simple tissu de remplissage simple. Actuellement, adipeux a été montré à jouer de nombreux rôles essentiels dans le fonctionnement de l&#39;organisme dans: le métabolisme, la régulation hormonale, l&#39;inflammation, la protection et l&#39;isolation 9. Le tissu adipeux est principalement composée deadipocytes, mais contient aussi des pericytes, des cellules endotheliales, les monocytes, les macrophages et les cellules souches pluripotentes 8. Le tissu adipeux est distribué dans tout le corps dans des dépôts distincts. Les principaux dépôts peuvent être trouvés sous-cutanée, sous-cutanée, intramusculaire, et viscéralement 10. Dépôts adipeux ont été montré pour avoir des profils métaboliques spécifiques de dépôt, qui ont montré une susceptibilité particulière de dépôt à l&#39;obésité et les troubles liés huit. Traditionnellement, le tissu adipeux a été classé en deux grandes catégories: tissu blanc adipeux (WAT) et de tissus adipeux brun (BAT); Bien que la littérature récente indique les présences d&#39;un troisième groupe baptisé adipeux brite ou beige 11. Le tissu adipeux a été démontré qu&#39;ils ont des couleurs différentes, des morphologies, des fonctions métaboliques, biochimiques caractéristiques génétiques et des motifs d&#39;expression 10. Adipocytes en WAT ont un seul, de grosses gouttelettes de lipides et des quantités variables de mitochondries. WATest dominante trouvée dans les localités sous-cutanées et viscérales du corps. WAT fonctions essentiellement comme un site de stockage d&#39;énergie et la protection des organes. Adipocytes dans BAT ont une morphologie multiloculaire et de nombreuses mitochondries. BAT se trouve principalement dans le cou et les gros vaisseaux sanguins du thorax, ainsi que les omoplates 12. MTD fonctions principalement dans les comportements dépenser d&#39;énergie qui régulent la thermogenèse 7. Adipeux Brite ou beige a été montré pour partager une morphologie analogue et d&#39;expression aux MTD, mais a été trouvé à l&#39;origine de 11 adipocytes blancs. La méthode chirurgicale décrite dans ce manuscrit offre aux chercheurs la capacité d&#39;analyser des effets différents que des facteurs tels que: l&#39;environnement, les produits pharmaceutiques, et de la génétique, ont sur adipeux; ainsi que le rôle bénéfique ou néfaste adipeux joue dans la maladie et la santé globale. En outre, en fournissant un moyen pour identifier et isoler les différents types de tissu adipeux àpermettre de mieux comprendre les relations et les différences biochimiques entre les dépôts. Cela peut aider à déterminer la relation entre la localisation, la fonction et le type de graisse dans le corps. Ce procédé décrit parvient en fournissant les moyens de visualisation brut, l&#39;analyse de l&#39;expression des gènes, l&#39;analyse d&#39;expression de protéine, l&#39;examen histologique, et l&#39;isolement de lignées de cellules primaires pour les études in vitro. Actuellement, il ya beaucoup d&#39;articles qui fournissent des informations sur le comportement métabolique des différents dépôts adipeux, ainsi que leurs emplacements anatomiques; mais ne fournit pas une méthode sur la façon de localiser précisément, identifier et isoler ces dépôts en profondeur. Cette méthode fournit une technique chirurgicale précise qui permet l&#39;isolement de plusieurs dépôts avec une quantité minimale de dissection et la contamination par rapport aux autres méthodes destinées à l&#39;isolat d&#39;un ou de deux dépôts de 13 à 14. L&#39;objectif de ce protocole est de fournirun procédé précis pour l&#39;identification et l&#39;isolement de différents types de dépôts de graisse à partir de plusieurs emplacements anatomiques.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70 % Ethanol</td><td>Fisher</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>DMEF-12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D-6421</td><td>Réchauffer au bain-marie avant de mettre le mouchoir.</td></tr><tr><td>2 ml Tubes à microcentrifuger</td><td>Midsci</td><td>MCT-200-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Saline tamponnée au phosphate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr></tbody></table>

localisation, identification, et l&#39;excision des dépôts adipeux murin

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

L’obésité a considérablement augmenté au cours des dernières décennies et touche plus d’un tiers de la population adulte américaine. L’effet économique de l’obésité en 2005 a atteint une somme stupéfiante de 190,2 milliards de dollars en coûts médicaux directs seulement. L’obésité est un facteur de risque majeur pour un large éventail de maladies. Historiquement, on savait peu de choses sur le tissu adipeux et ses fonctions majeures et essentielles dans le corps. L’adipeux brun et blanc sont les deux principaux types d’adipeux, mais la littérature actuelle a identifié un nouveau type de graisse appelé brite ou adipeux beige. La recherche a montré que les dépôts adipeux ont des profils métaboliques spécifiques et que certains dépôts permettent une propension à l’obésité et à d’autres troubles connexes. L’objectif de ce protocole est de fournir aux chercheurs la capacité d’identifier et d’exciser les dépôts adipeux qui permettront d’analyser différents effets factoriels sur le tissu adipeux ; ainsi que le rôle bénéfique ou préjudiciable que joue le tissu adipeux dans la maladie et la santé globale. L’isolement et l’excision des dépôts adipeux permettent aux enquêteurs d’examiner les changements morphologiques globaux ainsi que les changements histologiques. L’isolat adipeux peut également être utilisé pour des études moléculaires afin d’évaluer les changements transcriptionnels et translationnels ou pour des expériences in vitro afin de découvrir des cibles d’intérêt et des mécanismes d’action. Cette technique est supérieure aux autres techniques publiées en raison de sa conception permettant d’isoler plusieurs dépôts avec simplicité et une contamination minimale.

Identification et la localisation du tissu adipeux inguinal sous-cutanée, adipeux brun interscapulaire, adipeux de l'épididyme viscérale (figure 1), ainsi que le tissu adipeux arc périvasculaire aortique, adipeux de l'aorte thoracique, adipeux aortique surrénale et adipeux aorte abdominale (figure 2) a été réalisée avec succès en utilisant la méthode chirurgicale décrite. L'examen histologique et la différenciation entre les échantillons sur les MTD et Wat ont été évalués positivement u...

Grâce à la connexion drastique et négative entre l&#39;obésité et d&#39;autres comorbidités, la recherche sur le rôle adipeux joue dans la maladie et la santé globale est justifiée. Nous présentons un protocole pour l&#39;isolement et l&#39;excision de dépôts adipeux permettant l&#39;étude du tissu adipeux à l&#39;aide in situ et des procédés in vitro.

Localisation, identification, et l&#39;excision des dépôts adipeux murin

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

L’objectif général de cette procédure est de démontrer l’identification et l’excision du dépôt adipeux pour l’analyse de différents effets factoriels sur et par le dépôt adipeux. Ceci est accompli en exposant d’abord les organes internes et les dépôts adipeux d’une souris adulte. Dans la deuxième étape, les organes et les tissus superflus sont retirés pour mieux exposer les dépôts, ce qui permet d’identifier les dépôts dans leurs emplacements correspondants.Dans la dernière étape, le tissu adipeux est ensuite extrait avec un soin particulier pour éviter toute contamination. En fin de compte, l’isolement et l’excision de ces dépôts fournissent des tissus pour l’analyse histologique, l’expression des protéines, l’activité enzymatique et l’analyse de l’expression des gènes, ainsi que pour les études in vitro. Le principal avantage de ce protocole particulier par rapport aux méthodologies existantes est qu’il permet l’isolement de plusieurs dépôts avec une dissection minimale, ainsi qu’une contamination minimale.Cette procédure peut donc aider à répondre aux questions sur le domaine de l’obésité. Par exemple, les effets néfastes, voire bénéfiques, du tissu adipeux sur les maladies humaines. Pour isoler le tissu adipeux brun, commencez par placer une souris adulte euthanasiée à l’éthanol en position couchée, le dos contre la table.Ensuite, utilisez une pince pour soulever la peau juste en dessous du diaphragme et incisez la peau avec des ciseaux. Coupez transversalement autour de la circonférence de la souris pour exposer le péritoine. Ensuite, en tenant les appendices inférieurs et l’abdomen d’une main, tirez la peau vers la tête avec l’autre main pour déganter la moitié supérieure de la souris révélant le dépôt adipeux brun en forme de papillon ou chauve-souris.Ensuite, localisez le scape et le dépôt de chauves-souris correspondant. Ensuite, utilisez un microscope de dissection pour retirer soigneusement tout adipeux blanc superficiel sur le papillon et disséquer la graisse brune interscapulaire, en prenant soin d’éviter tout muscle associé. Pour isoler le tissu adipeux sous-cutané ou subq, tenez les appendices supérieurs et le thorax d’une main et tirez la peau vers les pieds avec l’autre main pour déganter la moitié inférieure de la souris et révéler les dépôts inguinaux triangulaires subq.Remettez ensuite la souris en position couchée et disséquez soigneusement les triangles de graisse subq pour isoler la graisse gonadique de la cavité abdominale. À l’aide de ciseaux, coupez le péritoine transversalement directement sous le diaphragme. Ensuite, coupez le péritoine du diaphragme au rectum, au milieu de la coronaire pour exposer les organes abdominaux et disséquez soigneusement les deux dépôts de graisse épidermique des testicules epi et vasa deia.Pour isoler le tissu adipeux périvasculaire, maintenez l’animal en position couchée et étendez les appendices supérieur et inférieur vers l’extérieur. Ensuite, soulevez le processus xiphoïde avec une pince pour créer une tension sur le haut du corps et coupez horizontalement à travers le diaphragme, exposant la partie inférieure de la cavité thoracique. Coupez la cage thoracique vers le haut vers la tête juste sur le côté du sternum, puis ramassez la cage thoracique juste en dessous de la clavicule.Couper le long de la longueur inférieure de la clavicule vers l’aisselle dans les deux sens. La cavité thoracique et son contenu devraient maintenant être clairement visibles. Une fois que la zone est débarrassée de liquide, coupez les bronches et les vaisseaux qui les attachent pour retirer les poumons et exposer le cœur.Après avoir identifié l’estomac et l’œsophage, coupez l’œsophage à la jonction gastro-œsophagienne pour libérer l’estomac. Ensuite, identifiez les intestins et le mésentère environnant. Coupez superficiellement à travers le mésentère, puis coupez le côlon aussi près que possible du rectum pour libérer l’estomac, l’intestin, le côlon, le pancréas et la rate.Lorsque les organes ont été enlevés, coupez à travers les veines hépatiques et le mésentère de liaison et retirez tous les lobes du foie. Coupez la couche viscérale et la graisse entourant les reins, laissant les reins attachés à l’aorte in vivo pour servir de marqueurs géographiques pour les différents segments de l’aorte. Ensuite, lorsque la zone autour des reins est dégagée, utilisez des micro-ciseaux et des micro-pinces pour séparer l’aorte de son attache dorsale à la colonne vertébrale et de son attache ventrale à l’œsophage.Dans le thorax, suivez et détachez l’aorte de son origine dans le cœur jusqu’à la bifurcation dans la région iliaque. Pour isoler le tissu adipeux aortique, à ce stade, les vaisseaux sous-claviers peuvent être identifiés. Isolez ces vaisseaux du cou à la racine aortique pour mieux exposer la jonction aortique et la racine dans le cœur.Ensuite, retirez le thymus et coupez les artères brachiocéphalique, carotidienne commune gauche et sous-clavière gauche pour permettre le mouvement du cœur. Enfin, utilisez un microscope à dissection pour visualiser le tissu adipeux périvasculaire ou la couche P VVA T entourant l’aorte. Ensuite, utilisez une micro-pince pour retirer doucement le tissu de l’aorte et des micro-ciseaux pour couper doucement l’attache du PVAT à l’aorte en commençant par la région thoracique, juste au-dessus de l’endroit où se trouve le diaphragme.Ensuite, utilisez une micro-pince pour retirer doucement le tissu de l’aorte et des micro-ciseaux pour couper doucement l’attache du PVAT à l’aorte en commençant par la région thoracique juste au-dessus de l’endroit où se trouve le diaphragme. Répétez ce processus sur toute la longueur de l’aorte en terminant à la région aortique infrarénale, située juste au-dessus de la bifurcation iliaque du vaisseau aortique et en dessous des branches rénales de la chauve-souris. Et les échantillons wat peuvent être différenciés par analyse histologique avec coloration h et e des lignées cellulaires primaires d’adipocytes sous-cutanés et périvasculaires.Les adipocytes peuvent ensuite être cultivés et différenciés de préadipocytes à adipocytes pour l’analyse sur microréseaux. Dans ces images représentatives, par exemple, la conversion des préadipocytes cultivés en adipocytes a été confirmée avec des adipocytes colorés au rouge d’huile, isolés, cultivés et différenciés par cette méthode peuvent être utilisés pour d’autres analyses in vitro. Dans cette expérience représentative, on a observé une diminution de l’activité enzymatique de MM P two dans les adipocytes périvasculaires isolés en réponse à un traitement expérimental par rapport aux témoins non traités.Lors de cette procédure, il est important de ne pas oublier de changer de gants et de nettoyer fréquemment vos instruments pour minimiser la contamination. Ainsi, une fois ces tissus collectés, une variété de procédures peuvent être effectuées sur eux. Par exemple, la culture cellulaire, l’analyse histologique, la mesure des protéines et même l’expression des gènes.Ensuite, ces résultats peuvent être utilisés pour aider à comprendre la relation, les similitudes et les différences entre les différents dépôts.

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Dans cette vidéo, nous montrons la procédure chirurgicale permettant d’isoler le tissu adipeux blanc sous-cutané et le tissu adipeux brun interscapulaire d’une souris nouveau-née.

Collection de dépôts adipeux blancs et bruns chez un bébé souris : une intervention chirurgicale pour récolter le tissu adipeux blanc et le tissu adipeux brun chez le bébé souris

Le tissu adipeux (AT) peut influencer l’homéostasie de l’ensemble du corps, il est donc important de comprendre les mécanismes moléculaires de la différenciation et de la fonction des adipocytes. Nous fournissons un protocole pour acquérir de nouvelles connaissances sur ces processus en analysant l’homéostasie des adipocytes, la différenciation et l’exposition à l’hypoxie comme modèle de l’apoptose adipocytaire induite.

Mécanisme de règlement des numéros adipocytes dans les organismes adultes grâce à la différenciation et l&#39;apoptose homéostasie

Nous présentons les techniques nécessaires pour isoler la fraction vasculaire stromale (SVF) des dépôts de tissu adipeux inguinal (sous-cutané) et périgonadique (viscéral) de souris afin d’évaluer leur expression génique et leur activité collagénolytique. Cette méthode comprend l’enrichissement de cellules souches dérivées du tissu adipeux (ASC)Sca1 à haute teneur en utilisant la séparation cellulaire immunomagnétique.

Séparation immunomagnétique de Sca1 Fat Depot spécifique<sup&gt; haute</sup&gt; Cellules souches adipeuses (CSA)

Les adipocytes existent dans des dépôts discrets et ont des rôles divers au sein de leurs microenvironnements uniques. Comme les différences régionales dans le caractère et la fonction des adipocytes sont découvertes, l'identification normalisée et l'isolement des dépôts sont cruciaux pour l'avancement du champ. Ici, nous présentons un protocole détaillé pour l'excision de divers dépôts adipeux de souris.

Identification et dissection des dépôts d'adipose de souris diverses

L’objectif de ce protocole est de synthétiser des liposomes marqués par fluorescence et d’utiliser la cytométrie en flux pour identifier la localisation in vivo des liposomes au niveau cellulaire.

Préparation, administration et évaluation de l’absorption cellulaire in vivo de liposomes marqués par un colorant fluorescent

Ce protocole décrit l’approche technique permettant d’isoler des sous-populations de cellules stromales adipogènes et fibro-inflammatoires à partir de dépôts de tissu adipeux blanc (WAT) intra-abdominal murin par tri cellulaire activé par fluorescence ou séparation immunomagnétique des billes.

Isolement de sous-populations de cellules stromales adipogènes et fibro-inflammatoires à partir de dépôts adipeux intra-abdominaux murins

Ce protocole détaille une méthode pour la dissection des dépôts adipeux de souris et l’isolement et la digestion des artères respectives pour libérer puis identifier la population de cellules endothéliales. Les cellules fraîchement isolées utilisées dans des applications en aval feront progresser la compréhension de la biologie cellulaire vasculaire et des mécanismes du dysfonctionnement vasculaire.

Isolement et identification de cellules endothéliales vasculaires à partir de dépôts adipeux distincts pour des applications en aval

Ce protocole décrit l’isolement semi-automatisé de la fraction vasculaire stromale (SVF) du tissu adipeux murin pour obtenir des préadipocytes et obtenir une différenciation adipocytaire in vitro. L’utilisation d’un dissociateur tissulaire pour la digestion de la collagénase réduit la variation expérimentale et augmente la reproductibilité.

Isolement semi-automatisé de la fraction vasculaire stromale à partir de tissu adipeux blanc murin à l’aide d’un dissociateur tissulaire

Ici, nous fournissons une procédure pratique pour disséquer et effectuer des analyses histologiques et d’expression génique du tissu adipeux brun supraclaviculaire murin.

Dissection, traitement histologique et analyse de l’expression génique du tissu adipeux brun supraclaviculaire murin

La taille et la fragilité des adipocytes matures ont limité les techniques et les outils disponibles pour leur étude et leur isolement. Ici, un protocole est décrit pour l’isolement des adipocytes murins matures, qui peuvent être facilement adaptés à différents dépôts adipeux et régimes alimentaires de souris.

Isolement et culture d’adipocytes murins primaires à partir de souris maigres et obèses

Apprenez à localiser et exciser les dépôts adipeux chez la souris adulte avec une dissection minimale et sans contamination. Cette méthode permet des analyses histologiques et moléculaires fiables du tissu adipeux.

Localisation, identification, et l'excision des dépôts adipeux murin

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