Name: Une nouvelle technique pour lanalyse quantitative de la perte de cheveux chez la souris Utilisation de lanalyse des niveaux de gris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Découvrez une méthode de quantification de la densité capillaire chez la souris par analyse des niveaux de gris sur imagerie en gel. Cette technique reproductible et objective facilite l'évaluation de nouvelles thérapies contre l'alopécie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nous tenons à remercier l’Hôpital pour enfants de Montefiore, Département de pédiatrie, pour son soutien à ces études. Nous tenons à remercier la Fondation nationale de l’alopécie areata pour son soutien financier à la réalisation d’études avec des souris greffées C3H/HeJ.

Déclaration éthique: Toutes les études portant sur des animaux doivent être approuvés par le IACUC de l&#39;institution (pour les données qui suivent, les protocoles ont été approuvés par le IACUC Montefiore, le protocole # 11-6-240 et 13-7-100 #). Les animaux sont fournis anesthésie légère comme indiqué dans le seul but de les garder encore pendant la photographie, il n&#39;y a pas de procédures douloureuses requises pour ce protocole. 1. Acquisition de Photographies <ol><li> Mise au point et le champ de vision pour imageur de gel en utilisant du papier avec du texte imprimé. Vérifiez uniformité de source de lumière à travers la région photographiée. Pour assurer l&#39;uniformité, utiliser un imageur de gel avec un construit en source de lumière pour la photographie réfléchissante. Ne pas utiliser une source de lumière de transillumination, car cela créerait une silhouette de l&#39;animal qui est impropre à une analyse plus approfondie en niveaux de gris. NOTE: Ceci placera la souris légèrement floue, qui fournit moyenne optique à travers la région d&#39;intérêt (ROI) et la volontéaider à réduire les erreurs quantiques pour les très petites régions (c.-à-&lt;10 pixels) d&#39;intérêt. Grandes régions d&#39;intérêt ne seront pas affectés par cette mineure réglage de la focalisation, ils ne seront pas affectées par les différences dans la taille de l&#39;animal. </li><li> Anesthésier des animaux à l&#39;aide de kétamine (100 mg / ml) / xylazine (20 mg / ml) (2: 1), cela fournit l&#39;effet de l&#39;anesthésie rapide et une récupération rapide et est optimal pour photographier plusieurs animaux. NOTE: L&#39;anesthésie est confirmé lorsque l&#39;animal est encore assez pour permettre la photographie. Comme les animaux récupèrent de cette lumière dans l&#39;anesthésie 10-15 min, le vétérinaire n&#39;a pas recommandé l&#39;utilisation de pommades ophtalmiques. </li><li> Placer sur les animaux anesthésiés imageur gel en alignement vertical (aussi près que possible parallèle). <ol><li> Pour les photographies dorsales, placer les animaux en décubitus ventral avec des membres étendus. </li><li> Pour les photographies ventrales, placer les animaux dans la position couchée, en prenant soin que les animaux ne sont pas pivoté latéralement. </li&gt; </ol></li><li> Placez norme niveaux de gris dans la région photographiée. </li><li> Fermer la porte d&#39;accès. Important: La lumière ambiante peut introduire des variations dans l&#39;exposition. </li><li> Réglez F-stop à une exposition qui place la région d&#39;intérêt au sein de la gamme linéaire de l&#39;acquisition (lecture F-stop). REMARQUE: La plupart des systèmes afficher où l&#39;image est saturée. </li><li> Prenez la photo. </li><li> Changer F-stop à un autre réglage de l&#39;exposition qui place la région d&#39;intérêt au sein de la gamme linéaire en augmentant ou en diminuant le F-stop par une, de sorte que tant la norme et la région d&#39;intérêt restent dans une plage linéaire d&#39;acquisition (référence F arrêtez). </li><li> Prenez la photo. </li><li> Une fois que la photographie est terminé, placer les animaux sur une table de réchauffement et de suivre jusqu&#39;à ce qu&#39;ils puissent maintenir décubitus sternal. Retour animaux dans leurs cages. Remettre le groupe d&#39;animaux le vivarium fois tous les animaux sont complètement rétablis. </li></ol> 2. Quantification de l&#39;absorption de lumière &lt;/ P&gt; <ol><li> Marquer les régions d&#39;intérêt sur les images des animaux avec le logiciel fourni pour le gel imageur. <ol><li> Pour toute vue dorsale de l&#39;animal, utiliser une image rectangulaire ou ovale se étendant à partir des membres supérieurs aux membres inférieurs, se étendant latéralement autant que possible de telle sorte qu&#39;aucune partie de la boîte se étend au-delà du dos de l&#39;animal, comme illustré sur la figure 1A. NOTE: On peut aussi marquer la zone d&#39;intérêt en utilisant un outil de dessin à main levée. </li><li> Pour animal entier vue ventrale, utiliser deux rectangles: l&#39;un couvrant la région pelvienne et une couvrant la région de la poitrine comme le montre la figure 1B. </li><li> Pour une plus petite région d&#39;intérêt, ce est à dire, l&#39;emplacement de l&#39;administration du médicament, marque le cas échéant. </li></ol></li><li> Mark région (s) d&#39;intérêt sur la norme d&#39;absorption en niveaux de gris. </li><li> l&#39;absorption d&#39;enregistrement de chacune des régions marquées d&#39;intérêt. </li></ol> 3. Analyse les niveaux d&#39;absorption obtained pour les régions d&#39;intérêt peut avoir besoin d&#39;être normalisée à la norme de référence pour la comparaison entre les photographies. La relation entre l&#39;exposition à l&#39;absorption est logarithmique (ce est à dire, la relation est linéaire entre log (exposition) et log (absorption)). En utilisant cette relation, l&#39;absorption de la région d&#39;intérêt peut être normalisée à une valeur de référence standard, ce qui permettra absorptions à être comparées directement entre les différentes photographies, y compris celles qui sont prises à des moments différents (par exemple, des mesures en série au sein d&#39;un protocole de l&#39;étude). La procédure pour effectuer ces corrections est détaillé dans des étapes facultatives 3.1 et 3.2. <ol><li> (Facultatif) courbe de Terrain de log (exposition) en fonction de log (absorption) en utilisant les valeurs obtenues à partir de la norme d&#39;absorption en niveaux de gris. </li><li> (Facultatif) Réglez les variations dans le niveau de chaque photographie comme suit: <ol><li> Sélectionnez F-stop pour la lecture (tel que déterminé dans l&#39;étape 1.6) et F-stop pour référence (tel que déterminé à sTep 1,8). </li><li> Calculer absorption moyenne de la norme dans toutes les photographies à la lecture F-stop. Cette moyenne est la Valeur de référence standard (RSV). </li><li> Calculer différence d&#39;absorption entre la lecture et de référence réglages F-stop dans chaque photographie pour la norme (delta-S) et pour chaque ROI définie (delta-ROI-1, delta-ROI-2 ... ..delta-ROI-X) </li><li> Calculer l&#39;absorption corrigé pour chaque ROI comme suit: absorption corrigé (ROI-X) = Absorption (ROI-X) pour lire les F-stop + (RSV - absorption de la norme à lecture F-stop) * (delta-ROI-X / delta-S) </li></ol></li><li> Compiler les données expérimentales et effectuer des analyses de données en utilisant des techniques statistiques standard pour les variables continues (c.-à-ANOVA, T-test). </li></ol>

<ol><li>McAndrews, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Hair+Loss+Association%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">American Hair Loss Association.</a> , 
 <a target="_blank" href="http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp">http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp</a> (2011).</li>
<li>Safavi, K. H., Muller, S. A., Suman, V. J., Moshell, A. N., Melton, L. J. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+alopecia+areata+in+Olmsted+County%2C+Minnesota%2C+1975+through+1989%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Incidence of alopecia areata in Olmsted County, Minnesota, 1975 through 1989.</a> Mayo Clin Proc. 70 (7), 628-633 (1995).</li>
<li>Hussein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy-induced+alopecia%3A+new+developments%5BTitle%5D)+AND+%22South+Med+J%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy-induced alopecia: new developments.</a> South Med J. 86 (5), 489-496 (1993).</li>
<li>Trueb, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy-induced+hair+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Therapy+Lett%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy-induced hair loss.</a> Skin Therapy Lett. 15 (7), 5-7 (2010).</li>
<li>Sato, N., Leopold, P. L., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+adenovirus-mediated+expression+of+Sonic+hedgehog+gene+on+hair+regrowth+in+mice+with+chemotherapy-induced+alopecia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Effect of adenovirus-mediated expression of Sonic hedgehog gene on hair regrowth in mice with chemotherapy-induced alopecia.</a> J Natl Cancer Inst. 93 (24), 1858-1864 (2001).</li>
<li>McGarvey, E. L., Baum, L. D., Pinkerton, R. C., Rogers, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+sequelae+and+alopecia+among+women+with+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Pract%22%5BJournal%5D)">Psychological sequelae and alopecia among women with cancer.</a> Cancer Pract. 9 (6), 283-289 (2001).</li>
<li>Baxley, K. O., Erdman, L. K., Henry, E. B., Roof, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alopecia%3A+effect+on+cancer+patients%27+body+image%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Nurs%22%5BJournal%5D)">Alopecia: effect on cancer patients' body image.</a> Cancer Nurs. 7 (6), 499-503 (1984).</li>
<li>Stough, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+effect%2C+pathophysiology%2C+and+management+of+androgenetic+alopecia+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Psychological effect, pathophysiology, and management of androgenetic alopecia in men.</a> Mayo Clin Proc. 80 (10), 1316-1322 (2005).</li>
<li>Ogunmakin, K. O., Rashid, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alopecia%3A+the+case+for+medical+necessity%5BTitle%5D)+AND+%22Skinmed%22%5BJournal%5D)">Alopecia: the case for medical necessity.</a> Skinmed. 9 (2), 79-84 (2011).</li>
<li>Olsen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+clinical+trial+of+5%25+topical+minoxidil+versus+2%25+topical+minoxidil+and+placebo+in+the+treatment+of+androgenetic+alopecia+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Acad+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A randomized clinical trial of 5% topical minoxidil versus 2% topical minoxidil and placebo in the treatment of androgenetic alopecia in men.</a> J Am Acad Dermatol. 47 (3), 377-385 (2002).</li>
<li>Rossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1+mg+daily+administration+on+male+androgenetic+alopecia+in+different+age+groups%3A+10-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Ther%22%5BJournal%5D)">1 mg daily administration on male androgenetic alopecia in different age groups: 10-year follow-up.</a> Dermatol Ther. 24 (4), 455-461 (2011).</li>
<li>Gibbons, R. D., Fiedler-Weiss, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer-aided+quantification+of+scalp+hair%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Clin%22%5BJournal%5D)">Computer-aided quantification of scalp hair.</a> Dermatol Clin. 4 (4), 627-640 (1986).</li>
<li>Fleming, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+a+structural+analysis+of+dermatoscopic+imagery%5BTitle%5D)+AND+%22Comput+Med+Imaging+Graph%22%5BJournal%5D)">Techniques for a structural analysis of dermatoscopic imagery.</a> Comput Med Imaging Graph. 22 (5), 375-389 (1998).</li>
<li>Chamberlain, A. J., Dawber, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+evaluating+hair+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Australas+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods of evaluating hair growth.</a> Australas J Dermatol. 44 (1), 10-18 (2003).</li>
<li>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale*. , Imatest. 
 
 <a target="_blank" href="http://www.imatest.com/docs/q13/">http://www.imatest.com/docs/q13/</a> Forthcoming.</li>
<li>Freyschmidt-Paul, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+alopecia+areata+in+C3H%2FHeJ+mice+with+the+topical+immunosuppressant+FK506+%28Tacrolimus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Treatment of alopecia areata in C3H/HeJ mice with the topical immunosuppressant FK506 (Tacrolimus).</a> Eur J Dermatol. 11 (5), 405-409 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Matsushita, O., Sakon, J., Gensure, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+prevention+of+chemotherapy-induced+alopecia+with+PTH-CBD%2C+a+collagen-targeted+parathyroid+hormone+analog%2C+in+a+non-depilated+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Drugs%22%5BJournal%5D)">Treatment and prevention of chemotherapy-induced alopecia with PTH-CBD, a collagen-targeted parathyroid hormone analog, in a non-depilated mouse model.</a> Anticancer Drugs. 25 (1), 30-38 (2014).</li>
<li>Peters, E. M., Foitzik, K., Paus, R., Ray, S., Holick, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+strategy+for+modulating+chemotherapy-induced+alopecia%2C+using+PTH%2FPTHrP+receptor+agonist+and+antagonist%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A new strategy for modulating chemotherapy-induced alopecia, using PTH/PTHrP receptor agonist and antagonist.</a> J Invest Dermatol. 117 (2), 173-178 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Seymour, A., Sakon, J., Gensure, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+hormone+linked+to+a+collagen+binding+domain+promotes+hair+growth+in+a+mouse+model+of+chemotherapy+induced+alopecia+in+a+dose-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Anti-cancer+drugs%22%5BJournal%5D)">Parathyroid hormone linked to a collagen binding domain promotes hair growth in a mouse model of chemotherapy induced alopecia in a dose-dependent manner.</a> Anti-cancer drugs. 25 (7), 819-825 (2014).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Dans ce rapport, une description détaillée est fournie d&#39;une nouvelle technique pour quantifier la perte de cheveux chez les rongeurs. Cette technique utilise un imageur gel d&#39;acquisition d&#39;images et d&#39;analyse, un équipement qui est facilement disponible dans la plupart des laboratoires. Les mesures ont été montrés pour être robuste aux variations mineures dans la technique (figures 4-5), et sont bien en corrélation avec le degré de perte de cheveux visuelle dans des modèles de traitemen...

Alopécie (perte de cheveux) peut être un événement psychologiquement et émotionnellement pénible aux causes multiples. Homme-calvitie est la cause la plus commune de l&#39;alopécie, affectant environ deux tiers des hommes de 35 ans 1. Une tendance similaire de la perte de cheveux peut être observée chez les femelles présentant un syndrome des ovaires polykystiques. Dans ces deux troubles, la perte de cheveux est médiée androgène. Alopécie peut également se produire comme une maladie auto-immune, la pelade, qui touche 1,7% de la population 2. L&#39;alopécie peut se produire comme un effet secondaire de certains traitements médicaux, tels que la chimiothérapie 3. Un pourcentage élevé (65-85%) des patients en chimiothérapie expérience dans une certaine mesure de l&#39;alopécie 4,5. Les conséquences psychologiques de la perte de cheveux ont été bien étudiés dans le cadre de la chimiothérapie. Alopécie induite par la chimiothérapie peut entraîner de l&#39;anxiété, la dépression, une image négative de leur corps, réduit l&#39;estime de soi et un sentiment réduite de bien-être 6,7. Une haute peourcentage (47-58%) des patients atteints de cancer chez les femmes considèrent la perte de cheveux à l&#39;aspect le plus traumatisant de la chimiothérapie, et jusqu&#39;à 8% de baisse de traitement par crainte de la perte de cheveux 4,6. Il existe également des preuves dans l&#39;alopécie androgénique pour soutenir thérapie pour réduire les conséquences psychologiques et même médicaux de perte de cheveux 8,9. De même, la pelade a été signalé à avoir des conséquences psychologiques graves 2, et de la nature inégale de la perte de cheveux peut conduire à un résultat esthétique plus désagréable que la plupart des autres causes de perte de cheveux. Alors que les médicaments ayant des effets anti-androgènes doux (ce est à dire, la spironolactone) avaient été utilisées avec un succès limité comme traitement pour l&#39;alopécie, le premier médicament efficace pour l&#39;alopécie était minoxidil 10. Ce antihypertenseur a un effet secondaire observé de provoquer la croissance des cheveux, et est maintenant utilisé comme traitement topique pour de nombreuses formes d&#39;alopécie. Cependant, les réponses sont souvent incomplets, certains sujets ne montrant que lentetion de la perte de cheveux plutôt que 10 repousse réel. Le finastéride est un antagoniste compétitif de taper II 5α-réductase qui bloque la conversion de testostérone en dihydrotestostérone, résultant en des améliorations dans l&#39;alopécie androgénique au détriment de blocage androgénique partielle systémique. Les taux de réponse avec à long terme (10 ans) thérapie sont environ 50% 11. Globalement, malgré des recherches considérables dans ce domaine, il n&#39;y a toujours pas de thérapie adéquate pour la perte de cheveux. Pendant des décennies, les scientifiques et les cliniciens ont examiné les méthodes de mesure de la croissance de cheveux de cuir chevelu dans les essais cliniques. Avec le développement de médicaments utilisés pour traiter l&#39;alopécie, on a un besoin accru de moyens fiables, économiques et peu invasive de mesure de la croissance des cheveux et, plus particulièrement, la réponse au traitement. Image en technologie d&#39;analyse pour une quantification précise de la densité des cheveux chez les patients présentant des troubles de perte de cheveux a abouti à des résultats cohérents et valables dans le passé en utilisant une variété de techniques, y compris l&#39;analyse des images numérisées 12, analyse de l&#39;image de poils individuels et les lésions 13 peau, et le balayage au microscope à quantifier la masse de cheveux dans une région du cuir chevelu 14 défini. Malheureusement, alors que les méthodes ci-dessus ont permis d&#39;améliorer l&#39;évaluation de l&#39;efficacité pour les cheveux favorisant la croissance interventions dans les essais cliniques, ces méthodes ne ont pas été appliquées aux études sur les rongeurs dans les études précliniques. Notre objectif est de développer une méthode cohérente et fiable de quantifier la perte de cheveux chez la souris, ce qui permettra aux enquêteurs d&#39;évaluer et de comparer de nouvelles approches thérapeutiques pour diverses formes d&#39;alopécie plus de précision. Nous avons développé une méthodologie utilisant des équipements facilement disponibles dans la plupart des laboratoires qui permettront quantification rapide et fiable de la densité des cheveux chez la souris avec des cheveux bruns ou noirs. Cette méthodologie a été testée dans des modèles murins de l&#39;alopécie induite par la chimiothérapie, la pelade, l&#39;alopécie et de Waxing. Un protocole détaillé est présenté pour l&#39;exécution de ces mesures, y compris les données de validation de C57BL / 6 et C3H / HeJ souches de souris. Comme cette technique repose sur la détection de l&#39;absorption de lumière à partir de pigments dans la tige du cheveu, il ne peut être utilisé pour détecter la croissance des cheveux chez les souris blanches ou des souris albinos.

<table><tbody><tr><td>KODAK Gel Logic 100 Imaging System</td><td>Eastman Kodak Company, Rochester, NY, USA</td><td></td><td>Système d'imagerie de gels pour l'acquisition et l'analyse de photographies, doit posséder une source lumineuse intégrée pour la photographie par réflexion.</td></tr><tr><td>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale</td><td><a href="http://www.imatest.com/docs/q13/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Imatest</a></td><td></td><td>Échelle de gris normalisée</td></tr><tr><td>C57BL/6J Mice</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>Souris pour une étude représentative</td></tr><tr><td>C3H/HeJ engrafted mouse</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>Souris greffée pour une étude représentative</td></tr></tbody></table>

une nouvelle technique pour l&#39;analyse quantitative de la perte de cheveux chez la souris utilisation de l&#39;analyse des niveaux de gris

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

L&#39;alopécie est une forme courante de perte de cheveux qui peut se produire dans de nombreuses conditions différentes, y compris le dessin male perte de cheveux, le syndrome des ovaires polykystiques, et la pelade. L&#39;alopécie peut également se produire comme un effet secondaire de la chimiothérapie chez les patients cancéreux. Dans cette étude, notre objectif était de développer une méthode cohérente et fiable de quantifier la perte de cheveux chez la souris, ce qui permettra aux enquêteurs d&#39;évaluer et de comparer de nouvelles approches thérapeutiques pour ces différentes formes d&#39;alopécie précision. Le procédé utilise un imageur de gel standard pour obtenir des images et le processus de souris, mesurant l&#39;absorption de lumière, qui se produit en proportion approximative de la quantité de cheveux noir (ou gris) sur la souris. Les données qui ont été quantifiés de cette manière peuvent ensuite être analysés en utilisant des techniques statistiques standard (ce est à dire, analyse de la variance, T-test). Cette méthodologie a été testée dans des modèles murins de l&#39;alopécie induite par la chimiothérapie, la pelade et l&#39;alopécie de l&#39;épilation. Dans ce rapport, le protocole détaillé est presENTED pour effectuer ces mesures, y compris les données de validation de C57BL / 6 et C3H / HeJ souches de souris. Cette nouvelle technique offre un certain nombre d&#39;avantages, y compris relative simplicité d&#39;application, le recours à l&#39;équipement qui est facilement disponible dans la plupart des laboratoires de recherche, et en appliquant une évaluation objective et quantitative qui est plus robuste que les évaluations subjectives. L&#39;amélioration de la quantification de la croissance des cheveux chez la souris permettra d&#39;améliorer l&#39;étude des modèles de l&#39;alopécie et de faciliter l&#39;évaluation de nouveaux traitements prometteurs dans les études précliniques.

Cette technique a été validée à l'aide souris C3H / HeJ greffées, le modèle murin de la pelade 16. Ces animaux développent la perte de cheveux mondiale qui progresse graduellement avec le temps. Cependant, la perte de cheveux survient chez des correctifs, et peut varier d'une souris pour la prochaine, en introduisant une variabilité considérable et entrave les évaluations qualitatives. Ce modèle a permis de tester les corrélations entre les mesures de la densité optique à différents endroits sur la souris com...

L’alopécie est une forme courante de perte de cheveux qui peut survenir dans de nombreuses conditions différentes, y compris comme effet secondaire de la chimiothérapie. Nous avons développé une méthode pour quantifier la perte de cheveux chez la souris, en utilisant un imageur de gel standard pour effectuer une analyse en niveaux de gris, afin de faciliter l’étude de nouvelles thérapies prometteuses contre l’alopécie.

Une nouvelle technique pour l&#39;analyse quantitative de la perte de cheveux chez la souris Utilisation de l&#39;analyse des niveaux de gris

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and ...

L’objectif global de cette procédure est de fournir une quantification de la densité des cheveux à l’aide de l’absorption de la lumière. Pour ce faire, il suffit de photographier d’abord des animaux sur un imageur à gel. Les étapes suivantes consistent à définir une région d’intérêt sur la photo et à déterminer l’absorption de la lumière dans la région d’intérêt.Ensuite, l’absorption de la lumière est comparée à une norme photographique. En fin de compte, l’absorption de la lumière peut être moyennée entre des animaux traités de la même manière pour montrer les effets d’une intervention sur la croissance des poils. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle est impartiale, quantifiable et reproductible.Ceci est extrêmement important car cela vous permet d’utiliser des normes, des techniques statistiques comme Inova pour déterminer la signification statistique des résultats. Pour ce protocole, utilisez un imageur à gel avec une source lumineuse intégrée pour la photographie réfléchissante. Cela garantit une bonne uniformité de la lumière, tandis que l’éclairage trans crée un silhouettage impropre à l’analyse.Commencez par préparer l’imageur gel, réglez la mise au point et le champ de vision. En utilisant du texte imprimé, la souris peut être légèrement floue car cela fonctionne réellement. Pour réduire les erreurs quantiques dans les petites régions d’intérêt, vérifiez l’uniformité de la source lumineuse dans la région photographiée dans le but d’obtenir une excellente moyenne optique dans la région d’intérêt.Ensuite, préparez l’animal. Choisissez un anesthésique à action rapide et de courte durée et administrez-en juste assez pour garder les animaux immobiles pour la photographie. Placez maintenant les animaux sur l’imageur verticalement et aussi près que possible de la position parallèle.Pour les photographies dorsales, placez les animaux en position couchée avec les membres étendus. Pour les photographies ventrales, placez les animaux en position couchée. Assurez-vous qu’ils ne sont pas tournés latéralement.Les valeurs d’absorption peuvent être extraites entre les images, mais ce n’est pas ce pour quoi la machine a été conçue. Ainsi, l’ajout d’une norme d’échelle de gris nous permet de normaliser les valeurs d’absorption lors de la compilation des données. Placez maintenant l’étalon d’échelle de gris dans la région photographiée.Fermez ensuite la chambre et réduisez l’éclairage ambiant qui pourrait pénétrer dans la chambre de l’appareil photo. Réglez la butée F sur une exposition qui fait que la zone d’intérêt n’est pas sursaturée ou sous-exposée. Ensuite, prenez une photo.Si le diaphragme F est choisi de telle sorte que l’image soit saturée, la valeur de l’échelle de gris sera fixée à la valeur et B n’aura aucune utilité. Changez ensuite le F.Stop d’un, en gardant la zone d’intérêt et la norme dans une plage d’exposition linéaire, et prenez une deuxième photo une fois la photographie terminée. Placez les animaux sur une table chauffante et surveillez-les jusqu’à ce qu’ils se rétablissent.Sternal couché. Ensuite, retournez les animaux dans leurs cages et enfin au vivarium pour une récupération complète. Pour quantifier l’absorption de la lumière à l’aide du logiciel d’imagerie sur gel, marquez les régions d’intérêt sur les images des animaux pour une vue dorsale de l’animal entier.Utilisez une image rectangulaire, une image ovale ou un outil à main libre pour délimiter un espace entre les membres supérieurs et les membres inférieurs, en s’étendant latéralement autant que possible. Restez dans les marges du dos de l’animal pour une vue ventrale de l’animal entier. Utilisez deux rectangles.L’un pour couvrir la région pelvienne, qui est toilettée, et l’autre pour couvrir la zone de la poitrine, qui n’est pas toilettée. Les petites régions d’intérêt, telles que l’endroit où un médicament a été administré, peuvent également être marquées au besoin. Deuxièmement, marquez la région d’intérêt sur l’étalon d’absorption en niveaux de gris.Enregistrez ensuite l’absorption de chaque région d’intérêt marquée pour comparaison entre les photographies. Normaliser les niveaux d’absorption par rapport à l’étalon de fond à l’aide d’une relation logarithmique entre l’exposition et l’absorption. Pour ce faire, tracez une courbe du logarithme d’exposition en fonction du logarithme d’absorption.À l’aide des valeurs obtenues à partir de l’étalon d’absorption en niveaux de gris, ajustez ensuite les variations de la norme de chaque photographie comme suit. Tout d’abord, sélectionnez le diaphragme pour la lecture du retour sur investissement et le diaphragme pour la référence et calculez l’absorption moyenne de l’étalon dans toutes les photographies au niveau du diaphragme de lecture. Cette moyenne est la valeur standard de référence ou RSV.Ensuite, calculez la différence d’absorption entre les paramètres de lecture et de référence F-Stop sur chaque photo et effectuez les mêmes calculs pour la norme et pour chaque retour sur investissement défini. À l’aide des données d’un diaphragme, calculez l’absorption corrigée pour chaque retour sur investissement à l’aide de la formule illustrée. Ensuite, appliquez des méthodes statistiques standard pour analyser les données des souris greffées C3 HHEJ, dont le modèle d’alopécie ADA a été analysé à l’aide de la méthode décrite à différentes expositions.Comme prévu, les variations du retour sur investissement non chevauchant étaient étroitement corrélées. Des comparaisons similaires ont produit la même corrélation étroite sur une période de trois semaines. Les souris ont été imagées pour quantifier leur perte de cheveux attendue.80 % des souris imagées ont montré une perte de cheveux dans cette période. En comparaison, les souris normales C 57 black six n’ont montré aucune perte de cheveux dans le même laps de temps. Dans une deuxième étude, l’alopécie induite par la chimiothérapie a été quantifiée à l’aide de la technique décrite.Les souris ont été traitées avec du cyclophosphamide pendant trois semaines et après deux mois, elles ont montré une perte de cheveux significative par rapport aux témoins. Une fois masterisée, chaque image peut être analysée en moins de cinq minutes. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de quantifier la quantité de croissance des poils chez les rongeurs à l’aide d’un système d’imagerie sur gel standard.

a-new-technique-for-quantitative-analysis-hair-loss-mice-using

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Tissu-spécifique de l'analyse d'un modèle de régénération des cheveux à l'aide follicule lentivirus de médiation de gain ou de perte de fonction.

Analyse rapide de la génétique des épithélio-mésenchymateuse signalisation lors de la régénération des cheveux

Cette vidéo montre une méthode de greffe de peau humaine sur une souris immunodéficiente avec une réponse neutrophile supprimée. La méthode consiste à appliquer de la peau humaine d'épaisseur fendue sur le lit de greffe de la souris, à le sceller et à le recouvrir pour la récupération. Finalement, la peau humaine adhère à la peau de la souris, établissant la vascularisation et la circulation, ce qui permet une xénogreffe de peau réussie.

Une technique de greffe de peau humaine dans un modèle murin

Cette vidéo démontre l’enregistrement combiné de la production afférente stimulée mécaniquement et du marquage des terminaisons nerveuses dans les follicules pileux d’un pavillon de souris. Il décrit les étapes impliquées dans la stimulation mécanique des terminaisons nerveuses du follicule pileux avant et après l’exposition à un colorant à membrane fluorescente, l’enregistrement électrophysiologique des potentiels d’action générés et la visualisation du marquage des terminaisons nerveuses dans...

Enregistrement combiné de la production afférente stimulée mécaniquement et du marquage des terminaisons nerveuses dans les follicules pileux de souris

La peau des mammifères contient un large éventail de structures - comme les follicules pileux et les terminaisons nerveuses - qui présentent des modèles distinctifs de l'organisation spatiale. Analyser la peau comme un support plat profite de la géométrie à 2 dimensions de ce tissu pour produire toute l'épaisseur des images haute résolution des structures de la peau.

Appartement Mont imagerie de la peau de souris et son application à l&#39;analyse des follicules pileux Modélisation et sensorielle Axon Morphologie

Ce protocole décrit comment générer des blessures excisionnelles bilatérales et pleine épaisseur chez la souris et comment surveiller, récolter et préparer les plaies pour l’analyse morphométrique. On y trouve une description détaillée de la façon d’utiliser les sections histologiques périodiques pour définir, quantifier et détecter avec précision les défauts morphométriques.

Modèle de cicatrisation des plaies excisional murine et analyse histologique des plaies morphométriques

Ici, nous décrivons en profondeur une méthode, basée sur la tomographie micro-informatisée, pour segmenter et mesurer des modèles 3D d’os craniomaxillo-faciaux chez la souris, afin de mieux évaluer le développement de l’os craniomaxillo-facial chez la souris que ce qui est possible avec les méthodes actuelles.

Analyse des malformations craniomaxillo-faciales chez la souris à l’aide de la microtomodensitométrie tridimensionnelle

La capillaroscopie est un outil accessible pour la visualisation directe, peu coûteuse et non invasive de la microvascularisation. L’objectif de ce protocole est de permettre aux chercheurs d’utiliser la capillaroscopie pour la visualisation de la morphologie microvasculaire périphérique dans les lits d’ongles de souris.

Visualisation non invasive de la morphologie microvasculaire du lit de l’ongle chez la souris par capillaroscopie

L’objectif du présent protocole est de fournir des instructions et des lignes directrices pour l’évaluation de la fragilité physique chez les souris de laboratoire C57Bl/6x129J. Des détails spécifiques concernant chaque mesure utilisée dans l’indice de fragilité physique sont expliqués. Plusieurs méthodes de déclaration des résultats de fragilité sont également présentées.

Évaluation de la fragilité dans un modèle de souris vieillissante

Cette étude présente une approche in vivo d’imagerie à deux photons pour visualiser les structures des terminaisons axoniques des mécanorécepteurs (LTMR) à faible seuil dans la peau des pattes avant des souris. Utilisant des images répétées et haute résolution d’axones individuels, cette méthode offre une nouvelle plateforme pour étudier la structure et la fonction du circuit sensoriel cutané pendant le développement et chez l’adulte.

Imagerie intravitale à deux photons de la morphologie des axones sensoriels tactiles dans la peau de souris

Cet article décrit un nouveau protocole et de réactif mis conçu pour la mesure sensibles des effets neurotoxiques de composés et de traitements sur les co-cultures de neurones et les astrocytes en utilisant l'analyse à haute teneur. Les résultats démontrent que l'analyse de contenu de haute technologie représente un roman passionnant pour l'évaluation de la neurotoxicité.

Un neuronale et astrocytes de co-culture de dosage pour l&#39;analyse du contenu haute de la neurotoxicité

Découvrez une méthode de quantification de la densité capillaire chez la souris par analyse des niveaux de gris sur imagerie en gel. Cette technique reproductible et objective facilite l'évaluation de nouvelles thérapies contre l'alopécie.

Une nouvelle technique pour lanalyse quantitative de la perte de cheveux chez la souris Utilisation de lanalyse des niveaux de gris (Vidéo) | JoVE Journal

Une nouvelle technique pour l'analyse quantitative de la perte de cheveux chez la souris Utilisation de l'analyse des niveaux de gris

Explorer plus de vidéos