Protocole pour l'étude de l'extinction de la peur conditionnée dans le cyclisme Naturellement rats femelles

L’objectif général de cette procédure est d’examiner les effets des hormones gonadiques sur le comportement d’extinction de la peur chez les femelles pendant les états hormonaux bas et élevés du cycle Esra et le rôle de l’œstradiol lorsqu’il est administré de manière exogène. Pour ce faire, il faut d’abord surveiller le cycle esra des rats femelles adultes et identifier la phase dans laquelle ils se trouvent avant l’expérimentation. Ensuite, les animaux qui sont en phase d’œstrus sont placés dans les chambres qui leur sont assignées pour l’habitation et le conditionnement de la peur.

Le lendemain, lorsque les animaux sont en œstrus, les femelles reçoivent une injection d’œstradiol ou de véhicule et subissent un entraînement d’extinction de la peur. Enfin, le troisième jour, les animaux sont replacés dans la même chambre pour tester le rappel de la session d’extinction de la veille. En fin de compte, l’écouvillonnage vaginal pour l’identification de la rue EST permet aux enquêteurs de manipuler les fluctuations naturelles des hormones gonadiques pour étudier leur influence sur la mémoire d’extinction de la peur.

Ce protocole peut être utilisé pour aider à répondre à des questions clés dans le domaine des différences entre les sexes, telles que les processus d’extinction de la peur sont-ils différents chez les hommes et les femmes ? Et si oui, quels sont les mécanismes hormonaux et neurobiologiques qui rencontrent ces différences ? Le principal avantage de ce protocole est qu’il peut aider à promouvoir l’étude de la féminité dans l’extinction de la peur en partageant des méthodes pour le faire.

Les chercheurs qui découvrent ces méthodes ont souvent du mal à surveiller de manière fiable le cycle eser, car la procédure peut prendre du temps et dépendre fortement d’une technique appropriée. Les implications de ces études peuvent contribuer à des options de traitement spécifiques au sexe pour les troubles liés à la peur et à l’anxiété. Cela peut être important étant donné que les femmes sont deux fois plus susceptibles que les hommes de développer ces psychopathologies.

Lisa man, postdoc dans le laboratoire ainsi que dans le secret des soins. Un assistant de recherche dans le laboratoire montrera la procédure de collecte d’échantillons pour surveiller le cycle de l’œstrus. Après avoir préparé une solution saline à 0,9 %, trempez un applicateur à bout de coton dans le liquide et utilisez une serviette en papier pour éponger l’extrémité de l’excès de solution en tenant la queue d’un rat vers le haut et en prenant soin de ne pas causer de détresse.

Insérez doucement l’embout en coton dans le canal vaginal pas trop profond et roulez-le autour des parois pour capturer les cellules vaginales lâches avant de le faire rapidement. En retirant l’embout sans transférer trop de liquide, roulez doucement l’embout de l’applicateur sur une lame de microscope pré-étiquetée, en veillant à ce que l’échantillon soit transféré sur la lame. Prélever des échantillons pendant au moins deux cycles complets et les transférer plusieurs jours consécutifs sur une seule lame afin de mieux suivre et identifier les extras quotidiens des TE.

La phase change une fois que les lames sont sèches, plongez-les 10 fois dans un fixateur, puis 10 fois dans une solution de coloration. Et enfin, cinq fois dans la solution de contre-teinture. Rincez doucement à l’eau.

Laissez les lames sécher complètement à l’air libre avant de les observer au microscope avant le début de l’expérience de conditionnement, pré-exposez les femelles aux chambres de conditionnement avec les lumières de la maison allumées pendant 20 à 30 minutes par jour pendant trois jours pour leur permettre de s’acclimater à l’environnement. Attribuez la boîte à laquelle ils sont pré-exposés comme chambre pour l’étude. Nettoyez soigneusement les boîtes entre les séances et les animaux pour éliminer les odeurs, car elles peuvent affecter le comportement et le cycle de stress EST.

Une fois qu’il est vérifié que les animaux sont dans la phase d’œstrus du cycle supplémentaire EST, commencez la phase de conditionnement d’habituation. Prenez des mesures de base de la congélation avant le stimulus de la première condition de tonalité en mesurant les secondes pendant lesquelles l’animal passe un mobile pendant le stimulus. En l’absence d’intervalle de temps, calculez le pourcentage de blocage en divisant la seconde passée immobile par la durée de l’essai.

Pour effectuer un entraînement à l’extinction pendant la phase œstrale de l’EM, conditionnez les rats dans leur dernier jour d’ESTRO comme déterminé par écouvillonnage. Placez les animaux dans la chambre de conditionnement et effectuez un essai d’accoutumance seul en CS. Induisez une tonalité CS pendant 30 secondes.

Après avoir attendu en moyenne trois minutes avant le prochain essai, répétez l’essai de CS seul quatre fois de plus pour un total de cinq essais avant le conditionnement. Connectez le sol de la grille d’amortisseurs de pied à un générateur de stimulation électrique. Utilisez un niveau de stimulation de 0,5 à 0,6 milliampères comme stimulus inconditionné ou US et une tonalité de quatre kilohertz de 80 décibels comme CS immédiatement après la séance d’habituation.

Commencez les essais de conditionnement de la peur CS US appariés en présentant une 32e tonalité CS, suivie d’un choc US de 0,5 seconde séparé d’un intervalle d’environ trois minutes entre les essais. Répétez l’essai en binôme six fois de plus à la fin de la séance de conditionnement. Retournez les animaux dans leurs cages d’origine et à l’animalerie jusqu’au lendemain, le deuxième jour.

Après l’écouvillonnage et l’identification de la phase œstrale EM pour tous les animaux qui ont subi le premier jour du protocole, préparez suffisamment d’œstradiol dans de l’huile de sésame ou une solution saline à 0,9 % pour que chaque animal reçoive une dose de 15 microgrammes par kilogramme pour administrer l’hormone par voie sous-cutanée. Soulevez la peau lâche entre l’omoplate par le cou en pinçant doucement et insérez la seringue dans le triangle formé par les plis de la peau. 30 minutes après que les animaux aient reçu leurs injections, placez-les dans les chambres de conditionnement et commencez l’entraînement à l’extinction en effectuant 20 CS seuls.

Des essais composés chacun d’un 32e ton de quatre kilohertz et 80 décibels avec environ trois minutes entre les essais 24 heures plus tard. Le troisième jour, frottez les animaux qui ont terminé les séances les premier et deuxième jours après avoir placé les animaux dans les chambres de conditionnement qui leur ont été attribuées. Commencez la séance de rappel d’extinction en effectuant trois essais de C seul avec environ trois minutes entre les essais à la fin de la séance de rappel, retournez les animaux dans leurs cages d’origine et analysez les données selon le protocole textuel de ce protocole d’extinction de la peur.

Les animaux qui se sont bien éteints et ont conservé le souvenir de l’entraînement à l’extinction ont montré une faible peur le dernier jour des tests comportementaux lors du rappel d’extinction. Comme démontré ici, les rats mâles et femelles ne diffèrent pas significativement dans l’expression de la peur conditionnée. Au cours de chaque phase, une différence entre les sexes devient évidente lorsque les animaux sont analysés séparément en groupes de phase ES à œstrogène élevé et faible.

Ce graphique montre l’effet de la phase œstrologique sur la mémoire d’extinction de la peur, des rats femelles qui subissent un entraînement d’extinction pendant la phase à faible teneur en œstrogènes du cycle supplémentaire EST. Ne vous souvenez pas de la mémoire d’extinction du troisième jour ainsi que de ceux formés aux PROE. Cependant, lorsque les femelles metri sont injectées par voie sous-cutanée avec une dose de 15 microgrammes par kilogramme d’œstradiol avant l’extinction, la consolidation de l’apprentissage de la peur de la mémoire d’extinction semble être améliorée, comme le démontre le faible taux de congélation pendant le rappel de l’extinction.

Par conséquent, ces données indiquent que les hormones gonadiques peuvent moduler le rappel de l’extinction de la peur, et également médier les différences sexuelles dans les comportements d’extinction de la peur conditionnée. Des procédures supplémentaires telles que la chirurgie de canulation et l’immunohistochimie peuvent être effectuées en conjonction avec la méthode décrite ici pour répondre à des questions telles que : où l’œstradiol agit-il dans le cerveau pour moduler la peur, l’extinction, la consolidation de la mémoire, et comment l’œstradiol modifie-t-il l’activité neuronale dans ces régions ? Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une compréhension claire de la façon d’étudier le recyclage naturel des rats femelles et l’influence de l’œstradiol dans l’extension ex claire.