Limb distance ischémique préconditionnement: Une technique neuroprotecteur chez les rongeurs

L’objectif global de cette procédure est de provoquer une ischémie dans le membre postérieur qui conditionne les tissus distants contre le stress ultérieur. Par exemple, la rétine contre les lésions lumineuses. Ceci est accompli en calibrant d’abord le manomètre manuel Ingle mom.

Ensuite, l’animal est anesthésié et placé sur un coussin chauffant. Ensuite, la patte arrière de l’animal est étendue et le brassard est placé en position. Enfin, l’ischémie à distance est réalisée en gonflant le brassard avec la pompe, en dégonflant le brassard et en répétant le processus une deuxième fois.

En fin de compte, lorsqu’elle est appliquée avant une lésion légère, l’ischémie à distance est utilisée pour montrer une amélioration de la fonction rétinienne et du nombre de photorécepteurs subissant une apoptose. Cette méthode peut répondre à des questions clés dans le domaine des neurosciences, telles que comment l’autoprotection est induite avec le préconditionnement ischémique à distance pour effectuer un suivi de la température de la peau en temps réel. Ouvrez le logiciel d’enregistrement de la température, ajustez le réglage de la température entre 30 et 35 degrés Celsius et la fréquence d’échantillonnage à toutes les 100 millisecondes à l’aide d’un brassard néonatal de taille deux pour un rat de 250 à 550 grammes, connectez le brassard au manomètre fome à l’aide d’un adaptateur si nécessaire.

Ensuite, dégonflez le brassard en desserrant la soupape de décharge d’air ou en déconnectant le tube du brassard de l’adaptateur. Assurez-vous qu’il ne reste aucune pression dans le tube et que l’aiguille du manomètre repose à zéro à l’intérieur du rectangle ovale. Ensuite, pour vérifier la pression entre le tube, le manomètre et la toux.

Utilisez de douces pompes de l’ampoule de gonflage pour gonfler le brassard jusqu’à ce que le manomètre indique 100 milligrammes de mercure. Après s’être assuré que la pression reste constante, dégonflez le brassard en ouvrant lentement la soupape de décharge d’air une fois la tombée de la nuit, en adaptant l’animal selon le protocole textuel. Confirmez qu’il a un bon tonus musculaire en pinçant le membre postérieur supérieur pour confirmer qu’il y a suffisamment de muscle présent.

Après avoir mis l’animal sous sédatif conformément au protocole textuel, vérifiez la profondeur de l’anesthésie en étendant la jambe et en pinçant la peau sous le pied. Appliquez ensuite des larmes artificielles. Placez le rat sur un coussin chauffant ou un tube de chauffe-eau en position couchée, les coussinets des membres inférieurs vers le haut.

Pour appliquer la sonde de température cutanée, étendez la patte du rat qui subira une ischémie et placez fermement la sonde cutanée sur le coussinet du pied, en la positionnant de manière à maximiser le contact entre la sonde de température et la peau. Utilisez ensuite du ruban adhésif pour fixer la sonde. Vérifiez l’emplacement de la sonde cutanée en suivant la température sur le logiciel d’enregistrement de la température pendant une à deux minutes.

Assurez-vous que la température de la peau est comprise entre 30 et 34 degrés Celsius et qu’elle reste stable. Sinon, ajustez la sonde pour effectuer une ischémie à distance. Commencez avec un brassard dégonflé et assurez-vous que la soupape de pression d’air est fermée.

Étendez la jambe et encerclez lâchement le brassard sur le membre postérieur supérieur. Utilisez l’index et le pouce pour étendre la jambe et les doigts inférieurs afin de maintenir le poignet desserré en position. Maintenant, augmentez la pression du brassard à 160 millimètres de mercure.

Une fois la pression correcte atteinte, démarrez la minuterie et les enregistrements de la température des pieds. La température du pied doit chuter de deux degrés Celsius après cinq minutes de pression constante, pomper à plusieurs reprises le bulbe de gonflage en courtes rafales pour maintenir la pression souhaitée du ballonnet et maintenir la position du ballonnet au-dessus du genou de l’animal tout au long de l’ischémie. Administrez en continu une ischémie à distance pendant cinq minutes.

Relâchez ensuite la soupape de pression d’air pour une reperfusion de cinq minutes avant de répéter l’ischémie à distance. Une fois la procédure terminée, dégonflez la pression du brassard en desserrant la soupape de pression d’air. Vérifiez l’évolution de la température au cours du protocole d’ischémie.

Relâchez ensuite le brassard. Placez l’animal sur un coussin chauffant et continuez à surveiller jusqu’à ce qu’il soit ambulatoire. Lorsque l’animal se promène, ramenez-le dans son logement.

Enfin, effectuez les blessures légères et effectuez le test du tunnel. Selon le protocole textuel, comme on le voit clairement ici, un brassard de tensiomètre placé au-dessus du genou élevé à plus de 160 millimètres de mercure arrête le flux sanguin vers le membre postérieur. L’absence de circulation sanguine a entraîné une réduction de la température des pattes qui était inférieure à la température centrale de l’animal, et qui a augmenté après le dégonflage du ballonnet, ce qui correspond à la condition nécessaire pour le RIP.

Dans cette figure, l’électrorétinogramme ou ERG adapté à l’obscurité d’un rat normal faiblement élevé a montré une grande réponse photoréceptrice et rétinienne interne à un flash lumineux une semaine après une lésion par la lumière. Les enregistrements ERG ont montré une réduction sévère de l’amplitude par rapport aux témoins, reflétant la perte de photorécepteurs, cependant, en préconditionnant le membre postérieur avec une ischémie en utilisant un protocole de reperfusion de deux par cinq minutes immédiatement avant que l’ischémie ne protège les photorécepteurs des lésions légères. Ce panel montre que les amplitudes R-I-P-E-R-G étaient supérieures à celles des lésions légères seules, avec une légère réduction de l’onde A.

Enfin, un brassard placé sous le genou ne protège pas les photorécepteurs des lésions lumineuses, comme en témoignent les amplitudes réduites de l’ERG observées ici. Des méthodes telles que le préconditionnement ischémique à distance peuvent être mises en œuvre afin de répondre à des questions supplémentaires telles que quels sont les mécanismes de la neuroprotection endogène et comment l’ischémie à distance peut être appliquée pour améliorer la fonction des lésions et de la dégénérescence du SNC.