Name: Règlement des éléments nutritifs par lalimentation continue pour lexpansion à grande échelle de cellules de mammifères en Spheroids (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: Découvrez la régulation des nutriments par alimentation continue ajustée pour cultiver des sphéroïdes de cellules de mammifères à grande échelle. Cette méthode améliore les taux de croissance et la distribution uniforme des nutriments.

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Les auteurs remercient Michael Garwood et Sam Stein pour leurs commentaires utiles, ainsi que Kristen M. Maynard pour leur aide dans la préparation du manuscrit.

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Générer des produits de cellules de mammifères pour la production d&#39;agents biologiques et des thérapies cellulaires nécessite la culture et la surveillance des cellules de mammifères à grande échelle 55-58. En outre, ces applications nécessitent des conditions de culture définies et validées. Il suffit d&#39;augmenter le volume des cellules en utilisant des technologies de recherche ne sera pas répondre à toutes ces exigences. moyennes modifications manuelles causant des fluctuations...

Afin de générer un grand nombre de cellules humaines viables et fonctionnelles pour la transplantation, la régulation des conditions de culture est impératif. Épuisement des nutriments, ainsi que l&#39; accumulation de déchets métaboliques sont des contributeurs majeurs à la sénescence et métaboliques changements qui réduisent la qualité du produit de la cellule 1-3. Cette procédure présente un procédé de culture de cellules de mammifère dans sphéroïdes en utilisant un bioréacteur agité associé à un système d&#39;alimentation de perfusion ajustée pour réguler le taux de glucose dans une gamme physiologique 4 pendant toute la durée de la culture. Aux fins de ces études, la gamme physiologique a été définie comme étant comprise entre 100 et 200 mg / dl. Les mêmes procédés peuvent être utilisés pour réguler d&#39;autres éléments nutritifs et de déchets métaboliques tels que le lactate. cultures statiques dans des petits volumes (1 - 30 ml) sont généralement utilisés dans le cadre du laboratoire de conserver et de différencier les lignées cellulaires pour experimefins NTAL. Cellule repiquage est réalisé avec des changements de milieu complet, au besoin, à intervalles réguliers. La plupart du milieu de culture &quot;classique&quot; a une concentration en glucose élevée (450 mg / dl pour DMEM utilisé dans ces études) pour permettre des changements moyens moins fréquents, sans risque de limitations en nutriments. Cependant, ce procédé par lots alimentation nécessite toujours une manipulation fréquente, présente une variabilité dans l&#39;environnement cellulaire et augmente le risque de contamination de 5 à 9. Bioréacteurs de suspension brassés (SSB) fournissent un meilleur mélange et une diminution de la manipulation 3,10 - 20, mais comme les cultures statiques, nécessitent moyennes modifications manuelles qui contribuent aux fluctuations potentiellement dommageables dans les niveaux de produits nutritifs et des déchets. Perfusion alimentation des cultures SSB réduit ces problèmes en perfusion continue et l&#39;élimination du milieu, mais de grands changements dans les niveaux de nutriments en raison de la croissance des cellules demeurent un problème. L&#39;utilisation d&#39;un ra d&#39;alimentation ajustéete à partir de calculs de l&#39; utilisation des éléments nutritifs en fonction des besoins cellulaires estimés peut fournir l&#39;environnement cellulaire stable nécessaire pour optimiser la viabilité cellulaire et la fonction 21 - 24. Il y a une abondante littérature décrivant les méthodes de cultures SSB évolutives de cellules de mammifères en particulier pour la culture et l&#39; expansion des cellules pluripotentes 25 - 32, avec d&#39; autres mis l&#39; accent sur l&#39; îlot (beta) cellules 17,33,34, ou la production de produits biologiques 24, 35-38. Beaucoup de ces types cellulaires étudiés peuvent être cultivées dans des cultures sphéroïde, et des procédures spécifiques pour le type de cellule utilisé doit être optimisé avant la mise en œuvre d&#39;un système d&#39;alimentation continue. Dans cette démonstration, un procédé de perfusion d&#39;alimentation a été utilisé pour développer une lignée de cellules bêta cultivées sous forme de sphéroïdes dans un bioréacteur agité 39-43. Le procédé décrit ici fournit unla mise en œuvre directe de l&#39;alimentation des ajustements de taux basés sur des mesures de glucose hors-ligne pour obtenir des conditions de culture ciblées. Réglage de la vitesse d&#39;avance avec cette méthode pour maintenir un niveau de glucose physiologique est montré une augmentation des rendements de cellules. Les cellules de mammifères dépendent d&#39;un nutriment essentiel, le glucose, la production d&#39;énergie, de sorte que l&#39;utilisation de cette lignée cellulaire représente un modèle pour de nombreuses cellules de mammifères cultivées 44. En outre, cette ligne illustre la complexité supplémentaire des cellules bêta, qui sont sensibles aux niveaux de glucose élevés et chroniques 45. Pour cette étude, les cellules ß-TC6 sont autorisés à former des sphéroïdes en culture pour approximer la taille moyenne des îlots de Langerhans in vivo. Le système de bioréacteur à perfusion 17 - 19,21,46 avec un taux d&#39;alimentation adapté à la consommation de glucose, a entraîné le maintien des conditions physiologiques , et les rendements des cellules plus élevées sans modification de la viabilité.

<table><tbody><tr><td>&#946 ; TC-6 Cells</td><td>ATCC, Manassas, VA</td><td>CRL-11506</td><td>Lignée cellulaire d’insulinome de souris (type de cellule adhérente)</td></tr><tr><td>DPBS No Ca, No Mg</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>14190-144</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/14190144 ? ICID=search-14190144">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/14190144 ? ICID=search-14190144</a></td></tr><tr><td>Dulbecco’s Modified Eagles Medium</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td></td><td>Voir ci-dessous pour les numéros de produit&nbsp ;</td></tr><tr><td>DMEM High Glucose (500 mM)</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11965-092</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11965092">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11965092</a></td></tr><tr><td>DMEM Low Glucose (100 mM)</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11885-084</td><td><a href="http ://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11885084%20(note %20that %20this %20medium %20contains %20pyruvate)">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11885084 (notez que ce milieu contient déjà du pyruvate)</a></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>25030081</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081 ? ICID=produit-de-recherche">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081 ? ICID=produit-de-recherche</a></td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11360070</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11360070 ? ICID=produit-de-recherche">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11360070 ? ICID=search-product</a></td></tr><tr><td>Sérum porcin inactivé par la chaleur</td><td>Gibco - Life Technologies</td><td>10082147</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/10082147">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/10082147</a></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>25200056</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25200056 ? ICID=produit-de-recherche">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25200056 ? ICID=search-product</a></td></tr><tr><td>T-150 Flacons traités pour la culture tissulaire</td><td>Corning, Corning, NY</td><td></td><td>430825 http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=430825(Sciences de la vie) & categoryname=</td></tr><tr><td>Incubateur de culture cellulaire NuAire</td><td>Princeton, MN</td><td></td><td>US Autoflow. N’importe quel incubateur de culture cellulaire régulant le CO2 avec chemise d’eau peut être utilisé.</td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td></td><td></td><td>Sorvall RT 7 (Toute centrifugeuse de paillasse similaire peut être utilisée)</td></tr><tr><td>Réfrigérateur</td><td></td><td></td><td>N’importe quel réfrigérateur de laboratoire peut être utilisé (une petite version de table a été utilisée pour ces études)</td></tr><tr><td>1 L Bouteille en verre</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>1395-1L</td><td>N’importe quel fournisseur peut être utilisé. http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=1395-1L(Sciences de la vie) & categoryname=</td></tr><tr><td>2 L Bouteille en verre</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>1395-2L</td><td>N’importe quel fournisseur pourrait être utilisé</td></tr><tr><td>250 ml de bioréacteurs agités&nbsp ;</td><td>Corning, Corning, État de New York</td><td>4500-250</td><td>http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=4500-250(Sciences de la vie) & categoryname=</td></tr><tr><td>Plaque à mélanger</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-496-104A</td><td>N’importe quelle plaque à agiter sans danger pour l’incubateur peut être utilisée, n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>Boîtes de culture tissulaire 100 mm de diamètre</td><td>Nunc, Rochester, NY (Fisher Scientific)</td><td>1256598&nbsp ;</td><td>N’importe quel fournisseur peut être utilisé (commandé via Fisher Sci)</td></tr><tr><td>FALCON 50 ml Tubes coniques</td><td>Falcon, San Jose, CA</td><td>1256598 N’importe</td><td>quel fournisseur pourrait être utilisé</td></tr><tr><td>Delran Plastic Utilisé pour les pièces personnalisées</td><td>McMaster Carr</td><td>Divers</td><td>N’importe quel matériau de choix peut être utilisé, mais Deran est choisi parce qu’il est sans danger pour l’autoclave, non réactif et facile à usiner. http://www.mcmaster.com/#acetal-homopolymer-sheets/=rjrcac</td></tr><tr><td>Tuyau en acier inoxydable pour couvercles personnalisés</td><td>McMaster Carr</td><td>Divers</td><td>N’importe quel fournisseur peut être utilisé. http://www.mcmaster.com/#standard-stainless-steel-tubing/=rjrd91</td></tr><tr><td>Couvercles de bioréacteur Delran modifiés sur mesure pour l’alimentation continue</td><td>Fabriqué</td><td></td> sur mesure <td>Ne connaît aucun fournisseur produisant un produit similaire Couvercles de</td></tr><tr><td>bouteilles en verre modifiés sur mesure pour l’alimentation continue Fabriqués</td><td></td><td>sur mesure</td><td>Certains fournisseurs ( par exemple , Fischer Sci, Corning) fabriquent des produits similaires dans les liens ci-dessous.</td></tr><tr><td>Pompe péristaltique numérique Masterflex</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>EW-77919-25</td><td>N’importe quelle pompe péristaltique de précision peut être utilisée. http://www.coleparmer.com/Product/L_S_Eight_Channel_Four_Roller_ Cartridge_Pump_System_115_230 _VAC/EW-77919-25</td></tr><tr><td>Connecteurs de tubes PVDF (divers)</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>voir le lien</td><td>N’importe quel fournisseur pourrait être utilisé. http://www.coleparmer.com/Category/Cole_Parmer_PVDF_Premium _Luer_Fittings/55889</td></tr><tr><td>Pharmed BPT Tubing L/S 16</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-16</td><td>N’importe quel fournisseur peut être utilisé. http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/WU-06508-16</td></tr><tr><td>Tube BPT armé L/S 14</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-14</td><td>N’importe quel fournisseur peut être utilisé. http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/WU-06508-14</td></tr><tr><td>Tube BPT armé L/S 13</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-13</td><td>N’importe quel fournisseur peut être utilisé. http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/ WU-06508-13</td></tr><tr><td>Millipore Millex GP Membrane PES 0.22 &#181 ; l filtre à seringue stérile (utilisé pour la ventilation et la filtration moyenne)</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGP033RS</td><td>Tout fournisseur peut être utilisé</td></tr><tr><td>25 ml Pipette graduée</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td>N’importe quel fournisseur peut être utilisé, et différentes tailles peuvent être utilisées</td></tr><tr><td>Pipette</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-681-15E</td><td>Tout fournisseur ou produit similaire peut être utilisé</td></tr><tr><td>Hémocytomètre</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-671-6</td><td>N’importe quel fournisseur ou produit similaire peut être utilisé</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Gibco - Life Technologies</td><td>15250-061</td><td>N’importe quel fournisseur ou produit similaire peut être utilisé. https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15250061</td></tr><tr><td>Microscope à lumière inversée</td><td>Leica</td><td></td><td>N’importe quel fournisseur ou produit similaire peut être utilisé</td></tr><tr><td>One Touch Ultra Blood Glucose</td><td>Meter Fisher Scientific</td><td>22-029-293</td><td>Tout fournisseur ou produit similaire peut être utilisé (par ex. , Bayer)</td></tr><tr><td>One Touch Ultra-Strips</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-029-292&nbsp ;</td><td>Tout fournisseur ou produit similaire peut être utilisé (par ex. , Bayer)</td></tr></tbody></table>

règlement des éléments nutritifs par l&#39;alimentation continue pour l&#39;expansion à grande échelle de cellules de mammifères en spheroids

Nutrient Regulation by Continuous Feeding for Large-scale Expansion of Mammalian Cells in Spheroids

Dans cette démonstration, des sphéroïdes formés à partir de la lignée cellulaire d’insulinome β-TC6 ont été cultivés comme modèle de fabrication d’un produit de cellules d’îlots de mariés afin de démontrer comment la régulation des niveaux de nutriments peut améliorer les rendements cellulaires. Dans des études antérieures, les bioréacteurs ont facilité l’augmentation des volumes de culture par rapport aux cultures statiques, mais aucune augmentation des rendements cellulaires n’a été observée. Les limitations de nutriments clés tels que le glucose, qui ont été consommés entre les repas par lots, peuvent entraîner des limitations de l’expansion cellulaire. De grandes fluctuations des taux de glucose ont été observées, malgré l’augmentation des concentrations de glucose dans les milieux. L’utilisation de systèmes d’alimentation continue a éliminé les fluctuations des niveaux de glucose et amélioré les taux de croissance cellulaire par rapport aux méthodes de culture statique et SSB alimentées par lots. Des augmentations supplémentaires des taux de croissance ont été observées en ajustant le taux d’alimentation en fonction de la consommation de nutriments calculée, ce qui a permis de maintenir le glucose physiologique pendant trois semaines en culture. Cette méthode peut également être adaptée à d’autres types de cellules.

Les niveaux et les fluctuations de la glycémie moyenne Limiter l' expansion des cellules dans les cultures standard SSB Les niveaux de glucose dans des cultures statiques varient et les cultures SSB pendant toute la période de culture de 3. Ces fluctuations intensifient avec l'augmentation du nombre de cellules au cours de la période de culture de 21 jours et étaient presque identiques dans les de...

La régulation des nutriments à l’aide d’une alimentation ajustée en croissance continue améliore les taux de croissance des sphéroïdes de cellules de mammifères par rapport à l’alimentation intermittente par lots pour les cultures dans des bioréacteurs en suspension agitée. Cette étude démontre les méthodes requises pour établir des cultures simples nourries au taux ajusté.

Règlement des éléments nutritifs par l&#39;alimentation continue pour l&#39;expansion à grande échelle de cellules de mammifères en Spheroids

In this demonstration, spheroids formed from the &#946;-TC6 insulinoma cell line were cultured as a model of manufacturing a mammalian islet cell product ...

L’objectif global de ce processus est de cultiver un grand nombre de cellules dans des conditions nutritionnelles contrôlées. Utilisation d’équipements conventionnels trouvés dans un laboratoire de culture cellulaire. Les algorithmes associés permettent le contrôle et la manipulation des nutriments dans des plages expérimentales.Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés pour les applications de culture cellulaire à grande échelle. Comme les thérapies cellulaires humaines. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet la culture de cellules à grande échelle avec une distribution uniforme des nutriments et des gaz.Cela permet des densités cellulaires plus élevées que les cultures cellulaires statiques ou nourries en vrac, augmente le rendement et réduit la perte de cellules. Cela peut être fait avec des équipements que l’on trouve couramment dans la plupart des laboratoires de culture cellulaire. La démonstration visuelle de cette méthode peut être utile aux nouveaux chercheurs, car ces techniques utilisées peuvent être difficiles à maîtriser, en raison du grand nombre d’étapes qui doivent être préformées dans un ordre spécifique dans des conditions stériles.Collectez les cinq composants primaires nécessaires au système d’alimentation. Un réservoir moyen, une pompe péristaltique, un bioréacteur agité, un réservoir de déchets et un ensemble d’échantillonnage de tubes conçus sur mesure. Établissez le réservoir moyen à l’aide d’une bouteille en verre d’un litre.Le réservoir à déchets à l’aide d’une bouteille en verre de deux litres. Le bioréacteur agité à l’aide d’un réacteur en verre d’un volume de 250 ml. Utilisez une pompe péristaltique numérique ou une pompe similaire avec une tête de pompe à huit canaux pour contrôler l’échange de fluide.Assemblez le réservoir et les couvercles du bioréacteur modifié à partir de plastique dur et autoclave. Avec des orifices de passage de tuyaux en acier inoxydable pour assurer la ventilation à travers des filtres stériles et permettre le transfert de fluide entre les réservoirs et les bioréacteurs. Fixez un tube d’évacuation fabriqué à partir de tubes d’aération en verre poreux au couvercle du bioréacteur à suspension agitée modifiée.Assemblez des ensembles de tubulures de perfusion autoclavables à partir de connecteurs de tubulure en polyfluorure de vinylidène et de tubulures de pompe péristaltique durables. La longueur de la section dépend de la distance entre les différents composants. Assemblez la conduite d’alimentation à l’aide de deux diamètres de tube.Utilisez L/S 14 pour le tube primaire qui couvrira la distance entre le bioréacteur et le réservoir de milieu. Insérez une longueur de tube L/S 13 au milieu de la longueur du tube pour la section de pompe, à l’aide des adaptateurs PVDF appropriés. Utilisez des adaptateurs de tubes barbelés en PVDF standard pour joindre deux morceaux de tube L/S 14 de chaque côté du tube de la section de pompe plus courte.Assemblez la section de tuyauterie pour l’évacuation des déchets à l’aide d’un tube L/S 16 de plus grand diamètre et insérez une courte section de tube L/S 14 au milieu pour la section de pompage. Cela se fait de la même manière que l’assemblage de la ligne d’alimentation à l’aide d’adaptateurs à tuyaux cannelés en PVDF. Assemblez le dernier composant de l’ensemble de tubes en construisant l’ensemble à partir de trois longueurs de tubes courts L/S 14.Reliés ensemble par un connecteur HVDF de type T et deux petits colliers de serrage sur deux des longueurs de tube. Connectez l’ensemble d’échantillon au connecteur d’échantillon en acier inoxydable fixé sur le couvercle du bioréacteur. Après la stérilisation, un filtre à gaz stérile sera fixé pour l’évacuation du gaz à l’une des longueurs serrées.L’autre est utilisé pour la connexion à une seringue de prélèvement stérile. Autoclave l’ensemble d’échantillonnage pendant qu’il est connecté au bioréacteur, avant de commencer l’expérience, comme décrit dans le protocole textuel. Utilisez cet ensemble pour collecter des échantillons stériles du bioréacteur au besoin, sans perturber le processus d’alimentation en continu.Fixez les évents stériles aux endroits appropriés sur les couvercles de la fiole tournante, du récipient moyen, des récipients à déchets et des orifices d’échantillonnage. Cultivez et récoltez les cellules comme décrit dans le protocole textuel. Laissez les cellules incuber à température ambiante dans de la trypsine pendant deux à trois minutes dans une enceinte de biosécurité, puis recueillez-les dans un tube conique.Un petit échantillon cellulaire est ensuite prélevé et coloré au bleu trypan. Comptez la densité cellulaire à l’aide d’un microscope et d’un hémocytomètre standard avec coloration au bleu de trypan, comme décrit dans le protocole textuel. Ajouter le nombre total souhaité de cellules dans des bioréacteurs stériles en suspension agitée pour chaque condition.Ajoutez le milieu dans le bioréacteur en suspension agitée à l’aide d’une pipette pour atteindre le volume total de culture souhaité. Déplacez le bioréacteur à suspension agitée avec des cellules vers une plaque d’agitation à l’intérieur d’un incubateur de culture cellulaire. Cultivez des cellules dans les bioréacteurs sans les nourrir pendant trois jours à 37 degrés Celsius, avec 5 % de dioxyde de carbone, 100 % d’humidité relative et un taux d’agitation de 70 tr/min pour permettre la formation de sphéroïdes.Après la formation du sphéroïde, retirez le bioréacteur en suspension agitée de l’incubateur. Assembler les composants du système d’alimentation en continu dans une enceinte de sécurité biologique. Remplissez d’abord un réservoir de milieu frais avec le milieu de culture souhaité, puis connectez-le d’un côté de la conduite d’alimentation.Assurez-vous également que le réservoir de milieu frais est correctement ventilé avec un filtre stérile. Un filtre stérile doit être remplacé sur l’orifice d’entrée du bioréacteur pour filtrer le milieu avant qu’il n’entre dans le bioréacteur. Raccordez la conduite d’évacuation au réservoir de déchets moyen et assurez-vous que le réservoir de déchets est correctement ventilé avec un filtre stérile.Placez le bioréacteur à suspension agitée sur la plaque d’agitation à l’intérieur de l’incubateur en utilisant les mêmes paramètres de culture que pour la formation de sphéroïdes. Placez le réservoir de fluide frais dans un mini-réfrigérateur à proximité. Assurez-vous que les conduites d’alimentation peuvent sortir du réfrigérateur sans empêcher les portes de se fermer.Il est également essentiel que les conduites d’alimentation ne soient pas pincées par les portes du réfrigérateur ou de l’incubateur. Le réservoir de déchets peut être placé sur la paillasse à l’extérieur de l’incubateur à un endroit pratique. Passez les extrémités restantes du tube dans l’incubateur et connectez la conduite d’alimentation au filtre sur l’orifice d’entrée du bioréacteur.Connectez ensuite la conduite de vidange à l’orifice du tube de sortie. Ensuite, placez la section de pompe des conduites d’alimentation et de déchets dans la tête de pompe, en assurant la bonne orientation afin que les conduites d’alimentation pompent le fluide du réservoir de fluide frais dans le bioréacteur à suspension agitée, et les conduites de déchets pompent le milieu du bioréacteur et vers le réservoir de déchets de milieu. Calculez la vitesse d’avance à l’aide de l’équation de vitesse d’avance ajustée comme décrit dans le protocole texte.Utilisez l’échantillon le plus récent avec des informations sur le nombre de cellules, ainsi que la prédiction du taux de croissance et les mesures de glucose moyennes pour estimer le taux d’alimentation nécessaire pour maintenir la concentration de glucose souhaitée dans la culture. Réglez la vitesse de la pompe en fonction de la vitesse d’avance calculée. Répétez le calcul de la vitesse d’avance et ajustez la vitesse de la pompe pour chaque point d’échantillonnage.Des mesures de glucose en milieu moyen sont présentées à partir de cultures de sphéroïdes d’insulinomes Beta-TC6 utilisant des bioréacteurs en suspension agités statiques et des méthodes de culture de bioréacteurs en suspension agitée alimentées en continu. Alimentation avec un milieu standard à haute teneur en glucose. L’alimentation continue est capable d’éliminer les fluctuations de glucose, mais les niveaux moyens de glucose dans le milieu changent radicalement pendant la période de culture et sont bien au-dessus de la plage physiologique.L’alimentation ajustée est capable d’éliminer les fluctuations, ainsi que de maintenir les concentrations de glucose près des niveaux physiologiques pendant toute la durée de la période de culture. Ici, la croissance cellulaire signalée comme une variation du pli du nombre de cellules au cours de la période de culture de 21 jours est comparée pour les bioréacteurs en suspension agités avec des changements réguliers de milieu, les cultures de bioréacteurs en suspension agitée à vitesse d’alimentation constante et les cultures de bioréacteurs en suspension agitée à taux d’alimentation ajusté. À la suite de cette procédure, d’autres méthodes, telles que des conditions variables, peuvent être mises en œuvre afin de répondre à des questions supplémentaires, telles que les besoins en nutriments pour de nouvelles lignées cellulaires ou des résultats expérimentaux spécifiques.Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la biologie cellulaire pour explorer les besoins métaboliques dans les cellules d’humains atteints de cancer ou d’autres troubles. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’assembler un système de culture cellulaire de profusion pour mieux contrôler les conditions de culture et maximiser les rendements cellulaires. N’oubliez pas que travailler avec des cellules humaines peut être extrêmement dangereux et que des précautions telles que la protection contre les agents pathogènes transmissibles par le sang doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.

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Les sphéroïdes sont un type de modèle de culture cellulaire 3D utilisé pour représenter plus précisément l’environnement d’une cellule par rapport aux modèles monocouches de culture cellulaire 2D. Dans l’exemple de protocole, nous verrons les scientifiques générer des sphéroïdes à partir d’une lignée cellulaire de cancer colorectal et appliquer l’imagerie de cellules vivantes pour suivre la croissance des sphéroïdes.

Génération de sphéroïdes à partir de lignées cellulaires : une méthode de culture cellulaire tridimensionnelle (3D)

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Ici, nous décrivons un protocole rapide et flexible pour la formation de sphéroïdes cellulaires 3D par agrégation cellulaire. Il s’adapte facilement à plusieurs types de cellules et peut être utilisé dans une variété d’applications, notamment la migration cellulaire, l’invasion ou les tests d’anoïkis, ainsi que pour l’imagerie et la quantification des interactions cellule-matrice.

Une méthode d&#39;agrégation cellulaire efficace et flexible pour 3D Spheroid production

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Génération de cellules épithéliales nasales humaines sphéroïdes pour mucoviscidose individualisé Transmembrane Conductance Regulator étude

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Une stratégie en deux étapes qui combine la modification épigénétique et les indices biomécaniques pour générer des cellules pluripotentes de mammifères

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