Name: Lutilisation de la boîte de Puzzle comme un moyen dévaluer lefficacité denrichissement du milieu (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Découvrez comment évaluer l'enrichissement environnemental sur la cognition chez la souris avec la méthode de la boîte de Puzzle. Cette technique simple et flexible permet de mesurer les performances cognitives et d'étudier les effets protecteurs contre les maladies neurodégénératives.

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Les auteurs n’ont aucune reconnaissance.

Déclaration éthique: Toutes les procédures ont été approuvées par le Comité d'éthique animale de l'Université de Sydney et conforme à Conseil de recherches médicales de lignes directrices Australie Santé nationale et du. Procédures ont été effectuées sur des souris C57 / BL6J qui ont été élevés à l'Université de Sydney Facilité Bosch rongeurs. Toutes les souris ont été logés dans un seul local suffisamment ventilé à 21 ° C de température ambiante sur un cycle lumière-obscurité de 12 h avec des lumières sur au 0600 heures dans des cages à ventilation individuelle avec accès à volonté à la nourriture sèche et l'eau. Femelles en fin de grossesse ont été assignés au hasard à des conditions standard ou enrichis environnement logement. 1. Logement (taux d'enrichissement): <ol><li> Obtenir 4 fin de la grossesse chez les souris femelles adultes. Affecter aléatoirement 2 à l'état standard et placer chacun d'eux dans une cage de souris standard propre (dimensions 391 x 199 globaux x 160 mm) contenant un igloo de la souris rouge. Pour la condition enrichi, placez le REMAINING deux souris dans une seule cage de rat taille propre (encombrement 462 x 403 x 404 mm). </li><li> Dans la cage d'enrichissement, placer une variété d'objets conçus pour augmenter la stimulation sensorielle et motrice (par exemple roues de course, des stimuli visuels, des boules de coton parfumées, des bandes Velcro). </li><li> Tous les 2 à 3 jours environ déplacer ces objets à l'intérieur de la cage; actualiser celles qui ont été détruites. </li><li> Après le sevrage à 21 jours après la naissance, les animaux de sexe et le lieu dans un logement distinct mâle-femelle compatible avec l'état de l'environnement, ils ont été soulevées. Pour la condition enrichi assurer qu'il ya entre 3 et 10 souris par cage avec deux et cinq souris pour la norme. Commencer les tests de comportement une fois les animaux atteignent l'âge adulte (12 à 14 semaines d'âge). </li></ol> 2. Construction de la boîte de Puzzle <ol><li> Obtenir six morceaux de acrylique blanc (ou autre matériau non poreux): une 750 x 280 mm, deux 280 x 250 mm, 750 x 250 deux mm et un 150 x 280 mm (voir la figure 1). </li><li> Obtenir une pièce d'acrylique noir 280 x 250 mm, avec une ouverture carrée 40 x 40 mm coupé en un côté de cette pièce (voir Figure 1). </li><li> Assemblez la boîte de puzzle comme suit: utiliser la pièce 750 mm x 280 que le fond de la boîte, utiliser 280 x 250 mm pièces que les extrémités de la boîte, et les 750 x 250 mm pièces que les côtés de la boîte. </li><li> Mesurer 150 mm dans la boîte d'un bout, et placer la pièce noire de l'acrylique dans la boîte de sorte qu'il divise en deux compartiments (une grande, une petite) avec la chasse d'ouverture avec le fond de la boîte. </li><li> Prenez le morceau de mm acrylique blanc 150 x 280 et le placer au sommet de la plus petite compartiment de la boîte en se assurant qu'il couvre cette zone complètement, fournissant un "objectif-box" chambre noire. Fixez ce morceau de acrylique pour le corps de la boîte principale par des charnières, ou à laisser libre d'être complètement enlevée lors de tests comportementaux. </li><li> Prenez trois morceaux de acrylique (trois 4 x 120 mm) et rejoindre pour faire un "u-Shap«canal éd. </li></ol><img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52225/52225fig1highres.jpg" width="500"> Figure 1: Schéma de la tâche Puzzle Box. La boîte de Puzzle est une boîte en acrylique comportant un espace plein champ (600 x 280 mm) et une zone abritée objectif-box (150 x 280 mm), mesurant 750 x 280 mm en tout. A 40 x 40 mm d'ouverture dans la partition (gris) séparant les deux zones permet aux animaux d'accéder à la zone de but boîte couverte de plein champ. Cette ouverture est bloqué avec des obstacles de plus en plus difficiles à éliminer que les tests progresse. Les animaux sont soumis à un protocole de cinq jours, composé de quatre conditions d'obstruction avec trois essais pour chaque condition. 3. Fonctionnement du Groupe Puzzle Box <ol><li> Nettoyer soigneusement la boîte de puzzle avec 70% d'alcool. Répétez cette étape entre chaque animal testé. </li><li> Placez un igloo de la souris rouge propre au sein de l'objectif-box area de la boîte de Puzzle, et remplacer le couvercle sur la boîte de but. </li><li> Se il est une condition de l'obstruction à l'essai, placer l'obstruction au sein de la porte de la boîte de but (voir Figure 2). </li><li> Placez la souris testée dans la section en plein champ de la boîte de Puzzle, orientée vers la boîte de but, et à l'extrémité la plus éloignée de la boîte de but. </li><li> Enregistrer le temps requis pour les quatre pattes de l'animal à entrer dans la section de la boîte de Puzzle but boîte. </li><li> Si un animal ne entre pas dans la boîte de but, mettre fin à l'essai une fois que le délai fixé est atteint (voir le tableau 1). </li><li> Une fois un procès est terminé, enlever l'animal de la boîte de Puzzle et le placer dans une cage de maintien séparée jusqu'à la prochaine procès commence. Gardez un écart de 60 à 180 sec entre les essais pour chaque animal. </li><li> Pour chaque animal, effectuer trois essais par jour pendant cinq jours consécutifs de test, avec quatre conditions d'obstruction et trois essais de chaque état. Le troisième trial d'un état ​​d'obstruction donnée doit toujours administré le jour suivant (voir tableau 1). </li></ol><img alt="Tableau 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52225/52225table1.jpg" width="500"> Tableau 1: Schéma de la tâche Puzzle Box. La tâche Puzzle Box est exécuté pendant cinq jours, et se compose de quatre conditions d'obstruction. Il existe trois essais sur chacun des quatre premiers jours, et une sur le cinquième jour. Chaque condition d'obstruction a trois essais; les deux premières sur une journée, et le troisième jour suivant immédiatement. Le premier procès d'un état d'obstruction vise à tester la capacité de résolution de problèmes d'origine, le second procès examine l'acquisition de la tâche et le renforcement et le troisième essai est utilisé comme un test pour la rétention de la solution et de rappel. <img alt="Figure 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52225/52225fig2highres.jpg" width="600"> Figure 2: Entraverconditions d'ions au sein de la tâche Puzzle Box. Schémas de l'arène Puzzle Box et les conditions d'obstruction utilisées dans cette étude. (A) Condition 0 (C0), sans obstruction présent dans la porte entre le champ ouvert et zones objectif-Box. (B) Condition 1 (C1 ), avec un "u en forme de" canaux présents dans la porte entre le champ ouvert et zones objectif-box. (C) Condition 2 (C2), où le canal est rempli d'une litière propre. (D) Condition 3 (C3 ), avec une "prise de tissu" présent dans la porte entre le champ ouvert et zones objectif-box. (E) Condition 4 (C4) avec un "bouchon de mousse" présent dans la porte entre le champ ouvert et objectif-box zones. Dimensions de l'arène sont selon énumérés dans Méthodes et Figure 1. 4. Interprétation des données <ol><li> Représenter des données soit comme temps pris pour comcomplète le procès (y compris les essais nuls où les animaux ne ont pas terminé la tâche dans le délai prévu) ou que le nombre d'essais nuls. </li><li> Utilisez un ANOVA à mesures répétées pour évaluer l'effet des conditions de logement sur la performance au sein de la boîte de puzzle, avec le type d'obstruction / condition (C) et le numéro de tâche (T) facteurs intra-sujets et le niveau d'enrichissement (standard par rapport enrichi) entre-sujets facteur . </li></ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Les données présentées démontrent que la boîte de puzzle peut être utilisé efficacement pour évaluer l&#39;impact de l&#39;EE. Souris élevés dans des environnements enrichis régulièrement pris beaucoup moins de temps pour résoudre les énigmes d&#39;obstruction dans ce test de comportement que ne animaux élevés dans des conditions de laboratoire standard. En outre, cette différence était plus importante dans le premier procès pour trois des quatre conditions testées, suggérant EE a une plus grande influence sur la capaci...

Enrichissement de l&#39;environnement (EE) peut être défini comme un cadre qui fournissent des animaux avec des possibilités accrues d&#39;interaction sociale, l&#39;activité motrice, et une plus grande stimulation sensorielle que d&#39;habitude connu dans un environment.EE standard de laboratoire a été démontré qu&#39;elle affecte toujours le comportement des animaux, entraînant des changements tels que la réduction du stress et de l&#39;activité liée à l&#39;anxiété 8-10, l&#39;amélioration des performances dans les tâches d&#39;apprentissage et de mémoire 8,11, l&#39;apparition précoce de la coordination motrice et activité exploratoire 11, les changements dans les soins maternels 8 ainsi que la résistance à 12 substances addictives 15. En outre, EE a été révélé pour améliorer les effets de troubles neurodégénératifs, de retarder l&#39;apparition et la diminution de la sévérité des symptômes chez les modèles animaux de la maladie de Huntington 1-4,16, la maladie de Parkinson 17 et 18 la maladie d&#39;Alzheimer. Ces changements Correlier avec les modifications anatomiques et moléculaires EE est connue pour entraîner tout le cerveau. Les animaux élevés dans des environnements enrichis des premiers stades de développement montrent une myriade de changements neuronaux, y compris une augmentation du poids du cerveau et de l&#39;épaisseur corticale, dendritique ramification 9,2-22 et la densité synaptique 23. EE peut modifier à la fois le niveau et le calendrier de l&#39;expression du facteur de croissance 9,24-30, qui a été montré à contribuer au développement accéléré des sensorielle 25,26,28,29, mnémonique 30, ainsi que des circuits automobiles 31,32. Des travaux antérieurs ont révélé à des conclusions parfois contradictoires lors d&#39;enquêtes sur l&#39;impact de l&#39;EE, sans prendre en compte les différents types d&#39;animaux et environnements utilisés dans les études individuelles 9,24,27,30. Actuellement, il n&#39;y a pas tâche comportementale cohérente et simple qui peut être utilisé pour mesurer l&#39;efficacité des différents paradigmes de l&#39;EE dans différentes souches et specs d&#39;animaux. La tâche Puzzle Box a été conçu comme un test simple pour déterminer problème native d&#39;un animal la capacité de résolution 7. Animaux placés dans l&#39;espace ouvert sont nécessaires pour éliminer les matériaux situés dans une petite ouverture pour accéder à une région / abri couvert obstruction. Chaque sujet est donné trois essais avec le même obstruction afin d&#39;évaluer trois attributs cognitifs différents. Le premier essai donne une indication de base de la capacité de résolution de problèmes inhérente ou natif. Le deuxième procès, exécutez le même jour, donne une indication de la capacité de l&#39;animal à améliorer et donc renforcer les stratégies pour éliminer l&#39;obstruction spécifique. Le troisième procès, menée le lendemain, donne un aperçu de la capacité du sujet à conserver et rappeler la solution appris à la tâche. La motivation pour résoudre ces énigmes &quot;obstruction&quot; par les animaux peut être modifiée, ce qui pourraitévoquant un désir inné d&#39;éviter les champs ouverts et chercher un abri, ainsi que d&#39;un lecteur inhérent à explorer leur environnement 6,7. La multitude de pilotes comportementaux sous-jacents potentiels le désir de résoudre le casse-tête suggère que différentes zones du cerveau sont impliquées dans la médiation de l&#39;exécution des tâches. Des travaux antérieurs ont montré que dans des modèles murins de la schizophrénie, le cortex préfrontal et l&#39;hippocampe sont impliqués dans l&#39;acquisition de cette tâche 5. Une étude de la lésion chez le rat a également révélé un grand nombre de régions du cerveau impliquées dans la performance Puzzle Box, y compris divers noyaux thalamiques, l&#39;hypothalamus, le cervelet, et les structures limbiques. Ensemble, ces résultats indiquent que l&#39;engagement dans cette tâche de résolution problème implique une multitude de structures neuronales associées à la fonction cognitive. La boîte de Puzzle a été utilisé avec succès pour évaluer la capacité de résolution de problème de souris, ainsi que les déficits cognitifs présenté par mmodèles d&#39;urine de la schizophrénie 5-7. Performance sur la tâche a été montré pour être très cohérente, et de corréler bien avec les résultats d&#39;autres tests comportementaux cognitifs 6. Le but de ce travail était donc d&#39;adapter la tâche Puzzle Box pour devenir un moyen simple et fiable de déterminer l&#39;efficacité de l&#39;EE.

<table><tbody><tr><td>Panneau</td><td></td><td></td> acrylique noir <td>280 x 250 mm avec une « porte » de 40 x 40 mm découpée sur un côté</td></tr><tr><td>Panneau</td><td></td><td></td> acrylique blanc <td>280 x 250 mm</td></tr><tr><td>Panneau</td><td></td><td></td> acrylique blanc <td>280 x 250 mm</td></tr><tr><td>Panneau</td><td></td><td></td> acrylique blanc <td>750 x 250 mm</td></tr><tr><td>Panneau</td><td></td><td></td> acrylique blanc <td>750 x 250 mm</td></tr><tr><td>Panneau</td><td></td> acrylique blanc<td></td><td>Passage souterrain</td></tr><tr><td></td> en panneau <td></td><td></td><td></td>acrylique blanc</tr> de 150 x 280 mm <tr><td></td><td>3 pièces de plexiglas ou d’acrylique</td> de 40 x 120 mm<td colspan="4">Remarque : Si vous ne pouvez pas accéder au panneau acrylique, le plexiglas ou un matériau non poreux similaire suffira.<td></td><td></td></tr><tr></td></tr><tr><td>Webcam</td><td>Logitech</td><td>C210</td><td>Fixez le toit avec du ruban isolant. Vous pouvez également utiliser un trépied.</td></tr><tr><td>VirtualDub v1.10.4</td><td>VirtualDub</td><td>N/A&nbsp ;</td><td>Logiciel d’enregistrement de vidéos de comportement. Entrée de la webcam.</td></tr><tr><td>TopScan v 3.0</td><td>CleverSys Inc.</td><td>N/A&nbsp ;</td><td>Logiciel de suivi et d’analyse automatisés du comportement de la souris en vue de dessus. Les vidéos capturées sont analysées a posteriori.</td></tr></tbody></table>

l&#39;utilisation de la boîte de puzzle comme un moyen d&#39;évaluer l&#39;efficacité d&#39;enrichissement du milieu

The Use of the Puzzle Box as a Means of Assessing the Efficacy of Environmental Enrichment

L’enrichissement de l’environnement peut influencer considérablement le développement et le fonctionnement des circuits neuronaux. De plus, il a été démontré que l’enrichissement retarde avec succès l’apparition des symptômes dans les modèles de la maladie de Huntington 1 à 4, ce qui suggère que les facteurs environnementaux peuvent provoquer un effet neuroprotecteur contre les dommages progressifs au niveau cellulaire observés dans les troubles neurodégénératifs. Cependant, les façons dont un animal peut être enrichi par l’environnement peuvent varier considérablement. De plus, il n’existe pas de manière simple d’évaluer les effets de l’enrichissement de l’environnement : la plupart des méthodes nécessitent soit des paradigmes comportementaux assez compliqués, soit des analyses anatomiques/physiologiques post-mortem. Ce protocole décrit l’utilisation d’un test comportemental simple et peu coûteux, le Puzzle Box 5-7, comme un moyen robuste de déterminer l’efficacité d’une stimulation sociale, sensorielle et motrice accrue sur des souris par rapport à des cohortes élevées dans des conditions de laboratoire standard. Cette tâche simple de résolution de problèmes tire parti du désir inné d’un rongeur d’éviter les enclos ouverts en cherchant un abri. Les capacités cognitives sont évaluées en ajoutant des obstacles de plus en plus complexes à l’entrée du refuge. Le temps qu’il faut à un sujet donné pour éliminer les obstructions et entrer dans l’abri sert de mesure principale pour l’exécution de la tâche. Cette méthode pourrait fournir un moyen fiable d’évaluer rapidement l’efficacité de différents protocoles d’enrichissement sur la fonction cognitive, ouvrant ainsi la voie à la détermination systématique du rôle que jouent des facteurs environnementaux spécifiques dans le retard de l’apparition des maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives.

Les résultats décrits ici sont un échantillon représentatif, avec des données tirées de plusieurs cohortes constituées de différentes portées. Tous les tests de comportement a été menée entre 0700 et 1100 heures, avec l'ordre d'essai randomisé des animaux dans une cohorte. Les animaux élevés dans un environnement enrichi (n = 14, 7 femmes et 7 hommes) ont pris beaucoup moins de temps pour résoudre les tâches d'obstruction dans la boîte de puzzle que ceux élevés dans un environnement standard (n = 15, 7 femmes et 8 homme...

L’enrichissement environnemental offre un effet protecteur potentiel contre les troubles neurodégénératifs. À l’heure actuelle, cependant, il n’existe pas de moyen facile de déterminer l’efficacité des procédures d’enrichissement. Ce protocole décrit une méthode simple de « boîte à puzzle » pour évaluer la fonction cognitive d’un animal, afin de révéler l’efficacité de l’enrichissement de l’environnement.

L&#39;utilisation de la boîte de Puzzle comme un moyen d&#39;évaluer l&#39;efficacité d&#39;enrichissement du milieu

Environmental enrichment can dramatically influence the development and function of neural circuits.  Further, enrichment has been shown to successfully ...

L’objectif global de l’expérience suivante est d’évaluer l’efficacité de l’enrichissement environnemental sur la fonction cognitive chez la souris. Pour ce faire, il faut d’abord créer une boîte de puzzle contenant deux chambres. Les souris sont ensuite habituées à l’arène de test et autorisées à découvrir l’entrée de la boîte de but abritée.Ensuite, les souris sont confrontées à une variété d’obstructions ou d’énigmes bloquant l’entrée de l’abri. Les résultats montrent que l’enrichissement de l’environnement améliore de manière fiable les performances dans la boîte du puzzle. Le principal avantage de cette technique par rapport aux autres méthodes est sa facilité et sa simplicité à la fois dans la construction de la boîte et dans sa mise en œuvre, et le fait qu’elle est extrêmement flexible dans la conception de tâches avec différents niveaux de charge cognitive.Cette méthode peut donc être utilisée pour répondre à une série de questions dans le domaine des neurosciences, en particulier celles associées à l’évaluation de l’efficacité des interventions environnementales. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu de l’effet de l’enrichissement de l’environnement sur la cognitio

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