Name: Une méthode dinjection dans les ganglions noueux rat Sprague-Dawley (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-25T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: Découvrez une méthode d'injection locale dans les ganglions nodosés chez le rat Sprague-Dawley pour étudier la modulation de l'activité du nerf vague. Cette technique chirurgicale permet d'explorer les réponses physiologiques et comportementales.

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Cette étude a été soutenue par les Instituts nationaux de la santé (Grant 1UM1HL112856).

Toutes les procédures et protocoles ont été approuvés par le soin et l&#39;utilisation des animaux Commission institutionnelle de l&#39;Université de l&#39;Illinois à Chicago. Les expériences décrites ici sont des expériences non-survie aigus, et il n&#39;y avait pas d&#39;utilisation de pommade oculaire. Le maintien de conditions stériles se produit uniquement lorsque les instruments chirurgicaux sont lavées avec 70% d&#39;éthanol dans Dih 2 O. Sacrifice de rats à la fin de l&#39;expérience a eu lieu par l&#39;intermédiaire de surdose de kétamine IV / xylazine. 1. Préparation des instruments et des produits chimiques <ol><li> Préparer la solution d&#39;achat d&#39;actions de 0,05 M de 5-HT HCl dans du PBS. Ensuite diluer stocks avec du PBS à une concentration finale de 5-HT de 0,203 mM. </li><li> Diluer dronabinol dans l&#39;huile de sésame à une concentration de 20 ug / ul. </li><li> Couper 20 cm de longueur de polyéthylène (PE) -50 tube (0,58 mm ID, OD 0,965 mm). À une extrémité du tube, couper une pointe conique avec des ciseaux, et à l&#39;autre extrémité carrée, insérer une aiguille de 23 g. Connectez cette aiguille 23 g pour un 1 mlseringue, et le remplir avec 0,3 ml de 50 u / ml d&#39;héparine. </li><li> Coupez quatre morceaux de fil de soie 4-0 tressé et mettre sur le côté. </li><li> Stériliser ciseaux chirurgicaux, deux forceps Graefe courbes, et trois micro pinces avec 70% d&#39;éthanol dans diH 2 O. </li></ol> 2. cathétérisme de la veine fémorale Protocole pour le cathétérisme est modifié à partir Jespersen et al. 21 <ol><li> Anesthésier un rat Sprague-Dawley avec intraperitoneale (IP) de la kétamine / xylazine (100 mg / kg: 10 mg / kg). Pincez le bout du rat et d&#39;observer tout mouvement de confirmer un niveau approprié de l&#39;anesthésie. Raser la face ventrale de la cuisse gauche, et la face ventrale du cou. Si nécessaire par le Comité soin et l&#39;utilisation des animaux institutionnel local, appliquer une pommade oculaire pour prévenir la sécheresse. </li><li> Rat sécurisé en position couchée sur une planche chirurgicale. Utilisez des ciseaux chirurgicaux pour couper la peau de la cuisse arrière gauche. </li><li> En utilisant des pinces, conduite dissectio émousséen du muscle superficiel pour exposer la veine fémorale. Utiliser la pince pour séparer la veine de l&#39;artère fémorale, et placer deux fils autour de la veine fémorale. </li><li> Utilisez la pince Graefe courbes de pull-up de la veine pour arrêter l&#39;écoulement du sang. En utilisant une aiguille 22 G de la seringue, de percer la veine fémorale, puis insérez l&#39;extrémité biseautée du tube PE-50 dans la veine. </li><li> Vérifiez si le tuyau PE-50 a été inséré correctement en rétractant le piston de la seringue. Le sang doit être vu entrer dans le tube PE-50. Attachez deux noeuds autour de la veine et PE-50 tube en utilisant les deux fils. </li></ol> 3. 5-HT induite par l&#39;apnée par perfusion IV <ol><li> Placer une jauge de contrainte piézo-électrique autour du rat pour mesurer la respiration. </li><li> Modifier les paramètres pour le niveau de l&#39;amplificateur électronique via logiciel de l&#39;amplificateur sur l&#39;ordinateur d&#39;amplification: pour amplifier (100x) et le filtre passe-bande (1-10 Hz) les signaux respiratoires obtenus à partir de la jauge de contrainte, réglez &quot;filtre highpas&quot; au &amp; #8220; AC @ 1 Hz &quot;et&quot; Filtre passe-bas &quot;à&quot; 10 Hz, &quot;et régler l&#39;amplification en entrant&quot; 10 &quot;pour le&quot; Initial Gain &quot;et&quot; 100 &quot;pour&quot; Gain total &quot;.. </li><li> Modifier les paramètres de taux d&#39;échantillonnage en ouvrant &quot;Entrée analogique&quot; via le logiciel d&#39;enregistrement sur l&#39;ordinateur. Pour numériser (500 fréquence d&#39;échantillonnage Hz) en utilisant un convertisseur analogique-numérique, &quot;échantillon&quot; à &quot;1000 Hz&quot; et &quot;sauter&quot; tous les autres points de &quot;1&quot; (vitesse d&#39;échantillonnage effective 500 Hz) d&#39;enregistrement, puis enregistrer le signal en utilisant le logiciel d&#39;enregistrement. </li><li> Retirer la seringue de 1 ml à partir du cathéter et insérer une seringue en verre de précision 500 pi rempli de 0,203 mM de 5-HT dans le cathéter. </li><li> Placer la seringue 500 ul de verre de précision dans une pompe à perfusion. Infuser 12,5 ug / kg par 350 pl / kg de solution de 5-HT à un débit de 63 ml / h. Effectuez plusieurs perfusions et d&#39;observer l&#39;apnée chez le rat, qui est vu d&#39;unSA pause respiratoire (≥ 2,5 sec) dans les signaux respiratoires enregistrées sur l&#39;écran d&#39;ordinateur. </li><li> Avant de procéder à la chirurgie du cou, surveiller rythme respiratoire et vérifier réflexe de douleur de pincement de l&#39;orteil chez le rat. Si la respiration est irrégulière, ou se il est un réflexe de la douleur de pincement de l&#39;orteil, administrer IP kétamine / xylazine (100 mg / kg: 5 mg / kg) et puis re-confirmer un niveau approprié de l&#39;anesthésie. </li></ol> 4. chirurgie cervico-faciale pour exposer noueux Ganglia <ol><li> Rat sécurisé en position couchée sur une planche chirurgicale. Faire une coupe longitudinale médiane à l&#39;aide des ciseaux chirurgicaux au niveau du cou. </li><li> Utilisation de dissection sur le muscle platysma (en utilisant deux pinces micro de garder ce muscle claire du site chirurgical), exposer les sternohyoideus et omohyoideus muscles. Séparer ces muscles pour exposer l&#39;artère carotide interne et une de ses branches, l&#39;artère ptérygopalatine. </li><li> Observez le nerf vague car il longe l&#39;artère carotide interne et puis le long de e<html> e ptérygopalatine artère. Observez comment le nerf vague et l&#39;artère ptérygopalatine, avec le nerf glossopharyngien (nerf crânien IX) et le nerf spinal accessoire (nerf crânien XI), entrent dans le foramen lacérées postérieures à la base du crâne. </li><li> Notez que le ganglion noueux se affiche comme un gonflement du nerf vague droit avant qu&#39;il ne pénètre dans les postérieures lacéré foramen. Notez également que les pharynx et du larynx nerveuses branches se détachent les aspects antérieures et postérieures, respectivement, du ganglion noueux. 5 </li><li> En utilisant les forceps Graefe, séparer le nerf vague dans les artères, et placez un morceau de fil autour du nerf vague. Placez une pince sur le fil d&#39;appliquer une légère tension sur le nerf vague, et nettoyer le ganglion noueux de tout tissu conjonctif de fournir moins de résistance lors de l&#39;injection. </li><li> Répétez l&#39;apnée 5-HT induite comme indiqué à la section 3 pour confirmer qu&#39;aucun dommage a été fait pour les ganglions noueux. </li></ol>itre &quot;&gt; 5. Intranodose Ganglia injection de dronabinol <ol><li> Remplir une précision étanche seringue en verre de 10 pi apposé avec un 28 g aiguille de seringue demi-pouce sur mesure avec 35 ° biseautées pointe avec 5 pi du dronabinol à l&#39;huile de sésame. </li><li> Placez un micro pince sur le fil d&#39;appliquer une légère tension sur le nerf vague, et percer le noueux en prenant garde à ne pas percer ganglion à travers elle. Appuyer sur la seringue lentement (≥ 60 sec) pour injecter tout le contenu de la seringue. Notez que certains de contenu de la seringue se échappe du ganglion. </li><li> Répétez l&#39;apnée 5-HT induit comme indiqué dans l&#39;article 3. </li></ol>

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Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Les étapes essentielles pour l&#39;injection de substances neurochimiques succès dans les ganglions noueux sont les suivants: 1) l&#39;identification et le nettoyage du tissu conjonctif de la ganglions noueux; 2) confirmer l&#39;intégrité des ganglions noueux avant injection; 3) et en utilisant une aiguille de calibre petite pour injecter délicatement dans, mais pas complètement piquant à travers, les ganglions noueux. Le nerf vague innerve nombreux organes dans le cou et l&#39;abdomen, et r...

La signalisation afférente via le nerf vague (nerf crânien X) transmet des informations viscérales générales importantes au système nerveux central (SNC) à partir des récepteurs baro-, chimio-, hépatiques osmo-, cardiaques, pulmonaires et gastriques situés dans les organes de l’abdomen et du thorax. Le nerf vague communique des informations à partir de stimuli tels que la fréquence cardiaque, la pression artérielle, l’irritation bronchopulmonaire et la distension gastro-intestinale au noyau des voies solitaires (NTS) de la moelle. Les corps cellulaires des neurones pseudo-unipolaires du nerf vague sont situés dans les ganglions nodose et pétreux, dont la majorité se trouve dans le premier. Les cellules ganglionnaires nodoses contiennent une multitude de récepteurs pour les acides aminés, les monoamines, les neuropeptides et d’autres substances neurochimiques qui, lorsqu’elles sont activées, peuvent modifier l’activité du nerf vague afférent. 1 De nombreuses innervations des nerfs vagues afférents couplées à la diversité des récepteurs situés sur les ganglions nodoses illustrent l’importance biologique de ce nerf crânien, et des médicaments systémiques qui ne traversent pas le SNC ciblant les récepteurs sur les ganglions nodoses peuvent être utilisés pour traiter diverses maladies, telles que l’apnée du sommeil, le reflux gastro-œsophagien, ou une toux chronique. 2-4
La facilité d’accès aux ganglions nodose se prête à une manipulation expérimentale par incision longitudinale médiane pratiquée au niveau du cou. Le nerf vague émerge du foramen lacéré postérieur à la base du crâne et présente immédiatement un gonflement du nerf qui est le ganglion nodose. Le ganglion nodose est facilement reconnaissable grâce à deux branches nerveuses qui en découlent : antérieurement la branche pharyngée ; et branche laryngée postérieurement supérieure. 5 Des manipulations expérimentales antérieures des ganglions nodoses impliquaient des enregistrements électrophysiologiques6, des injections de composés immunohistochimiques ou immunofluorescents pour les tracés nerveux7-10, des superfusions ou des injections de neuroexcitotoxines,11-13 des injections de virus adéno-associé aux récepteurs knockdown,14,15 et des injections de substances neurochimiques spécifiques aux récepteurs pour modifier l’activité du nerf vague. 16,17
Les injections systémiques de substances neurochimiques sont problématiques dans la mesure où le traitement systémique affecte à la fois les systèmes nerveux périphérique et central. Ainsi, le traitement systémique n’isole pas l’effet des substances neurochimiques sur l’activité du nerf vague afférent. Ce protocole décrit une méthode utilisant du matériel facilement disponible d’injections intranodoses chez le rat Sprague-Dawley qui module l’activité du nerf vague sans affecter le système nerveux central. La stimulation des récepteurs de la sérotonine de type 3 (5-HT3) sur les ganglions nodoses par perfusion intraveineuse (IV) de sérotonine (5-HT) induit le réflexe de Bezold-Jarisch, un tiercé gagnant de la réponse vagale de la bradycardie, de l’hypotension et de l’apnée, qui peut être aboli par la vagatomie supranodose. 11,17-19 L’apnée est facilement mesurée en plaçant un transducteur respiratoire autour de l’abdomen du rat. 17,18 Les cannabinoïdes diminuent le courant induit par le 5-HT dans les cellules ganglionnaires nodoses,20 et les injections intranodoses de dronabinol atténuent l’apnée induite par le 5-HT.

<table><tbody><tr><td>5-HT HCl</td><td>MP Biomedicals</td><td>215376591</td><td>12.5 & micro ; g/kg par 350 & micro ; l/kg</td></tr><tr><td>Dronabinol (Marinol) 10 mg Gélules (80 &micro ; g/&micro ; l)</td><td>AbbVie</td><td>NDC 0051-0023-21</td><td>Diluer avec de l’huile de sésame à 20 & micro ; g/&micro ; l</td></tr><tr><td>Huile de sésame</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3547</td><td></td></tr><tr><td>Intramedic Polyéthylène-50</td><td>BD</td><td>427411</td><td>Commandé chez VWR (Cat. # 63019-047)</td></tr><tr><td>Graefe Forceps</td><td>Roboz</td><td>RS-5138</td><td>Deux sont nécessaires</td></tr><tr><td>Johns Hopkins Bulldog Clamp</td><td>Roboz</td><td>RS-7441</td><td>Trois sont nécessaires</td></tr><tr><td>Jauge de contrainte piézoélectrique</td><td>Ambu</td><td>813255-100</td><td></td></tr><tr><td>Acquisition de données Sous-systèmes USB</td><td>DataWave Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sciworks Experimenter Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CyberAmp</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seringue, 500 & micro ; l, Modèle 1750 TLL</td><td>Hamilton Company</td><td>81220</td><td></td></tr><tr><td>Seringue, 10 & micro ; l, modèle 1801 RN</td><td>7659-01</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aiguille, 28 g, petit moyeu RN</td><td>7803-02</td><td>point style 4, angle 35, longueur 0,5 po</td><td></td></tr></tbody></table>

une méthode d&#39;injection dans les ganglions noueux rat sprague-dawley

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

La signalisation afférente via le nerf vague transmet des informations viscérales générales importantes au système nerveux central à partir de nombreux récepteurs divers situés dans les organes de l’abdomen et du thorax. Le nerf vague communique des informations à partir de stimuli tels que la fréquence cardiaque, la pression artérielle, l’irritation bronchopulmonaire et la distension gastro-intestinale au noyau du tractus solitaire de la moelle. Les corps cellulaires du nerf vague sont situés dans les ganglions nodose et pétreux, dont la majorité sont situés dans le premier. Les ganglions nodoses contiennent une multitude de récepteurs pour les acides aminés, les monoamines, les neuropeptides et d’autres substances neurochimiques qui peuvent modifier l’activité du nerf vague afférent. La modification des afférences vagales par des traitements médicamenteux périphériques systémiques ciblant les récepteurs des ganglions nodoses a le potentiel de traiter des maladies telles que l’apnée du sommeil, le reflux gastro-œsophagien ou la toux chronique. Le protocole décrit ici une méthode d’injection de substances neurochimiques directement dans le ganglion nodose. L’injection de substances neurochimiques directement dans les ganglions nodoses permet d’étudier les effets uniquement sur les corps cellulaires qui modulent l’activité nerveuse afférente, et prévient la complication de l’implication du système nerveux central comme on le voit dans le traitement neurochimique systémique. À l’aide d’un équipement facilement disponible et peu coûteux, les injections intranodoses des ganglions sont facilement effectuées chez les rats Sprague-Dawley anesthésiés.

La figure 1 représente un exemple d'enregistrement de la respiration chez les rats qui avaient perfusion de 5-HT pour induire une apnée avant et après les injections de ganglions intranodose de dronabinol. 5-HT active 5-HT3 sur les ganglions noueux qui contribuent à l'réflexe de Bezold-Jarisch de la bradycardie, l'hypotension et l'apnée. 11,17-19 injections de ganglions Intranodose de dronabinol activent les récepteurs CB inhibiteurs, ou module de manière allostérique 5-HT 3</...

La signalisation vagale afférente transmet des informations importantes au système nerveux central à partir de récepteurs situés dans les organes de l’abdomen et du thorax. Les ganglions nodoses des nerfs vagues contiennent de nombreux types de récepteurs qui modulent l’activité vagale. Ce protocole décrit une méthode d’injections locales de substances neurochimiques dans les ganglions nodoses.

Une méthode d&#39;injection dans les ganglions noueux rat Sprague-Dawley

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

L'objectif général de cette procédure est d'effectuer des injections locales de neurochimiques directement dans les ganglions du nerf vague afin d'étudier l'effet des neurochimiques sur le comportement physiologique lié au nerf vague. Cela est réalisé en réalisant d'abord une chirurgie au niveau du cou pour visualiser les ganglions du nerf vague et les nerfs vagues. La deuxième étape consiste à isoler et à nettoyer les ganglions du nerf vague des tissus conjonctifs.Ensuite, injectez le neurochimique d'intérêt dans les ganglions sans dose. La dernière étape consiste à mesurer les effets physiologiques et comportementaux de la modulation de l'activité du nerf vague par des injections locales de neurochimiques dans les ganglions sans dose. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des neurosciences, telles que de savoir si les neurochimiques administrés localement modulent ou non l'activité du nerf vague.En général, les personnes novices dans cette méthode peuvent éprouver des difficultés, car il faut des compétences motrices très fines pour injecter dans les ganglions sans dose. La pratique est essentielle. Préparez d'abord une solution mère de chlorhyd

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JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Source : Cheah, M.,  et al. Injection du ganglion de la racine dorsale et blessure par écrasement de la racine dorsale comme modèle de régénération sensorielle des axones. J. Vis. Exp. (2017). Cette vidéo montre une procédure étape par étape pour injecter une suspension virale dans les ganglions de la racine dorsale (DRG) et induire une lésion axonale contrôlée via un écrasement de la racine dorsale chez un rat anesthésié. Le protocole consiste à exposer les DRG, à délivrer un vecteur viral...

Modélisation de la régénération sensorielle des axones chez un rat à l’aide d’une injection de ganglion de la racine dorsale et d’une lésion par écrasement de la racine dorsale

L’injection directe dans le nerf optique du rat est utile pour la recherche régénérative. Nous démontrons une technique mini-invasive d’injection directe dans un nerf optique de rat qui n’implique pas d’ouverture du crâne. Grâce à cette méthode, les complications chirurgicales sont minimisées et la récupération est plus rapide.

Technique mini-invasive pour injection dans Rat Optic Nerve

Ce protocole présente l’utilisation d’une injection de ganglion de la racine dorsale (DRG) avec un vecteur viral et d’une lésion concomitante par écrasement de la racine dorsale chez un rat adulte comme modèle pour étudier la régénération sensorielle des axones. Ce modèle convient à l’étude de l’utilisation de la thérapie génique pour favoriser la régénération sensorielle des axones.

Racine Dorsale Ganglion Injection et Racine Dorsale Crush blessures comme modèle pour la régénération sensorielle Axon

Nous décrivons une méthode pour laminotomy chez le porc qui donne accès au rachidiens lombaires (DRG) pour injection intraganglionic. Progrès de l’injection sont surveillée de manière et histologiquement confirmé jusqu'à 21 jours après la chirurgie. Ce protocole pourrait être utilisé pour de futures études précliniques impliquant l’injection de DRG.

Laminotomy pour accès de Ganglion de la racine dorsale lombaire et Injection chez le porc

Intrarachidienne de recombinase dépendant adeno-associated virus recombinant (rAAV) peut être utilisée pour manipuler n’importe quel type de cellules génétiquement marquées dans la moelle épinière. Ici, nous décrivons comment transmettre des neurones de la corne dorsale de la moelle épinière lombaire. Cette technique permet d’interrogatoire fonctionnelle du sous-type neurone manipulé.

Adeno-associated Virus-mediated Transgene Expression dans les neurones de la moelle épinière génétiquement définies

Ce protocole montre l’injection d’un vecteur viral marqués transportable dans les tissus de la moelle épinière de rat. Le vecteur est absorbé au niveau de la synapse et transporté vers le corps cellulaire des neurones de la cible. Ce modèle convient pour un traçage rétrograde des voies importantes de la colonne vertébrale ou ciblage des cellules pour des applications de la thérapie génique.

Injection directe d’un vecteur Lentiviral met en évidence plusieurs voies motrices de la moelle épinière de Rat

Ici, nous décrivons une méthode pour livrer des drogues au système nerveux central de rat en implantant un cathéter dans l'espace intrathécal lombaire de la colonne vertébrale. Nous nous concentrons sur la livraison des oligonucléotides d'antisens, bien que cette méthode soit appropriée pour la livraison d'autres modalités thérapeutiques aussi bien.

Livraison intrathécale d'Oligonucléotides antisens dans le système nerveux central de rat

Ce protocole décrit la préparation détaillée et à faible entrée de l’échantillon pour le séquençage à noyau unique, y compris la dissection des ganglions cervicaux et stellaires supérieurs de souris, la dissociation cellulaire, la cryoconservation, l’isolement du noyau et le codage à barres hashtag.

Isolement et multiplexage de noyaux à faible entrée avec des anticorps à code-barres de ganglions sympathiques de souris pour le séquençage de l’ARN à noyau unique

Une injection intrathécale lombaire représente une voie d’administration pertinente sur le plan translationnel pour l’administration de la thérapie génique au système nerveux central. Ce protocole standardisé complet pour les injections intrathécales lombaires chez les souris et les rats néonatals, juvéniles et adultes vise à guider les chercheurs dans l’adoption de cette technique pour les études précliniques de thérapie génique.

Injection intrathécale lombaire de vecteurs de thérapie génique pour le ciblage du système nerveux central chez la souris et le rat

Nous présentons un protocole d’injection directe du nerf vague chez le rat, permettant l’administration directe du médicament dans le nerf sans complications post-injection. Cette méthode s’applique aux études neurologiques précliniques impliquant une manipulation du système nerveux autonome. Il peut être utilisé pour l’injection nerveuse directe pour d’autres nerfs chez les rats et d’autres espèces, avec les modifications nécessaires.

Protocole d’injection directe du nerf vague pour les rats

Ce protocole décrit une technique unique utilisant une approche transconjonctivale pour accéder au nerf optique du rat pour des injections.

Approche transconjonctivale pour l’injection dans le nerf optique du rat

Découvrez une méthode d'injection locale dans les ganglions nodosés chez le rat Sprague-Dawley pour étudier la modulation de l'activité du nerf vague. Cette technique chirurgicale permet d'explorer les réponses physiologiques et comportementales.

Une méthode d'injection dans les ganglions noueux rat Sprague-Dawley

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